穗花杉双黄酮

摘要： 目的:采用低共熔溶剂提取翠云草中穗花杉双黄酮(amentoflavone,AME),优化提取工艺参数。方法:合成了3种低共熔溶剂并进行筛选,然后对提取效果最佳的低共熔溶剂进行结构分析,研究提取时间、提取温度、提取功率、液固比对翠云草中AME提取量的影响,再进一步运用响应面设计技术优化提取条件,并与传统提取方法(浸渍法、渗漉法、超声法)比较。结果:筛选出适合提取AME的溶剂为氯化胆碱:4-松油醇,最佳的提取条件为:低共熔溶剂(氯化胆碱与4-松油醇摩尔比1:5)含水量30%、超声功率为280 W、液固比为16:1 mL/g、提取温度为48°C、提取时间为24 min,AME最大提取量为(0.941±0.07)mg/g。与超声法、冷浸法、热浸法比较,低共熔溶剂提取AME的含量提高了近5倍,且时间缩短了1/10(P<0.05)。结论:低共熔溶剂提取法是一种高效、快速且简便的提取方法,可为中药有效成分的提取研究提供一些参考。

摘要： 目的:研究穗花杉双黄酮(AF)对骨肉瘤细胞增殖的作用及其分子机制。方法:CCK-8法筛选AF抑制骨肉瘤细胞增殖的有效浓度,细胞周期流式法检测AF对骨肉瘤细胞G_(1)期和S期分布的影响,免疫荧光法、荧光定量PCR法和Western blot法检测AF对骨肉瘤细胞增殖相关基因及蛋白表达的影响。结果:AF在浓度为75μmol/L时,显著降低骨肉瘤细胞活力(P<0.05);促进骨肉瘤细胞停滞在G_(1)期,无法进入S期;抑制骨肉瘤细胞β-catenin核表达;AF上调p21 mRNA和蛋白表达(P<0.05),下调骨肉瘤细胞β-catenin和Cyclin D1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论:AF对骨肉瘤细胞增殖有抑制作用,其机制是上调p21、下调β-catenin和Cyclin D1的表达。

摘要： 采用低共熔溶剂超声辅助技术提取江南卷柏中穗花杉双黄酮(AME),并优化其工艺参数。通过一步法制备3种低共熔溶剂,并筛选出提取江南卷柏AME效果最佳低共熔溶剂,通过核磁共振、傅里叶红外光谱和热重分析表明低共熔溶剂被成功制备,并采用单因素和响应面法优化江南卷柏中AME的提取工艺。结果表明,最佳低共熔溶剂为氯化胆碱:香叶醇,最佳提取工艺条件为:摩尔比1:2,含水量20%,液固比10 mL/g,超声时间31 min,超声功率为240 W。在此条件下,AME的提取得率为(2.75±0.12) mg/g。与热浸法、冷浸法、离子液体超声提取法、乙醇超声提取法进行对比表明,低共熔溶剂结合超声提取不仅能够节约提取时间,还能显著增加AME提取得率。

摘要： 目的 探讨穗花杉双黄酮调节体外诱导的M1型巨噬细胞极化的相关机制.方法 设实验组、溶媒对照组和无药对照组,实验组:不同浓度的(5、10μmol/L)穗花杉双黄酮干预用联合脂多糖及重组人干扰素-γ诱导的M1型巨噬细胞;溶媒对照组:溶媒3‰DMSO;无药对照组:不加穗花杉双黄酮处理.显微镜下观察细胞形态学;通过ELISA检测干预后细胞上清液L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β各自的表达水平;通过CCK-8法检测计算出穗花杉双黄酮对细胞的安全浓度;通过分子对接建模确定穗花杉双黄酮的靶蛋白,利用RT-qPCR、Western blot检测L-6、IL-10、TNF-α、TGF-β、PPAR-α/γ、Arg-1、Fizz1基因和蛋白表达.结果 穗花杉双黄酮干预后可以阻止被诱导引起的THP-1细胞向M1极化;穗花杉双黄酮可下调M1极化时高表达的IL-6、TNF-α的mRNA,上调M2型主要标志细胞因子IL-8和TGF-β的mRNA表达(P<0.05),同时上调M1极化状态下的细胞内Arg1和Fizz1蛋白的表达(P<0.05).随着穗花杉双黄酮浓度的增加和作用时间的延长,其抑制细胞的增殖效果增强(P<0.05),且高浓度具有杀伤作用.穗花杉双黄酮可与PPAR-α/γ关键靶点蛋白活性位点非共价结合并激活该蛋白.结论 穗花杉双黄酮可通激活PPAR-α/γ,恢复Arg-1、Fizz1基因表达,抑制巨噬细胞向M1型分化.

