寡核苷酸类,反义

摘要： 目的 制备新型的靶向长链非编码RNA(lncRNA)同源异型盒基因转录的反义基因间RNA(HOTAIR)的反义寡核苷酸(ASON)探针99Tcm-HYNIC-ASON(HYNIC为联肼尼克酰胺),探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响.方法 设计并通过化学修饰合成HOTAIR的ASON,使用双功能螯合剂HYNIC偶联99Tcm并进行纯化.采用快速薄层层析(ITLC)法和琼脂糖凝胶电泳分别检测探针的标记率、放射化学纯度、体外稳定性及完整性.细胞摄取实验分为2组:Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON组(转染组)和99Tcm-HYNIC-ASON组(未转染组),通过脂质体转染探针,测定人脑胶质瘤U87细胞对探针的摄取率;细胞计数试剂盒8(CCK-8)实验和细胞划痕实验分为3组:Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON组(转染组)、99Tcm-HYNIC-ASON组(未转染组)、99Tcm-Control组(对照组),分别检测转染探针后细胞增殖和迁移能力的变化.2组间比较采用Studentt检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 99Tcm-HYNIC-ASON的标记率为(90.0±5.6)％.琼脂糖凝胶电泳结果显示,99Tcm与探针成功标记并且没有明显的降解,探针孵育12 h的放射化学纯度＞80％.细胞摄取实验结果显示,转染后5h,探针Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON在人脑胶质瘤U87细胞中的摄取率最大(0.70％),与未转染组(0.16％)相比,差异有统计学意义(t=17.81,P＜0.01).CCK-8实验结果显示,转染探针Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖能力,与未转染组相比,在各个时间点(1、2、3、4、5d)的差异均有统计学意义(t=2.336～30.230,均P＜0.05).细胞划痕实验结果显示,转染探针Lipo-99Tcm-HYNIC-ASON能抑制人脑胶质瘤U87细胞的迁移,3组细胞间隙融合率的差异有统计学意义(F=331.8,P＜0.01),与未转染组相比,转染组细胞间隙融合率明显降低,且差异有统计学意义(60.0％对23.6％,t=51.54,P＜0.01).结论 成功合成了靶向人脑胶质瘤lncRNA HOTAIR的探针99Tcm-HYNIC-ASON,该探针具有良好的体外稳定性和靶向结合能力,能够抑制人脑胶质瘤U87细胞的增殖和迁移.

摘要： 反义寡核苷酸是一类新的基因靶向药物。随着基因组学与新一代基因测序技术的发展,以及各种新的核苷酸合成技术的出现,反义寡核苷酸药物在转化医学与精准医学中的应用取得了飞速的发展。该类药物为很多过去无法治疗的疾病提供了全新的治疗策略。本文以目前上市的几种代表性药物为例,集中阐释反义寡核苷酸药物在相关疾病治疗中的主要应用进展及作用机制,同时对该类药物开发中亟待解决的问题进行了分析。

摘要： 近二十年来,随着对炎症性肠病(IBD)发病免疫学机制的深入研究,其治疗药物已由传统的5-氨基水杨酸、糖皮质激素和硫唑嘌呤发展至静脉或皮下注射生物制剂,如肿瘤坏死因子抑制剂和整合素拮抗剂.但由于上述药物的给药方式、长期使用的不良反应以及治疗疾病时失效或失应答,寻找具有稳定结构、不良反应小的口服药物已成为临床的迫切需求.目前IBD的新型口服药物包括α4整合素拮抗剂AJM300、JAK拮抗剂tofacitinib和反义寡核苷酸mongersen等,本文就新型口服药物的研究现状作一综述.

