荧光定量PCR检测

摘要： 目的:探究荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果.方法:将于2019年6月-2020年6月在本中心共收到50例流感患者样本进行荧光定量PCR检测病毒核酸,并对检测结果呈阳性样本的检测结果进行观察统计.结果:在对患者样品检测后,50份样品中有33份表现为阳性,阳性率为66％,其中,甲型H1N1为18例,甲型H3为6例,乙型为9例,占比分别为36％、12％和18％.结论:对流感患者样本进行检测时,采用荧光定量PCR检测能够快速、高效检测流感病毒核酸,提高检测结果的准确度,具有应用价值和实际意义,建议推广.

摘要： 针对四川省珙县孝儿镇2018-2019年连续2年蚕病暴发的情况,开展了氟化物和硫化物含量检测、样品解剖、显微镜检、荧光定量PCR检测、气象因素及地形地貌分析等方面的研究.研究认为,孝儿镇大面积家蚕异常死亡的原因是受夏秋蚕饲养期间气候条件恶劣,温度较高,雨水偏多,湿度偏大,同时蚕病发生区域地势低洼,呈锅底型,气流不畅的影响,导致家蚕抗病力下降,从而引起家蚕感染病毒暴发蚕病.

摘要： 非洲猪瘟荧光定量PCR检测实验,无论是对仪器设备还是技术人员操作水平均是要求较高的实验,本文主要是介绍在实验室实际操作过程中影响非洲猪瘟荧光定量PCR检测实验结果的因素和实验过程中常见问题的分析及处理方法.

摘要： 目的 对郑州市一起皮肤炭疽疫情相关病例标本进行实验室检测分析,为皮肤炭疽的实验室诊断和疫情防控提供参考依据.方法 用常规培养的方法对患者的皮损渗出液标本和痰标本进行分离培养鉴定;对患者的血清标本进行ELISA检测;用荧光定量PCR方法对患者的皮损渗出液标本、血浆标本和痰标本进行rpoB基因、pagA基因和capC基因检测.结果 ELISA检测结果显示,患者A的双份血清抗体滴度呈4倍以上升高,患者B双份血清结果由阴性转为阳性;荧光定量PCR检测结果显示,3名患者皮损渗出液标本的rpoB基因、pagA基因和capC基因检测结果均为阳性.结论 实验室诊断结果证实此次事件是由炭疽杆菌引起的皮肤炭疽疫情.

摘要： 目的:探讨 ELISA联合荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒的临床效果.方法:选择我院 2018 年 1 月-2019 年 12 月收治的丙型肝炎病毒患者47 例为对象,患者病情均通过实验室病理学检查证实,单用 ELISA 检测作为对照组,ELISA 联合荧光定量PCR检测作为观察组,比较两组检测方法的灵敏度.结果:ELISA联合荧光定量PCR检测的灵敏度高于单用 ELISA检测, x 2=4.0286,P=0.0447,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:丙型肝炎病毒患者采用 ELISA联合荧光定量PCR检测的灵敏度高,可以对患者的病情进行准确检测.

摘要： 目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙肝病毒基因(HBV-DNA)与酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝五项指标在诊断乙型肝炎中的应用价值.方法:选取2018年1月至2020年1月期间泗阳县人民医院收治的80例乙型肝炎患者作为研究对象.对这80例患者分别采用FQ-PCR进行HBV-DNA含量检测和采用ELISA进行乙肝五项指标检测.然后,比较这些患者采用FQ-PCR检测HBV-DNA和采用ELISA检测乙肝五项指标的结果.结果:在这80例患者中,在HBV-DNA呈阴性的28例患者中,HBsAg、HBeAg、HBcAb呈阳性患者的占比低于HBsAg、HBeAb、HBcAb呈阳性患者的占比,P＜0.05.在HBV-DNA的含量为103～105拷贝/mL的19例患者中,HBsAg、HBeAg、HBcAb呈阳性患者的占比与HBsAg、HBeAb、HBcAb呈阳性患者的占比相比,P＞0.05.在HBV-DNA的含量＞105拷贝/mL的33例患者中,HBsAg、HBeAg、HBcAb呈阳性患者的占比高于HBsAg、HBeAb、HBcAb呈阳性患者的占比,P＜0.05.结论:采用FQ-PCR检测HBV-DNA和采用ELISA检测乙肝五项指标诊断乙型肝炎各具优势.通过乙肝五项指标的检测结果可准确地判断患者是否存在乙肝病毒感染.通过HBV-DNA可准确地判断乙型肝炎患者HBV感染及复制的情况,进而确定其病情所处的阶段.

