转录激活

摘要： 【目的】克隆木薯锌指转录因子基因MeDi19-1,分析其编码蛋白特征、亚细胞定位、转录激活活性及在木薯不同组织中的表达水平,为探究MeDi19-1基因在木薯中的作用机制提供理论参考。【方法】从木薯KU50扩增MeDi19-1基因编码区(CDS)序列,利用生物信息学软件对其进行预测分析,并构建pNC-Green-SubC-MeDi19-1融合表达载体,通过农杆菌介导转染烟草表皮细胞,观察荧光信号以确定蛋白的亚细胞定位情况。利用酵母系统确定其转录激活活性,并基于木薯不同组织转录组数据分析其组织表达特性。【结果】MeDi19-1基因CDS序列(OL620080)长度为618 bp,共编码205个氨基酸残基,蛋白分子量为22416.79 Da,理论等电点(pI)为6.10,属于不稳定疏水蛋白,含有Di19蛋白家族典型的锌指结构域zf-Di19。MeDi19-1蛋白的二级结构中含有无规则卷曲(53.66%)、α-螺旋(40.49%)、延伸链(4.39%)和β-转角(1.46%)。MeDi19-1蛋白氨基酸序列与橡胶树(Hevea brasiliensis)Di19蛋白氨基酸序列(XP_021655585.1)相似性最高,为83.50%。MeDi19-1基因启动子元件含有脱落酸(ABA)、赤霉素和茉莉酸等激素响应元件及胁迫响应元件和光响应元件。MeDi19-1蛋白亚细胞定位于细胞膜和细胞核中,具有转录激活活性,且活性区域在C端。MeDi19-1基因在叶、叶中脉和储藏根中相对表达量较高。【结论】MeDi19-1基因属于Di19基因家族成员,具有组织表达特异性,主要在叶、叶中脉和储藏根中发挥调控作用,其编码蛋白在木薯组织中作为转录因子参与调节多项生理活动。

摘要： 由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的菌核病是油菜等十字花科作物的重要病害,对油菜的产量品质造成严重影响。本研究基于转录组数据筛选到一个核盘菌基因Ss160(Sscle04g035160),发现Ss160在接种油菜的核盘菌中高度表达。生物信息分析表明该基因具有信号肽,且序列在真菌界高度保守。亚细胞定位显示Ss160无特异性的定位,烟草叶片瞬时表达Ss160在核盘菌离体叶接种实验中病斑扩展显著小于表达空载体的和野生型烟草叶片,暗示异源表达Ss160能够提高植物的菌核病抗性。基于酵母系统的体外实验证明Ss160具有转录激活能力。该研究结果为后续Ss160在核盘菌-植物互作中功能机制的研究提供基础,也为油菜菌核病的研究提供借鉴和参考。

摘要： 目的:探讨BBOX1-AS1在胃癌中的分子功能和潜在作用机制。方法:实时定量PCR(qRT-PCR)检测BBOX1-AS1在胃癌细胞系中的表达水平。分别过表达和抑制TFAP4表达检测BBOX1-AS1表达水平,荧光素酶实验检测TFAP4和BBOX1-AS1启动子结合情况。CCK-8、EDU和划痕实验检测检测BBOX1-AS1对胃癌细胞系增殖、迁移的影响。Western blot检测迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达水平。结果:qRT-PCR结果显示,BBOX1-AS1在胃癌组织和细胞系中高表达(P<0.05),荧光素酶实验证实TFAP4通过与BBOX1-AS1启动子结合,转录调控BBOX1-AS1表达。CCK-8实验和EDU实验显示,抑制BBOX1-AS1表达可显著抑制MKN45细胞增殖(P<0.05)。划痕实验显示抑制BBOX1-AS1表达可降低MKN45细胞迁移能力(P<0.05)。Western blot实验结果表明,抑制BBOX1-AS1表达可显著降低MMP-2、MMP-9表达(P<0.05)。结论:BBOX1-AS1在胃癌组织和细胞系中高表达,被TFAP4转录激活,可促进胃癌细胞MKN45的增殖和迁移。

