肝细胞移植

摘要： 2021年1月-2021年6月,我有幸在日本国立成育医疗研究中心(National Center for Child Health and Development,NCCHD)的器官移植中心学习。NCCHD器官移植中心在国际知名的移植专家笠原群生(Mureo Kasahara)教授及阪本靖介(Seisuke Sakamoto)教授的带领下开展儿童肝脏移植、肾脏移植、小肠移植及肝细胞移植。经过这6个月的学习,对于儿童器官移植的体会有所加深。因此,将我的学习见闻及体会与大家分享。

摘要： 目的 对眼表疾病患者临床中采用羊膜联合角膜缘干细胞移植治疗的整体效果进行主要分析.方法 将本院在2017年12月-2019年12月期间收治的96例患有眼表疾病的患者随机分为两组,每组各48例;分别实施常规治疗(常规组患者)和羊膜联合角膜缘干细胞移植治疗(实验组患者),对比实验组患者的临床效果.结果 治疗后实验组和常规组患者的治愈率、角膜上皮修复时间和视力提高概率进行比较,实验组优于常规组,组间差异明显,具有统计学意义(P<0.05);结论 羊膜联合角膜缘干细胞移植临床治疗效果显著,既可以有效提高眼表疾病患者的治愈率,同时对患者的视力恢复效果具有显著影响.

摘要： 目的 建立经SD大鼠颈动脉途径胃左动脉插管移植肝细胞的动物模型.方法 将20只SD大鼠经颈动脉插管进入腹腔干,临时阻断脾动脉及肝总动脉,将亚甲蓝注入胃左动脉,观察亚甲美蓝的分布;将CFDA SE标记的肝细胞注入胃左动脉,通过荧光显微镜观察肝细胞在胃的分布情况.结果 亚甲美蓝染胃成蓝色;荧光显微镜发现C FD A SE标记的肝细胞在胃壁显示.结论 经胃左动脉移植CFDA SE标记的肝细胞成功分布于胃壁的肌层及黏膜下层,成功建立经SD大鼠颈动脉途径插管经胃左动脉的动物模型,为研究肝细胞移植提供一种新的动物模型.

摘要： 目的:探讨巨噬细胞在Fah-/-小鼠肝损伤过程中的作用以及对肝细胞移植效率的影响.方法:观察Fah-/-小鼠撤药后肝损伤过程中巨噬细胞的活化情况,并采用脂质体将巨噬细胞清除后,用脾脏注射的方法将同品系野生型小鼠的成熟肝细胞移植入Fah-/-小鼠体内,评价肝再生效率以及病理学的变化.同时体外分离小鼠骨髓巨噬细胞,将其与原代肝细胞共同回输入Fah-/-小鼠体内,观察细胞再植的效率以及小鼠肝功能的影响.结果:H&E染色与免疫组化染色显示,在撤除药物NTBC[2-(2-硝基-4-三氟甲基苯甲酰基)-环己烷-1,3-二酮]后造成的肝损伤过程中,F a h-/-小鼠肝脏内伴随着内源肝细胞的损伤与巨噬细胞的增殖;采用脂质体对巨噬细胞清除的效率约为50％;清除巨噬细胞后进行原代细胞移植发现在细胞移植第4周,清除巨噬细胞组进行扩增的细胞克隆数目与大小均多于对照组;将小鼠巨噬细胞与原代肝细胞按1:5比例同时回输入Fah-/-小鼠体内,免疫组化染色显示巨噬细胞与原代肝细胞混合注入后肝细胞再植效率降低,且肝损伤较对照组更为严重.结论:巨噬细胞会阻碍Fah-/-小鼠肝细胞移植过程中细胞的增殖.