摘要： 目的:研究结核杆菌检测中荧光定量PCR技术的应用价值。方法:选择2020年1月-2020年5月我辖区定点医疗机构收治的拟行结核杆菌筛查患者207例,分别进行痰涂片法、痰培养法以及荧光定量PCR技术检测,对比不同检测技术的阳性率。结果:207例患者采取痰涂片检测,共检测出阳性69例,占33.33%,阴性86例;痰培养法共检出阳性81例,占39.13%,痰培养法检测的阳性率高于痰涂片法(P<0.05);荧光定量PCR检测的阳性例数119例,占57.49%,明显高于痰涂片法与痰培养法(P<0.05)。结论:结核杆菌检测应用荧光定量PCR技术具有较高的敏感性及特异性,对于结核病早期诊断具有重要价值。

摘要： K亚群禽白血病病毒(ALV-K)是近几年新发现的一个禽白血病病毒亚群.本研究建立了一种SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测ALV-K方法.该方法仅对ALV-K有特异性扩增,不与其他亚群ALV、禽流感病毒、新城疫病毒或马立克氏病病毒等病原发生交叉反应;该方法比普通PCR至少灵敏100倍;该方法组内重复和组间重复试验的变异系数均低于1.95％;在对86个临床血浆样本的检测中,该方法显示出比普通PCR更高的检出率;该方法对人工感染ALV-K的鸡组织脏器进行检测,以肾脏、肺和腺胃的病毒载量较高.

摘要： K亚群禽白血病病毒(ALV-K)是近几年新发现的一个禽白血病病毒亚群.本研究建立了一种SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测ALV-K方法.该方法仅对ALV-K有特异性扩增,不与其他亚群ALV、禽流感病毒、新城疫病毒或马立克氏病病毒等病原发生交叉反应;该方法比普通PCR至少灵敏100倍;该方法组内重复和组间重复试验的变异系数均低于1.95％;在对86个临床血浆样本的检测中,该方法显示出比普通PCR更高的检出率;该方法对人工感染ALV-K的鸡组织脏器进行检测,以肾脏、肺和腺胃的病毒载量较高.

摘要： K亚群禽白血病病毒(ALV-K)是近几年新发现的一个禽白血病病毒亚群.本研究建立了一种SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测ALV-K方法.该方法仅对ALV-K有特异性扩增,不与其他亚群ALV、禽流感病毒、新城疫病毒或马立克氏病病毒等病原发生交叉反应;该方法比普通PCR至少灵敏100倍;该方法组内重复和组间重复试验的变异系数均低于1.95％;在对86个临床血浆样本的检测中,该方法显示出比普通PCR更高的检出率;该方法对人工感染ALV-K的鸡组织脏器进行检测,以肾脏、肺和腺胃的病毒载量较高.

摘要： K亚群禽白血病病毒(ALV-K)是近几年新发现的一个禽白血病病毒亚群.本研究建立了一种SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测ALV-K方法.该方法仅对ALV-K有特异性扩增,不与其他亚群ALV、禽流感病毒、新城疫病毒或马立克氏病病毒等病原发生交叉反应;该方法比普通PCR至少灵敏100倍;该方法组内重复和组间重复试验的变异系数均低于1.95％;在对86个临床血浆样本的检测中,该方法显示出比普通PCR更高的检出率;该方法对人工感染ALV-K的鸡组织脏器进行检测,以肾脏、肺和腺胃的病毒载量较高.

摘要： 目的：建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查. 方法：比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank：NC_001515)的核酸序列,选择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏感性和特异性进行验证.人工感染9只1日龄KM乳鼠,21天后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行检测,验证方法在应用中的有效性,最后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本. 结果：建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100copies/μL;人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高,脑、胸腺和血液中未检出;62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性. 结论：建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒,对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考.

摘要： 目的：建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查. 方法：比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank：NC_001515)的核酸序列,选择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏感性和特异性进行验证.人工感染9只1日龄KM乳鼠,21天后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行检测,验证方法在应用中的有效性,最后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本. 结果：建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100copies/μL;人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高,脑、胸腺和血液中未检出;62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性. 结论：建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒,对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考.