摘要： 甜叶菊被誉为“世界第三大糖源”,具有重要的经济价值,但其生长对水分胁迫十分敏感,因而限制其进一步推广。AP2/ERF转录因子是植物特有的一类转录因子,其中DREB亚家族蛋白被广泛报道可以提高植物非生物胁迫抗性。本研究在甜叶菊中克隆了拟南芥AtDREB2A同源基因SrDREB2A,该基因编码区长度为903 bp,编码301个氨基酸残基。系统进化树分析将其归类于DREB亚家族的A-2亚组,与青蒿的AaDREB2亲缘关系最近,并且包含一个典型的AP2结构域。SrDREB2A在甜叶菊叶片中表达量最高,并且受水分胁迫显著诱导。SrDREB2A蛋白定位于细胞核,具有转录激活活性,进一步发现100 mmol/L高浓度的3AT(3-氨基-1,2,4-三唑)不能抑制其转录激活活性。对SrDREB2A全长序列进行截断,结果发现其转录激活活性区段位于211~301 aa,而1~210 aa区段不具有激活活性,此无激活活性区段可用于后续的酵母双杂交筛库。以上研究为通过分子生物学手段提高甜叶菊耐旱性提供了基因资源,并且为进一步研究SrDREB2A的分子功能奠定基础。

摘要： NAC(即NAM、ATAF和CUC)转录因子参与植物生长、发育、衰老和多种逆境胁迫反应的调控.为阐释甘蓝型油菜BnNAC61的表达特征,本研究采用RT-PCR方法,从甘蓝型油菜总cDNA中克隆BnNAC61基因.生物信息学分析表明,其CDS全长846 bp,编码281个氨基酸,N端含有NAM保守结构域;其启动子区存在W-box、响应抗性和胁迫、ABA、MeJA的顺式作用元件.利用烟草瞬时表达系统进行亚细胞定位,结果发现BnNAC61定位在细胞核.酵母试验表明,BnNAC61属于转录激活子,转录激活区位于136～208 aa区段.利用qRT-PCR研究BnNAC61的表达模式,结果表明,黑胫病菌(Leptosphaeria biglobosa)接种处理后,BnNAC61被显著诱导上调表达;逆境胁迫PEG、NaCl、4°C处理后BnNAC61被不同程度地诱导表达,表现先升高后降低的趋势;激素SA、MeJA和ACC处理后Bn-NAC61表达量显著高于对照(P<0.05),而激素ABA处理后,BnNAC61表达被抑制.上述结果表明BnNAC61是参与多种逆境胁迫的转录因子,尤其可能在茉莉酸和乙烯信号途径中发挥重要作用.

摘要： Yin Yang-1(YY1)是一种锌指蛋白,是GLI-Krüppel家族的成员,其可以作为转录抑制因子、激活因子或启动因子结合蛋白,指导并启动细胞和病毒基因的转录.因YY1的表达及功能与细胞周期的进展密切相关,最近被广泛应用于肿瘤生物学模型中.一些证据表明,YY1的表达和/或激活除了在正常的生物学过程中起调节作用外,还与肿瘤的发生有关.该文主要对YY1在转录调控、胚胎发育作用及其在头颈部肿瘤中的研究进展做一综述.

摘要： 乙烯应答因子(ethylene responsive factor,ERF)广泛存在于植物中,在植物生长、发育和逆境胁迫响应的调节中具有重要作用.本研究根据扁蓿豆(Medicago ruthenica)低温胁迫转录组测序信息,设计特异性引物,利用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术克隆了一个受低温胁迫诱导表达的ERF转录因子基因MrERF1.序列分析表明,MrERF1基因包含了一个948 bp的开放阅读框,编码由316个氨基酸组成的序列中含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征.遗传进化分析表明其与蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)MtABR1蛋白的同源性最高.构建表达MrERF1融合增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的载体,本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片下表皮细胞瞬时表达结果证明MrERF1蛋白定位于细胞核.结果表明,构建pGBKT7-MrERF1载体转化AH109酵母感受态细胞具有转录激活活性.对MrERF1在不同组织中的表达分析发现,该基因在扁蓿豆的茎、叶、芽和花序中均有表达,但在根中不表达.进一步分析发现,MrERF1基因的转录与光周期和生物节律无关.此外,MrERF1的表达受高盐、干旱、水淹、低温和脱落酸(abscisic acid,ABA)诱导.本研究表明,MrERF1能够响应多种非生物胁迫,为进一步分析MrERF1的功能奠定了基础.