摘要： 目的：探讨hTERT基因全硫代修饰反义寡核苷酸（AS PS-ODN）抑制氟他胺耐受型前列腺癌细胞LNCaP-flu端粒酶活性后，藏药镰状棘豆总黄体酮（TFOF）对LNCaP-flu细胞凋亡的影响。方法采用TRAP-PCR-ELISA法检测氟他胺耐受型前列腺癌细胞LNCaP-flu端粒酶活性；采用台盼蓝观察hTERT AS PS-ODN与TFOF共同作用对氟他胺耐受型前列腺癌细胞LNCaP-flu生长活力的影响；通过双标流式细胞仪测定凋亡细胞的百分率。结果hTERT AS PS-ODN作用于LNCaP-flu细胞48h，端粒酶活性明显下降；hTERT AS PS-ODN作用于LNCaP-flu细胞后加入TFOF 0.1g/L作用48h，LNCaP-flu细胞的抑制率与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TFOF组及S PS-ODN+TFOF组相比有统计学差异（P＜0.01）。hTERT AS PS-ODN作用于LNCaP-flu细胞后加入0.1g/L TFOF作用48h，凋亡细胞的百分率分别与对照组、S PS-ODN组、AS PS-ODN组、TFOF组及S PS-ODN+TFOF组相比有显著性差异（P＜0.05）。结论 hTERT基因反义核酸对TFOF诱导的氟他胺耐受型前列腺癌细胞LNCaP-flu凋亡有增敏作用。%Objective To investigate the effects of telomerase inhibition with hTERT antisense on oxytropis falcata (TFOF)-induced apoptosis in flutamide insensitive prostate cancer cells (LNCaP-flu). Methods Antisense phosphorothioate oligodeoxynucleotide (AS PS-ODN) was synthesized and purified. Telomerase activity was measured by telomerase PCR ELISA kit. Cell viability was determined by MTT assay;Cell apoptosis was determined by flowcytometry. Results AS PS-ODN significantly inhibited telomerase activity. The cell viability decreased with time after hTERT AS PS-ODN combined with TFOF treatment. The percentage of apoptosis increased with time after hTERT AS PS-ODN combined with TFOF treatment. There was no difference in cell viability and the percentage of apoptosis between S PS-ODN and the control group.. Conclusion Inhibition of telomerase with hTERT antisense can enhance TFOF-induced apoptosis in flutamide insensitive prostate cancer cells (LNCaP-flu).

摘要： Duchenne muscular dystrophy (DMD) is lethal inherited muscular disorder which caused by frame‐shift mutations in the Dystrophin gene .The splicing regulatory sequence in target exon of antisense oligonucleotide (AON ) can induce exon skipping to re‐framing the dystrophin mRNA .It is a new therapy strategy to treat DMD ,and the applicability of AON has been confirmed in both patient‐derived muscle cell cultures and animals models .Currently ,AON medication for DMD are in clinical trials .This paper reviews the molecular basis of DMD ,the mechanisms of AON action and the progress of AON therapy in clinical trials ,in order to provide theoretical basis for clinical application of AON medication .%Duchenne型肌营养不良（DMD）是由抗肌萎缩蛋白基因 Dystrophin发生移码突变导致的儿童遗传性致死性肌病。反义寡核苷酸（AON ）靶向外显子中的剪接调控序列可以诱导Dystrophin基因的相应外显子跳读，以恢复dystrophin mRNA阅读框，是目前新的DMD治疗方法。该治疗方法的有效性已在患者来源的肌细胞及动物模型中得到证实。目前，AON靶向治疗DMD已经进入药物临床试验阶段。笔者拟对DMD的分子致病机制、AON治疗DMD的作用机制及其临床试验新进展进行综述，为AON在DMD治疗中的临床应用提供理论依据。