摘要： 目的：建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查. 方法：比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank：NC_001515)的核酸序列,选择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏感性和特异性进行验证.人工感染9只1日龄KM乳鼠,21天后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行检测,验证方法在应用中的有效性,最后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本. 结果：建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100copies/μL;人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高,脑、胸腺和血液中未检出;62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性. 结论：建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒,对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考.

摘要： 目的：建立多瘤病毒荧光定量PCR检测方法,并对裸鼹鼠中多瘤病毒感染情况进行调查. 方法：比较NCBI中小鼠多瘤病毒(Genbank：NC_001515)的核酸序列,选择保守区域设计引物和探针,建立多瘤病毒的荧光定量PCR方法,对方法的敏感性和特异性进行验证.人工感染9只1日龄KM乳鼠,21天后采集心、肝、脾、肺、肾、脑、胸腺、盲肠内容物和血液等组织脏器,用建立的荧光PCR方法进行检测,验证方法在应用中的有效性,最后用该方法检测62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本. 结果：建立的检测方法特异性好,在以多瘤病毒为模板时出现明显的荧光信号,以猴空泡病毒、小鼠K病毒、小鼠微小病毒和大鼠细小病毒H-1株为模板时无荧光信号出现;方法的最低检出限为100copies/μL;人工感染小鼠的心、肝、脾、肺、肾和盲肠内容物中均检测到多瘤病毒核酸,其中肺组织中含量最高,脑、胸腺和血液中未检出;62份裸鼹鼠的盲肠内容物样本经检测多瘤病毒为阴性. 结论：建立的多瘤病毒荧光定量PCR方法可有效检测动物组织中的多瘤病毒,对裸鼹鼠自然感染多瘤病毒的调查为实验用裸鼹鼠微生物标准的制定提供了参考.

摘要： 目的：建立流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的荧光定量PCR检测方法.并进行验证及初步应用. 方法：针对EDSV六邻体蛋白保守区分别设计引物和探针.建立荧光定量PCR检测方法.并验证该方法的线性、特异性、精密性、灵敏性及可行性.采用新建立的荧光定量PCR法针对16株流感疫苗主种子批毒种进行外源性EDSV检测. 结果：该方法的最佳线性范围为1×101～1×104coples/μl,回归曲线为y=-3.385x+39.616,R2＞0.99;与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应;实验内和试验间Ct值得变异系数(CV)均＜2％;灵敏度为104copies/μl;该方法检测PO代样品的最低检测限为10-4渗入体积比例,血清学方法检测PO-P3代样品的最低检测限为10-2～10-3掺入体积比例.该方法检测16株流感毒种中外源性RDSV的结果均为阴性,与血清学方法检测结果一致. 结论：成功建立了检测EDSV的荧光定量PCR法,提高了检测灵敏度和检测效率,更好地满足了流感疫苗应急检验中快验的要求.

摘要： 目的：建立流感疫苗主种子批毒种中外源性禽腺病毒Ⅲ型(egg drop syndrome virus,EDSV)的荧光定量PCR检测方法.并进行验证及初步应用. 方法：针对EDSV六邻体蛋白保守区分别设计引物和探针.建立荧光定量PCR检测方法.并验证该方法的线性、特异性、精密性、灵敏性及可行性.采用新建立的荧光定量PCR法针对16株流感疫苗主种子批毒种进行外源性EDSV检测. 结果：该方法的最佳线性范围为1×101～1×104coples/μl,回归曲线为y=-3.385x+39.616,R2＞0.99;与其他种属的腺病毒及流感病毒间均无交叉反应;实验内和试验间Ct值得变异系数(CV)均＜2％;灵敏度为104copies/μl;该方法检测PO代样品的最低检测限为10-4渗入体积比例,血清学方法检测PO-P3代样品的最低检测限为10-2～10-3掺入体积比例.该方法检测16株流感毒种中外源性RDSV的结果均为阴性,与血清学方法检测结果一致. 结论：成功建立了检测EDSV的荧光定量PCR法,提高了检测灵敏度和检测效率,更好地满足了流感疫苗应急检验中快验的要求.

