ELISA

摘要： 为进一步评定小反刍兽疫病毒抗体的测量不确定度,使用ELISA方法进行相关试验,依据《兽医检测实验室ELISA试验测量不确定度评估指南》(CNAS-GL043:2020)、《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012),分析了ELISA试验测量不确定度的各分量,并根据各分量的来源及产生途径,详细评定了各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度.结果显示,本次试验检测样品的S/N值为89.03％,U=1.36％(k=2).结果表明,ELISA试验引入不确定度,可以进一步提高结果的准确性、可靠性,还可以通过分析各分量在测量结果中所占比例及影响,推断出影响检测结果的主要因素,进一步做好实验室质量控制.

摘要： 目的:分析南通地区无偿献血者HIV筛查反应性S/CO值与确证阳性的相关性,探讨ELISA检测HIV灰区设置的必要性。方法:对2017~2020年南通地区355585份无偿献血者标本进行ELISA艾滋病病毒抗原和抗体联合检测法(HIV Ag/Ab)和艾滋病抗体检测法(HIV-Ab)筛查,将反应性标本(包括单试剂反应性、双试剂反应性和灰区反应性)288例送疾控中心做蛋白免疫印迹(WB)确证试验,对结果进行统计分析。结果:第3、4代试剂最大约登指数分别为0.974和0.952,对应最适临界值分别为9.762和9.057;单试剂反应性和灰区(0.7≤S/CO<1)标本WB确证试验结果均为阴性且核酸NAT检测未检测出HIV RNA。第3、4代HIV ELISA双试剂反应性献血者标本确证试验阳性率95.45%(42/44),确证阴性率2.27%、(1/44),不确定率2.27%(1/44)。结论:ELISA双试剂反应性与确证阳性呈现正相关,ELISA检测设置灰区意义不大,设置适合实验室工作实际的灰区,可以降低检测成本,降低血液报废。

摘要： 为探究非洲猪瘟病毒(ASFV)EP153R蛋白的功能和建立ASFV抗体间接ELISA方法,本试验构建了EP153R蛋白杆状病毒表达系统,采用Western blot与IFA鉴定rEP153R蛋白的表达和免疫原性。结果显示,杆状病毒能高效表达rEP153R蛋白且可被小鼠多克隆抗体识别,具有良好的免疫原性。以此重组蛋白为抗原进行间接ELISA方法的建立,经方阵ELISA确定当抗原包被量2.5μg/mL,ASFV阳性血清稀释比1∶1000时为最佳反应条件;以优化后的条件确定了抗体阳性临界值为0.259;特异性试验结果表明,该方法仅与ASFV阳性血清发生反应,具有较强的特异性;重复性试验结果显示变异率小于10%,重复性良好。利用该方法对46份猪血清进行检测,与商品化试剂盒检测结果对比显示,符合率为91.3%,能较好的区分ASFV阴性血清与阳性血清。本研究的结果为后续EP153R功能研究和ASFV临床血清学诊断奠定了基础。

摘要： The mdx mouse is a model of Duchenne muscular dystrophy(DMD),a fatal progressive muscle wasting disease caused by dystrophin deficiency,and is used most widely in preclinical studies.Mice with dystrophin deficiency,however,show milder muscle strength phenotypes than humans.In human,the introduction of a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)kit revealed a more than 700-fold increase in titin N-terminal fragment levels in the urine of pediatric patients with DMD.Notably,the urinary titin level declines with aging,reflecting progression of muscle wasting.In mouse,development of a highly sensitive ELISA kit has been awaited.Here,a sandwich ELISA kit to measure titin N-terminal fragment levels in mouse urine was developed.The developed kit showed good linearity,recovery,and repeatability in measuring recombinant or natural mouse titin N-terminal fragment levels.The titin N-terminal fragment concentration in the urine of mdx mice was more than 500-fold higher than that of normal mice.Urinary titin was further analyzed by extending the collection of urine samples to both young(3-11 weeks old)and aged(56-58 weeks old)mdx mice.The concentration in the young group was significantly higher than that in the aged group.It was concluded that muscle protein breakdown is active and persistent in mdx mice even though the muscle phenotype is mild.Our results provide an opportunity to develop DMD treatments that aim to alleviate muscle protein breakdown by monitoring urinary titin levels.

