胰腺癌细胞

摘要： 目的探讨微小RNA-103(miR-103)靶向泛素特异性蛋白酶10(USP10)对胰腺癌细胞Yes相关蛋白(YAP)和包含WW结构域的转录调节蛋白1(TAZ)(YAP/TAZ)表达及顺铂(DDP)耐药性的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1、人正常胰腺上皮细胞株hTERT-HPNE和耐DDP细胞PANC-1/DDP。将PANC-1/DDP细胞随机分为对照组、干扰RNA组(si-miR-103)和阴性对照(si-NC)组。用CCK-8法检测转染后细胞DDP半数抑制浓度(IC_(50));实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞miR-103、USP10、MDR1基因表达情况;CCK-8法检测转染后各组PANC-1/DDP细胞存活率变化情况;流式细胞术检测转染后各组PANC-1/DDP细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞YAP、TAZ蛋白表达变化;双荧光素酶报告实验验证miR-103与USP10的靶向关系。结果与hTERT-HPNE细胞比较,PANC-1与耐药细胞PANC-1/DDP中miR-103表达水平显著升高,USP10表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与PANC-1比较,耐药细胞PANC-1/DDP中miR-103表达水平显著升高,USP10表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);经MiRcode数据库预测显示,miR-103与USP103'UTR区有结合位点。与USP10-3'UTR-WT+si-NC组比较,USP10-3'UTR-WT+si-miR-103组荧光素酶活性降低(P<0.05);与对照组和si-NC组比较,si-miR-103组PANC-1/DDP细胞IC_(50)值、miR-103、MDR1表达水平、细胞增殖活性、YAP、TAZ蛋白表达下降显著降低(P<0.05),USP10 mRNA及蛋白表达、细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。结论miR-103/USP10、YAP/TAZ与胰腺癌细胞DDP耐药存在调控关系,干扰miR-103表达可上调USP10并抑制YAP/TAZ表达,逆转胰腺癌耐药细胞对DDP耐药性。

摘要： 目的研究小RNA干扰上皮细胞转化序列2癌基因(ECT2)对于人SW1990胰腺癌细胞中时钟基因PER1、PER2表达的影响。方法采用高糖培养基培养胰腺癌细胞并采用siRNA-ECT2沉默ECT2表达,在干预24、48、72、96 h后采用CCK-8法检测其增殖能力变化,流式细胞术检测各组细胞凋亡率的改变,荧光定量PCR法检测时钟基因PER1、PER2表达的变化。结果siRNA-ECT2沉默ECT2表达后,SW1990胰腺癌细胞抑制率和凋亡率均有不同程度增加,差异有统计学意义(P<0.05),时钟基因PER1、PER2表达显著上调(P<0.05)。结论沉默ECT2可能通过调控肿瘤细胞时钟基因PER1、PER2的表达水平来抑制人SW1990胰腺癌细胞的增殖能力,诱导其凋亡。

摘要： 目的 探讨丙泊酚在低氧条件下对胰腺癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的机制。方法 胰腺癌Panc-1细胞株在常规条件下培养24 h后,将细胞随机分为Hypo组(低氧)、Hypo+P组(低氧+10μg/ml丙泊酚培养)和正常组(正常培养)。其中Hypo组和Hypo+P组在低氧培养箱中继续培养,正常组在常规条件下继续培养。采用CCK8法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)蛋白表达情况。结果 培养24、48、72 h,Hypo组胰腺癌Panc-1细胞的增殖活性均高于正常组和Hypo+P组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Hypo组胰腺癌Panc-1细胞侵袭数目多于正常组和Hypo+P组,ADAM8蛋白相对表达量高于正常组和Hypo+P组,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 丙泊酚在低氧条件下对胰腺癌细胞的增殖和侵袭具有抑制作用,其机制可能与抑制ADAM8蛋白表达有关。