摘要： 目的：：探讨lmna基因下调对斑马鱼早期造血干细胞发育的影响。方法：显微注射法将lmna基因mRNA的吗啉代反义寡核苷酸注入单细胞期斑马鱼胚胎(实验组)，显微注射无意义的吗啉代寡核苷酸作为对照组。待胚胎发育至受精18、24、30、36 hpf后收集胚胎进行实验。 RT-PCR和全胚胎原位杂交方法检测斑马鱼髓系造血转录因子pu.1和红系造血转录因子gata1的变化。结果：RT-PCR结果显示，实验组pu.1和gata1表达均较对照组下降(均P<0．05)。原位杂交结果显示，实验组pu.1和gata1蓝黑色阳性杂交信号较对照组变浅。结论：lmna基因下调会阻碍斑马鱼髓系造血干细胞和红系造血干细胞的发育。%Objective: To investigate the effect of lmna gene down-regulation on early hematopoietic development of zebrafish. Methods: Phosphorodiamidate morpholino oligomer ( PMO) technology was used to downregulate lmna gene expression in Zebrafish. Zebrafish embryos injected phosphorodiamidate morpholino antisense oligonucleotide of lmna gene mRNA by microinjection at unicellular stage were taken as the experimental group, and those injected meaningless phosphorodiamidate morpholino antisense oligonucleotide were taken as the control. The embryos were collected at 18, 24, 30 and 36 hpf after the fertilization. The real-time fluorescent quantitative PCR ( RT-PCR) and whole embryo in situ hybridization methods were used to detect the expression of myeloid hematopoietic transcription factor pu. 1 and erythroid hematopoietic transcription factor gata1 in zebrafish. Results:RT-PCR showed that the expressions of pu. 1 and gata1 decreased in the experimental group compared with the control group ( all P<0. 05 ) . Whole embryo in situ hybridization showed that the blue-black positive hybridization signals of pu. 1 and gata1 in experimental group were shallow than those in the control group. Conclusion: Myeloid hematopoietic and erythroid hematopoietic of zebrafish are blocked with the downregulation of lmna gene.

摘要： 目的 探讨hTERT基因的两端各三个碱基硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)对氟他胺耐受性前列腺癌细胞LNCaP端粒酶活性的影响机制.方法 采用TRAP-PCR-ELISA法检测氟他胺耐受性前列腺癌细胞的端粒酶活性;采用RT-PCR方法检测hTERT基因mRNA的表达水平;以免疫组化通过流式细胞仪检测hTERT基因蛋白水平的变化.结果 hTERT基因的两端各三个碱基硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)作用于LNCaP细胞48h,其端粒酶活性下降,作用72h,其端粒酶活性受到抑制.结论 通过hTERT基因的两端各三个碱基硫代修饰反义寡核苷酸(AS PS-ODN)特异性抑制hTERT基因mRNA的表达降低氟他胺耐受性前列腺癌细胞LNCaP端粒酶活性,为氟他胺耐受性前列腺肿瘤的基因治疗提供新思路.

摘要： Objective To research the effects of FasL and FasL ASODN in the immune escape of squamous lingual carcinoma cells .Methods This experiment was planned to conduct the test through the expression and functions of FasL in squamous lingual carcinoma cells ,and designed and compounded the specific FasL ASODN to transfect squamous lingual carcinoma cells and block the expression of FasL in squamous lingual carcinoma cells .Such methods as RT‐PCR ,flow cytometry and M T T had been adopted to conduct the observation from three levels ,gene ,protein and cell effects .Results The FasL ASO inhibited cell proliferation in a dose‐and time‐dependent manner within limits(P<0 .05) .The total apoptosis rate was apparently increased(P<0 .05) in antisense group compared with the control group ,the lipofectamine group and the sense group .Conclusion Fas/FasL approach is one of the important mechanisms of the immune escape of oral squamous cell carcinoma cells ,and can be the new target for immunotherapy .%目的：研究Fas配体（FasL）及FasL反义寡脱氧核苷酸（ASODN）在舌鳞癌细胞免疫逃逸中的作用。方法对人舌鳞癌细胞中FasL表达及功能进行检测，设计合成特异FasLASODN，转染舌鳞癌细胞，封闭舌鳞癌细胞的FasL表达。通过流式细胞术、逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）和四唑盐（MTT）等方法，观察基因‐蛋白‐细胞效应。结果通过RT‐PCR检测提示在脂质体的量一定的情况下，在一定范围内，ASO的浓度越高，转染效率越高。MTT／FCM结果显示ASO对SCC‐9细胞的增殖有明显的抑制作用（P＜0．05）。FCM对细胞凋亡的检测结果显示反义链组与正义链组、空白对照组及脂质体组相比，总凋亡率有明显差异（P＜0．05）。结论Fas／FasL途径是口腔鳞癌细胞免疫逃逸的重要机制之一，可作为免疫治疗的新靶点。