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 一种用于检测水貂圆环病毒的荧光定量PCR引物组和荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括：MiCV荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；MiCV荧光定量PCR反应液包括上下游引物、TBPremix Ex TaqTMII和ddH2O；上游引物：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'。本发明根据水貂圆环病毒的Cap基因保守序列设计引物，通过反应体系和条件优化建立了基于SYBR Green II的实时荧光定量PCR技术并组装试剂盒，该试剂盒具有稳定性好、敏感性和特异性较高等优点。

摘要： 本发明提供了一种三重荧光定量PCR引物探针组与三重荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域。本发明的PCR引物探针组包括SEQ ID NO.1所示的APP‑F、SEQ ID NO.2所示的APP‑R、SEQ ID NO.3所示的APP‑探针，SEQ ID NO.4所示的HPS‑F、SEQ ID NO.5所示的HPS‑R、SEQ ID NO.6所示的HPS‑探针，SEQ ID NO.7所示的Pm‑F、SEQ ID NO.8所示的Pm‑R、SEQ ID NO.9所示的Pm‑探针。将该引物探针组制备成试剂盒，可特异的同时检测APP、HPS和Pm，灵敏度能达到10拷贝/μl。

摘要： 本发明属于D型流感病毒检测技术领域，具体涉及D型流感病毒荧光定量PCR与LAMP荧光定量PCR引物对及其应用。D型流感病毒主要感染动物中包括猪和牛，对畜牧业的发展具有一定的威胁，提供稳定可靠的检测方法具有重要的意义。本发明提供了一种用于D型流感病毒实时荧光定量PCR检测的引物序列及相应的试剂盒，该引物针对D型流感病毒HE基因中的保守序列进行设计，能够实现良好的检测特异性和灵敏度，敏感性比普通PCR和荧光定量LAMP均高100倍，可以实现大量通用样品的检测，可对D型流感病毒进行快速、高敏感度的实时荧光定量PCR检测，对于提高D型流感病毒的检测精度具有重要的意义。

摘要： 本发明提供了一种鉴别肝螺杆菌的荧光定量PCR方法，将包含有PCR引物的反应体系进行荧光定量PCR反应；PCR引物包括上游引物和下游引物；反应体系包括以下组分：上游引物，下游引物，SYBR Premix Ex TaqⅡ，ROX Reference DyeⅡ，样品DNA模版，ddH

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液及试剂盒和荧光定量PCR方法。所述荧光定量PCR反应液，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×SYBR荧光染料，10×PCR buffer，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和Ex-Taq酶。本发明优化了PCR实验的荧光定量PCR反应液，特别是加入一定比例的甘油溶液，以保证Ex-Taq酶的活性，加入BSA与DMSO的组合保证了Tag酶的稳定性及活性并减少引物二聚体的形成，减少荧光定量PCR反应液配置时间，所得PCR反应液可以长期保存在-20°C中，使用方便。

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本申请公开了一种荧光定量PCR反应系统、试剂盒及核酸定量检测方法，所述荧光定量PCR反应系统利用核酸内切酶特异性地产生一段Flap序列，所述Flap序列可作为一段核苷酸序列扩增时的引物，而该核苷酸序列上存在多个的发光探针结合区段，因此，当该核苷酸序列扩增时，发光探针被DNA聚合酶切割而产生荧光信号。由于该核苷酸序列上结合有多个发光探针，且Flap序列的数量与待荧光定量PCR检测的目标基因的数量相关，所以所述荧光定量PCR反应系统可实现对目标基因的特异性扩增，且信号强度大大提升，从而提高了对临界样本的检测灵敏度。

摘要： 本实用新型公开了一种荧光定量PCR光学激发装置及成像装置、荧光定量PCR仪，其中荧光定量PCR光学激发装置包括光源，该光源的出光方向上设有激发光滤光片和二向色镜，还包括设于激发光滤光片与二向色镜之间的光均匀化透镜组；所述光均匀化透镜组包括平行透镜、复眼透镜和积分透镜，激发光滤光片、平行透镜、复眼透镜、积分透镜、二向色镜沿光源的出光方向依次设置；所述光源为宽光谱光源。本实用新型能够获得照度均匀的激发光，并能够在不同的光谱通道进行检测，使用寿命长，光源更换次数少；成像效果好；尤其适用于微流体芯片的荧光定量PCR检测。