荧光定量PCR技术

摘要： 目的:评价荧光定量PCR技术在女性生殖道人乳头状瘤病毒(HPV-DNA)中的检测价值。方法:收集2016年10月-2021年5月体检中心26630例健康体检者、门诊12521例及住院患者5576例的宫颈分泌物,采用PCR荧光探针法进行HPV-DNA检测,对检测结果进行统计分析。结果:门诊患者与住院患者HPV感染率均高于健康体检者,差异有统计学意义(P<0.05)。健康体检者、门诊及住院患者荧光定量PCR法检出HPV感染7860例,阳性率为17.57%;其中高危型2542例(32.34%)、低危型5318例(67.66%);与病理活检结果比较,荧光定量PCR法检测高危型HPV阳性符合率为93.30%,阴性符合率为93.59%,总符合率为93.55%。结论:荧光定量PCR法是HPV-DNA有效的临床检测技术,在检测常见的高危型HPV方面有较好结果,可用于女性大规模体检初筛。

摘要： PCR技术是现代分子生物学研究中最常用的技术,自1986年发明至今,在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多新PCR技术,本文对5种常用PCR技术进行简介.

摘要： 目的探讨在临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术的临床价值。方法选择2018年5月-2019年6月收治100例患者作为研究对象,观察采集标本在临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术的检测结果。结果 60例粪便标本中,检出沙门菌20株,检出率为33.33%,副溶血性弧菌12株,检出率为20.00%,肠出血性大肠杆菌O157:H7 5株,检出率为8.33%;在40例脓液标本中,检出金黄色葡萄球菌7株,检出率为17.50%,化脓性链球菌5株,检出率为12.50%;在临床微生物检测中,荧光定量PCR技术具有较高的敏感度与特异性。结论临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术的检测结果较好,具有精确定量、敏感度好、特异性高等优点,值得临床广泛推广应用。

摘要： 目的:探讨抗酸染色涂片和荧光定量PCR检测在结核病的诊断价值.方法:选取2019年1月-2019年12月收治的68例结核病患者为研究对象,分别用荧光定量PCR技术和常规结核抗酸染色涂片方法检测,并对两种检测结果进行比对.结果:荧光定量PCR检测法阳率性为82.35％(56/68),常规抗酸染色法阳性率为44.12％(30/68),两组比较差异显著(P<0.05).结论:结核分枝杆菌的检测中荧光定量PCR技术较抗酸染色法更敏感,具有准确、简便、快速的特点,对结核病有较高的诊断价值,值得全面推广.

摘要： 伴随着中国经济的快速发展和社会的不断变迁,中国的科学技术也有了很大的发展,为各领域的科学研究提供了强有力的技术支持.该技术是在原聚合酶链反应技术的基础上发展起来的一种新型核酸定量技术.这是时代发展的产物.另外,荧光定量PCR技术还可用于常规的聚合酶链式反应检测仪器,并可用于荧光染料或荧光基团.积累的荧光信号主要用于实现PCR全过程的实时监测,最终根据反应标准曲线预测未知模板浓度.近年来,荧光定量PCR技术已广泛应用于国内外环境监测,有利于加强环境中微生物的检测与研究.随着这一技术的不断完善和发展,其在环境微生物检测方面将具有广阔的发展和应用前景.

摘要： 目的:研究荧光定量PCR技术检测结核杆菌的准确性及价值.方法:在2019年6月-2020年6月,选取本院接收的416例疑似为肺结核患者作为此次研究对象,416例患者均进行荧光定量PCR技术检测,以痰培养为"金标准",观察荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的诊断效能.结果:经痰培养结果显示,416例患者共有54例阳性,阳性检出率为12.98％;荧光定量PCR技术检测显示,416例患者共有55例阳性,阳性检出率为13.22％.荧光定量PCR技术检测的阳性检出率与细菌培养结果相当,差异无统计学意义(P<0.05).经分析,荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中准确率为99.28％,敏感性为98.15％,特异性为99.45％.结论:荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中应用,具有较高的诊断准确率、敏感性和特异性,应用价值显著.

摘要： 目的 探讨在临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术的临床价值.方法 选择2018年5月-2019年6月收治100例患者作为研究对象,观察采集标本在临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术的检测结果.结果 60例粪便标本中,检出沙门菌20株,检出率为33.33％,副溶血性弧菌12株,检出率为20.00％,肠出血性大肠杆菌O157:H7 5株,检出率为8.33％;在40例脓液标本中,检出金黄色葡萄球菌7株,检出率为17.50％,化脓性链球菌5株,检出率为12.50％;在临床微生物检测中,荧光定量PCR技术具有较高的敏感度与特异性.结论 临床微生物检测中应用荧光定量PCR技术的检测结果较好,具有精确定量、敏感度好、特异性高等优点,值得临床广泛推广应用.