摘要： BACKGROUND: Hepatocyte transplantation has achieved some success in animal experiments for the treatment of metabolic diseases and acute liver failure. However, the clinical efficacy of hepatocyte transplantation is unsatisfactory. The difference between the experimental results and the clinical efficacy may be related to the hepatocyte transplantation approach. OBJECTIVE: To evaluate the therapeutic effects of hepatocyte transplantation by the intubation via the intubation of the splenic artery and intrasplenic injection in rats with acute hepatic failure, providing more optimal transplantation approaches and methods. METHODS: Hepatocytes were isolated and cultured by the modified Seglen's method (two-step). Acute hepatic failure was induced by D-gal in Sprague-Dawley rats (provided by the Experimental Animal Center of Chongqing Medical University in China). After 24 hours, an intubation tube was inserted into the splenic artery in 65 rats with acute hepatic failure, which was successful in 60 rats. Then these 60 rat models were randomly divided into three groups (n=20 per group). Intrasplenic injection group received about 2×107 hepatocytes through intrasplenic injection and 0.4 mL of Hank's solution through the splenic artery. Splenic artery group received 0.4 mL of Hank's solution through intrasplenic injection and 2×107 hepatocytes through the splenic artery. Model group received 0.4 mL of Hank's solution through intrasplenic injection and 0.4 mL of Hank's solution through the splenic artery. Survival rate and liver function of the rats was observed within 14 days after transplantation. The distribution of CFDA-SE-labeled hepatocytes transplanted via the splenic artery was observed under fluorescence microscope at 7 days after transplantation, and meanwhile, the distribution and proliferation of transplanted hepatocytes in the spleen were observed using hematoxylin-eosin staining. Synthesis of albumin in the spleen was observed by immunofluorescence staining. RESULTS AND CONCLUSION: (1) 80％-90％ hepatocytes survived after isolation. (2) At 14 days after transplantation, the survival rates of rats in the three groups were significantly different: intrasplenic injection group> splenic artery group> model group. (3) The liver function of rats was significantly improved in the intrasplenic injection group and the splenic artery group, especially in the former group. (4) CFDA-SE-labeled hepatocytes (green fluorescence) were scattered in the rat spleen and liver at 7 days after transplantation via the splenic artery. (5) At 14 days after transplantation, immunofluorescent staining of albumin demonstrated some positive cells in the rat spleen in the intrasplenic injection group and splenic artery group. (6) At 7 days after transplantation, transplanted hepatocytes were concentrated and colonized in the red pulp of the spleen. In conclusion, hepatocyte transplantation through catheterization of the splenic artery via carotid route can improve the survival of rats with acute hepatic failure and ameliorate the hepatic function, but intrasplenic injection is significantly superior to the injection via the splenic artery.%背景:肝细胞移植在治疗代谢性疾病和急性肝衰竭的动物实验中取得了一定成功, 然而肝细胞移植的临床疗效却并没有动物实验理想.造成实验模型与临床疗效的差异可能与肝细胞移植途径有一定关系.目的:探讨经颈动脉途径脾动脉插管注射与脾脏直接注射两种方法行肝细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的疗效, 得出更加优化的移植方法.方法:在Seglen改良两步法的基础上稍加改进分离培养肝细胞.采用D-氨基半乳糖诱导大鼠 (重庆医科大学实验动物中心提供) 急性肝衰竭24h后, 65只大鼠经颈动脉途径脾动脉插管, 60只插管成功后随机分为3组:脾脏直接注射组 (n=20) 大鼠经脾脏直接注射约2×107个肝细胞、脾动脉注射0.4m Lhank's液;脾动脉注射组 (n=20) 大鼠经脾脏直接注射0.4 mL Hank's液、脾动脉注射2×107个肝细胞;模型对照组 (n=20) 经脾脏直接注射0.4 mL Hank's液、脾动脉注射0.4 mL Hank's液.移植后14 d内观察各组大鼠的生存率及肝功能变化;移植后7d, 荧光显微镜观察经脾动脉移植肝细胞的体内分布情况, 苏木精-伊红染色观察移植肝细胞在脾内的分布和增殖情况;移植后14 d, 免疫荧光染色观察白蛋白合成情况.结果与结论: (1) 大鼠肝细胞分离存活率达80％-90％; (2) 3组大鼠生存率的比较差异有显著性意义, 脾脏直接注射组14 d存活率显著高于脾动脉注射组, 脾动脉注射组14 d存活率高于模型对照组; (3) 脾脏直接注射组、脾动脉注射组大鼠肝功能均明显改善, 尤其以脾脏直接注射组最为显著; (4) CFDA-SE荧光标记的肝细胞经脾动脉移植7 d后, 受体大鼠脾脏和肝脏可以看到散在绿色荧光分布; (5) 移植14 d后, 脾脏直接注射组、脾动脉注射组脾脏内有肝细胞白蛋白绿色荧光信号; (6) 移植7d后, 脾脏直接注射组、脾动脉注射组肝细胞在脾脏红髓中簇集在一起并定植下来; (7) 结果表明, 经大鼠颈动脉途径脾动脉插管移植肝细胞能提高急性肝衰竭大鼠的存活率和改善其肝功能;脾脏直接注射法优于脾动脉途径注射法.