摘要： 为了对MYB54基因的功能进行初步探究,对MYB54的进化保守性,蛋白质的二、三级结构,空间组织的特异性表达,高温胁迫响应,体外蛋白纯化和Western Blot检测以及转录激活活性进行了研究.结果表明,拟南芥中的MYB54与十字花科中的芥蓝、白菜、亚麻荠等同源性比较接近,分别达到了87％,87％,81％;与禾本科植物高粱、谷子和水稻的同源性较低,分别为54％,57％,47％;与小麦和番茄的同源性为42％.小麦中MYB54与拟南芥中MYB54在保守结构域,亲水性,二、三级结构都十分相似.RT-PCR结果表明,拟南芥中MYB54基因在果荚中表达量最高,暗示MYB54可能在生殖发育过程中发挥了一定的作用,并且拟南芥MYB54和小麦中的MYB54在高温胁迫下的表达量都显著降低,表明该基因在响应热胁迫中也发挥了重要功能.拟南芥中MYB54在18,30,37°C条件下,均可被成功诱导,在37°C条件下诱导纯化的蛋白量最高,Western Blot结果检测MYB54蛋白可以被正确翻译表达.利用酵母GAL4系统对MYB54的转录激活活性进行探究,发现MYB54在不与转录激活结构域结合的情况下,依然可以激活下游报告基因的表达,表明MYB54确实具有转录激活活性.初步对MYB54蛋白进行了结构、组织表达、蛋白诱导纯化、转录活性以及逆境表达分析,为MYB54在拟南芥及小麦生长发育过程中的功能研究提供一定的理论基础.

摘要： 新金色分枝杆菌Mycobacterium neoaurum JC-12是一株用于转化植物甾醇合成甾体激素类药物中间体的重要菌株,传统的基因编辑方法效率低、周期长、操作复杂并且需带入抗性标签.近期 CRISPR(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas9系统在许多非模式菌株中成功应用为本研究提供了参考.作者结合非同源黏性末端连接(NHEJ)构建了应用于新金色分枝杆菌基因组编辑CRISPR-Cas系统,对Mycobacterium neoaurum JC-12基因组上催化雄甾-4-烯-3,17-二酮(AD)合成雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(ADD)的3-甾酮-脱氢酶(KSDD)分别设计了敲除和转录激活的靶向sgRNA.结果显示成功敲除了ksdd基因并且突变菌株KSDD的酶活下降了 80％,突变株发酵96 h的AD产量比原始菌株提高了 30％,并且突变株未代谢产生ADD.转录调控结果显示,靶向-29位点相比于无靶向对照ksdd的转录水平下降了38％,而靶向-83位点和-141位点则对ksdd的转录水平分别提升了 2.24倍和3.23倍,同时对应的AD和ADD的产量在对-29位点激活时没有显著变化,而AD和ADD的产量在-83位点分别提升了 26％和25％,在-141位点分别提升了 29.5％和36％.以上研究为进一步对新金色分枝杆菌基因组水平的代谢工程改造提供了更便捷的方式.

摘要： 目的探讨小儿支气管哮喘与信号传导及转录激活因子(STAT)3等位基因的相关性.方法选取自2018年1月至2021年1月于张家口市第一医院就诊的86例小儿支气管哮喘患儿纳入哮喘组.另选取同期体检的100例健康儿童纳入健康组.评价STAT3等位基因内含子11 rs2293152位点和内含子23 rs957970位点遗传平衡性,检测核转录因子多态性.比较健康组和哮喘组STAT3基因型及等位基因分布情况,以及不同基因型患者的白细胞介素(IL)-4、IL-5、γ干扰素(IFN-γ)水平.结果两组内含子11 rs2293152位点CC基因型、等位基因(C、G)比例比较,差异均有统计学意义(P0.05).内含子11 rs2293152位点CC基因型患者血清IL-4、IL-5水平高于CG患者,血清IFN-γ水平低于CG患者,差异有统计学意义(P0.05).结论小儿支气管哮喘发病与STAT3基因多态性有关,而内含子11 rs2293152位点的C等位基因属于易感基因,且该位点的基因多态性会影响哮喘患者气道炎症反应.

摘要： DREB转录因子是一类可以调控多个与干旱、高盐及低温耐性有关的功能基因表达的转录因子家族.从大豆耐盐品种铁丰8号中克隆了一个新的DREB基因GmDREB5.该基因编码309个氨基酸,具有典型的AP2/EREBP保守结构域,属于AP2/EREBP类转录因子中的DREB亚族.同源性比较分析表明,GmDREB5基因与Genbank登录的DREB基因同源性不高,属于新基因.酵母转录激活实验证明,该基因可以与DRE顺式作用元件特异结合,并具有转录激活活性;同时采用CaMV35S启动子驱动,构建了植物表达载体pBI35S-GmDREB5,并通过冻融法将重组质粒导入根癌农杆菌EHA105中,再利用叶盘转化法将重组质粒导入烟草品种W38中,获得转基因烟草植株30株.

