小反刍兽疫病毒

摘要： 为进一步评定小反刍兽疫病毒抗体的测量不确定度,使用ELISA方法进行相关试验,依据《兽医检测实验室ELISA试验测量不确定度评估指南》(CNAS-GL043:2020)、《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012),分析了ELISA试验测量不确定度的各分量,并根据各分量的来源及产生途径,详细评定了各分量的标准不确定度、合成标准不确定度和扩展不确定度.结果显示,本次试验检测样品的S/N值为89.03％,U=1.36％(k=2).结果表明,ELISA试验引入不确定度,可以进一步提高结果的准确性、可靠性,还可以通过分析各分量在测量结果中所占比例及影响,推断出影响检测结果的主要因素,进一步做好实验室质量控制.

摘要： 干扰素具有广谱抗病毒、抗肿瘤活性,可增强机体抗病毒能力,已经广泛应用于病毒性疾病的防控。小反刍兽疫病毒是危害山羊、绵羊等小反刍动物常见的病毒之一,该病毒的传播对全球养殖业造成了严重的影响。为了表达具有高效抗病毒活性的羊α干扰素(OviIFN-α),将OviIFN-α基因序列根据家蚕密码子偏好性进行优化合成,构建pVL1393-OviIFN-α转移载体,将转移载体与ORF1629缺失型杆状病毒基因组DNA利用脂质体介导的转染法在BmN细胞中进行重组,重组病毒感染家蚕,在蚕血淋巴液中获取重组蛋白OviIFN-α。利用微量细胞病变抑制法在BHK-VSV*GFP系统中检测到该蛋白表达量可达6.5×10^(5)U/mL左右。小反刍兽疫病毒增殖抑制实验显示,羊α干扰素对小反刍兽疫病毒在BHK细胞中的复制产生了明显的抑制作用,IC_(50)为136.93 U左右。该结果为羊α干扰素用于小反刍兽疫疫情防控提供了重要的理论依据。

摘要： 为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)和小反刍兽疫病毒(PPRV)的快速检测方法,本研究选取蓝舌病病毒的NS3基因和小反刍兽疫病毒的N基因作为靶基因,参照GenBank上公布的两种基因序列,通过序列比对后选取一段保守性较高的区域,利用Beacon designer 8设计引物和探针并优化反应体系及反应条件,建立了双重荧光定量RT-PCR检测方法。结果显示,该方法检测BTV和PPRV阳性质粒标准品的最低检出量分别为1.7 copies/μL和1.2 copeis/μL;与山羊痘病毒、羊口疮病毒、口蹄疫病毒、羊腐败性梭菌、布氏杆菌及弓形虫无交叉反应,具有良好的特异性;其组间重复性和组内重复性的变异系数均小于2%,表明该方法具有较好的重复性。结果表明,建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法适用于BTV和PPRV的快速检测。

摘要： 为了能够同时开展对小反刍兽疫病毒(PPRV)、蓝舌病血清8型病毒(BTV8)、鹿流行性出血热血清1型病毒(EHDV1)和非洲马瘟病毒(AHSV)4种外来动物疫病病原体的核酸检测,本试验根据GenBank中相关病毒序列设计引物和探针,建立多重普通逆转录PCR(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在采集的临床样本检测中进行初步应用验证。结果显示:建立的PPRV/BTV8/EHDV1三重实时荧光定量RT-PCR检测方法仅对PPRV、BTV8和EHDV1有特异荧光信号,检测敏感度可达10^(1.70)~10^(2.08) copies/μL DNA;建立的PPRV/BTV8/EHDV1/AHSV四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测PPRV、BTV8、EHDV1和AHSV,检测敏感度可达10^(3) copies/μL DNA;2种方法对羊痘、羊口疮、口蹄疫、阿卡斑、牛病毒性腹泻等临床相似的病毒均无扩增。在925份临床样本中检测出1例PPRV核酸阳性样本;经核苷酸序列测定及BLAST比对确定为谱系Ⅳ型PPRV毒株序列。本试验所建立的三重实时荧光定量RT-PCR检测方法和四重普通RT-PCR方法可特异性同步检测相应的3种或4种病毒病原,且具有临床样本检测的应用潜力。

摘要： 小反刍兽疫(Pestedespetits ruminants,PPRV)也称作小反刍兽假性牛瘟、口炎肠肺炎综合征等,是由小反刍兽疫病毒引起的烈性传染病。调查发现,该病主要感染对象为小反刍兽,以山羊最为常见。现阶段,并未发现感染人的病例。小反刍兽疫病毒和犬瘟热病毒、牛瘟病毒、牛麻疹病毒、海豹瘟病毒等相类似,它们均属于副粘病毒科麻疹病毒属成员。