摘要： 目的:探讨长链非编码RNA核富集转录体1(lncRNA NEAT1)靶向miR-497-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡及上皮-间质转化(EMT)的影响。方法:体外培养PANC-1细胞株,对其转染并分为空白对照组(NG组)、阴性转染组(siRNA-NC组)、沉默NEAT1组(NEAT1-siRNA组)、共转染组(NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组)。采用实时荧光定量PCR法检测NEAT1、miR-497-5p水平;CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;Western blot检测增殖细胞核抗原(Ki-67)、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤基因-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及EMT标志蛋白E-钙黏附蛋白(E-cadherin)、N-钙黏附蛋白(Ncadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达情况;应用TargetScan数据库预测NEAT1与miR-497-5p靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果:与NG组、siRNA-NC组比较,NEAT1-siRNA组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著升高(P<0.05),NEAT1水平、Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与NEAT1-siRNA组比较,NEAT1-siRNA+miR-497-5p-inhibitor组PANC-1细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-497-5p及Bax、E-cadherin蛋白表达均显著降低(P<0.05),Ki-67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-497-5p是NEAT1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-497-5p-inhibitor-NEAT1-WT组荧光素酶活性显著高于miR-497-5p-inhibitor-NC-NEAT1-WT组(P<0.05)。结论:沉默lncRNA NEAT1表达能够靶向上调miR-497-5p表达,抑制胰腺癌细胞增殖及EMT过程,并诱导细胞凋亡,有望成为胰腺癌新的潜在治疗靶点。

摘要： 目的 探讨原肌球蛋白4(TPM4)对人胰腺癌细胞侵袭和迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测人正常胰腺导管上皮细胞(HPDE)和人胰腺癌细胞系(ASPC-1、BXPC-3、MIA PaCa-2、PANC-1、SW1990)中TPM4 RNA表达量。采用siRNA或过表达慢病毒感染胰腺癌细胞(MIA PaCa-2、PANC-1),通过qRT-PCR、Western blotting检测各组细胞TPM4的表达,划痕实验及Transwell实验检测各组胰腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果 GEPIA数据库中胰腺癌组织TPM4表达明显高于正常胰腺组织(P<0.05),qRT-PCR分析TPM4 RNA在胰腺癌细胞系中表达均高于HPDE(P<0.0001)。与对照组相比,在MIA Paca-2和PANC-1中过表达TPM4促进了胰腺癌细胞侵袭迁移能力(均P<0.01),而敲低TPM4胰腺癌细胞侵袭迁移能力则明显减弱(均P<0.01)。结论 TPM4在胰腺癌细胞中呈现高水平表达,可能在胰腺癌中发挥着癌基因的作用,其并可促进胰腺癌细胞迁移及侵袭能力。

摘要： 目的:研究Axin2在胰腺癌细胞中的表达.方法:借助实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)对胰腺癌细胞株、永生化正常胰腺细胞中所具有的Axin2进行检测;借助过表达Axin2质粒对具有较低表达的人胰腺癌(PANC-1)细胞株进行瞬时转染,借助Transwell、四甲基偶氮唑盐法测定(MTT)、划痕实验对进行转染后的过表达Axin2细胞所发生的增殖、侵袭与其迁移能力进行检测.结果:PANC-1在细胞中具有最低的表达,较之于其余组别具统计学意义,P<0.05;过表达Axin2载体在对PANC-1细胞进行转染后,过表达组的Axin2较之于空白对照组、阴性对照组高,P<0.05;过表达组的PANC-1细胞增殖、细胞侵袭、细胞迁移较之于阴性对照组、空白对照组低,P<0.05.结论:Axin2在胰腺癌细胞株中较之于正常胰腺细胞低,在具有更高侵袭能力的癌细胞株中具有更低的表达,其本身具有抑癌基因的作用.

摘要： 目的:研究Axin2在胰腺癌细胞中的表达。方法:借助实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)对胰腺癌细胞株、永生化正常胰腺细胞中所具有的Axin2进行检测;借助过表达Axin2质粒对具有较低表达的人胰腺癌(PANC-1)细胞株进行瞬时转染,借助Transwell、四甲基偶氮唑盐法测定(MTT)、划痕实验对进行转染后的过表达Axin2细胞所发生的增殖、侵袭与其迁移能力进行检测。结果:PANC-1在细胞中具有最低的表达,较之于其余组别具统计学意义,P<0.05;过表达Axin2载体在对PANC-1细胞进行转染后,过表达组的Axin2较之于空白对照组、阴性对照组高,P<0.05;过表达组的PANC-1细胞增殖、细胞侵袭、细胞迁移较之于阴性对照组、空白对照组低,P<0.05。结论:Axin2在胰腺癌细胞株中较之于正常胰腺细胞低,在具有更高侵袭能力的癌细胞株中具有更低的表达,其本身具有抑癌基因的作用。