摘要： BACKGROUND: Hepatocyte transplantation has achieved some success in animal experiments for the treatment of metabolic diseases and acute liver failure. However, the clinical efficacy of hepatocyte transplantation is unsatisfactory. The difference between the experimental results and the clinical efficacy may be related to the hepatocyte transplantation approach. OBJECTIVE: To evaluate the therapeutic effects of hepatocyte transplantation by the intubation via the intubation of the splenic artery and intrasplenic injection in rats with acute hepatic failure, providing more optimal transplantation approaches and methods. METHODS: Hepatocytes were isolated and cultured by the modified Seglen's method (two-step). Acute hepatic failure was induced by D-gal in Sprague-Dawley rats (provided by the Experimental Animal Center of Chongqing Medical University in China). After 24 hours, an intubation tube was inserted into the splenic artery in 65 rats with acute hepatic failure, which was successful in 60 rats. Then these 60 rat models were randomly divided into three groups (n=20 per group). Intrasplenic injection group received about 2×107 hepatocytes through intrasplenic injection and 0.4 mL of Hank's solution through the splenic artery. Splenic artery group received 0.4 mL of Hank's solution through intrasplenic injection and 2×107 hepatocytes through the splenic artery. Model group received 0.4 mL of Hank's solution through intrasplenic injection and 0.4 mL of Hank's solution through the splenic artery. Survival rate and liver function of the rats was observed within 14 days after transplantation. The distribution of CFDA-SE-labeled hepatocytes transplanted via the splenic artery was observed under fluorescence microscope at 7 days after transplantation, and meanwhile, the distribution and proliferation of transplanted hepatocytes in the spleen were observed using hematoxylin-eosin staining. Synthesis of albumin in the spleen was observed by immunofluorescence staining. RESULTS AND CONCLUSION: (1) 80％-90％ hepatocytes survived after isolation. (2) At 14 days after transplantation, the survival rates of rats in the three groups were significantly different: intrasplenic injection group> splenic artery group> model group. (3) The liver function of rats was significantly improved in the intrasplenic injection group and the splenic artery group, especially in the former group. (4) CFDA-SE-labeled hepatocytes (green fluorescence) were scattered in the rat spleen and liver at 7 days after transplantation via the splenic artery. (5) At 14 days after transplantation, immunofluorescent staining of albumin demonstrated some positive cells in the rat spleen in the intrasplenic injection group and splenic artery group. (6) At 7 days after transplantation, transplanted hepatocytes were concentrated and colonized in the red pulp of the spleen. In conclusion, hepatocyte transplantation through catheterization of the splenic artery via carotid route can improve the survival of rats with acute hepatic failure and ameliorate the hepatic function, but intrasplenic injection is significantly superior to the injection via the splenic artery.%背景:肝细胞移植在治疗代谢性疾病和急性肝衰竭的动物实验中取得了一定成功, 然而肝细胞移植的临床疗效却并没有动物实验理想.造成实验模型与临床疗效的差异可能与肝细胞移植途径有一定关系.目的:探讨经颈动脉途径脾动脉插管注射与脾脏直接注射两种方法行肝细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的疗效, 得出更加优化的移植方法.方法:在Seglen改良两步法的基础上稍加改进分离培养肝细胞.采用D-氨基半乳糖诱导大鼠 (重庆医科大学实验动物中心提供) 急性肝衰竭24h后, 65只大鼠经颈动脉途径脾动脉插管, 60只插管成功后随机分为3组:脾脏直接注射组 (n=20) 大鼠经脾脏直接注射约2×107个肝细胞、脾动脉注射0.4m Lhank's液;脾动脉注射组 (n=20) 大鼠经脾脏直接注射0.4 mL Hank's液、脾动脉注射2×107个肝细胞;模型对照组 (n=20) 经脾脏直接注射0.4 Ml Hank's液、脾动脉注射0.4 Ml Hank's液.移植后14 d内观察各组大鼠的生存率及肝功能变化;移植后7d, 荧光显微镜观察经脾动脉移植肝细胞的体内分布情况, 苏木精-伊红染色观察移植肝细胞在脾内的分布和增殖情况;移植后14 d, 免疫荧光染色观察白蛋白合成情况.结果与结论: (1) 大鼠肝细胞分离存活率达80％-90％; (2) 3组大鼠生存率的比较差异有显著性意义, 脾脏直接注射组14 d存活率显著高于脾动脉注射组, 脾动脉注射组14 d存活率高于模型对照组; (3) 脾脏直接注射组、脾动脉注射组大鼠肝功能均明显改善, 尤其以脾脏直接注射组最为显著; (4) CFDA-SE荧光标记的肝细胞经脾动脉移植7 d后, 受体大鼠脾脏和肝脏可以看到散在绿色荧光分布; (5) 移植14 d后, 脾脏直接注射组、脾动脉注射组脾脏内有肝细胞白蛋白绿色荧光信号; (6) 移植7d后, 脾脏直接注射组、脾动脉注射组肝细胞在脾脏红髓中簇集在一起并定植下来; (7) 结果表明, 经大鼠颈动脉途径脾动脉插管移植肝细胞能提高急性肝衰竭大鼠的存活率和改善其肝功能;脾脏直接注射法优于脾动脉途径注射法.