摘要： 本研究利用PCR方法扩增小反刍兽疫病毒(PPRV)的衣壳蛋白(N蛋白)基因,并将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组表达质粒pcDNA3.1-pN。利用电转的方法将该重组质粒转入非洲绿猴肾(Vero)细胞,并使用抗生素G418进行筛选。Western blot试验结果表明,N基因在Vero细胞中得到了表达,且能够随着细胞的传代稳定遗传。PPRV N基因的成功表达为小反刍兽疫的诊断、鉴定以及新型基因重组疫苗的开发奠定了基础。

摘要： 小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的山羊、绵羊等小反刍动物的急性、高度接触性传染病。反向遗传学是在获得生物基因信息的基础上,对基因进行突变、缺失等操作,进而研究基因变化对表型的影响。本文综述了包括PPRV在内的单股负链RNA病毒反向遗传学的最新研究进展,以期为PPRV及同科属病毒的反向遗传操作系统的建立提供新的思路。

摘要： 小反刍兽疫病毒(PPRV)是小型反刍动物的重要病原体,在非洲、近东、中东及亚洲大部分地区流行。尽管已有针对小反刍兽疫病毒有效且廉价的减毒活疫苗,但该病毒仍在继续传播。PPRV是一种麻疹病毒,鉴于根除同样为麻疹病毒属牛瘟病毒方面的经验,根除PPRV可行,但有许多关键领域缺乏关于PPRV的基础和应用病毒学研究。本文对小反刍兽流行病学和疫苗研究方面进行综述,旨在为小反刍兽疫的研究和防控提供参考。

摘要： 小反刍兽疫(PPR)是一种主要感染山羊和绵羊的传染病,病原为副黏病毒科麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒(PPRV)。PPRV基因组由6个基因组成,依据N和F基因可将PPRV分为4个谱系或者基因群,我国流行的PPRV属于谱系Ⅳ。2007年我国首次报道发生PPR疫情,在2014年大流行后,农业农村部加强了PPR的防疫措施。目前,国内的PPR疫情基本得到了控制,主要风险来自于境外输入和野生动物。PPRV分子检测是防疫措施的重要一环,目前已经建立了多种针对PPRV不同基因的检测方法。将新型技术应用于PPRV分子检测,开发小型化、快速化、高通量的PPRV检测方法将是未来的发展方向。

摘要： 旨在探究组蛋白去乙酰化酶抑制剂对小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)复制的影响,以确定组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylases,HDACs)在PPRV复制过程中的作用。采用RT-qPCR法检测PPRV感染后Vero细胞HDACs(HDAC1~11)mRNA表达水平的变化;用针对不同类型HDACs的抑制剂处理感染PPRV的Vero细胞48 h,Western blot筛选影响PRPV N蛋白表达的抑制剂;应用筛选出的抑制剂处理感染PPRV的Vero细胞,通过RT-qPCR、Western blot和TCID_(50)法进一步分析抑制剂对病毒RNA、蛋白和病毒滴度的影响。结果显示,PPRV感染后,Vero细胞HDAC2 mRNA水平显著升高(P<0.05);SAHA、TMP269、MGCD0103处理后,PPRV N蛋白的表达量明显降低,且呈剂量负相关;SAHA、TMP269、MGCD0103也显著降低PPRV N RNA表达水平(P<0.05,P<0.05,P<0.01)和病毒滴度(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。这表明Ⅱa类HDACs抑制剂和Ⅰ类HDACs抑制剂能抑制PPRV的复制,Ⅰ类HDACs(HDAC1~3)和Ⅱa类HDACs(HDAC4~5、HDAC7、HDAC9)可能参与调控PPRV的感染。

摘要： 为了研制小反刍兽疫病毒(PPRV)与蓝舌病病毒(BTV)双重荧光RT-PCR快速检测试剂盒,根据GenBank公布的小反刍兽疫病毒、蓝舌病病毒的基因序列,设计两套特异性的引物和探针,建立基于Taqman探针的双重荧光RT-PGR快速检测小反刍兽疫病毒与蓝舌病病毒的方法.实验结果表明,该方法特异性好、灵敏度高,检测最低浓度为10拷贝/儿数量级阳性标准品.通过对临床样品的检测,证实本研究建立的检测方法具有较好的临床应用价值.