摘要： 【目的】探究石房蛤毒素(STX)完全抗原制备方法和STX多克隆抗体免疫方案。【方法】通过碳二亚胺法(EDC)和高碘酸盐法(periodate reaction)2种交联方法,将小分子石房蛤毒素与牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)和孔血蓝蛋白(KLH)分别进行交联,制备了6种形式STX完全抗原,并对交联物进行琼脂糖凝胶电泳鉴定和紫外吸收峰迁移变化鉴定。分别将EDC法和高碘酸盐法交联的STX-BSA、STX-KLH 4种完全抗原作为免疫原,对Balb/c小鼠进行免疫,获得STX多克隆抗体。通过间接ELISA法,对不同方法制备的多克隆抗体进行分析比较。【结果】在石房蛤毒素完全抗原的制备中,在交联方法的选择上,EDC法较高碘酸盐法更具优势;而在免疫原的选择上,STX-BSA完全抗原效果最好。【结论】本研究探究了2种制备STX完全抗原的方法,为今后多克隆抗体生产以及特异性单克隆抗体筛选提供数据支撑。

摘要： 【目的】明确苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)晶体蛋白对暗黑鳃金龟Holotrichia parallela幼虫的杀虫机制。【方法】基于暗黑鳃金龟转录组数据,PCR克隆暗黑鳃金龟碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因HpALP全长cDNA序列;利用原核表达系统在体外表达HpALP,并进行Western blot检测;利用qRT-PCR测定HpALP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫不同组织(前肠、中肠、直肠、回肠、马氏管、脂肪体和体壁)中的表达水平;利用配体印记实验及ELISA技术对HpALP蛋白与苏云金芽胞杆菌晶体蛋白Cry8Ea3体外结合特性进行分析。【结果】得到了暗黑鳃金龟HpALP全长cDNA(GenBank登录号:MZ004964),长1536 bp,编码512个氨基酸,预测蛋白质分子量为57.32 kD,等电点为4.70;HpALP与食粪金龟Onthophagus taurus ALP的氨基酸序列一致性最高;原核表达获得重组蛋白HpALP,经Western blot检测HpALP重组蛋白在IPTG诱导8 h时的表达量最高。qRT-PCR分析的组织表达谱结果表明,HpALP在幼虫前肠中丰度最高。HpALP重组蛋白可以与Cry8Ea3特异结合,解离常数Kd值为76.21±26.44 nmol/L,最大亲合力Bmax值为0.59±0.068;而HpALP重组蛋白与对照Cry1Ab35不结合,Kd值为142.50±137.30 nmol/L,Bmax值为0.013±0.005。【结论】分离鉴定了暗黑鳃金龟HpALP蛋白,它与Bt Cry8Ea3亲和力强,推断其为Cry8Ea3的受体蛋白。研究结果为明确Cry8Ea3蛋白对暗黑鳃金龟的作用机制提供了理论依据。

摘要： 为调查宁夏回族自治区(简称“宁夏”)银川市规模牧场犊牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染情况,本试验采集某牧场6月龄内犊牛血液和粪便拭子各69份,采用商品化BVDV抗原检测试剂盒结合RTPCR检测及微流控芯片检测技术等进行检测。结果表明,商品化BVDV抗原检测、RT-PCR核酸检测方法及微流控芯片检测结果一致,阳性率均为7.24%。结果表明,该牛场BVDV感染率较高,为了做好该病的净化,应加强全群牛只的检测,以防止该病在此牧场进一步蔓延。

摘要： 为了解山东部分地区奶牛副结核病的感染情况,采用ELISA方法对2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区18个不同规模奶牛养殖场2岁以上所有泌乳奶牛进行副结核病的血清抗体水平检测,并运用统计学软件进行数据分析。结果显示,2018年2月-2019年11月期间山东省9个地区总体抗体阳性率为17.80%(579/3253),2019年阳性率(22.31%;441/1976)高于2018年阳性率(11.24%,138/1227)。不同地区和不同月份的抗体阳性率差异均较大,济南地区最高,为40.75%(P>0.05),威海地区最低,为5.98%(P>0.05);济南与其他地区抗体阳性率均差异显著(P0.05),与其他地区差异显著(P0.05)、大型牛场15.57%(P>0.05)、小型牛场15.30%(P>0.05),不同规模的养殖场之间牛副结核病阳性率均差异不显著(P>0.05)。此次调查表明,牛副结核感染在山东省普遍存在,应引起有关部门的重视,采取有效的综合防控措施进行防控。

