小鼠,裸

摘要： [目的]探讨安罗替尼对人肝癌细胞裸鼠移植后肿瘤生长情况及相应生物钟基因表达的影响.[方法]选取实验无胸腺裸鼠共36只,取人肝癌HepG2细胞,移植于小鼠左侧腋皮下,建立裸鼠皮下肝癌移植瘤模型.接种完成1周后,随机分为安罗替尼处理组和对照组,每组18只.安罗替尼组给予安罗替尼50 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组给予二甲基亚砜(DMSO)100pL/20(g·d)灌胃,每日1次,连续2周.在灌胃开始前和灌胃结束后24 h测量肿瘤体积情况.待2周后处死小鼠并剥离肿瘤,采用实时PCR(Real-Time PCR)法检测生物钟基因Per(Per1、Per2、Per3)、CLOCK、Cry(Cry1、Cry2)、Bmal1、Dec2和Timeless mRNA表达水平,同时运用western blot评估上述基因及蛋白质表达情况.[结果]与对照组相比,安罗替尼组裸鼠移植瘤较对照组生长缓慢,体积趋向于缩小.RT-PCR提示肝癌细胞中生物钟基因在安罗替尼作用下,Per1、Per2的mRNA表达量明显增加(P＜0.05),同时下游蛋白质表达量增加,而Dec2的mRNA表达量及下游蛋白质表达则明显受抑制(P＜0.05);Cry1的mRNA表达量不变,但相应的下游蛋白质表达受抑制.[结论]安罗替尼能显著调节肝癌细胞中多种生物钟基因表达,调控其相应表达产物生成,可抑制肝癌移植瘤的生长,其作用机制之一可能与调控生物钟基因表达密切相关.

摘要： [目的]探讨槲皮素(quercetin,QUE)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的影响及其机制.[方法]将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为4组(每组15只):正常对照组(CON组)、QUE单独处理组(QUE组)、LPS模型组(LPS组)和QUE治疗组(LPS+QUE组).采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)构建小鼠ALI模型;CON组及QUE组给予等量生理盐水.QUE组只预先接受灌胃法给予QUE(25 mg/kg);LPS+QUE组在给予LPS之前2 h预先灌胃QUE 25 mg/kg;CON组和LPS组灌胃等量二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO).采用HE染色检测肺组织病理学改变,蛋白质免疫印迹检测肺组织双链RNA依赖的蛋白激酶ER激酶(PERK)和细胞凋亡途径关键蛋白的表达.通过检测肺组织丙二醛(MDA)/谷胱甘肽(GSH)改变反映氧化应激水平,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和IL-1β]及肺组织中髓过氧化物(MPO)活性反映炎症程度.[结果]QUE单独处理(QUE组)对小鼠肺组织的组织病理学和炎症指标无影响.腹腔注射LPS可诱导小鼠肺组织病理损伤,增加BALF中细胞总数和中性粒细胞的数量,升高MPO活性,同时增加BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β等炎症因子含量.而给予QUE预处理(LPS+QUE组),可显著性减轻上述改变;WB检测结果发现,QUE预处理可抑制内质网应激PERK信号途径相关蛋白的表达,减轻细胞凋亡途径关键蛋白caspase-3的表达.[结论]槲皮素可通过抑制内质网应激、氧化应激及炎症反应,减轻LPS诱导的小鼠ALI,其机制与抑制内质网应激PERK信号途径有关.