摘要： 背景:肝细胞移植在治疗代谢性疾病和急性肝衰竭的动物实验中取得了一定成功,然而肝细胞移植的临床疗效却并没有动物实验理想。造成实验模型与临床疗效的差异可能与肝细胞移植途径有一定关系。目的:探讨经颈动脉途径脾动脉插管注射与脾脏直接注射两种方法行肝细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的疗效,得出更加优化的移植方法。方法:在Seglen改良两步法的基础上稍加改进分离培养肝细胞。采用D-氨基半乳糖诱导大鼠(重庆医科大学实验动物中心提供)急性肝衰竭24 h后,65只大鼠经颈动脉途径脾动脉插管,60只插管成功后随机分为3组:脾脏直接注射组(n=20)大鼠经脾脏直接注射约2×107个肝细胞、脾动脉注射0.4 mL Hank’s液;脾动脉注射组(n=20)大鼠经脾脏直接注射0.4 mL Hank’s液、脾动脉注射2×107个肝细胞;模型对照组(n=20)经脾脏直接注射0.4 mL Hank’s液、脾动脉注射0.4 mL Hank’s液。移植后14 d内观察各组大鼠的生存率及肝功能变化;移植后7 d,荧光显微镜观察经脾动脉移植肝细胞的体内分布情况,苏木精-伊红染色观察移植肝细胞在脾内的分布和增殖情况;移植后14 d,免疫荧光染色观察白蛋白合成情况。结果与结论:①大鼠肝细胞分离存活率达80%-90%;②3组大鼠生存率的比较差异有显著性意义,脾脏直接注射组14 d存活率显著高于脾动脉注射组,脾动脉注射组14 d存活率高于模型对照组;③脾脏直接注射组、脾动脉注射组大鼠肝功能均明显改善,尤其以脾脏直接注射组最为显著;④CFDA-SE荧光标记的肝细胞经脾动脉移植7 d后,受体大鼠脾脏和肝脏可以看到散在绿色荧光分布;⑤移植14 d后,脾脏直接注射组、脾动脉注射组脾脏内有肝细胞白蛋白绿色荧光信号;⑥移植7 d后,脾脏直接注射组、脾动脉注射组肝细胞在脾脏红髓中簇集在一起并定植下来;⑦结果表明,经大鼠颈动脉途径脾动脉插管移植肝细胞能提高急性肝衰竭大鼠的存活率和改善其肝功能;脾脏直接注射法优于脾动脉途径注射法。

摘要： Objective To investigate the inducing effect and mechanism of semimature dendritic cell ( smDCs ) on transplantation tolerance of hepatocytes differentiated from mouse embryonic stem cells (ESCs), and to study the connections between smDCs and regulatory dendritic cells (regDCs).Methods ESCs of 129 mouse labelled green fluorescent protein ( GFP) were induced to hepatocytes by using previous methods.Meanwhile, bone marrow mononuclear cells of 129 mouse were induced to smDCs and regDCs.Moreover , the hepatocytes differentiated from 129 mouse ESCs were transplanted into liver of BALB/c mouse 3 days after infusing smDCs and regDCs suspension of 129 mouse into BALB/c mouse by tail vein respectively.After that, the growth status and survival time of transplanted cells in the recipient and infiltration of lymphocytes in transplant sites were observed.Furthermore, Foxp3 expression of peripheral blood CD4+T cells was also tested.Results In the control group , the transplanted cells in liver of BALB/c mouse survived only about 1 week.In contrast, the transplanted cells of smDC groups and regDCs groups survived about 4 weeks and the transplant sites of smDC groups also had less CD 3 +T cells.The morphology of smDCs were similar with regDCs.The expression of MHC-Ⅱ, CD40, CD80 and CD86 on smDCs and regDCs were moderate.Moreover, the Foxp3 expression of peripheral blood CD 4+T cells in smDC groups was higher than that in the control groups , from 1.11% up to 5.38%.The Foxp3 expression in regDC groups rose to 3.87%.Conclusion The smDCs could induce transplantation tolerance of hepatocytes differentiated from 129 mouse ESCs in the recipient.The mechanism was associated with high level of Foxp3 +Tregs, which could be increased by means of smDCs appropriate expression of MHC -Ⅱ, CD40, CD80 and CD86.The smDCs and regDCs were the same type of tolerance dendritic cells.%目的：观察半成熟树突状细胞（ smDCs ）在小鼠胚胎干细胞（ ESCs ）来源的肝细胞移植中诱导免疫耐受的作用及机制，并分析smDCs与调节性树突状细胞（ regDCs ）之间的关系。方法将绿色荧光蛋白（ GFP）标记的129系小鼠ESCs按前期方法向肝细胞诱导分化，同时诱导129系小鼠骨髓单核细胞向smDCs和regDCs分化。将smDCs、regDCs分别预先输入BALB／c小鼠体内，3 d后再将ESCs分化的肝细胞移植入BALB／c小鼠肝实质内。观察移植细胞生存时间、生长状况、局部免疫反应情况；检测分析受体血CD4＋T细胞Foxp3表达情况等。结果对照组小鼠肝实质内移植细胞仅生存1周，smDCs组与regDCs组生存时间可达4周，移植部位CD3＋T细胞浸润较对照组明显减轻；smDCs与regDCs在形态和表型方面相似，二者均中度表达MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD86；smDCs组受体小鼠外周血CD4＋T细胞Foxp3表达量明显升高由1.11％上升至5.38％；regDCs组Foxp3表达量亦有所升高达3.87％。结论 smDCs能诱导ESCs源性肝细胞移植耐受，其机制可能与Foxp3＋Tregs产生相关。 smDCs与regDCs作用类似，且均中度表达MHC-Ⅱ、CD40等，推测为同一类型的耐受性树突状细胞。