摘要： 目的分析梅毒患者血清学检测结果的分布情况,为本地区的梅毒临床诊疗及预防提供实验依据。方法收集2015年1月-2019年12月在贵阳市第一人民医院就诊检查梅毒的患者123950例,用酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)进行检测,将检测结果按年份、来源、性别、年龄和方法进行分组整理并分析。结果ELISA和TRUST检出梅毒抗体阳性例数分别为5571例、1441例,ELISA总阳性率为4.49%,高于TRUST总阳性率的1.16%,差异有统计学意义(P60岁的阳性率最高,≤20岁阳性率最低,各年龄段间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论梅毒抗体阳性率门诊高于住院,男性高于女性,随年龄增加有升高的趋势。应加强预防梅毒的宣传力度,普及梅毒血清学筛查,及早发现梅毒患者并治疗,有助于减少梅毒传播与流行。医务人员应加强自我保护意识,减少职业暴露风险;梅毒血清学检查因存在方法学的局限性,诊断时谨慎。

摘要： ELISA即酶联免疫吸附试验,是一种在抗原抗体特异性反应基础上运用了酶的催化放大效应的免疫学试验方法,可广泛用于抗原抗体的检测,具有特异性强、灵敏度高、易于操作、结果客观准确、安全性高且易于推广等优点。本文简要介绍了兽医临床诊断中实验室常规ELISA检测的基本原理,同时以犬细小、猫免疫缺陷病、犬心丝虫病等为例介绍了ELISA检测在兽医临床诊断中的应用概况,旨在推广和普及该检测方法在兽医临床疾病诊断中的应用。

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的287份和青海的262份共549份牦牛血清进行牛病毒性腹泻抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏145份,阳性率为53.65％;青海189份,阳性率为72.14％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛病毒性腹泻病毒的感染.该研究的目的在于调查牛病毒性腹泻在西藏和青海牦牛群中的流行情况.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的287份和青海的262份共549份牦牛血清进行牛病毒性腹泻抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏145份,阳性率为53.65％;青海189份,阳性率为72.14％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛病毒性腹泻病毒的感染.该研究的目的在于调查牛病毒性腹泻在西藏和青海牦牛群中的流行情况.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的287份和青海的262份共549份牦牛血清进行牛病毒性腹泻抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏145份,阳性率为53.65％;青海189份,阳性率为72.14％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛病毒性腹泻病毒的感染.该研究的目的在于调查牛病毒性腹泻在西藏和青海牦牛群中的流行情况.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的287份和青海的262份共549份牦牛血清进行牛病毒性腹泻抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏145份,阳性率为53.65％;青海189份,阳性率为72.14％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛病毒性腹泻病毒的感染.该研究的目的在于调查牛病毒性腹泻在西藏和青海牦牛群中的流行情况.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的938份和青海的206份共1124份牦牛血清进行结核杆菌抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏24份,阳性率2.56％；青海3份,阳性率为0.98％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛结核杆菌的感染.该研究的目的在于调查牛结核杆菌在西藏和青海牦牛群中的流行情况,为制定该病的防治措施提供理论依据.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的938份和青海的206份共1124份牦牛血清进行结核杆菌抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏24份,阳性率2.56％；青海3份,阳性率为0.98％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛结核杆菌的感染.该研究的目的在于调查牛结核杆菌在西藏和青海牦牛群中的流行情况,为制定该病的防治措施提供理论依据.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的938份和青海的206份共1124份牦牛血清进行结核杆菌抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏24份,阳性率2.56％；青海3份,阳性率为0.98％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛结核杆菌的感染.该研究的目的在于调查牛结核杆菌在西藏和青海牦牛群中的流行情况,为制定该病的防治措施提供理论依据.