摘要： 小反刍兽疫病毒(PPRV)的血凝素蛋白(H)作为其两种糖蛋白之一,负责与宿主细胞受体的结合,也是诱导宿主产生保护性免疫反应的主要抗原.为了揭示H蛋白上的表位情况,我采用生物合成肽法和兔抗重组H蛋白多抗对PPRVH蛋白进行了线性B细胞表位精细作图和保守性分析.鉴定到PPRV China/Tibet/Geg/07-30株H蛋白的13个线性B细胞袁位(BCE),并得到各自的最小袁位基序.对52株PPRV的保守性分析显示,13个最小表位基序中存在2个完全保守性表位.9个包含一个最小表位基序的多肽可以被来源于山羊的PPRV疫苗株Nigeria75/1免疫血清识别.袁位及其最小基序的鉴定将提高我们对PPRV H蛋白抗原特性的理解,并将为表位诊断方法和多表位疫苗的开发提供重要的前期基础.

摘要： 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)N蛋白是PPRV的主要抗原蛋白,在病毒中含量最高.为了建立一种血清PPRV抗体检测方法,将纯化的N蛋白作为包被抗原,建立检测PPRV抗体效价的间接ELISA方法.优化后的ELISA检测方法,检测35份临床血清样品,同时与法国ID.VET ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率达96％.

摘要： 核衣壳蛋白是麻疹病毒属病毒含量最丰富、免疫原性最强的蛋白;也是小反刍兽疫检测诊断应用最多的蛋白质.本研究中,利用生物合成肽法对小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白进行精细线性B细胞表位作图和保守性表位分析.从小反刍兽疫病毒新疆株的核衣壳蛋白鉴定到19个表位,并确定了它们的最小基序.保守性分析显示,其中10个表位是46株已知序列核衣壳蛋白中的保守性表位.所有包含最小表位基序的多肽都可以被Nigeria 75/1株免疫羊血清识别.小反刍兽疫病毒核衣壳蛋白的表位作图和最小表位基序的鉴定不经提高了对核衣壳蛋白免疫原性的认识,而且也为基于多表位肽的检测方法的建立奠定了基础.

摘要： 为了解小反刍兽疫病毒H蛋白与其SLAM受体相互作用的机制,进一步促进PPRV在感染、传播和致病机制的研究工作,本研究通过生物信息学技术对不同PPRV H蛋白和SLAM受体蛋白的胞外区、信号肽进行了预测.为进一步揭示PPRV H蛋白与病毒致病性的关系,对PPRV Nigeria 75/1疫苗株、PPRV Nigeria 75/1克隆株、Tibet 07株H蛋白与人、犬、绵羊的SLAM受体的单个蛋白及复合蛋白模型的关系进行分析,预测PPRV Nigeria 75/1疫苗株、PPRV Nigeria 75/1克隆株、Tibet 07株H蛋白与人、犬、绵羊的SLAM受体相互作用的位点以及相互作用的差异位点.为进一步确认结果的准确性,采用免疫共沉淀法验证PPRV Nigeria 75/1克隆株H蛋白与绵羊SLAM受体的相互作用.不同PPRV H蛋白的胞外区均为59～609aa,绵羊SLAM受体蛋白的胞外区29～338aa.通过模拟得到的PPRV H蛋白与SLAM受体相互作用氨基酸的蛋白模型存在差异位点,并证明PPRV H蛋白(克隆株)与绵羊SLAM受体可以发生相互作用.虽对PPRV Nigeria 75/1克隆株H蛋白与绵羊SLAM受体相互作用作了初步鉴定,但其相互作用的精确位点以及存在的差异位点对其的影响还有待进一步验证.

摘要： 为研究小反刍兽疫病毒(PPRV)竞争ELISA试剂盒的生产工艺,本试验利用昆虫细胞表达的PPRV核蛋白及其单克隆抗体,建立一种特异性高、敏感性强的PPRV竞争ELISA检测方法,并对该方法的各个步骤进行优化,确定该方法的最适条件,从而确定竞争ELISA的操作程序.并用该方法与OIE推荐的PPRV rC-ELISA抗体检测试剂盒同时检测来自西藏、内蒙古共977份临床羊、牛血清样本,结果显示特异性、敏感性、符合率分别达99.89％、93.82％、99.38％.本研究建立的PPRV竞争ELISA方法为该病毒检测试剂盒的研制奠定技术基础,为小反刍兽疫的防控提供科学依据.

