胰腺星状细胞

摘要： 常见的胰腺疾病类型有胰腺炎、糖尿病和胰腺癌。临床研究显示,在人体内胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)可以从纤维化、氧化应激和炎性反应等方面影响胰腺病变,导致胰腺疾病的发生。本文综述了不同胰腺疾病的造模方法,以及PSCs对胰腺疾病发生发展的影响及其应用前景,以期为研究和治疗胰腺疾病提供新思路。

摘要： 目的:探讨Notch3在小鼠胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)激活中的作用机制。方法:原代分离培养小鼠PSCs并用油红O染色鉴定,细胞分组为空白对照组、阴性对照siRNA组、Notch3 siRNA组、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)组及Notch3 siRNA+TGFβ1组。应用RNA测序检测Notch3基因对其他信号通路的影响;应用免疫组织化学检测Notch3与TGFβ1在人胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcino⁃ma,PDAC)间质及癌旁组织中的表达情况;应用免疫荧光双标法检测Notch3和TGFβ1在PDAC间质的共表达情况;应用Western blot检测Notch3和TGFβ1在空白对照组和Notch3 siRNA组小鼠PSCs中的表达;应用Western blot检测Notch3基因敲减和TGFβ1诱导对活化的PSCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、纤连蛋白(fibronectin)和I型胶原(collagen type I,Col I)蛋白表达的影响;应用划痕实验和CCK-8实验检测Notch3基因敲减和TGFβ1诱导对小鼠PSCs迁移和活力的影响。结果:RNA测序和Western blot结果显示,敲减小鼠PSCs中Notch3基因表达可抑制TGFB1基因和TGFβ1蛋白表达;免疫组化和免疫荧光双标染色结果显示,Notch3和TGFβ1共表达于人PDAC间质细胞中;与Notch3 siRNA组相比,Notch3 siRNA+TGFβ1组小鼠PSCs中fibronectin和Col I蛋白表达显著升高(P<0.05),且PSCs活力和迁移能力显著提高(P<0.01)。结论:抑制小鼠PSCs中Notch3基因的表达,同时给予TGFβ1诱导,可提高小鼠PSCs的迁移能力和活力。Notch3对PSCs激活的调节作用部分依赖TGFβ1信号通路。

摘要： 急性胰腺炎(AP)是临床上常见的一种急腹症,不仅累及胰腺,还可侵犯多器官,患者会出现发热、腹痛、恶心、呕吐等症状,严重者会出现腹膜刺激征、腹水、休克等,病情凶险,病死率较高,严重危及患者身体健康与生命安全[1]。AP的发病机制尚未完全明确,目前研究认为,与胰腺自消化、炎症因子级联瀑布效应、胰腺微循环障碍、胰腺腺泡细胞坏死及凋亡、肠道菌群易位、胰腺腺泡内钙超载、胰腺星状细胞活化等机制有关[2]。

摘要： 胰腺星状细胞(PSCs)是胰腺癌肿瘤微环境的重要组成部分,其激活后可通过释放多种细胞因子及外泌体等直接促进肿瘤细胞的生长、转移、侵袭,并作用于内皮细胞促进肿瘤组织的血管生成,还能调节免疫细胞功能、参与肿瘤免疫耐受,同时促进肿瘤间质成分增生,促进肿瘤耐药.而通过阻断相关信号转导或使用靶向性的新材料等方式调节PSCs的活化或功能,能够实现对胰腺癌发展进程的调控.本文就PSCs促进胰腺癌发展的作用机制作一综述,旨在为胰腺癌发病机制研究与治疗提供参考.

摘要： IL-17是具有多种功能的细胞因子,在抵抗细胞外细菌和真菌的感染、参与炎症的发生与发展等方面发挥重要作用.CP是由遗传、环境等因素导致的胰腺局部或弥散性的慢性进展性炎症.IL-17已被证实广泛参与包括CP在内多种纤维化相关疾病的进程.本文从IL-17介导的免疫学改变及下游信号通路等角度入手,探讨以IL-17为靶点进行有效干预在改善CP胰腺纤维化以及缓解CP相关并发症中的临床价值.