摘要： 目的 本研究旨在探讨长链非编码RNA母系表达基因3(LncRNAMEG3)过表达对胰腺癌细胞(PANC1)自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路的影响.方法 构建pCMV-N-Flag-MEG3表达质粒并转染入PANC1细胞.实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测HPDE6C7(正常胰腺细胞)组、PANC 1(空白对照)组、Vector(PANC 1细胞转染空载体)组和MEG3(PANC 1细胞转染pCMV-N-Flag-MEG3重组质粒)组中LncRNA MEG3表达量;四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法、流式细胞术和单丹磺酰尸胺(MDC)染色法分别检测LncRNA MEG3过表达对胰腺癌细胞PANC1增殖、凋亡和自噬的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测LncRNA MEG3过表达对胰腺癌细胞PANC1中抑凋亡因子(Bcl-2)、促凋亡因子(Bax)和自噬因子(Beclin 1)蛋白表达水平及mTOR通路中mTOR、核糖体p70S6激酶蛋白(SK61)和核起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)磷酸化水平的影响.结果 与PANC1组和Vector组相比,MEG3组LncRNA MEG3表达水平(0.36±0.08 vs 0.35±0.11 vs 0.69±0.09)、胰腺癌细胞 PANC1 增殖抑制率(3.35％±0.12％vs 3.23％±0.09％vs 36.77％±0.13％)、自噬率(29.32％±1.03％vs 26.73％±1.32％vs 57.76％±1.09％)、凋亡率(9.85％±1.58％vs 9.73％±1.12％vs 35.89％±1.05％)、Bax(0.26±0.08 vs 0.29±0.05 vs 0.83±0.08)和 Beclin 1(0.15±0.06 vs 0.17±0.02 vs 0.61±0.03)表达水平显著升高(均P＜0.05),Bcl-2表达水平(0.79±0.12 vs 0.81±0.09 vs 0.30±0.03)及 mTOR 通路中 mTOR(1.08±0.05 vs 1.06±0.08 vs 0.37±0.10)、SK61(1.12±0.06 vs 1.11±0.09 vs 0.41±0.03)和4E-BP1(0.97±0.07 vs 0.95±0.03 vs 0.39±0.05)磷酸化水平显著降低(均P＜0.05).结论 LncRNA MEG3过表达能抑制胰腺癌细胞PANC1增殖促进细胞凋亡,促进细胞自噬囊泡的形成,可能与阻滞mTOR通路有关.

摘要： 目的:探讨肿瘤相关中性粒细胞(TNA)释放中性粒细胞外诱捕网(NETs)对胰腺癌细胞增殖的影响.方法:将TNA和胰腺癌PANC-1细胞进行培养,并将其分为对照组(PANC-1)、PANC-1+TAN处理组、PANC-1+TAN+HMGB1处理组、PANC-1+TAN+Anti-HMGB1处理组,观察TNA释形成中性粒细胞外诱捕网(NETs)对于胰腺癌PANC-1细胞的增殖活性影响.结果:PANC-1+TAN处理组和PANC-1+TAN+HMGB1处理组的PANC-1细胞活性高于对照组(p<0.05);PANC-1+TAN处理组的PANC-1细胞活性高于对照组,但是低于PANC-1+TAN+HMGB1处理组(p<0.05);PANC-1+Anti-HMGB1处理组细胞活性低于对照组,(p<0.05).结论:胰腺癌患者微环境下TNA形成释放中性粒细胞外诱捕网(NETs)对胰腺癌PANC-1细胞增殖具有一定的促进作用,为胰腺癌病情发生进展及肿瘤细胞的增殖转移的机制提供可参考资料.