摘要： Hepatocyte transplantation is effective in the treatment of liver failure caused by a variety of factors.In pace with the progress of the study of induced pluripotent stem cells and its differentiation technology,a new method has arisen to obtain a great number of safe hepatocytes with biological function,which are suitable for seed cells of hepatocyte transplantation.In this article,we review the latest research progress about induced pluripotent stem cell-derived hepatocytes being transplanted to treat liver failure.%肝细胞移植治疗多种原因造成的肝功能衰竭,在临床上已取得较好的疗效.诱导多功能干细胞(iPS)及其定向分化技术的进步,为获得大量、安全及具有生物学功能活性的肝细胞移植所需的种子细胞提供了一种新的方法.对iPS定向分化成肝细胞并应用于肝细胞移植治疗肝功能衰竭的研究进展进行综述.

摘要： 本文在制备载药纳米粒子表征和释药实验研究的基础上，通过实验观察在HTX(肝细胞移植)治疗ALF(急性肝衰竭)大鼠过程中以不同途径给药及不同方法使用载生长因子纳米粒子后通过受体ALF大鼠的肝功能、病理切片和检测一些指标(c-Met、CD34)的变化情况，探讨哪种治疗能更好促进血管的形成、促进肝细胞的再生、发挥肝细胞移植的肝功能替代作用，以及肝细胞移植经载生长因子纳米粒子使用后是否能更有利于肝组织的重建和恢复，从而为临床对急性肝衰竭的治疗带来借鉴作用。

摘要： 肝细胞移植(HTx)是将分离、培养的肝细胞植入体内，用于肝衰竭或代谢性肝疾病的治疗，恢复或重建肝功能，促进自身肝再生而免于肝移植，或短期支持病人过渡到肝移植。本文分析了HTx的优点和适应症，探讨了HTx在临床应用中存在的几个问题，包括移植细胞的选择、移植的肝细胞数量、HTx部位的选择等，并回顾总结分析了HTx在治疗肝衰竭、先天性代谢性疾病等方面的初步临床试验结果，最后展望了干细胞移植的未来应用前景。

摘要： 急性肝衰竭(ALF)常规内科治疗效果不佳，死亡率高。肝细胞移植(HTx)有望成为治疗ALF的一种有效手段。载药纳米粒子作为一种新型药物和生物大分子输送载体，具有高的通透性、靶向性和控释性等优势，将在组织工程和细胞治疗方面发挥更大作用。本文使用载肝细胞生长因子(HGF)的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖(PLA-O-CMC)纳米粒子，培养大鼠肝细胞，移植至ALF大鼠腹腔内，观察其治疗效果。

摘要： 本文利用PLA-O-CMC纳米粒子培养肝细胞并进行移植的经验基础，制备了载VEGF的PLA-O-CMC纳米粒子，联合培养大鼠肝细胞，移植至ALF(急性肝衰竭)大鼠腹腔内，发挥VEGF的促血管形成，增强血管通透性以及HTx(肝细胞移植)的肝功能替代作用，观察急性肝衰竭大鼠肝细胞移植后生存率及肝功能变化情况以及应用免疫组化染色检测VEGF的表达，并通过PCR法检测VEGF在受体体内的变化，从而研究VEGF在肝再生中的作用机制。