摘要： 背景：目前反义寡核苷酸的基因治疗已经拥有良好的应用前景,但是反义寡核苷酸的相对分子质量小却不容易入细胞并且易被核酸酶降解,能否有效地穿过细胞膜且不被核酸酶降解从而与目的基因结合发挥作用,因此人们一直致力于理想载体的选择、基因转移效率的增加和转移特异性等研究。目的：探讨新型阳离子磷酸胆碱聚合物MPC30-DEA70能否有效地负载转化生长因子β1反义寡核苷酸（AS-ODN）进入心肌细胞,并观察其对该基因胞内生物表达的影响。方法：按不同N/P电荷比值将载体MPC30-DEA70与转化生长因子β1 AS-ODN络合成形成基因复合物并且对其总电性进行表征;采用MTT法检测MPC30-DEA70与心肌细胞的生物相容性;共聚焦激光扫描显微镜观察MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN在细胞内的分布和定位;应用流式细胞仪检测MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN（FAM标记）的细胞转染效率和荧光强度;Western blot、RT-PCR法检测转化生长因子β1细胞内表达水平。结果与结论：MPC30-DEA70与心肌细胞具有较好的细胞相容性,在较高质量浓度（〉20 mg/L）下才表现出一定的细胞毒性并呈剂量依赖;MPC30-DEA70/TGF-β1AS-ODN复合物对心肌细胞具有较高的转染效率,并且能够携带转化生长因子β1 AS-ODN进入细胞后下调转化生长因子β1 m RNA和蛋白的表达。新型阳离子磷酸胆碱基聚合物MPC30-DEA70可以有效负载和运输转化生长因子。

摘要： 本发明涉及包含重复三核苷酸单元的反义寡核苷酸(AON)，其用于治疗或预防遗传性眼病、优选由RNA毒性引起的眼营养不良症比如Fuchs角膜内皮营养不良(FECD)。本发明的寡核苷酸用于靶向内含子序列中存在的三核苷酸重复(TNR)序列扩增，以防止与这种TNR扩增相互作用的细胞蛋白质的疾病相关螯合。

摘要： 本发明属于医学工程技术领域，具体涉及一种piRNA‑500核苷酸类似物及其反义核苷酸的应用和应用其的产品；所述piRNA‑500核苷酸类似物含有SEQ ID NO.1所示的序列，piRNA‑500反义核苷酸含有SEQ ID NO.2所示的序列；piRNA‑500核苷酸类似物或其生物活性功能片段或变体在制备用于诊断和/或预后评估心脏疾病的产品中的应用，通过检测外周血血浆中piRNA‑500核苷酸的表达水平，用于对许多心脏疾病具有诊断和/或预后评估的潜在价值；通过piRNA‑500反义核苷酸在制备用于预防和/或治疗心脏疾病的产品中的应用，对许多心脏疾病的预防和/或治疗提供基础。

摘要： 本发明提供了一种miRNA‑485‑5p核苷酸类似物及其反义核苷酸的应用和应用其的产品，涉及医学工程的技术领域。本发明提供的miRNA‑485‑5p核苷酸类似物或其生物活性功能片段或变体在制备用于诊断和/或预后评估心脏疾病的产品中的应用，通过检测外周血血浆中miRNA‑485‑5p核苷酸的表达水平，用于对许多心脏疾病具有诊断和/或预后评估的潜在价值；并且，通过本发明提供的miRNA‑485‑5p反义核苷酸在制备用于预防和/或治疗心脏疾病的产品中的应用，对许多心脏疾病的预防和/或治疗提供基础。

