暗黑鳃金龟

摘要： 【目的】明确苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)晶体蛋白对暗黑鳃金龟Holotrichia parallela幼虫的杀虫机制。【方法】基于暗黑鳃金龟转录组数据,PCR克隆暗黑鳃金龟碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)基因HpALP全长cDNA序列;利用原核表达系统在体外表达HpALP,并进行Western blot检测;利用qRT-PCR测定HpALP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫不同组织(前肠、中肠、直肠、回肠、马氏管、脂肪体和体壁)中的表达水平;利用配体印记实验及ELISA技术对HpALP蛋白与苏云金芽胞杆菌晶体蛋白Cry8Ea3体外结合特性进行分析。【结果】得到了暗黑鳃金龟HpALP全长cDNA(GenBank登录号:MZ004964),长1536 bp,编码512个氨基酸,预测蛋白质分子量为57.32 kD,等电点为4.70;HpALP与食粪金龟Onthophagus taurus ALP的氨基酸序列一致性最高;原核表达获得重组蛋白HpALP,经Western blot检测HpALP重组蛋白在IPTG诱导8 h时的表达量最高。qRT-PCR分析的组织表达谱结果表明,HpALP在幼虫前肠中丰度最高。HpALP重组蛋白可以与Cry8Ea3特异结合,解离常数Kd值为76.21±26.44 nmol/L,最大亲合力Bmax值为0.59±0.068;而HpALP重组蛋白与对照Cry1Ab35不结合,Kd值为142.50±137.30 nmol/L,Bmax值为0.013±0.005。【结论】分离鉴定了暗黑鳃金龟HpALP蛋白,它与Bt Cry8Ea3亲和力强,推断其为Cry8Ea3的受体蛋白。研究结果为明确Cry8Ea3蛋白对暗黑鳃金龟的作用机制提供了理论依据。

摘要： 【目的】本研究旨在阐明暗黑鳃金龟Holotrichia parallela UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(UAP)基因HpUAP的序列特征和功能。【方法】通过PCR方法从暗黑鳃金龟2龄幼虫中扩增HpUAP全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;构建pET30a-HpUAP重组表达载体,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达;利用qRT-PCR检测HpUAP在暗黑鳃金龟幼虫不同发育阶段(1-3龄幼虫)和3龄第2天幼虫不同组织(体壁、中肠、直肠、回肠、马氏管和脂肪体)中的表达量。利用RNAi沉默暗黑鳃金龟2龄幼虫体内HpUAP基因后,观察其生长发育和存活情况,并测定RNAi 72 h后其HpUAP表达量和体壁几丁质含量。【结果】PCR扩增获得暗黑鳃金龟HpUAP全长cDNA序列(GenBank登录号:MW676788),开放阅读框长1461 bp,编码486个氨基酸残基,蛋白分子量约为53.9 kD。系统进化分析发现HpUAP与似牛嗡蜣螂Onthophagus taurinus UAP的氨基酸序列以较高的置信度聚为一个分支。经IPTG诱导可表达53.9 kD的HpUAP蛋白,与预期大小一致。发育表达谱结果表明HpUAP在1龄第1天和3龄第1天暗黑鳃金龟幼虫中表达量较高,组织表达谱结果表明HpUAP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫中肠和体壁中表达量较高。HpUAP RNAi导致暗黑鳃金龟2龄幼虫生长与行动缓慢,体表颜色加深并皱缩;RNAi处理72 h后,与对照组(dsGFP注射组)相比,dsHpUAP注射组HpUAP表达量下降了93.06%,死亡率增加了40%左右,表皮几丁质含量下降了约29%。【结论】结果说明HpUAP参与几丁质代谢,在暗黑鳃金龟幼虫的生长发育过程中起关键作用。