摘要： 目的：探讨超声辐照能否用于增强吉西他滨对胰腺癌细胞Panc-1和Mia PaCa-2的细胞毒性,对超声介导下药物递送系统的可能机制进行初步研究.方法：常规培养Panc-1和MIA PaCa-2细胞,加入不同浓度的吉西他滨(0.1-300 μ g/ml),接受超声辐照(参数为频率1MHz,声强1.0 W/cm2,工作周期20％,时间30 s),MTT检测其细胞毒性作用.以相同超声参数辐照两种细胞,钙黄绿素及碘化丙啶分别用来对细胞膜通透性及细胞活率进行检测,分析超声对其影响.结果：在Panc-1和MIA PaCa-2细胞，超声辐照可明显增强吉西他滨对两种细胞的细胞毒性(P0.05)。结论：低声强超声辐照是一种安全有效的方法，可使胰腺癌细胞对吉西他滨化疗敏感性增强。超声辐照后，细胞膜通透性的改变可能是其中的机制。

摘要： 目的:研究Withanolide E(WE)和4β-Hydrowithanolide E(HWE)抑制Hsp90的分子作用机制,并比较几种不同分子结构的醉茄内酯类化合物,从而揭示其发挥抑制HSP90功能的药效团.rn 方法:比较WE、HWE、WA、AZWA以及WP对胰腺癌细胞系Panc-1的增殖活性、凋亡、降解Hsp90客户蛋白、绑定Hsp90蛋白以及诱导Hsp90高聚体形成影响.rn 结果:WE与HWE可以直接与Hsp90蛋白分子结合,促使Hsp90被氧化形成二聚体,进而诱导Hsp90客户蛋白降解,诱导细胞凋亡,最终抑制胰腺癌细胞增殖活性.构效关系研究显示醉茄内酯类化合物结构中的C-5和C-6位环氧基团是抑制Hsp90功能的关键药效团、C2-C3不饱和双键上的H被亲核取代会降低抑制Hsp90的活性,而C4位的羟基可增强其抑制Hsp90的活性.rn 结论:WE与HWE可通过拮抗Hsp90活性抑制胰腺癌细胞系Panc-1增殖;醉茄内酯类化合物结构中的C-5和C-6位环氧基团、C2-C3不饱和双键以及C4位的羟基可能与其拮抗Hsp90活性有关.

摘要： 使用包含α‑氨基己二酸的胰腺癌用唾液生物标记物。此处，上述胰腺癌用唾液生物标记物例如可以进而包含(肌酸酐、1,3‑二氨基丙烷、N8‑乙酰亚精胺和胍丁胺肌酸酐)、(肌酸酐、N1‑乙酰亚精胺、N‑乙酰神经氨酸和1,3‑二氨基丙烷)、(磷酰胆碱和N‑乙酰神经氨酸)或者(3‑磷酸化‑D‑甘油酸(3PG)、N1‑乙酰亚精胺、N‑乙酰神经氨酸和4‑(β‑乙酰基氨基乙基)咪唑)。进而，也可以使用丙氨酸对浓度进行归一化。由此，即使是浓度变化大的唾液也可从健康者中早期发现包含胰腺癌的胰腺疾病。

摘要： 本发明公开了提取胰腺癌诊断用生物标志物的方法、用于所述方法的计算装置、胰腺癌诊断用生物标志物以及包含该生物标志物的胰腺癌诊断用装置。更具体地，本发明公开了利用在胰腺癌患者中特异性表达的基因或者获自血液或组织的与所述基因配对的微RNA来提取胰腺癌诊断用生物标志物的方法、用于所述方法的计算装置、胰腺癌诊断用生物标志物以及包含该生物标志物的胰腺癌诊断用装置。

摘要： 本发明公开了提取胰腺癌诊断用生物标志物的方法、用于所述方法的计算装置、胰腺癌诊断用生物标志物以及包含该生物标志物的胰腺癌诊断用装置。更具体地，本发明公开了利用在胰腺癌患者中特异性表达的基因或者获自血液或组织的与所述基因配对的微RNA来提取胰腺癌诊断用生物标志物的方法、用于所述方法的计算装置、胰腺癌诊断用生物标志物以及包含该生物标志物的胰腺癌诊断用装置。