摘要： 从胰腺纤维化的微环境出发,综述了多种细胞在慢性胰腺炎发病中的作用,以及中医药防治慢性胰腺炎的相关机制。中医药可通过调节细胞外基质的过度产生和降解,抑制胰腺星状细胞的活化、腺泡细胞的凋亡、炎症细胞的浸润和炎性因子的释放来减缓胰腺纤维化,从而达到防治慢性胰腺炎的目的,为慢性胰腺炎的临床治疗提供参考。

摘要： 目的 以癌症相关胰腺星状细胞(CaPSCs)和正常胰腺相关胰腺星状细胞(NaPSCs)作为切入点,筛选出其影响胰腺癌细胞系Panc-1增殖和迁徙能力的相关circRNA,并以此探究胰腺癌靶向治疗的策略.方法 分离培养出5个胰腺癌患者胰腺癌组织的CaPSCs1～5和5个胰腺良性疾病患者的正常胰腺组织的NaPSCs1～5后,再与Panc-1共培养,之后使用CCK-8实验检测Panc-1的增殖能力,筛选出对Panc-1增殖促进作用最强的CaPSCs1和最弱的NaPSCs1,再利用RNA高通量测序分析2种细胞间circRNA表达谱差异,并应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)验证前3位差异性表达最明显的circRNA.同时利用KEGG富集差异circRNA的生物学过程及信号通路,并用microRNA靶标预测软件预测差异circRNA下游基因(microRNA).结果 与NaPSCs1组比较,CaPSCs1组有841个差异circRNA(其中下调的有453个,上调的有388个)、8 155个差异mRNA(其中下调的有4 226个,上调的有3 929个)及73个差异microRNA(其中下调的有16个,上调的有57个).其中差异性表达最明显的cir-cRNA为chr7:154954255 | 154998784、chr10:12081472 |12120267和chr10:76909966|77019099,差异有统计学意义(P＜0.05),其相对应的靶基因(microRNA)分别为hsa-miR-612、hsa-miR-1301-3p、hsa-miR-4459.差异circRNA主要富集的信号通路为Toll样受体信号通路、TNF信号通路、T细胞受体信号通路、HIF-1信号通路,生物过程则主要集中在细胞-底物连接和细胞-基质黏附连接等方面.结论 CaPSCs中表达上调最明显的circRNA:chr7:154954255 |154998784、chr10:12081472|12120267和chr10: 76909966 |77019099及其下游靶基因(microRNA)有可能与PSCs通过多种信号通路促进胰腺癌细胞增殖和迁徙的能力相关.

摘要： CP是一种以胰腺纤维化及腺泡萎缩和破坏等为主要病理特征的慢性不可逆性疾病,其病因复杂,发病机制尚未明确.近年研究表明,数个易感基因、信号通路及细胞或亚细胞水平的病理生理机制均与CP发病存在不同程度的关联.

摘要： 胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)发病隐匿,多数患者在最初诊断时已处于进展期或晚期,预后极差,而当前主流的手术治疗效果并不理想,为此有必要寻找更优的治疗靶点.国内外研究表明,微环境中活化的胰腺星状细胞及其自噬分泌的丙氨酸对PDAC的发生及进展又具有重要作用.本文就胰腺肿瘤微环境中活化的胰腺星状细胞及其自噬分泌的丙氨酸在胰腺导管腺癌发生、进展中的重要作用加以综述,并就其相关机制提出合理假设.

摘要： 胰腺癌是恶性程度极高的消化系统肿瘤.随着经济社会的发展,中国胰腺癌的发病率迅速升高,但目前仍缺乏有效的治疗手段,死亡率和疾病发生率几乎相当,5年总体生存率仍低于5％.胰腺导管腺癌是胰腺癌最常见的病理类型,各种致病因素作用于胰腺,导致癌前病变一胰腺上皮内瘤变的发生,损伤和修复反复发生,并导致癌基因的突变的积累,最终导致胰腺导管腺癌的发生.在胰腺癌的发生和进展过程中,最为显著的特点是胰腺纤维化和粘连形成,这一过程中,癌细胞激活并募集胰腺星状细胞,营造了特殊的丰富基质,低灌注,缺氧,免疫屏蔽的微环境,并给因此给治疗带来巨大的困难.因此,胰腺癌微环境及胰腺星状细胞是一个极具潜力的治疗靶点.这篇文章综述了胰腺癌微环境及胰腺星状细胞在胰腺癌中的作用及近年来的研究进展.