摘要： 目的：本实验将微囊化肝细胞移植入急性肝衰竭大鼠腹腔内，动态观察大鼠肝功能和肝组织中高迁移率族蛋白Bl(high mobility group box 1，HMGB1)的表达情况和意义。rn 方法：用D-氨基半乳糖造成大鼠急性肝衰竭模型，随机分成3组：Ⅰ组为生理盐水组，Ⅱ组为裸肝细胞移植组，Ⅲ组为微囊化肝细胞移植组，在6、12、24、48、72、120和168h检测各组血生化，用RT-PCR方法检测肝组织HMGB1 mRNA的表达。另取6只正常大鼠标本作为参考值。rn 结果：各组ALT、AST和TBil在6 h就开始上升，24h均已显著升高(P<0.05)，Ⅲ组ALT、AST和TBil显著下降，与Ⅰ、Ⅱ组有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。HMGB1 mRNA在6h显著升高(P<0.01)，12h达高峰，Ⅱ组、Ⅲ组在24h后表达量较Ⅰ组显著下降，72h、120 hⅢ组与Ⅱ组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。rn 结论：HMGB1可能参与了急性肝衰竭的病理生理过程，微囊化肝细胞移植组显著减少了肝衰竭大鼠肝组织中HMGB1mRNA的表达，从而减轻肝组织炎症反应并改善肝衰竭大鼠的预后。

摘要： 骨髓干细胞是一类具有自我增殖和分化潜能的细胞，主要包括造血干细胞和间充质干细胞。体外通过生长因子，体内利用特定的微环境均可诱导骨髓干细胞分化为肝前体细胞和成熟肝细胞，并明显改善肝功能。有望成为肝细胞移植或生物人工肝支持系统的新型种子细胞。本文就骨髓干细胞分化为肝样细胞及其临床治疗肝病做一综述。

摘要： 某患者患急性非淋巴细胞性白血病，经异基因肝细胞移植后39d出现腹泻，无明显腹痛，大便10余次/天，量约1000-2OOOml/天，黄色稀水样便，时有粘液。大便常规及培养未提示异常，G染色显示G+球菌占40%。伴有面部、颈部皮肤发红，瘙痒不明显。肝功能检测持续正常。考虑肠道感染及aGVHD可能。给予抗难辨梭状芽抱杆菌及调理肠道菌群等治疗，并给予甲强1Omg Q12h，间断甲氨喋吟针1Omg iv，环孢素浓度维持在200ng/ml左右。39d CMV-DNA阳性(9*102)，加用更昔洛韦针抗病毒治疗。复查血型为AB型，抗A抗B阴性。上述治疗后皮肤改变很快消失，但是腹泻无好转。50d颈部及面部少量皮疹伴轻度瘙痒，大便量同前，G染色G+球菌70%。甲强加量为20mg Q12h，间断丙球治疗，辅以去甲万古霉素及微生态制剂灌肠，腹泻有所好转。复查血象减低(WBC2.4*109/L,Pt 28*1O9/L)，60d停用更昔洛韦针。63d复查CMV阴性，甲强减量至30mg/天，腹泻加重，予以甲氨喋吟针1Omg iv无好转。复查骨髓显示幼稚单核细胞1.5%。DNA指纹图为完全供者型。68d CMV阳性(6.51*103)，加用膦甲酸钠针。考虑患者腹泻有病毒感染所致可能性大，70d起进一步逐渐减量使用免疫抑制剂。并给予长疗程去甲万古霉素口服。患者血象进行性降低，74d停用膦甲酸钠针。76d患者腹泻量减少，大便转为糊状。CMV滴度渐渐降低。82dCSA浓度59.4ng/ml，甲强减量至20mg/天。88d血型A型。101d大便量每日350ml, 2-3次/天，黄色稀软便。103d停用环孢素。110d日复查CMV阴性，大便基本恢复正常。121d激素减量至强的松1Omg/天，之后随访至今，大便持续正常。

摘要： 肝衰竭是在多致病因素作用下，肝脏在短期内发生大块或亚大块坏死所致的肝脏功能衰竭综合症，主要表现为凝血机制障碍、黄疸、肝性脑病、腹水等复杂的临床症候群。肝衰竭的发生机制尚不十分清楚，其死亡率高，治疗仍是世界性难题。近年来，肝衰竭在研究方法学及治疗方面取得了一些进展，代谢组学作为系统生物学的一个很重要的研究方法，为后组学时代服务于肝衰竭的研究提供了一个全新的技术平台。肝细胞移植技术也日趋成熟，也广受医学界的热宠，作为治疗肝衰竭的有益补充。人工肝是目前治疗肝衰竭不可或缺的重要手段之一，其原理是借助一个体外的机械、化学或生物反应装置，暂时辅助或部分代替严重病变的肝脏的功能，清除各种有害物质，代偿肝脏相应的功能，从而使肝细胞得以再生直至自体肝脏恢复或等待机会进行肝移植。目前一般分为三个主要类型：非生物型人工肝；生物型人工肝；混合型人工肝。本文介绍了肝衰竭的研究进展及人工肝的研究进展。