摘要： 目的 通过68Ga-成纤维细胞激活蛋白抑制剂(FAPI)-04 PET显像探索胰腺癌对FAPI的摄取,为胰腺癌成纤维细胞激活蛋白(FAP)靶向显像提供依据.方法 构建胰腺癌-人源肿瘤异种移植(PDX)荷瘤裸鼠模型(n=8),分别行68Ga-FAPI-04和18F-脱氧葡萄糖(FDG) microPET/CT显像(每组各4只),采用两独立样本t检验比较2种显像剂在肿瘤中的每克组织百分注射剂量率(％ID/g).对5例胰腺癌患者[男4例、女1例,年龄46～74(63.0±11.9)岁]分别行68Ga-FAPI-04与18 F-FDG PET/CT显像,采用配对t检验比较2种显像剂在胰腺癌原发灶的最大标准摄取值(SUVmax)及肝转移灶与正常肝组织的SUVmax比值.结果 MicroPET/CT显像示,68Ga-FAPI-04在胰腺癌-PDX荷瘤裸鼠肿瘤组织中各个时间点均有显像,注射后60 min,68 Ga-FAPI-04在胰腺癌-PDX荷瘤裸鼠肿瘤组织中的摄取显著高于18F-FDG[(6.58±0.44)和(4.29±0.13) ％ID/g;t =4.152,P=0.0089].5例胰腺癌患者68Ga-FAPI-04在胰腺癌原发灶的SUVmax显著高于18F-FDG(16.82±3.08和5.14± 2.20;t=6.893,P=0.0001);68Ga-FAPI-04的胰腺癌肝转移灶与正常肝组织的SUVmax比值也显著高于18F-FDG(4.57±1.47和1.30±0.16;t=3.803,P=0.0191).结论 胰腺癌可高度摄取68Ga-FAPI-04,提示FAP有望作为胰腺癌良好的分子靶点,用于胰腺癌PET/CT显像.

摘要： 目的 制备68 Ga-2-(4,7-二乙酸)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1-戊二酸(NODAGA)-YHW-YGYTPQNVI (GE11),研究其对胰腺癌显像的可行性.方法 GE11偶联NODAGA后用68Ga进行标记,测定其标记产率、放化纯、亲水性、体外稳定性和特异性.建立人胰腺癌BxPC3荷瘤裸鼠模型9只,分别于注射后30和90 min行microPET显像,并在90 min时获取主要器官及肿瘤的放射性分布情况.采用配对t检验分析数据.结果 68 Ga-NODAGA-GE11标记产率为(73.5±5.4)％,放化纯＞98％,小鼠血清中温育120 min放化纯仍＞92％,在BxPC3细胞中特异性摄取.MicroPET图像上可见68Ga-NODAGA-GE11在肿瘤部位浓聚.注射后90 min,肿瘤摄取明显高于正常胰腺[(1.38±0.25)与(0.49±0.07) ％ID/g;t=12.67,P＜0.05],且血液、肌肉和骨骼的摄取低于肿瘤.结论 68Ga-NODA-GA-GE 11制备过程简单、放化纯高、稳定性好,对胰腺癌有特异靶向性,但由于肾和肝高摄取的影响,其对胰腺肿瘤的显像价值还有待进一步研究.

摘要： 目的 制备新型68 Ga标记三七素类前列腺特异膜抗原(PSMA)靶向探针,并进行理化性质和体内外评估.方法 采用固相合成法制备配体P151,测定其亲和性.将配体加入到68GaCl3与醋酸钠混合的溶液中,95°C反应10 min,使用放射性高效液相色谱(HPLC)测定其标记率及体外稳定性.评估68Ga-P151的脂水分配系数(log P),并进行细胞摄取实验.对正常昆明(KM)小鼠进行体内生物分布测定;对前列腺癌22Rv1荷瘤裸鼠注射68Ga-P151后进行microPET显像,并与68Ga-PSMA 617进行对比.2组间比较采用两独立样本t检验.结果 成功合成目标配体P151,其抑制常数Ki为0.58 nmol/L,标记率和放化纯均≥95％;37°C放置2h后,68Ga-P151在生理盐水和人血清白蛋白(HSA)溶液中的放化纯仍≥95％,表明其体外稳定性好;68Ga-P151的脂水分配系数(log P)为-2.65±0.17,表明其亲水性较好.注射8Ga-P151后60 min,前列腺癌LNCaP细胞的总摄取值为(0.83±0.04)百分注射活度(％IA)/105个细胞,并可被PSMA抑制剂(ZJ-43)所抑制.正常小鼠体内生物分布显示68Ga-P151主要经肾脏排泄出体外,在其他组织中摄取较低;荷瘤裸鼠microPET显像显示,68Ga-P151与68 Ga-PSMA 617的最大标准摄取值(SUVmax:0.79±0.23和0.54±0.05;t=2.12)、肿瘤/肾脏比值(2.04±0.65和1.88±0.33;t=0.44)、肿瘤/肌肉比值(12.83±5.18和6.95±1.63;t=2.17)差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 68Ga-P151制备简单、标记率高、生物分布理想,可对PSMA阳性肿瘤显像,其显像效果与68Ga-PSMA 617相当,有望应用于前列腺癌的诊断.