摘要： 目的:观察PSC对胰岛β细胞胰岛素分泌功能及其增殖和凋亡的影响。方法:免疫组化法检测2型糖尿病患者胰腺组织连续切片中α-平滑肌肌动蛋白及胰岛素的表达；分离培养大鼠PSC，收集胰腺星状细胞上清；PSC-SN干预胰岛p细胞株Ins-1及RINm5f；电化学发光免疫分析法检测培养液中胰岛素的分泌量；嗅脱氧尿苷核素渗入法观察RINm5f的增殖，蛋白免疫印迹法检测其表达情况。结果:免疫组化染色观察到胰岛内存在a-SMA染procasepase 3的表达情况。结论：结论:PSC存在，并可能导致该部位胰岛素染色的缺失；可抑制胰岛p细胞的胰岛素分泌；PSC-SN可抑制胰岛β细胞增殖，并可能参与启动β细胞凋亡。

摘要： 目的:观察柴胡皂苷a对大鼠胰腺星状细胞Ⅰ型胶原分泌和基质金属蛋白酶13(MMP13)表达的影响. 方法:体外分离培养大鼠胰腺星状细胞(PSC),分别加入5μg/mL、10μg/mL柴胡皂苷a,作用24h后,应用Elisa检测柴细胞培养液上清Ⅰ型胶原含量,用Western blot检测PSC MMP13表达. 结果:与对照组相比,低浓度和高浓度柴胡皂苷a组Ⅰ型胶原含量降低(P＜0.05),MMP13蛋白表达水平升高(P＜0.05);与低浓度柴胡皂苷a组比较,高浓度柴胡皂苷a组Ⅰ型胶原含量降低和MMP13蛋白表达水平升高有显著性(P＜0.05). 结论:柴胡皂苷a能减少胰腺星状细胞Ⅰ型胶原分泌,其作用与诱导MMP13表达,促进胶原降解有关.

摘要： 核转录因子-KB(nuclear factor kappa bingding,NF-KB)广泛存在于真核细胞中,参与炎症反应,机体免疫,细胞凋亡等过程,是当前热门研究的细胞因子之一.研究发现,慢性胰腺炎的发生与NF-KB的活化关系密切,其主要机制为活化的NF-KB转录胰腺星状细胞激活因子,进而激活了胰腺星状细胞,促使胰腺发生纤维化.

摘要： 本发明提供一种构建永生化猪肝星状细胞系的方法、永生化猪肝星状细胞系和应用，涉及永生化细胞技术领域，本发明所述方法从猪肝脏中分离得到正常的猪肝星状细胞，以SV40LT过表达慢病毒转染，得到永生化的猪肝星状细胞系。本发明采用包含SV40LT序列的慢病毒载体对猪肝星状细胞进行永生化，具有可感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可长期表达等优点。本发明所述方法构建的永生化猪肝星状细胞系呈伸展状态生长，有伪足，细胞轮廓清晰，细胞完整，具有与原代猪肝星状细胞类似的典型形态学特征；所得永生化猪肝星状细胞系传代10代后，细胞形态和特征与第1代细胞无明显差别，该构建的永生化猪肝星状细胞系可在药物筛选中应用。

摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及脂肪间充质干细胞向肝星状细胞和肝内皮细胞同时分化的培养基及方法。本发明提供的培养基能够将脂肪间充质干细胞诱导同时分化成为星状细胞和肝内皮细胞，实验操作简单，干细胞来源广泛。以本发明提供培养基对脂肪干细胞诱导分化的效果要显著优于对照试验，且分化而来的两种细胞都具备其典型功能和表达关键基因。结果表明，本发明提供的培养基诱导分化23天后，有9.6％的细胞分化为肝星状细胞类似的细胞，有14.3％的细胞成为人类肝内皮细胞类似的细胞。

摘要： 本发明公开了一种从胚胎干细胞分化获得肝星状细胞的方法。采用该方法制备的肝星状细胞，质量稳定，安全性高，为组织工程、药物开发和细胞治疗提供大量的细胞来源。本发明制备的肝星状细胞具有肝星状细胞静息态和活化态的特性；可以被TAA活化，能够模拟药物(如TAA)导致肝纤维化的过程；可以被APAP活化，能够模拟药物(如APAP)引起的肝毒性肝星状细胞激活。由此可见，本发明提供的方法制备的肝星状细胞可以作为细胞模型筛选治疗肝纤维化药物。本发明具有重要的应用价值。

摘要： 本发明提供一种构建永生化猪肝星状细胞系的方法、永生化猪肝星状细胞系和应用，涉及永生化细胞技术领域，本发明所述方法从猪肝脏中分离得到正常的猪肝星状细胞，以SV40LT过表达慢病毒转染，得到永生化的猪肝星状细胞系。本发明采用包含SV40LT序列的慢病毒载体对猪肝星状细胞进行永生化，具有可感染非分裂期细胞、容纳外源性基因片段大，可长期表达等优点。本发明所述方法构建的永生化猪肝星状细胞系呈伸展状态生长，有伪足，细胞轮廓清晰，细胞完整，具有与原代猪肝星状细胞类似的典型形态学特征；所得永生化猪肝星状细胞系传代10代后，细胞形态和特征与第1代细胞无明显差别，该构建的永生化猪肝星状细胞系可在药物筛选中应用。