摘要： 近年来,人源肝细胞的需求日益增多。新药的开发与应用、病毒性肝炎的实验研究、肝细胞移植及生物人工肝的研究应用等等均需要大量的人源肝细胞。但人肝细胞来源困难，细胞分离、培养及储存的技术尚不完善，体外培养存活时间短，其供给无法满足日益增多的需求。近几年永生化的人肝细胞技术进展较快，尤其是构建成功的可逆性永生化人肝细胞，有望从根本上解决人肝细胞来源困难的难题，本文介绍了永生化的人肝细胞技术和可逆性永生化人源肝细胞技术。

摘要： 目的：建立Alb-cre/DTR双转基因小鼠模型并进行相关表型分析,在此基础上建立可诱导性肝损模型,用于肝脏疾病的相关研究. 方法：将引进的Alb-cre和DTR小鼠扩繁后,通过杂交的方式获得双转基因小鼠.提取小鼠尾部组织DNA,利用PCR方法进行基因型鉴定.在双转基因小鼠上腹腔注射白喉毒素,之后在不同时间点进行称重、采血,检测血清ALT、AST水平. 结果：将Alb-cre和DTR小鼠杂交、筛选后获得了Alb-cre/DTR双转基因小鼠,对该小鼠使用0.625ng/g剂量的白喉毒素,可使小鼠血清中ALT与AST水平显著升高,解剖小鼠后观察到肝脏整体变白,HE染色结果显示肝细胞明显坏死. 结论：成功建立可诱导特异性肝损小鼠模型.

摘要： 本发明提供细胞移植前处理方法、细胞移植前处理装置以及细胞移植前处理单元，能够提高向移植设备填充移植物的作业效率。包括：使用培养托盘、前处理托盘(20)及移植设备(30)将在培养托盘的多个培养凹部中培养的细胞群向前处理托盘的多个前处理凹部(21)搬运，该培养托盘具备按照第1排列而排列的多个培养凹部，该前处理托盘具备按照第2排列而排列的多个前处理凹部(21)，该移植设备具备按照第2排列而排列的多个针状部(31)，且多个针状部(31)具有构成为含有细胞群的移植物能够出入的筒状；以及从多个前处理凹部(21)向多个针状部(31)同时填充细胞群。

摘要： 本发明目的是利用人类白细胞抗原(HLA)一致的活性淋巴细胞使造血干细胞移植后附着生长稳定。从末梢血或脐带血分离获得的单核球细胞中的HLA一致淋巴细胞经增殖、活化后，进一步分离提纯，制备以HLA一致淋巴细胞为主要成分的造血干细胞移植后附着生长稳定的组合物。该组合物可以广泛应用于预防造血干细胞移植后附着生长不全及促进造血干细胞移植后附着生长的治疗。本发明中组合物的给药量因患者的年龄、症状而异，对于包括人在内的哺乳动物，人源抗体的给药量为0.2－20毫克/千克体重·天。给药可经静脉注射，每日一次(单次给药或连续给药)或间隔性地每周1－3次，每2周或每3周1次。

摘要： 本发明提供能够将肌细胞和/或心肌祖细胞适当地保持在心肌组织中、能够提高移植后的细胞的存留性和增殖性的细胞移植用组合物和细胞移植方法。本发明的细胞移植用组合物是包含蛋白质(A)的水溶液和细胞的细胞移植用组合物，其特征在于，上述细胞为心肌细胞和/或心肌祖细胞，上述蛋白质(A)的疏水度为0.2～1.2，上述蛋白质(A)具有多肽链(Y)和/或多肽链(Y’)，上述蛋白质(A)中的上述多肽链(Y)与上述多肽链(Y’)的合计个数为1～100个，上述多肽链(Y)是序列编号1所示的氨基酸序列即VPGVG序列(1)、序列编号2所示的氨基酸序列即GVGVP序列(2)、GPP序列、GAP序列和序列编号3所示的氨基酸序列即GAHGPAGPK序列(3)中的任一氨基酸序列(X)2～100个连续而成的多肽链，上述多肽链(Y’)是上述多肽链(Y)中的0.1～5％的氨基酸残基被赖氨酸残基和/或精氨酸残基置换的多肽链，上述赖氨酸残基和上述精氨酸残基的合计个数为1～100个。