摘要： 本试验利用浊度仪,采用实时浊度法进行小反刍兽疫病毒RT-LAMP方法检测.试验表明在65°C,50min内即可完成对小反刍兽疫病毒检测.通过敏感性试验证明了该试验方法只能检测目的病毒而与同属病毒无交叉反应,灵敏性试验表明其灵敏度与Real-time RT-PCR方法相当,临床样本试验表明其准确性与RT-PCR检测试剂盒相当.

摘要： 本研究利用表位预测软件筛选了针对小反刍兽疫病毒F和H基因的4条多肽表位,进行了化学合成,将合成多肽免疫小鼠,通过ELISA、MTT法、NK细胞杀伤活性测定及T淋巴细胞亚群检测等免疫试验分析了预测表位的抗原性.结果表明:在筛选的4条多肽中,H242-255、F528-541和H349-362具有较好的体液免疫功能;H242-255、H392-405具有较好的细胞免疫功能.H242-255多肽能够满足这两方面的功能,有望作为候选表位疫苗成分.本试验结果为筛选有效表位用于PPRV表位疫苗的研究奠定了基础.

摘要： 试验旨在探讨利用纳米金标记寡核苷酸探针快速检测小反刍兽疫病毒核酸的方法。针对小反刍兽疫病毒N基因的高度保守区设计两条特异寡核苷酸探针，一条探针5`端修饰生物素，另一条探针3`端修饰巯基。巯基化的探针通过Au-S键连接到纳米金颗粒上。靶核酸两端分别与两条探针结合，形成“生物素化探针．靶核酸一纳米金探针”复合物，该复合物通过生物素-亲和素系统，固定在固相载体上，最后银染放大信号。通过肉眼观察法、光镜观察法、分光光度法分析银染灰度，从而间接测定靶核酸的量。初步检测PPRV核酸最低浓度达10 fhlol／L，所需时间约为1.5 h。该方法灵敏度高，操作简单，为临床检测小反刍兽疫病毒核酸提供实验数据和技术支持。

摘要： 目的：为了建立可特异性地检测血清中抗小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体。方法：对具有PPRV特异性的N蛋白第1V区域进行扩增，并克隆至原核表达载体pET-32a(+)载体中，用于PPRV N亚单位重组蛋白的表达。用纯化的重组蛋白作为检测抗原，建立了检测血清中存在的抗PPRV抗体的间接ELISA方法，并对间接ELISA抗原包被量、血清稀释倍数、血清孵育时间等反应条件进行了优化。结果：western blot结果表明，重组蛋白具有良好的反应原性。所建立的间接ELIsA方法可以鉴别血清中的PPRV抗体和RP(牛瘟)抗体，具有良好的特异性和灵敏性，与标准竞争ELISA试剂盒的符合率达98.4％。结论：本研究建立了一种具有良好的特异性和灵敏性的检测血清中存在的抗PPRV抗体的间接ELISA方法。

摘要： 本发明涉及免疫检测技术领域，公开了一种小反刍兽疫病毒抗原以及检测小反刍兽疫病毒抗体的胶体金免疫层析试纸卡。本发明所述抗原序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供了一种新型的小反刍兽疫病毒抗原，作为小反刍兽疫病毒抗体的检测抗原时，具备极高的特异性、重复性和准确性，能够应用在相关的免疫层析检测产品中，结果直观可肉眼判断，可快速、特异地检出血清中小反刍兽疫病毒抗体，具有较高的实用价值，便于基层推广使用。

摘要： 本发明提供了一种检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的引物及方法。本发明设计筛选出的引物组合，最终首次成功实现了在同一个反应管里，通过多重荧光RT‑LAMP检测方法，简单、快速和准确的鉴别出小反刍兽疫病毒(PPRV)和蓝舌病病毒(BTV)。本发明提供的用于检测小反刍兽疫病毒(PPRV)和蓝舌病病毒(BTV)的多重荧光RT‑LAMP引物及方法，特异性好、敏感性高、干扰性小，最低能检测到100个混合模板拷贝/反应，并能有效抑制假阳性结果。本发明提供的引物及方法，通过荧光基团所显示颜色的不同直观准确的判断结果，并只需一台水浴锅即可完扩增,成本低廉，操作方便，是一种简便，快速，低成本的诊断方法，适用于BTV和PPRV的大规模流行病学调查。

摘要： 本发明涉及免疫检测技术领域，公开了一种小反刍兽疫病毒抗原以及检测小反刍兽疫病毒抗体的胶体金免疫层析试纸卡。本发明所述抗原序列如SEQ ID NO:1所示。本发明提供了一种新型的小反刍兽疫病毒抗原，作为小反刍兽疫病毒抗体的检测抗原时，具备极高的特异性、重复性和准确性，能够应用在相关的免疫层析检测产品中，结果直观可肉眼判断，可快速、特异地检出血清中小反刍兽疫病毒抗体，具有较高的实用价值，便于基层推广使用。