摘要： 应用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)对在2011年间采自西藏的938份和青海的206份共1124份牦牛血清进行结核杆菌抗体检测.结果检出阳性血清样品西藏24份,阳性率2.56％；青海3份,阳性率为0.98％.统计数据表明西藏和青海牦牛群中均存在牛结核杆菌的感染.该研究的目的在于调查牛结核杆菌在西藏和青海牦牛群中的流行情况,为制定该病的防治措施提供理论依据.

摘要： 目的: 评价十二指肠乳头周围憩室与幽门螺杆菌感染在胆总管结石形成中的相关性。方法: 回顾性分析我院内镜中心2007年9月至2008年8月成功进行ERCP 检查并获取胆汁患者121 例，根据其有无胆总管结石和十二指肠周围憩室进行分组，用ELISA 法对胆汁进行HP-IgG 抗体检测，检测结果进行统计学分析。结果:伴十二指肠乳头周围憩室的胆总管结石患者中胆汁中HP-IgG 检出率高达77.3%，不伴十二指肠乳头周围憩室的胆总管结石患者中胆汁HP-IgG 检出率为58.2%，两组阳性率有统计学意义（P<0.05）。结论: 十二指肠周围憩室增加了胆道幽门螺旋杆菌感染的机率，对胆总管结石的形成有一定的促进作用。

摘要： 目的: 评价十二指肠乳头周围憩室与幽门螺杆菌感染在胆总管结石形成中的相关性。方法: 回顾性分析我院内镜中心2007年9月至2008年8月成功进行ERCP 检查并获取胆汁患者121 例，根据其有无胆总管结石和十二指肠周围憩室进行分组，用ELISA 法对胆汁进行HP-IgG 抗体检测，检测结果进行统计学分析。结果:伴十二指肠乳头周围憩室的胆总管结石患者中胆汁中HP-IgG 检出率高达77.3%，不伴十二指肠乳头周围憩室的胆总管结石患者中胆汁HP-IgG 检出率为58.2%，两组阳性率有统计学意义（P<0.05）。结论: 十二指肠周围憩室增加了胆道幽门螺旋杆菌感染的机率，对胆总管结石的形成有一定的促进作用。

摘要： 本发明公开了可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒，ELISA试剂盒含有可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液和终止液，将该试剂盒用于检测I型鸭病毒性肝炎抗体具有特异性强、重现性好、敏感度高，与用全病毒作包被抗原的ELISA试剂盒检测的符合率高，可用于临床样品的检测。

摘要： 本发明涉及一种用于ELISA试验中的稀释液，所述的稀释液包括0.0014-0.0017%的溴粉红指示剂，及余量的基础稀释液生理盐水。所述的稀释液是将小牛血清、指示剂溴粉红加入到基础稀释液中，然后再稀释血清或血浆标本。本发明其显色反应较明显，可完全避免检测标本的漏加和错加现象。

摘要： 本发明提供了杂交瘤细胞、洋葱黄矮病毒抗体及其应用、ELISA检测试剂盒和ELISA检测方法，涉及生物技术领域。本发明提供的杂交瘤细胞分泌单抗4G12、单抗6D7、单抗6E10或单抗10C8，能够用于上述单抗的制备。经发明人研究发现，上述单抗均能够特异性的与洋葱黄矮病毒结合，能够用于构建洋葱黄矮病毒的检测方法。本发明提供的洋葱黄矮病毒的ELISA检测方法，包括采用本发明提供的葱黄矮病毒抗体包被酶标板，然后依次进行待测样本孵育、抗体标记的辣根过氧化酶孵育和显色。该方法检测灵敏度高，特异性强，检测准确性好，方便快捷，为葱属植物病害检测、检疫、脱毒提供关键技术支持。