摘要： 建立中药卷柏特征成分总黄酮及穗花杉双黄酮的快速含量分析方法,比较不同卷柏药材中的含量及活性差异。采用紫外分光光度法和高效液相色谱法分别测定卷柏总黄酮和穗花杉双黄酮含量;通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对卷柏活性部位进行活性测试。不同卷柏中总黄酮含量在1.48%~2.67%之间,穗花杉双黄酮含量在0.49%~0.93%之间,活性部位的总黄酮含量在9.14%~16.46%之间,穗花杉双黄酮含量在2.26%~4.74%之间。卷柏活性部位的α-葡萄糖苷酶活性为:垫状卷柏IC_(50)6.56μg/mL;疏叶卷柏IC_(50)4.47μg/mL;兖州卷柏IC_(50)4.41μg/mL;剑叶卷柏IC_(50)4.23μg/mL;块茎卷柏IC_(50)3.12μg/mL,均明显强于阳性对照阿卡波糖(IC_(50)76.82μg/mL)。总黄酮和穗花杉双黄酮含量在不同品种间存在差异,其中对α-葡萄糖苷酶抑制作用和黄酮含量呈量效关系,且具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

摘要： 目的 探讨穗花杉双黄酮(AMF)对卵巢癌细胞SKOV3迁移能力的影响.方法 采用细胞划痕实验与Transwell实验检测AMF对细胞迁移的影响,Western blotting检测AMF对SKOV3细胞黏附相关分子E-钙黏蛋白(E-cadherin)与β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响,细胞免疫荧光检测AMF对SKOV3细胞β-catenin表达与分布的影响.结果 细胞划痕实验与Transwell实验显示,与对照组相比50μmol·L-1与100μmol·L-1 AMF能够显著抑制卵巢癌细胞SKOV3的迁移;Western blotting结果显示,与对照组相比,50μmol·L-1与100μmol·L-1 AMF能够显著促进SKOV3细胞E-cadherin与β-catenin的表达;细胞免疫荧光显示,AMF能够显著促进β-catenin的表达,且主要分布于细胞膜.结论 AMF能够抑制卵巢癌细胞SKOV3的迁移与侵袭,其主要机制可能与其上调细胞黏附分子E-cadherin/β-catenin复合体表达有关.

摘要： 建立中药卷柏特征成分总黄酮及穗花杉双黄酮的快速含量分析方法,比较不同卷柏药材中的含量及活性差异.采用紫外分光光度法和高效液相色谱法分别测定卷柏总黄酮和穗花杉双黄酮含量;通过建立体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对卷柏活性部位进行活性测试.不同卷柏中总黄酮含量在1.48％～2.67％之间,穗花杉双黄酮含量在0.49％～0.93％之间,活性部位的总黄酮含量在9.14％～16.46％之间,穗花杉双黄酮含量在2.26％～4.74％之间.卷柏活性部位的α-葡萄糖苷酶活性为:垫状卷柏IC506.56 μg/mL;疏叶卷柏IC504.47 μg/mL;兖州卷柏IC50 4.41 μg/mL;剑叶卷柏IC504.23μg/mL;块茎卷柏IC50 3.12 μg/mL,均明显强于阳性对照阿卡波糖(IC5076.82 μg/mL).总黄酮和穗花杉双黄酮含量在不同品种间存在差异,其中对α-葡萄糖苷酶抑制作用和黄酮含量呈量效关系,且具有显著的α-葡萄糖苷酶抑制活性.