摘要： 目的 筛选适合监测低葡萄糖代谢的胃黏液腺癌小鼠模型的89 Zr标记表皮生长因子受体(EGFR)和人表皮生长因子受体2(HER2)单克隆抗体(简称单抗)分子探针.方法 通过细胞爬片和移植瘤肿瘤切片验证MGC803胃癌细胞株的EGFR和HER2表达情况;用89Zr标记去铁胺-西妥昔单抗(DFO-Cetuximab)和去铁胺-帕妥珠单抗(DFO-Pertuzumab),制得分别靶向EGFR和HER2的89Zr-DFO-Cetuximab和89Zr-DFO-Pertuzumab,测定其放化纯;通过细胞结合实验、阻断实验验证89 Zr-DFO-Cetuximab和89Zr-DFO-Pertuzumab与MGC803的结合力和特异性;将12只MGC803荷瘤裸鼠模型分3组(每组4只),分别注射89 Zr-DFO-Cetuximab(7.4 MBq/只,74μg/只)、89Zr-DFO-Pertuzumab(7.4 MBq/只,70 μg/只)和18F-脱氧葡萄糖(FDG)(7.4 MBq/只),于注射后4、24和48 h进行micro-PET显像(18F-FDG显像为注射后1h);另取8只荷瘤裸鼠,分为s9 Zr-DFO-Cetuximab组和89 Zr-DFO-Pertuzumab组(各4只),于探针注射后48 h进行生物分布研究.采用两独立样本t检验进行组间生物分布比较.结果 肿瘤切片免疫荧光染色示MGC803胃癌细胞株EGFR表达量高于HER2.89Zr-DFO-Cetuximab和89Zr-DFO-Pertuzumab放化纯均大于95％,比活度分别为100和95 MBq/mg;2种探针在生理盐水和胎牛血清(FBS)中稳定性好,放置72 h放化纯仍高于80％.MicroPET显像示MGC803肿瘤部位89Zr-DFO-Cetuximab的摄取高于18 F-FDG和89 Zr-DFO-Pertuzumab.生物分布实验示,48 h肿瘤89Zr-DFO-Cetuximab摄取[每克组织百分注射剂量率(％ID/g)]为56.3±12.0,高于89Zr-DFO-Pertu-zumab摄取(22.0±3.6;t=4.31,P＜0.05).结论 相较于89 Zr-DFO-Pertuzumab,89 Zr-DFO-Cetuximab具有更好的无创监测低葡萄糖代谢胃黏液腺癌的潜能.