摘要： 目的：评价结核感染T细胞斑点试验联合荧光定量PCR在结核病患儿诊断中的价值.方法：2011年3月至2013年1月在我科住院疑诊结核的患儿62例,行PPD试验、血沉、胸部CT、结核感染T细胞斑点试验、支气管镜检及灌洗液结核杆菌DNA荧光定量.结果：经检查临床确诊肺结核43例,TSPOT.TB阳性率(67.4％)和FQ-PCR检测阳性率(69.7％)明显高于结核菌培养(34.8％)和涂片抗酸染色(44.1％).两者联合检测阳性率86.0％,与单项检查T.SPOTTB相比,差异具有统计学意义(X2=4.17,P＜0.05),而与FQ-PCR检查相比无统计学差异(X2=3.31,P＞0.05).结论：对于活动性肺结核的患儿,TSPOT.TB和FQ-PCR技术比传统的PPD试验和涂片抗酸染色方法具有更高的敏感性和特异性,且联合检测可以提高结核患儿的诊断率.

摘要： 目的：评价结核感染T细胞斑点试验联合荧光定量PCR在结核病患儿诊断中的价值.方法：2011年3月至2013年1月在我科住院疑诊结核的患儿62例,行PPD试验、血沉、胸部CT、结核感染T细胞斑点试验、支气管镜检及灌洗液结核杆菌DNA荧光定量.结果：经检查临床确诊肺结核43例,TSPOT.TB阳性率(67.4％)和FQ-PCR检测阳性率(69.7％)明显高于结核菌培养(34.8％)和涂片抗酸染色(44.1％).两者联合检测阳性率86.0％,与单项检查T.SPOTTB相比,差异具有统计学意义(X2=4.17,P＜0.05),而与FQ-PCR检查相比无统计学差异(X2=3.31,P＞0.05).结论：对于活动性肺结核的患儿,TSPOT.TB和FQ-PCR技术比传统的PPD试验和涂片抗酸染色方法具有更高的敏感性和特异性,且联合检测可以提高结核患儿的诊断率.

摘要： 目的：评价结核感染T细胞斑点试验联合荧光定量PCR在结核病患儿诊断中的价值.方法：2011年3月至2013年1月在我科住院疑诊结核的患儿62例,行PPD试验、血沉、胸部CT、结核感染T细胞斑点试验、支气管镜检及灌洗液结核杆菌DNA荧光定量.结果：经检查临床确诊肺结核43例,TSPOT.TB阳性率(67.4％)和FQ-PCR检测阳性率(69.7％)明显高于结核菌培养(34.8％)和涂片抗酸染色(44.1％).两者联合检测阳性率86.0％,与单项检查T.SPOTTB相比,差异具有统计学意义(X2=4.17,P＜0.05),而与FQ-PCR检查相比无统计学差异(X2=3.31,P＞0.05).结论：对于活动性肺结核的患儿,TSPOT.TB和FQ-PCR技术比传统的PPD试验和涂片抗酸染色方法具有更高的敏感性和特异性,且联合检测可以提高结核患儿的诊断率.

摘要： 目的：评价结核感染T细胞斑点试验联合荧光定量PCR在结核病患儿诊断中的价值.方法：2011年3月至2013年1月在我科住院疑诊结核的患儿62例,行PPD试验、血沉、胸部CT、结核感染T细胞斑点试验、支气管镜检及灌洗液结核杆菌DNA荧光定量.结果：经检查临床确诊肺结核43例,TSPOT.TB阳性率(67.4％)和FQ-PCR检测阳性率(69.7％)明显高于结核菌培养(34.8％)和涂片抗酸染色(44.1％).两者联合检测阳性率86.0％,与单项检查T.SPOTTB相比,差异具有统计学意义(X2=4.17,P＜0.05),而与FQ-PCR检查相比无统计学差异(X2=3.31,P＞0.05).结论：对于活动性肺结核的患儿,TSPOT.TB和FQ-PCR技术比传统的PPD试验和涂片抗酸染色方法具有更高的敏感性和特异性,且联合检测可以提高结核患儿的诊断率.

摘要： 目的：评价结核感染T细胞斑点试验联合荧光定量PCR在结核病患儿诊断中的价值.方法：2011年3月至2013年1月在我科住院疑诊结核的患儿62例,行PPD试验、血沉、胸部CT、结核感染T细胞斑点试验、支气管镜检及灌洗液结核杆菌DNA荧光定量.结果：经检查临床确诊肺结核43例,TSPOT.TB阳性率(67.4％)和FQ-PCR检测阳性率(69.7％)明显高于结核菌培养(34.8％)和涂片抗酸染色(44.1％).两者联合检测阳性率86.0％,与单项检查T.SPOTTB相比,差异具有统计学意义(X2=4.17,P＜0.05),而与FQ-PCR检查相比无统计学差异(X2=3.31,P＞0.05).结论：对于活动性肺结核的患儿,TSPOT.TB和FQ-PCR技术比传统的PPD试验和涂片抗酸染色方法具有更高的敏感性和特异性,且联合检测可以提高结核患儿的诊断率.