摘要： 提供在调节STAT3和/或STAT5激活方面有效的吡啶化合物，其可用于预防和治疗包括癌症、炎症和增生性皮肤病在内的增生性疾病和病症。

摘要： 提供在调节STAT3和/或STAT5激活方面有效的吡啶化合物，其可用于预防和治疗包括癌症、炎症和增生性皮肤病在内的增生性疾病和病症。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，公开了一对多肽及其编码基因，序列如SEQ ID NO.1～4。利用这对多肽构建获得的一对重组的转录激活子样效应因子（TALE）；转录激活子样效应因子核酸酶（TALEN），TALEN是由一对DNA识别蛋白分别与DNA切割蛋白融合形成的融合蛋白，能够对人胰岛素基因靶位点进行定向切割，从而实现对人胰岛素基因的靶向修饰，具有特异性强、效率高和准确度高等特点。

摘要： 本发明公开了具有抑制转录因子的转录激活活性的多肽及其编码基因与应用。该多肽，是如下1)或2)的多肽：1)由序列表中SEQ ID №：2所示的氨基酸残基组成的多肽；2)序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列经过一个或十几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有抑制转录因子的转录激活活性的由SEQ ID №：2衍生的多肽。该多肽对研究具有转录激活功能的转录因子的生物学功能及通过抑制此类转录因子的激活活性达到改变转基因植物(含有具有转录激活活性的转录因子)表型具有重要意义。

摘要： 本发明涉及基因工程领域，公开了一对多肽及其编码基因，序列如SEQ ID NO.1～4。利用这对多肽构建获得的一对重组的转录激活子样效应因子（TALE）；转录激活子样效应因子核酸酶（TALEN），TALEN是由一对DNA识别蛋白分别与DNA切割蛋白融合形成的融合蛋白，能够对人胰岛素基因靶位点进行定向切割，从而实现对人胰岛素基因的靶向修饰，具有特异性强、效率高和准确度高等特点。

摘要： 本发明公开了具有抑制转录因子的转录激活活性的多肽及其编码基因与应用。该多肽，是如下1)或2)的多肽：1)由序列表中SEQ ID №：2所示的氨基酸残基组成的多肽；2)序列表中SEQ ID №：2的氨基酸残基序列经过一个或十几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有抑制转录因子的转录激活活性的由SEQ ID №：2衍生的多肽。该多肽对研究具有转录激活功能的转录因子的生物学功能及通过抑制此类转录因子的激活活性达到改变转基因植物(含有具有转录激活活性的转录因子)表型具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种转录激活结构域TaL及其应用，所述转录激活结构域TaL氨基酸序列为ADEVGTKRIRLDSEPST，本发明的转录激活结构域转录活性优于现有的转录激活域，而且TaL转录激活域只有17个氨基酸，所以只需要51个碱基便可以编码一个拷贝，对于dCas9载体的影响不大。相较于动辄数十上百的其它转录激活域具有较大优势，更利于做稳定转化，获得转基因材料。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种海洋微拟球藻转录激活CRISPRa系统及其的构建方法和应用。系统载体含Cas9失活蛋白、转录激活效应蛋白VP64、抗性选择标记基因、至少一个gRNA支架序列和增强转录激活的特异序列(SunTag序列)。所述的用于微拟球藻基因转录激活CRISPRa载体在基因转化中的应用。本发明为微拟球藻基因功能研究提供了一种新的模型和可行性方法。

摘要： 本文公开了用于提高Pax7表达的方法和系统，在细胞中激活内源成肌转录因子Pax7的方法，将干细胞分化成骨骼肌祖细胞的方法，以及用于治疗需要再生的肌肉祖细胞的对象的组合物和方法。所述组合物和方法可以包括基于Cas9的转录激活蛋白和至少一种靶向Pax7的指导RNA(gRNA)。

摘要： 本发明涉及生命科学、遗传学和基因表达调节的领域。具体地，本发明涉及用于真核宿主的非病毒转录激活结构域。此外，本发明涉及包括本发明的转录激活结构域的多肽或人工转录因子。并且此外，本发明涉及多核苷酸、表达盒、表达系统和/或真核宿主。另外，本发明涉及用于在本发明的真核宿主中生产期望蛋白产物的方法，或涉及制备本发明的非病毒转录激活结构域或编码所述非病毒转录激活结构域的多核苷酸的方法。并且仍进一步，本发明涉及本发明的转录激活结构域、多肽、人工转录因子、多核苷酸、表达盒、表达系统或真核宿主用于代谢工程和/或生产期望蛋白产物的用途。