摘要： 目的 以DOTA-MHI 148为靶向肿瘤细胞的探针,用放射性核素镥(177Lu)标记DOTA-MHI 148合成双模态分子探针,探讨其在乳腺癌MCF-7裸鼠模型中的生物分布及显像情况.材料与方法以177Lu标记DOTA-MHI 148,使用高效液相色谱法测定标记物的标记率及室温稳定性.研究该分子探针在乳腺癌荷瘤裸鼠模型中的生物分布及 γ 闪烁成像和近红外荧光成像情况.结果 177Lu-DOTA-MHI 148在1 h时的标记率为(97.83±0.62)％,室温放置24 h后标记率为(95.75±0.56)％.生物分布结果显示,肿瘤内标记物的分布随时间增加而逐渐增高,在48 h分布达到最高,为(4.69±2.28)％ID/g,且肿瘤/肌肉比值达到最高,为40.53±16.09.成像结果显示,在48 h时肿瘤显影效果最佳.结论 成功制备多模态分子探针177Lu-DOTA-MHI 148,该分子探针具有较好的室温稳定性.体内生物分布及 γ 闪烁成像、近红外荧光成像结果显示177Lu-DOTA-MHI 148具有良好的肿瘤靶向性,证实177Lu-DOTA-MHI 148在肿瘤的诊断及治疗中具有潜在的临床应用价值.

摘要： [目的]探讨水苏碱对胃癌移植瘤裸鼠肿瘤生长及CyclinD1、c-myc、Bcl-2、c-Met、p53、p16、Bax、Caspase-3表达的影响.[方法]培养人胃癌SGC-7901细胞株后制备细胞悬液,将细胞悬液接种至BALB/c裸鼠皮下得到胃癌移植瘤小鼠模型,随机分为用生理盐水灌胃的对照组、用水苏碱(stachydrine,STA)灌胃的STA组.干预后21 d,测定移植瘤体积、重量及移植瘤中上述癌基因的表达.[结果]STA组的移植瘤体积、重量均明显低于对照组;移植瘤中cyclinD1、c-myc、Bcl-2、c-Met的蛋白表达量均明显低于对照组,而p53、p16、Bax、Caspase-3的蛋白表达量均明显高于对照组.[结论]水苏碱能够抑制胃癌移植瘤小鼠的肿瘤生长并使移植瘤中的原癌基因表达下调、抑癌基因表达上调.

摘要： 目的制备一种68Ga标记的人表皮生长因子受体2(HER2)亲和体显像剂68Ga-1,4,7-三氮环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)-马来酰亚胺(MAL)-半胱氨酸(Cys)-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-精氨酸-天冬氨酸-天冬酰胺-HER2:342亲和体(GGGRDN-ZHER2:342)(简称68Ga-MZHER),探讨其microPET显像及生物分布。方法采用"一步法"对多肽NOTA-MAL-Cys-GGGRDN-ZHER2:342进行68Ga标记,得到68Ga-MZHER,测定其标记率、放化纯及体外稳定性。取ICR小鼠24只,注射68Ga-MZHER 1.85 MBq,并于注射后15、30、60和120 min分别处死(每时间点6只),获得主要器官的放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率(%ID/g)。行microPET动态观察68Ga-MZHER在正常小鼠体内的生物分布。建立HER2阳性的卵巢癌SKOV-3荷瘤裸鼠模型8只,于68Ga-MZHER注射后30、60和120 min时分别进行静态显像;预先按体质量10 mg/kg注射未标记Cys-ZHER2:342后30 min,再注入68Ga-MZHER,60 min后采集图像。勾画感兴趣区(ROI),获得时间-放射性曲线(TAC)。另取正常小鼠6只进行安全性研究。结果68Ga-MZHER合成时间约15 min,标记率>90%,放化纯>95%,室温放置120 min放化纯仍>95%。ICR小鼠生物分布示68Ga-MZHER主要经肾排泄,在其他组织中清除较快;注射后15 min肾摄取为(106.36±15.74)%ID/g,且随着时间延长逐渐升高,最高达(145.15±28.04)%ID/g(60 min),120 min后降至(86.12±22.75)%ID/g。探针在小鼠体内血液药代动力学分布符合二室模型。荷瘤裸鼠microPET显像示SKOV-3移植瘤清晰可见,与本底对比度良好。注射68Ga-MZHER后30、60和120 min,SKOV-3移植瘤的摄取分别为(11.26±0.50)、(12.27±1.13)和(12.65±0.89)%ID/g;注射后60 min,阻断后的SKOV-3移植瘤对探针的摄取为(1.25±0.28)%ID/g。安全性研究表明,小鼠注射68Ga-MZHER后30 d,健康存活,病理学检查主要器官未见明显异常。结论68Ga-MZHER制备方便、体外稳定性好、药代动力学性能良好、显像性能优良且安全,这有助于探针的后续开发及临床应用研究。