摘要： 本发明公开一种检测豆蔻明对胰腺癌细胞的细胞增殖与凋亡作用的方法，具体步骤如下：S1、胰腺癌细胞培养于添加10％胎牛血清的DMEM培养基中；S2、胰腺癌细胞以5000个细胞/孔的密度接种于96孔板中，隔夜孵化后，细胞给予不同稀释浓度的豆蔻明孵化48h和72h，然后用20μL MTT试剂添加到每个孔中，继续孵化4h；S3、以DMSO溶解MTT试剂，用微孔板检测仪在490nm处测定各孔的吸光度。结果表明豆蔻明具有诱导DNA损伤和凋亡的作用，对胰腺癌细胞的增殖也有一定的抑制作用。豆蔻明有可能成为胰腺癌的一种新的治疗方法。

摘要： 本发明首先提供了漆黄素的一种新的用途，即在制备用于抑制胰腺癌细胞或小鼠胰腺癌肿瘤增殖的制品中的应用。本发明再一个方面还提供一种用于抑制胰腺癌细胞或小鼠胰腺癌肿瘤增殖的制品，所述的制品中包含有药理有效浓度的漆黄素。本发明发现漆黄素能抑制胰腺癌细胞和小鼠胰腺癌肿瘤的增殖，可将漆黄素用于抗胰腺癌治疗新药物的制备。

摘要： 本发明提供一种依帕司他在制备胰腺癌药物中的应用，胰腺癌药物应用于抑制胰腺癌细胞的外泌体分泌。一种抗胰腺癌的药品组合物，药品组合物含有依帕司他。所述药品组合物应用于抑制胰腺癌细胞的外泌体分泌。本发明的实施例还提供一种依帕司他对胰腺癌细胞分泌外泌体的抑制作用的验证方法，包括以下过程：利用低温超速离心法提取细胞上清外泌体；将收集的外泌体裂解后用BCA试剂盒定量蛋白，用测得的蛋白量来反映外泌体的量；透射电镜验证外泌体的双层脂质膜包裹的杯状结构；蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝检测外泌体蛋白浓度。本发明中提供了依帕司他有一个新的用途，即抑制外泌体分泌，依帕司他在临床肿瘤治疗中有巨大的应用潜力。

摘要： 本发明公开一种检测豆蔻明对胰腺癌细胞的细胞增殖与凋亡作用的方法，具体步骤如下：S1、胰腺癌细胞培养于添加10％胎牛血清的DMEM培养基中；S2、胰腺癌细胞以5000个细胞/孔的密度接种于96孔板中，隔夜孵化后，细胞给予不同稀释浓度的豆蔻明孵化48h和72h，然后用20μL MTT试剂添加到每个孔中，继续孵化4h；S3、以DMSO溶解MTT试剂，用微孔板检测仪在490nm处测定各孔的吸光度。结果表明豆蔻明具有诱导DNA损伤和凋亡的作用，对胰腺癌细胞的增殖也有一定的抑制作用。豆蔻明有可能成为胰腺癌的一种新的治疗方法。

摘要： 本发明涉及胰腺癌干细胞及针对胰腺癌的新的分子标记、标记检测方法及筛选方法。本发明作为从胰腺癌细胞株中发掘的标记，是一种通过胰腺癌干细胞标记的检测，对胰腺癌，尤其是对早期的胰腺癌进行检测的标记。并且，利用本发明的标记，能够对胰腺癌进行准确的诊断及预后分析。

摘要： 本发明提出了一种用于检测胰腺癌细胞的表达基因、检测方法及其应用，该表达基因为MYEOV，选取Capan‑2细胞，以MYEOV作为表达基因进行RT‑PCR检测实验，可检测该表达基因于胰腺癌细胞中的表达性，选取Capan‑2细胞，以MYEOV作为表达基因，于低氧压力下进行实验，并通过Western Blot实验进行检测，该基因表达量的增加和氧气浓度呈负相关性，和同一氧气浓度下的培养时间呈正相关性，借此，本发明具有可检测胰腺癌细胞和低氧压力之间相关性的优点。

摘要： 本发明提供了一种以PERK和CTR1为联合靶点的抑制胰腺癌细胞增殖的组合物及其应用，属于生物医药技术领域。所述的组合物包括PERK抑制剂和CTR1抑制剂。本发明首次提出将CTR1靶点与PERK靶点联合作为胰腺癌药物治疗的靶点，为胰腺癌的治疗提出了新的思路。研究显示，与正常对照组相比，PERK抑制剂和CTR1抑制剂联合使用后，能明显抑制胰腺癌细胞的增殖以及成瘤能力。