α-龙葵碱通过WNT信号通路抑制曲古抑菌素A-耐药人胰腺癌细胞的上皮-间质转化进程

摘要

目的探究α-龙葵碱对曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞凋亡、侵袭和迁移能力的影响,探究α-龙葵碱对胰腺癌上皮-间质转化(EMT)的影响。方法采用不同浓度的α-龙葵碱(0 μg/mL,2 μg/mL,4 μg/mL和6 μg/mL)处理曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞,使用Transwell和划痕试验来检测曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的迁移和侵袭能力变化。然后,通过RT-PCR和Western blotting检测相关的EMT标记物波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、p-β-连环蛋白(p-β-catenin)、Frizzled家族蛋白7(Frizzled7)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)表达情况。结果与正常对照组(无α-龙葵碱处理)相比,实验组中无毒性剂量下的α-龙葵碱处理后,划痕试验中曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的侵袭迁移能力显著降低(P<0.05);EMT相关蛋白中,E-钙黏蛋白α表达水平增加(P<0.05),N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-2的表达水平下降(P<0.05)。此外,实验组中,经α-龙葵碱处理后,曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的β-连环蛋白上游基因Fizzled7和GSK3β的表达水平下降(P<0.05)。结论本研究结果表明,α-龙葵碱可能通过WNT/β-连环蛋白信号通路来调节曲古抑菌素A-耐药胰腺癌细胞的EMT进程,发挥其抗肿瘤作用。