摘要： 目的 制备一种68Ga标记的人表皮生长因子受体2(HER2)亲和体显像剂68Ga-1,4,7-三氮环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)-马来酰亚胺(MAL)-半胱氨酸(Cys)-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-精氨酸-天冬氨酸-天冬酰胺-HER2∶342亲和体(GGGRDN-ZHER2∶342)(简称68Ga-MZHER),探讨其microPET显像及生物分布.方法 采用“一步法”对多肽NOTA-MAL-Cys-GGGRDN-ZHER2∶342进行68Ga标记,得到68Ga-MZHER,测定其标记率、放化纯及体外稳定性.取ICR小鼠24只,注射68Ga-MZHER 1.85 MBq,并于注射后15、30、60和120 min分别处死(每时间点6只),获得主要器官的放射性计数,计算每克组织百分注射剂量率(％ID/g).行microPET动态观察68Ga-MZHER在正常小鼠体内的生物分布.建立HER2阳性的卵巢癌SKOV-3荷瘤裸鼠模型8只,于68Ga-MZHER注射后30、60和120 min时分别进行静态显像;预先按体质量10 mg/kg注射未标记Cys-ZHER2:342后30 min,再注入68Ga-MZHER,60 min后采集图像.勾画感兴趣区(ROI),获得时间-放射性曲线(TAC).另取正常小鼠6只进行安全性研究.结果 68Ga-MZHER合成时间约15 min,标记率＞90％,放化纯＞95％,室温放置120 min放化纯仍＞95％.ICR小鼠生物分布示68Ga-MZHER主要经肾排泄,在其他组织中清除较快;注射后15 min肾摄取为(106.36±15.74) ％ID/g,且随着时间延长逐渐升高,最高达(145.15±28.04) ％ID/g (60 min),120 min后降至(86.12±22.75) ％ID/g.探针在小鼠体内血液药代动力学分布符合二室模型.荷瘤裸鼠microPET显像示SKOV-3移植瘤清晰可见,与本底对比度良好.注射68Ga-MZHER后30、60和120 min,SKOV-3移植瘤的摄取分别为(11.26±0.50)、(12.27±1.13)和(12.65±0.89) ％ID/g;注射后60 min,阻断后的SKOV-3移植瘤对探针的摄取为(1.25±0.28) ％ID/g.安全性研究表明,小鼠注射8Ga-MZHER后30 d,健康存活,病理学检查主要器官未见明显异常.结论 68Ga-MZHER制备方便、体外稳定性好、药代动力学性能良好、显像性能优良且安全,这有助于探针的后续开发及临床应用研究.

摘要： 本发明涉及肝癌原位移植技术领域，尤其为裸小鼠肝癌原位移植模型的建立，先用体外培养好的细胞混悬液制备皮下移植瘤模型，然后制备肝癌原位移植瘤模型：将皮下移植瘤模型制备好的实体瘤切成大小约为2mm×2mm×1mm的肿瘤组织块备用。将裸小鼠进行麻醉，取仰卧位，皮肤消毒，剑突下方约5～10mm沿腹中线向动物的右侧横向开腹，开口长度约为1cm，暴露出肝脏，使用“夹心法”将肿瘤组织取出即可，本发明提供一种新型肝癌原位移植模型，具有实验过程出血少、对动物伤害小、操作时间短、难度低且更有利于大批量制备等优势，应用范围广，可以让肝癌原位移植模型在治疗肝癌的药物研究中得到更加广泛的应用，让肝癌原位移植模型的制备更简单快捷。