摘要： 为了筛选与“DDK综合症”相关的基因,对其中四个差异显著的基因(EGF、Bcl-2、Mcl-1、EGF-R)进行荧光定量PCR分析,最终确定此基因是否和DDK综合症相关.本试验选用8-10周龄的清洁级小鼠,雌雄比例1︰1方式合笼交配,以(DDK♀x BALB/C♂)交配组合做为实验组(BALB/C♀ xBALB/C♂)交配组合为对照组,依据胚胎发育时间,对植入前期2细胞、4细胞、8细胞期的胚胎进行观察和采集,然后提取总RNA并进行反转录,最后利用荧光定量PCR技术,比较所选的候选基因在不同交配组合中各胚胎时期的表达差异.EGF、Bcl-2、Mcl-1三个基因在三个时期表达差异都极其显著;EGF-R基因在4细胞、8细胞两个时期表达差异极其显著,证实了“DDK综合症”和所选的四个候选基因的作用相关.

摘要： 为了筛选与“DDK综合症”相关的基因,对其中四个差异显著的基因(EGF、Bcl-2、Mcl-1、EGF-R)进行荧光定量PCR分析,最终确定此基因是否和DDK综合症相关.本试验选用8-10周龄的清洁级小鼠,雌雄比例1︰1方式合笼交配,以(DDK♀x BALB/C♂)交配组合做为实验组(BALB/C♀ xBALB/C♂)交配组合为对照组,依据胚胎发育时间,对植入前期2细胞、4细胞、8细胞期的胚胎进行观察和采集,然后提取总RNA并进行反转录,最后利用荧光定量PCR技术,比较所选的候选基因在不同交配组合中各胚胎时期的表达差异.EGF、Bcl-2、Mcl-1三个基因在三个时期表达差异都极其显著;EGF-R基因在4细胞、8细胞两个时期表达差异极其显著,证实了“DDK综合症”和所选的四个候选基因的作用相关.

摘要： 为了筛选与“DDK综合症”相关的基因,对其中四个差异显著的基因(EGF、Bcl-2、Mcl-1、EGF-R)进行荧光定量PCR分析,最终确定此基因是否和DDK综合症相关.本试验选用8-10周龄的清洁级小鼠,雌雄比例1︰1方式合笼交配,以(DDK♀x BALB/C♂)交配组合做为实验组(BALB/C♀ xBALB/C♂)交配组合为对照组,依据胚胎发育时间,对植入前期2细胞、4细胞、8细胞期的胚胎进行观察和采集,然后提取总RNA并进行反转录,最后利用荧光定量PCR技术,比较所选的候选基因在不同交配组合中各胚胎时期的表达差异.EGF、Bcl-2、Mcl-1三个基因在三个时期表达差异都极其显著;EGF-R基因在4细胞、8细胞两个时期表达差异极其显著,证实了“DDK综合症”和所选的四个候选基因的作用相关.

摘要： 为了筛选与“DDK综合症”相关的基因,对其中四个差异显著的基因(EGF、Bcl-2、Mcl-1、EGF-R)进行荧光定量PCR分析,最终确定此基因是否和DDK综合症相关.本试验选用8-10周龄的清洁级小鼠,雌雄比例1︰1方式合笼交配,以(DDK♀x BALB/C♂)交配组合做为实验组(BALB/C♀ xBALB/C♂)交配组合为对照组,依据胚胎发育时间,对植入前期2细胞、4细胞、8细胞期的胚胎进行观察和采集,然后提取总RNA并进行反转录,最后利用荧光定量PCR技术,比较所选的候选基因在不同交配组合中各胚胎时期的表达差异.EGF、Bcl-2、Mcl-1三个基因在三个时期表达差异都极其显著;EGF-R基因在4细胞、8细胞两个时期表达差异极其显著,证实了“DDK综合症”和所选的四个候选基因的作用相关.

摘要： 为了筛选与“DDK综合症”相关的基因,对其中四个差异显著的基因(EGF、Bcl-2、Mcl-1、EGF-R)进行荧光定量PCR分析,最终确定此基因是否和DDK综合症相关.本试验选用8-10周龄的清洁级小鼠,雌雄比例1︰1方式合笼交配,以(DDK♀x BALB/C♂)交配组合做为实验组(BALB/C♀ xBALB/C♂)交配组合为对照组,依据胚胎发育时间,对植入前期2细胞、4细胞、8细胞期的胚胎进行观察和采集,然后提取总RNA并进行反转录,最后利用荧光定量PCR技术,比较所选的候选基因在不同交配组合中各胚胎时期的表达差异.EGF、Bcl-2、Mcl-1三个基因在三个时期表达差异都极其显著;EGF-R基因在4细胞、8细胞两个时期表达差异极其显著,证实了“DDK综合症”和所选的四个候选基因的作用相关.