摘要： 通过辛硫磷和毒死蜱对铜绿丽金龟和暗黑鳃金龟幼虫的室内药效和毒力测定,研究了防治地下害虫的2个主要药剂对2种主要优势种蛴螬的抗(耐)药性现状。结果表明:40%辛硫磷乳油对暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟3龄幼虫的LC_(50)分别是2龄幼虫的4.63倍和1.10倍,45%毒死蜱乳油对暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟3龄幼虫的LC_(50)分别是2龄幼虫的5.15倍和4.01倍,因此3龄幼虫比2龄幼虫有更强的耐药性,蛴螬防治要防早防小;40%辛硫磷乳油对铜绿丽金龟2龄和3龄幼虫的LC_(50)是分别是暗黑鳃金龟14.7倍和3.5倍,45%毒死蜱乳油对铜绿丽金龟2龄和3龄幼虫的LC_(50)是分别是暗黑鳃金龟7.8倍和6.1倍,因此铜绿丽金龟幼虫较暗黑鳃金龟幼虫具有更强的耐药性。以铜绿丽金龟为主要优势种的地区,蛴螬的防治不建议使用辛硫磷,毒死蜱可以和其他药剂轮换使用。

摘要： 利用2015—2019年自动虫情测报灯对漯河市金龟子进行诱集监测.结果表明,灯光诱集到的金龟子共2科8种,混合种群年诱集量呈上升趋势,以2018年诱集数量最多.5种常发性金龟子总的诱集数量表现为暗黑鳃金龟>铜绿丽金龟>阔胫玛绢金龟>华北大黑鳃金龟>毛黄鳃金龟.暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟为漯河市金龟子优势种群,暗黑鳃金龟诱集数量占当年金龟子总量的73.18％～90.50％,占比逐年上升,为绝对优势种,发生期长而分散,发生盛期集中在6月下旬至8月中下旬;铜绿丽金龟诱集数量占当年金龟子总量的9.11％～23.88％,占比呈下降趋势,发生期相对短而集中,发生盛期集中在6月上旬至7月中旬.

摘要： 为筛选高效安全的花生种衣剂,选用7种杀虫剂对暗黑鳃金龟进行室内毒力测定,并在此基础上,复配杀菌剂戊唑醇或吡唑醚菌酯制成种衣剂开展田间防效试验.室内毒力测定结果表明,供试的7种杀虫剂原药中,联苯菊酯、噻虫胺和氯虫苯甲酰胺对7日龄暗黑鳃金龟幼虫的毒力较高,96 h的LC50依次为0.490、12.923和14.705 mg/kg.田间防效结果表明,添加杀菌剂戊唑醇或吡唑醚菌酯复配后处理,出苗率、防治效果、保果效果和增产率均得到进一步的提高,其中以12％联苯菊酯·吡唑醚菌酯和12％联苯菊酯·戊唑醇的综合防效最佳,可作为花生病虫害防治的轮换药剂推广应用.

摘要： [目的]筛选对铜绿丽金龟和暗黑鳃金龟具有明显诱捕效果的光波波长,研究成虫夜间活动节律,优化金龟成虫的灯诱防控技术.[方法]2014～2015年评价19种不同波长(375～748 nm)LED灯对2种金龟成虫的田间诱捕效果,2019年分时段监测385 nm、395 nm的LED灯以及黑光灯(365 nm±50 nm)的诱捕数量.[结果]2014～2015年,395 nm的LED灯对铜绿丽金龟的诱捕效果显著高于其他18种波长,395 nm的LED灯对暗黑鳃金龟的诱捕数量同样最多,但与418 nm之间差异不显著.2019年385 nm的LED灯诱捕到的铜绿丽金龟、暗黑鳃金龟成虫数量均显著高于395 nm的LED灯,但与黑光灯之间无显著差异.2种金龟成虫的上灯高峰均在20:00～24:00,占整个夜晚(18:00～翌日06:00)诱捕量的68.9％ ～76.7％.[结论]诱捕铜绿丽金龟和暗黑鳃金龟的最优波长是385 nm,最佳时段为20:00～24:00.