摘要： 本发明提供了一种piRNA‑514核苷酸类似物及其反义核苷酸的应用和应用其的产品，涉及医学工程的技术领域。本发明提供的piRNA‑514核苷酸类似物或其生物活性功能片段或变体在制备用于诊断和/或预后评估心脏疾病的产品中的应用，通过检测外周血血浆中piRNA‑514核苷酸的表达水平，对许多心脏疾病具有诊断和/或预后评估的潜在价值；并且，通过本发明提供的piRNA‑514反义核苷酸在制备用于预防和/或治疗心脏疾病的产品中的应用，对许多心脏疾病的预防和/或治疗提供基础。

摘要： 本发明涉及使用部分立体限定的寡核苷酸子文库，鉴定反义寡核苷酸的改进的立体限定的硫代磷酸酯寡核苷酸变体的方法。这些方法允许高效鉴定具有改进特性的立体限定的变体，如增强的体外或体内活性、增强的功效、增强的比活性、降低的毒性、改变的生物分布、增强的细胞或组织摄取和/或增强的靶特异性(脱靶效应减少)。本文公开了多个平行的文库筛选方案，其中优化立体限定的硫代磷酸酯连接的核苷的多个排他性或重叠性短子区域或基序，以鉴定增强的子文库，并且随后合并来自每个选定(改进的)子文库的立体限定的核苷间键样式，以产生增强的立体限定的化合物。

摘要： 本发明涉及包含重复三核苷酸单元的反义寡核苷酸(AON)，其用于治疗或预防遗传性眼病、优选由RNA毒性引起的眼营养不良症比如Fuchs角膜内皮营养不良(FECD)。本发明的寡核苷酸用于靶向内含子序列中存在的三核苷酸重复(TNR)序列扩增，以防止与这种TNR扩增相互作用的细胞蛋白质的疾病相关螯合。

摘要： 本公开文本涉及包含有义链寡核苷酸和反义链寡核苷酸的双链寡核苷酸，包括诸如siRNA的双链寡核苷酸，并且其中所述反义链寡核苷酸包含一个或多个式(I‑A)的核苷酸类似物，所述核苷酸类似物既不是所述反义链寡核苷酸的5’‑突出端核苷酸也不是3’‑突出端核苷酸，并且其中式(I‑A)的核苷酸类似物如本公开文本所述。含有这些类似物的寡核苷酸具有优异的生物活性，例如，增加的体外稳定性和改善的体内效力，尤其是改善的脱靶概况。所改善的寡核苷酸可用于沉默(例如，减少或根除)靶基因的表达。

摘要： 本文公开了双链RNA核酸分子，其包括至少一个吡唑并三嗪核苷酸类似物且已被修饰来展现以下一者：相较于未修饰或类似修饰的dsRNA时的中靶活性增加、靶标特异性增加、核酸酶稳定性增强、脱靶活性降低和/或免疫原性降低；包含所述分子的药物组合物及其在疗法中的使用方法。

摘要： 一种寡核苷酸衍生物，由通过下述一般式（一般式中，B表示腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶，X表示硫原子或氧原子，n表示6～60的整数。）表示的重复结构单元（所述一般式中，B以及X，在各个重复结构单元中独立表示）构成，且所述一般式表示的重复结构单元中至少有一个其X是硫原子。

摘要： 本发明涉及寡核苷酸引物对、寡核苷酸组合物和包括寡核苷酸组合物的试剂盒及其检测方法，由序列为TGAYGGGCGACAATGTCC的上游引物PRRSVNSP2-F和序列为CGCAGACAAATCCAGAVG的下游引物PRRSVNSP2-R组成。本发明与现有技术相比具有以下优点：1、能够对PRRSV经典株与高致病性变异株进行鉴别诊断，解决了临床样品检测中不能区分PRRSV经典株或高致病性变异株单独感染亦或共同感染的问题；2、特异性好，针对PRRSVNSP2具有高保守区设计引物，特异性强，无假阳性出现；3、灵敏度高，该方法的敏感性可达1TCID50/mL；4、简便快速。