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本发明提供了一种三重荧光定量PCR引物探针组与三重荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域。本发明的PCR引物探针组包括SEQ ID NO.1所示的APP‑F、SEQ ID NO.2所示的APP‑R、SEQ ID NO.3所示的APP‑探针，SEQ ID NO.4所示的HPS‑F、SEQ ID NO.5所示的HPS‑R、SEQ ID NO.6所示的HPS‑探针，SEQ ID NO.7所示的Pm‑F、SEQ ID NO.8所示的Pm‑R、SEQ ID NO.9所示的Pm‑探针。将该引物探针组制备成试剂盒，可特异的同时检测APP、HPS和Pm，灵敏度能达到10拷贝/μl。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 一种用于检测水貂圆环病毒的荧光定量PCR引物组和荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括：MiCV荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；MiCV荧光定量PCR反应液包括上下游引物、TBPremix Ex TaqTMII和ddH2O；上游引物：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'。本发明根据水貂圆环病毒的Cap基因保守序列设计引物，通过反应体系和条件优化建立了基于SYBR Green II的实时荧光定量PCR技术并组装试剂盒，该试剂盒具有稳定性好、敏感性和特异性较高等优点。

摘要： 本发明属于D型流感病毒检测技术领域，具体涉及D型流感病毒荧光定量PCR与LAMP荧光定量PCR引物对及其应用。D型流感病毒主要感染动物中包括猪和牛，对畜牧业的发展具有一定的威胁，提供稳定可靠的检测方法具有重要的意义。本发明提供了一种用于D型流感病毒实时荧光定量PCR检测的引物序列及相应的试剂盒，该引物针对D型流感病毒HE基因中的保守序列进行设计，能够实现良好的检测特异性和灵敏度，敏感性比普通PCR和荧光定量LAMP均高100倍，可以实现大量通用样品的检测，可对D型流感病毒进行快速、高敏感度的实时荧光定量PCR检测，对于提高D型流感病毒的检测精度具有重要的意义。

摘要： 本发明提供了一种鉴别肝螺杆菌的荧光定量PCR方法，将包含有PCR引物的反应体系进行荧光定量PCR反应；PCR引物包括上游引物和下游引物；反应体系包括以下组分：上游引物，下游引物，SYBR Premix Ex TaqⅡ，ROX Reference DyeⅡ，样品DNA模版，ddH

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液及试剂盒和荧光定量PCR方法。所述荧光定量PCR反应液，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×SYBR荧光染料，10×PCR buffer，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和Ex-Taq酶。本发明优化了PCR实验的荧光定量PCR反应液，特别是加入一定比例的甘油溶液，以保证Ex-Taq酶的活性，加入BSA与DMSO的组合保证了Tag酶的稳定性及活性并减少引物二聚体的形成，减少荧光定量PCR反应液配置时间，所得PCR反应液可以长期保存在-20°C中，使用方便。

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本发明提供一种采用荧光定量PCR技术定量检测土壤中大肠杆菌O157:H7的方法，该方法包括(1)提取样本的微生物基因组DNA；(2)将所述基因组DNA放入PCR反应管中，并向管中加入正向引物、反向引物、SYBR Green Reaction Mix、ROX和无菌水，对标准对照液和未知样品同时进行PCR扩增和熔解曲线测定，获得大肠杆菌O157:H7实时定量PCR的Ct值，根据标准对照液的Ct值和拷贝数拟合的标准曲线，即可定量检测未知样品中的大肠杆菌O157:H7，特异性高，准确度强，最低检测DNA浓度为1.5×10‑4ng/μL，可有效解决土壤和粪便中大肠杆菌O157:H7定量检测的问题。

摘要： 本实用新型公开了一种荧光定量PCR光学激发装置及成像装置、荧光定量PCR仪，其中荧光定量PCR光学激发装置包括光源，该光源的出光方向上设有激发光滤光片和二向色镜，还包括设于激发光滤光片与二向色镜之间的光均匀化透镜组；所述光均匀化透镜组包括平行透镜、复眼透镜和积分透镜，激发光滤光片、平行透镜、复眼透镜、积分透镜、二向色镜沿光源的出光方向依次设置；所述光源为宽光谱光源。本实用新型能够获得照度均匀的激发光，并能够在不同的光谱通道进行检测，使用寿命长，光源更换次数少；成像效果好；尤其适用于微流体芯片的荧光定量PCR检测。