摘要： [目的]分析植物叶片中主要营养成分与暗黑鳃金龟Holotrichia parallela成虫取食偏好关系,明确影响其成虫取食、寿命及生殖力的主要营养成分.[方法]测定室内5种植物(花生、核桃、榆树、金叶女贞和毛白杨)叶片饲养的暗黑鳃金龟成虫寿命、取食量和产卵量,分析植物叶片中4种主要营养成分(氨基酸、脂肪酸、粗纤维和总磷)含量与暗黑鳃金龟成虫取食、寿命和生殖力之间的相关性.[结果]暗黑鳃金龟成虫对5种植物叶片的日均取食量由高到低依次为:花生＞核桃＞榆树＞金叶女贞＞毛白杨;取食核桃、花生和榆树叶片的成虫总取食量和单雌总产卵量与取食金叶女贞和毛白杨的成虫间均差异极显著(P＜0.01).成虫总取食量与植物叶片中氨基酸含量显著相关(P ＜0.05;r=0.515);成虫单雌总产卵量与植物叶片中脂肪酸及氨基酸含量间极显著相关(P＜0.01)(分别为:r=0.698和r=0.746).植物叶片中必需氨基酸含量与成虫取食量和产卵量相关性与植物叶片中总氨基酸含量与成虫取食量和产卵量的相关性基本一致;成虫取食量与植物叶片中赖氨酸含量最相关,而成虫单雌总产卵量与植物叶片中各种必需氨基酸含量均相关.成虫寿命与植物叶片营养成分含量不相关.[结论]植物叶片中的赖氨酸含量是影响暗黑鳃金龟成虫取食偏好的关键因子,植物叶片中必需氨基酸含量和脂肪酸含量影响暗黑鳃金龟生殖力.

摘要： cDNA文库免疫筛选到编码暗黑鳃金龟幼虫几丁质脱乙酰酶HpCDA5基因,序列分析表明HpCDA5含有1个几丁质脱乙酰酶结构域,属于Group V类CDA蛋白.构建重组杆状病毒表达载体pFastBac-HpCDA5,转染昆虫细胞sf9,Western blot分析表明HpCDA5在昆虫细胞sf9中成功表达42 kDa的蛋白.利用qRT-PCR方法分析HpCDA5基因组织表达,结果显示HpCDA5基因在中肠中表达最高,为中肠特异表达蛋白.几丁质结合活性表明HpCDA5蛋白只能被强洗脱剂洗脱,具有很强的几丁质结合活性.本研究通过对暗黑鳃金龟几丁质脱乙酰酶HpCDA5的生化特性研究,为进一步明确HpCDA5的生理功能提供理论依据,并为以HpCDA5蛋白为靶标的暗黑鳃金龟生物防治提供支撑.

摘要： 暗黑鳃金龟(Holotrichia parallela)是一种世界性分布的重要地下害虫.近几年,随着免耕等种植模式的调整,暗黑鳃金龟在中国的发生日益严重,对农作物造成极大的为害.本文介绍了暗黑鳃金龟发生为害现状,化学防治、物理防治、生物防治、性信息素和植物挥发物防治等具体措施.探讨了暗黑鳃金龟防治方面存在的主要问题,并就加强发生规律和有效防控的研究进行了展望.

摘要： 在暗黑鳃金龟成虫触角转录组测序和分析的基础上,通过RT-PCR技术克隆得到气味结合蛋白HparOBP26的编码序列,利用生物信息学方法对暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP26的理化性质、物种间同源性、保守结构域、信号肽、亲水性/疏水性、蛋白质二级结构进行预测分析.分析表明,暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP26全长451bp,编码127个氨基酸(其中包含信号肽21个氨基酸),等电点6.10,属于OBP结合蛋白家族,属于亲水性蛋白;二级结构以α螺旋为主,含有6个α螺旋区.分析结果对于深入研究暗黑鳃金龟气味结合蛋白HparOBP26在其取食、交配中的作用奠定了基础.