摘要： 本发明涉及微流控芯片ELISA检测技术领域，特别涉及ELISA检测微流控芯片和ELISA检测微流控芯片体系以及它们的应用。芯片包括：进样单元(1)、储液单元(2)、反应单元(3)及废液单元(4)；该微流控芯片还包括用于对待检样本定量的第一定量单元(5)，第一定量单元包括第一狭缝(51)、以及由第一狭缝隔开的第一样本腔室(52)和第二样本腔室(53)；第一样本腔室与所述进样单元相通，第二样本腔室与所述废液单元相通。芯片体系由上中下三层组成；中层为所述芯片；上下层用于覆盖封闭中层；上层有与进样单元连接的进样孔，及对应储液单元的让位孔。所述芯片检测过程简单，可对反应样本进行定量，灵敏度高、重复性强。

摘要： 本发明公开了可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒，ELISA试剂盒含有可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液和终止液，将该试剂盒用于检测I型鸭病毒性肝炎抗体具有特异性强、重现性好、敏感度高，与用全病毒作包被抗原的ELISA试剂盒检测的符合率高，可用于临床样品的检测。

摘要： 本发明公开了检测植物感染番茄黄化曲叶病毒的dot-ELISA和组织印迹ELISA方法及其试剂盒及应用。利用针对番茄黄化曲叶病毒外壳蛋白制备的单克隆抗体，建立配比最优化的斑点酶联免疫吸附法（dotenzyme-linkedimmunosorbentassay，dot-ELISA）及组织印记ELISA的方法，并研发快速检测试剂盒。该发明适用于番茄、辣椒、茄子、烟草、龙葵、曼陀罗等茄科植物。利用该发明可对田间蔬菜样品番茄黄化曲叶病毒感染情况进行调查，检测病毒病的发病率，评估番茄黄化曲叶病毒在田间的发生分布情况及流行爆发趋势。该检测方法灵敏度高、特异性好、耗时短、成本低，为番茄黄化曲叶病毒的快速、大规模检测提供技术支撑。

摘要： 本发明涉及用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物、其制备方法及黄曲霉毒素ELISA检测方法。用于ELISA检测黄曲霉毒素的标准品通用替代物，其特征在于：它为可识别各鼠源抗黄曲霉毒素单克隆抗体的兔抗鼠抗体。它是以鼠源抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体、抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和抗黄曲霉毒素G1单克隆抗体作为混合抗原，经免疫新西兰长耳大白兔，颈动脉取血，血清亲和纯化后获得。该标准品通用替代物无毒无害，可分别通过替代黄曲霉毒素

摘要： 抗原捕获IgA酶联免疫吸附测定(antigen capture IgA Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ACA－ELISA)已被开发用于检测抗黄病毒IgA。该测定使用由单克隆抗体捕获的黄病毒裂解物抗原，优选登革病毒裂解物抗原。优选使用缀合有报告基团(例如辣根过氧化物酶(HRP))的兔抗IgA来检测测试血清中的所捕获抗黄病毒IgA。发现该测定比抗人IgA捕获ELISA(AAC－ELISA)灵敏至少8倍。发现基于血清或唾液的ACA－ELISA与“黄金标准”抗登革热IgM检测技术相比更加灵敏和快速，并且可用作感染早期确诊登革热的诊断工具。

摘要： 本发明涉及一种用于ELISA试验中的稀释液，所述的稀释液包括0.0014－0.0017％的指示剂，及余量的基础稀释液。所述的稀释液是将小牛血清、指示剂溴粉红加入到基础稀释液中，然后再稀释血清或血浆标本。本发明其显色反应较明显，可完全避免检测标本的漏加和错加现象。

摘要： 本实用新型涉及微流控芯片ELISA检测技术领域，特别涉及ELISA检测微流控芯片和ELISA检测微流控芯片体系。芯片包括：进样单元(1)、储液单元(2)、反应单元(3)及废液单元(4)；该微流控芯片还包括用于对待检样本定量的第一定量单元(5)，第一定量单元包括第一狭缝(51)、以及由第一狭缝隔开的第一样本腔室(52)和第二样本腔室(53)；第一样本腔室与所述进样单元相通，第二样本腔室与所述废液单元相通。芯片体系由上中下三层组成；中层为所述芯片；上下层用于覆盖封闭中层；上层有与进样单元连接的进样孔，及对应储液单元的让位孔。所述芯片检测过程简单，可对反应样本进行定量，灵敏度高、重复性强。