摘要： 细胞移植装置用于将包含细胞在内的移植物配置于生物体内的对象区域。细胞移植装置具有：针状部，其沿1个方向延伸；以及止流部，其由纤维状物构成。针状部在内部具有在针状部的前端部开口的流路。止流部位于流路的中途，且构成为使得从开口进入流路内的液态物质中的移植物滞留于止流部与开口之间。

摘要： 细胞移植装置是用于在生物体的皮内及皮下中的至少一方即对象区域配置细胞群的装置。细胞移植装置具备：收容部，收容含有细胞群的液状体；以及进入部，具有与收容部相通的开口部，且从生物体的皮肤表面朝向对象区域进入而将开口部配置于对象区域。细胞移植装置具有基板部及突出部，该基板部具有基板面，该突出部从基板面突出，作为收容部进入部发挥功能。突出部具有开口部，是在该突出部的内部具有从开口部延伸的孔的构造体。

摘要： 本发明公开涉及造血干细胞或祖细胞移植领域。更具体地，提供了通过与内皮细胞共培养和共同施用来改善造血干细胞或祖细胞的扩增和植入的方法、组合物和试剂盒。该方法、组合物和试剂盒可用于治疗与由疾病或清髓治疗引起的造血功能缺陷相关的各种疾病。

摘要： 本发明公开了一种细胞培养和移植方法，包括如下步骤：1.提供包括一个或多个孔径的径迹蚀刻膜；2.把一个或多个靶细胞接种在径迹蚀刻膜上，形成细胞移植复合材料；3.将步骤2的细胞移植复合材料移植到皮肤或角膜伤口上。此外，本发明还公开了一种利用组织工程技术构建的细胞移植复合材料，包括一个或多个孔径的径迹蚀刻膜和一个或多个靶细胞，靶细胞接种在径迹蚀刻膜上。该细胞移植复合材料用于上皮细胞，黑色素细胞或其他细胞的(共)培养，实现细胞的体外培养和移植，以满足临床上对皮肤疾病和角膜疾病的治疗要求。本发明可操作性强，为大面积皮肤缺失，遗传性皮肤疾病，色素脱失症和皮肤颜色的调节，和角膜病变的治疗提供了极大的便利。

摘要： 本发明公开了异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒对巨核细胞易感性的生物标记物及其应用。本发明经体内外两部分研究，CMV感染影响巨核细胞分化成熟，诱导细胞凋亡，促使其低倍体化，抑制体外血小板生成；CMV感染后细胞TPO/c‑Mpl通路中关键信号分子表达下调，为巨核细胞功能障碍的机制。研究发现，高表达PDGFR+及αvβ3+的巨核细胞易被CMV感染，其受体拮抗剂IMC‑3G3及αvβ3抗体均可减少细胞内病毒载量，为治疗移植后CMV相关的血小板减少提供理论依据。

摘要： 本发明提供了通过在体外从系统中的临界密度非酶性收获并培养内皮细胞来分离人角膜内皮细胞的方法，所述系统由涂布了细胞外基质蛋白的塑料皿和富含生长因子的培养基组成，其被用于产生扩大的内皮细胞亚群以用于在剥落的供体角膜中的细胞替换步骤或者移植。在本方法中包括了用来将天然角膜内皮从供者角膜移除的以及将培养角膜内皮细胞接种到剥落角膜上以用于移植目的的特殊步骤。

摘要： 本发明提供了一种用于肝细胞移植的自体干细胞制剂，从慢性肝病患者自身尿液中提取出尿源性干细胞，其生物学性状不受肝脏疾病本身的影响，具有强大的增殖能力，多次传代扩增后仍具有干细胞特性和多向分化潜能，体内移植可显著改善肝脏功能、修复肝组织损伤，作为自体的干细胞，不存在免疫排斥，且获取无创，作为肝细胞移植治疗的种子细胞较骨髓间充质干细胞有较大优势。本发明还提供了一种上述自体干细胞制剂的制备方法，分离培养方法简单方便，患者3‑4天的24小时尿液中获取的尿源性干细胞，传至P4‑P6代可获得足够细胞数量用于移植。本发明还提供了一种上述尿源性干细胞的培养基，配方经过优化后，价格便宜，配制方便，获得的细胞克隆数更多。该方法能有效获得大量自体干细胞，细胞可随时并多次获取，减少了干细胞长期贮存的费用，有望解决目前肝细胞移植技术中细胞来源缺乏及术后移植排斥反应的难题，具有重大的社会经济效益。