摘要： 在暗黑鳃金龟成虫触角转录组测序和分析的基础上,通过RT-PCR技术克隆得到化学感受蛋白HparCSP17的编码序列,利用生物信息学方法对暗黑鳃金龟化学感受蛋白HparCSP17的理化性质、物种间同源性、保守结构域、信号肽、亲水性/疏水性、蛋白质二级结构进行预测分析.分析表明,暗黑鳃金龟化学感受蛋白HparCSP17全长641bp,编码130个氨基酸(其中包含信号肽18个氨基酸),等电点6.31,属于OS-D superfamily结合蛋白家族,属于亲水性蛋白;二级结构以α螺旋为主.分析结果对暗黑鳃金龟化学感受蛋白HparCSP17随后研究有着指导意义.

摘要： 本文通过研究不同温湿度、不同植物根际土壤及不同土质等因子对暗黑鳃金龟卵孵化的影响发现,暗黑鳃金龟卵孵化所需最适因子为:温度24°C,土壤含水量为16％,大豆根际土及壤土对暗黑鳃金龟卵的孵化也有明显的促进作用.以期为通过改变环境因子或调整种植结构从而降低暗黑鳃金龟卵孵化率提供科学依据.

摘要： 暗黑鳃金龟(Holotr(i)ch(i)a parallela)近年来在花生田里的为害越来越重,本文研究了室内模拟花生田生态环境即花生根际土对暗黑鳃金龟卵孵化率和花生嫩根、花生荚果对暗黑鳃金龟幼虫存活率的影响.结果显示,在花生根际土中暗黑鳃金龟卵的孵化率为(70.7±1.5)％,与普通土壤中暗黑鳃金龟卵的孵化率差异不显著;以花生嫩根饲养的暗黑鳃金龟幼虫的成活率达到(83.0±2.6)％,以花生荚果饲养的暗黑鳃金龟幼虫的成活率达到(85.3±3.5)％,均高于以马铃薯决饲养的暗黑鳃金龟幼虫的成活率;暗黑鳃金龟单位面积产卵量的大小对应的位置关系为0～16cm＞16～32cm＞32cm外,初步表明暗黑鳃金龟喜于在靠近花生根系的位置产卵,距花生根系越远产卵量越少.

摘要： 本文结合近年来，苏云金杆菌遗传学研究进展，及其对有害金龟治理效果。结果表明:中国农业科学院植物保护研究所分离出来的Bt185菌株，经河北省农林科学院植物保护研究所生物测定，目前只对暗黑鳃金龟Holotrichia parallel。幼虫具有高杀虫活性，对暗黑鳃金龟幼虫的LCSO(1xlOBCfu/ml)为0.9464，而对丽金龟科的供试幼虫无效。

摘要： 本发明公开了一种暗黑鳃金龟引诱剂，含有有效剂量的苯甲醚。本发明还公开了苯甲醚用作暗黑鳃金龟引诱剂的用途以及一种暗黑鳃金龟诱捕器。田间诱杀试验证明，本发明对暗黑鳃金龟成虫具有良好的引诱效果，诱虫数明显要高于邻苯二甲酸二丁脂、香叶醇、丁香酚等引诱剂，本引诱剂既能引诱暗黑鳃金龟雌成虫，又能引诱雄成虫，而且制造简单、环保无污染、不伤害天敌和益虫、对作物安全，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种鳃叶状触角的暗黑鳃金龟的触角电位测定方法，该方法为：将已自基部切下的暗黑鳃金龟触角，继续切下鳃叶状的端部后，将闭合的3片鳃叶用昆虫针分离开，在记录电极上缠上铂金丝以增加触角长度。