摘要： 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及脂肪间充质干细胞向肝星状细胞和肝内皮细胞同时分化的培养基及方法。本发明提供的培养基能够将脂肪间充质干细胞诱导同时分化成为星状细胞和肝内皮细胞，实验操作简单，干细胞来源广泛。以本发明提供培养基对脂肪干细胞诱导分化的效果要显著优于对照试验，且分化而来的两种细胞都具备其典型功能和表达关键基因。结果表明，本发明提供的培养基诱导分化23天后，有9.6％的细胞分化为肝星状细胞类似的细胞，有14.3％的细胞成为人类肝内皮细胞类似的细胞。

摘要： 本发明提供一种SD大鼠肝脏库普弗细胞和肝星状细胞原代分离、培养方法，包括步骤：(1)麻醉和抗凝；(2)插管；(3)原位灌注；(4)体外消化并获取总细胞悬液；(5)KC和HSC的纯化、分离；(6)细胞培养及形态观察；(7)存活率检测；(8)细胞鉴定。本发明使用健康成年SD雄鼠，200～350g，通过原位灌注、消化和体外消化、梯度离心和差速贴壁分离法，达到了存活率可达到95％以上、纯度可达到90％以上等效果。

摘要： 本发明公开了一种从胚胎干细胞分化获得肝星状细胞的方法。采用该方法制备的肝星状细胞，质量稳定，安全性高，为组织工程、药物开发和细胞治疗提供大量的细胞来源。本发明制备的肝星状细胞具有肝星状细胞静息态和活化态的特性；可以被TAA活化，能够模拟药物(如TAA)导致肝纤维化的过程；可以被APAP活化，能够模拟药物(如APAP)引起的肝毒性肝星状细胞激活。由此可见，本发明提供的方法制备的肝星状细胞可以作为细胞模型筛选治疗肝纤维化药物。本发明具有重要的应用价值。

摘要： 本发明提供了一种特异性靶向活化肝星状细胞的CAR‑T细胞及其制备方法和应用，所述CAR包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域；所述抗原结合结构域为抗FAP单链抗体。本发明采用抗FAP单链抗体作为嵌合抗原受体的抗原结合结构域，表达所述嵌合抗原受体的T细胞对活化肝星状细胞具有显著的特异性靶向杀伤作用，拓展了细胞免疫疗法的应用范围，为临床治疗肝纤维化和非肿瘤疾病提供了新思路。

摘要： 本发明为一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法。一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法，包括：(1)原位灌注：在泡球蚴感染动物肝脏中，经门静脉，依次用前灌注液、后灌注液1和后灌注液2原位灌注肝脏后，取下肝脏制成肝内细胞悬液；(2)梯度离心：将肝内细胞悬液离心后，得上清液1和下层的沉淀物1；用D‑Hanks液离心洗涤沉淀物1，得肝细胞；将上清液1离心后，收集下层的沉淀物2；向沉淀物2中依次加入GBSS‑B、Nycodenz分离液、GBSS‑B，离心，收集白色的环状层，用GBSS‑B离心洗涤，弃上清液，得肝星状细胞。本发明所述的一种泡球蚴感染动物中肝细胞与肝星状细胞的分离方法，可同时提取分离出泡球蚴感染动物中的肝细胞与肝星状细胞。

摘要： 本发明公开一种大鼠静止态胰腺星状细胞的提取方法，包括以下步骤：S1、配制DMEM/F12培养基；S2、将大鼠胰腺充分剪碎；S3、将胰腺组织块涂布在细胞培养皿底部培养1‑3h；S4、加入DMEM/F12培养基培养24‑48h；S5、除去培养基，使用PBS润洗一遍后除去PBS，加入胰蛋白酶浸润后除去胰蛋白酶；S6、孵育80‑120s，加入DMEM/F12培养基终止消化，轻柔吹打3‑5次，将静止态胰腺星状细胞吹打悬浮；S7、将步骤S6的细胞悬浮液过滤收集滤液，即得到大鼠静止态胰腺星状细胞。本发明方法步骤简单、易于操作、节省时间；获得的静止态胰腺星状细胞产率高且纯度高，同时其整个过程中仅用到一种价格较为低廉的胰蛋白酶，成本与密度梯度离心法相比大大降低。