摘要： 本发明公开了一种建立绿色荧光BALB/c裸小鼠模型的方法，方法如下：选取雌性C57BL/6‑Tg(CAG‑EGFP)小鼠与雄性Foxn1nu小鼠杂交得到F1子代均为有毛荧光小鼠，筛选其中♀小鼠，待其性成熟后与亲代♂Foxn1nu交配(回交)得F2；产生F2子代性状分离，筛选其中♀有毛荧光鼠与亲代♂Foxn1nu回交，完成一个回交循环；此回交循环过程一共进行10代，得到F10，建立绿色荧光BALB/c裸小鼠模型，本发明还公开本发明方法建立的动物模型在脑肿瘤移植模型中的应用；本方法利用同源导入法建立的新品系稳定表达EGFP的模型小鼠，为人胶质瘤原位移植示踪研究胶质瘤及其肿瘤微环境奠定坚实基础。

摘要： 一种裸片接合设备包括裸片转移模块。所述裸片转移模块包括台架单元，其用于支撑上面附接有裸片的切割带；摆臂，其设置在所述台架单元的上方并且被配置为可围绕设置在水平方向上的旋转轴旋转；拾取单元，其安装在所述摆臂的下部上并且被配置为从所述切割带拾取第一裸片；臂驱动单元，其用于在由所述拾取单元拾取所述第一裸片之后在第一方向上将所述摆臂旋转第一角度；以及裸片台架，其设置成面向在所述第一方向上旋转的所述拾取单元并且被配置为从所述拾取单元接收所述第一裸片。

摘要： 本实用新型公开了一种荷足掌肿瘤裸小鼠放射治疗固定装置，它包括若干组单元抽屉匣（6），每组单元抽屉匣（6）包括长方体形的外套盒（1）、长方体形的抽盒（2），抽盒（2）置于外套盒（1）内构成抽屉结构，所述抽盒（2）的两端面封闭，其中一端面上设置有呼吸孔（3），另一端面上设置有伸腿孔（4）。呼吸孔（3）为圆孔。伸腿孔（4）为在抽盒（2）端面的上端部开设的缺口孔。缺口孔为半圆形孔。本实用新型的荷足掌肿瘤裸小鼠放射治疗固定装置，置于生命窗开放、单个IVC内就能在放射治疗全过程保持SPF环境不变。

摘要： 本发明公开了小鼠裸卵体外成熟方法及小鼠裸卵体外成熟培养液。其中，小鼠裸卵体外成熟方法的步骤包括（1）小鼠裸卵的分离培养；（2）小鼠裸卵的成熟检测；（3）小鼠裸卵成熟后发育能力检测。小鼠裸卵体外成熟培养液由α-MEM+10%FBS+10ng/ml EGF+1.5U/ml hCG+1mM/ml Glu+0.23mM/ml丙酮酸钠+10uM Forskolin组成。本发明通过在小鼠卵母细胞培养体系中添加同卵母细胞体外成熟相关的化学试剂，建立了小鼠裸卵体外高效成熟发育体系，该体系不仅能够有效人工调控小鼠裸卵的体外成熟，而且成熟后的裸卵能够具有正常卵母细胞形成胚胎的发育能力，从而为小鼠作为实验动物模型在新品种培育、转基因育种和品种改良等方面的重要的材料，也为人类辅助生殖技术的纵深发展提供基础。