摘要： 本发明提供一株对杀暗黑鳃金龟幼虫Bt Cry8类杀虫蛋白敏感的细胞系，为暗黑鳃金龟细胞系QAU‑Hp‑E‑9‑2，其保藏编号为CCTCC No:C201867。本发明的细胞系，可用于杀暗黑鳃金龟幼虫Bt杀虫晶体蛋白的活性筛选和离体生物测定。本发明以暗黑鳃金龟胚胎组织为材料，建立该昆虫的细胞系并克隆筛选，获得一株对Bt Cry8类杀虫蛋白敏感的细胞系，对其相关的生物学特性进行研究，为对暗黑鳃金龟具有活性杀虫蛋白的筛选、离体生物测定以及杀虫机理研究提供材料。

摘要： 本发明涉及一种对暗黑鳃金龟有杀虫活性的肠杆菌属菌株，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20449。

摘要： 一种暗黑鳃金龟内参基因，所述内参基因为延伸因子1α(EF1α)、核糖体蛋白S5(RPS5)和真核肽链释放因子3(eRF3)；其中EF1α的核苷酸序列表如SEQ ID NO:1所示，RPS5的核苷酸序列表如SEQ ID NO:2所示，eRF3的核苷酸序列表如SEQ ID NO:3所示。本发明从多个候选内参基因中筛选出表达最稳定的暗黑鳃金龟内参基因，以及基于内参基因序列设计的实时荧光定量PCR引物，解决了现有暗黑鳃金龟荧光定量PCR实验中没有可靠内参基因的现状。筛选出的内参基因适用于分析功能基因在暗黑鳃金龟不同发育阶段或不同组织部位的表达水平，能够提高检测数据的可靠性、稳定性和重复性。

摘要： 本发明公开了有害生物的生物防治技术领域的一种防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂。所述引诱剂为丁酸（Butyric acid），溶剂为石蜡油，溶质质量分数为10%。本发明提供的防治暗黑鳃金龟成虫的牛粪源引诱剂对暗黑鳃金龟的防治效果好，不会使暗黑鳃金龟产生抗性；制备简单，制作成本低，对人畜无害，环境友好，对于综合治理暗黑鳃金龟具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种暗黑鳃金龟引诱剂，含有有效剂量的苯甲醚。本发明还公开了苯甲醚用作暗黑鳃金龟引诱剂的用途以及一种暗黑鳃金龟诱捕器。田间诱杀试验证明，本发明对暗黑鳃金龟成虫具有良好的引诱效果，诱虫数明显要高于邻苯二甲酸二丁脂、香叶醇、丁香酚等引诱剂，本引诱剂既能引诱暗黑鳃金龟雌成虫，又能引诱雄成虫，而且制造简单、环保无污染、不伤害天敌和益虫、对作物安全，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及建立了一种鳃叶状触角暗黑鳃金龟的触角电位方法，主要涉及触角的摘取与处理方法、触角电位仪电极处理方法。

摘要： 本发明公开了有害生物的生物防治技术领域的一种防治暗黑鳃金龟成虫的引诱剂。所述引诱剂配方由肉桂醛和顺‑13‑二十二烯醇组成，各成分比例为10:0.625。本发明提供的防治暗黑鳃金龟成虫的引诱剂对暗黑鳃金龟的防治效果好，不会使其产生抗性；制备工艺简单，制作成本低，对人畜无害，环境友好，对于综合治理暗黑鳃金龟具有重要意义。

摘要： 本发明提供一株对杀暗黑鳃金龟幼虫Bt Cry8类杀虫蛋白敏感的细胞系，为暗黑鳃金龟细胞系QAU‑Hp‑E‑9‑2，其保藏编号为CCTCC No:C201867。本发明的细胞系，可用于杀暗黑鳃金龟幼虫Bt杀虫晶体蛋白的活性筛选和离体生物测定。本发明以暗黑鳃金龟胚胎组织为材料，建立该昆虫的细胞系并克隆筛选，获得一株对Bt Cry8类杀虫蛋白敏感的细胞系，对其相关的生物学特性进行研究，为对暗黑鳃金龟具有活性杀虫蛋白的筛选、离体生物测定以及杀虫机理研究提供材料。