摘要： 本发明涉及一种表达口蹄疫病毒VP1基因的重组小反刍兽疫病毒疫苗。本发明还公开了制备所述重组小反刍兽疫病毒疫苗的方法和该重组小反刍兽疫病毒疫苗在制备预防小反刍兽疫和/或口蹄疫的疫苗中的应用。

摘要： 本发明公开了同时鉴别检测小反刍兽疫病毒、施马伦贝格病毒和库布病毒的多重PCR方法。多重PCR方法引物包括PPRV引物对、SBV引物对及KBV引物对。该方法利用不同引物对扩增出不同大小的病毒核酸片段来达到鉴别诊断的目的。本发明可同时检测并区分小反刍兽疫病毒、施马伦贝格病毒和库布病毒，具有特异性强、敏感性高、省时省力等优点，可用于牛羊临床样品的检测。

摘要： 本发明提供一种用于重组山羊痘病毒构建的重组转移载体。所述的转移载体主要包含：TK基因的左臂和右臂、两个逆向的p7.5K启动子及其分别调控的小反刍兽疫病毒H基因和F基因、p11K启动子、增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因、两个顺向Loxp序列。所述的转移载体与山羊痘病毒在羊睾丸细胞内发生同源重组，获得表达eGFP的重组山羊痘病毒，在Cre酶作用下，eGFP基因被特异性敲除，获得潜在共表达小反刍兽疫病毒H和F蛋白的重组山羊痘病毒。

摘要： 本发明提供了一种检测小反刍兽疫病毒和蓝舌病病毒的引物及方法。本发明设计筛选出的引物组合，最终首次成功实现了在同一个反应管里，通过多重荧光RT‑LAMP检测方法，简单、快速和准确的鉴别出小反刍兽疫病毒(PPRV)和蓝舌病病毒(BTV)。本发明提供的用于检测小反刍兽疫病毒(PPRV)和蓝舌病病毒(BTV)的多重荧光RT‑LAMP引物及方法，特异性好、敏感性高、干扰性小，最低能检测到100个混合模板拷贝/反应，并能有效抑制假阳性结果。本发明提供的引物及方法，通过荧光基团所显示颜色的不同直观准确的判断结果，并只需一台水浴锅即可完扩增,成本低廉，操作方便，是一种简便，快速，低成本的诊断方法，适用于BTV和PPRV的大规模流行病学调查。

摘要： 本发明提供了一种小反刍兽疫病毒与蓝舌病病毒双重荧光RT‑PCR快速检测方法，包括小反刍兽疫病毒引物对和探针，蓝舌病病毒引物对和探针，其中两组探针的5’端和3’端分别用不同的荧光报告基团及配套的荧光淬灭基团标记。该快速检测方法能够对单个样本一次性检测两种病毒，具有敏感、高效的优点，临床应用价值优异。

摘要： 本发明涉及一种用于检测山羊副流感病毒3型和小反刍兽疫病毒的引物对，属于生物技术领域。本发明提供了检测病毒的专用引物，包括引物对A和引物对B，引物对A包括引物1和引物2，引物对B包括引物3和引物4；引物1、引物2引物3和引物4的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3和序列4。本发明所提供的CPIV3和PPRV双重RT-PCR检测专用引物敏感性高，最低可检测到RNA含量约为1×10

摘要： 本发明公开了一种基于单域抗体9‑4‑1免疫磁珠的直扩检测小反刍兽疫病毒的试剂盒及其应用。所述试剂盒包括SEQIDNO.1所示的小反刍兽疫病毒单域抗体9‑4‑1通过链霉亲和素‑生物素与磁珠进行偶联得到的单域抗体9‑4‑1免疫磁珠。本发明使用切胶纯化的单域抗体9‑4‑1蛋白与磁珠进行偶联获得免疫磁珠，免疫磁珠富集小反刍兽疫病毒后，无需提取基因组RNA，可直接对其进行扩增。本发明的提出克服了由于病毒含量低微，检出率低，容易漏检等问题；以及提取基因组RNA时费时、费财、费力，操作时污染环境等一系列难题，通过直接扩增富集产物不但节约时间、节省资源，而且高效、灵敏、特异、稳定，本发明的提出为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种高效的技术手段。