摘要： 本发明涉及一种小鼠裸卵体外成熟技术，属于生物技术领域。本发明为卵丘细胞利用胱氨酸和半胱胺提高了小鼠裸卵GSH合成和发育能力，进而建立了卵丘细胞共培养结合添加半胱胺和胱氨酸使小鼠裸卵完全恢复发育能力的体外成熟系统。小鼠裸卵在添加100-200μmol/l半胱胺和250-300μmol/l胱氨酸的TCM-199成熟培养液中与小鼠或山羊卵丘细胞共培养，其囊胚率达到添加相同巯基化合物培养成熟COC水平。将共培养成熟的裸卵和COC产生的2-细胞胚胎移植后，妊娠率和产仔数差异不显著。这是在国际上首次建立使小鼠裸卵完全恢复发育能力的体外成熟系统，对于动物胚胎工程以及人类辅助生殖技术研究和应用都有重要意义。

摘要： 本发明公开了小鼠裸卵体外成熟方法及小鼠裸卵体外成熟培养液。其中，小鼠裸卵体外成熟方法的步骤包括（1）小鼠裸卵的分离培养；（2）小鼠裸卵的成熟检测；（3）小鼠裸卵成熟后发育能力检测。小鼠裸卵体外成熟培养液由α-MEM+10%FBS+10ng/mlEGF+1.5U/mlhCG+1mM/mlGlu+0.23mM/ml丙酮酸钠+10uMForskolin组成。本发明通过在小鼠卵母细胞培养体系中添加同卵母细胞体外成熟相关的化学试剂，建立了小鼠裸卵体外高效成熟发育体系，该体系不仅能够有效人工调控小鼠裸卵的体外成熟，而且成熟后的裸卵能够具有正常卵母细胞形成胚胎的发育能力，从而为小鼠作为实验动物模型在新品种培育、转基因育种和品种改良等方面的重要的材料，也为人类辅助生殖技术的纵深发展提供基础。

摘要： 本发明公开了一种裸卵小鼠生产方法，包括小鼠裸卵的体外发育和小鼠裸卵胚胎的体外发育两大步骤。本发明在体外环境条件下，利用Forskolin和PD166285模拟卵母细胞成熟过程中自然发育模式进行联合应用，在没有外源卵泡发育激素的作用下，Forskolin和PD166285联合应用能够使小鼠裸卵完全在体外培养条件下发育成熟，成熟的裸卵能够进行体外受精和诞生出新的小鼠个体，小鼠裸卵诞生出新生小鼠的产仔率能够达到11.11%，新生裸卵小鼠发育正常。

摘要： 本发明公开了小鼠裸卵的体外成熟培养方法，包括以下步骤：（1）裸卵的体外成熟培养；（2）成熟裸卵的孤雌激活；（3）成熟裸卵的体外受精。本发明能够创造一个人工模拟卵母细胞自然发生成熟的环境，使裸卵在体外能够高效成熟发育，并且裸卵体外培养成熟后具备同正常发育的卵母细胞一样能够体外受精和胚胎发育。实践证实，该体系裸卵体外成熟发育效率高，体系成熟稳定，裸卵体外自然受精后胚胎发育质量高，因此，本发明能够极大地促进裸卵在人类生殖健康和现代家畜遗传育种中的应用和推广。简化了通过裸卵获得囊胚的操作，为裸卵作为卵源投入到实际生产提供了便利。

摘要： 本发明涉及一种小鼠裸卵体外成熟技术，属于生物技术领域。本发明为卵丘细胞利用胱氨酸和半胱胺提高了小鼠裸卵GSH合成和发育能力，进而建立了卵丘细胞共培养结合添加半胱胺和胱氨酸使小鼠裸卵完全恢复发育能力的体外成熟系统。小鼠裸卵在添加100－200μmol/l半胱胺和250－300μmol/l胱氨酸的TCM－199成熟培养液中与小鼠或山羊卵丘细胞共培养，其囊胚率达到添加相同巯基化合物培养成熟COC水平。将共培养成熟的裸卵和COC产生的2－细胞胚胎移植后，妊娠率和产仔数差异不显著。这是在国际上首次建立使小鼠裸卵完全恢复发育能力的体外成熟系统，对于动物胚胎工程以及人类辅助生殖技术研究和应用都有重要意义。