摘要： 目的 建立适当的定性、定量检测方法,以期更加有效、准确地控制卷柏总黄酮的质量.方法 采用HPLC法对卷柏总黄酮进行定性鉴别;以穗花杉双黄酮为对照,用UV法测定卷柏总黄酮的含量,HPLC法测定穗花杉双黄酮的含量;参照《中国药典》2015年版方法测定重金属及有害元素、有机氯农残和其他检查项.结果 卷柏总黄酮和穗花杉双黄酮质量浓度分别在1.56～11.68、6.40～320.03μg·mL-1范围内线性关系良好(r=1.0000),平均回收率分别为98.18％(RSD=1.76％)、96.66％(RSD=1.15％).重金属及有害元素、有机氯农残和其他检查项均符合规定.结论 所建立的方法简便、准确,指标成分科学有效,为该品种的质量评价与控制提供了有力的技术支持.

摘要： 目的:探究穗花杉双黄酮(AF)对小儿血管瘤内皮细胞体外增殖的影响.方法:MTS法筛选AF抑制小儿血管瘤内皮细胞体外增殖的适宜浓度,流式细胞法检测AF对小儿血管瘤内皮细胞细胞周期G1期和S期分布的影响,荧光定量PCR和Western blot法检测AF对小儿血管瘤内皮细胞增殖相关蛋白表达的影响.结果:75、125μmol/L AF显著降低小儿血管瘤内皮细胞活性(P<0.05),75μmol/L AF用于后续细胞周期实验、荧光定量PCR和Western blot实验,结果显示75μmol/L AF抑制小儿血管瘤内皮细胞从G1期进入S期(P<0.05),但对G2其细胞分布无明显作用,与对照组相比较,AF显著抑制小儿血管瘤内皮细胞β-catenin和Cyclin D1 mRNA和蛋白表达,促进p21 mRNA和蛋白表达(均P<0.05).结论:AF通过抑制β-catenin和Cyclin D1,促进p21等增殖相关蛋白表达进而抑制小儿血管瘤内皮细胞体外增殖.

摘要： 目的:为完善藏药刺柏药材的质量标准提高参考.方法:采用显微鉴别法观察刺柏药材的显微鉴别特征:薄层色谱法(TLC)对槲皮苷、穗花杉双黄酮进行鉴别;采用高效液相色谱法(HPLC)测定药材样品中穗花杉双黄酮的含量,SVEATM C18 Gold色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.2％磷酸水(B),梯度洗脱,0-10 min,12％-33％A;10-37 min,33％-60％A;37-42 min,60％-100％A;42-50 min,100％-12％A.体积流量1mL·min-1,检测波长337 nm,柱温30°C.结果:叶横截面、粉末显微特征清晰;槲皮苷和穗花杉双黄酮的TLC鉴别特征较为明显,穗花杉双黄酮检测进样量线性范围为14.0875 μg-450.8 μg (R2=0.9999),精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2.0％ (n=6);加样回收率为98.35％-103.50％(RSD =1.85％,n=6).结论:建立了藏药刺柏不同指标成分的TLC和HPLC法综合评价方法,该方法简便、准确、重复性好,可用于藏药刺柏药材的质量控制,为提高藏药刺柏现有的质量标准提供了科学的实验依据.

摘要： 目的：建立5种卷柏属植物药的总黄酮及穗花杉双黄酮含量测定方法,比较不同种之间的含量差异,初步探讨采收期对总黄酮及穗花杉双黄酮含量的影响.rn 方法：以穗花杉双黄酮为对照品,采用紫外-可见分光光度法和HPLC法分别测定5种卷柏属植物药中总黄酮及穗花杉双黄酮的含量.rn 结果：同一产地(湖北宜昌车溪)5种卷柏属植物药总黄酮及穗花杉双黄酮含量差异较大;采收期分别为7月和10月的5种植物药总黄酮及穗花杉双黄酮的含量有一定差异.rn 结论：建立的含量测定方法精密度好,准确度高.研究结果为卷柏属植物药的质量评价提供有价值的参考;同时,根据采收期对总黄酮及穗花杉双黄酮含量的影响,初步认为异穗卷柏和薄叶卷柏宜在秋季采收,江南卷柏宜在夏季采收,翠云草和疏叶卷柏夏秋季采收对其质量影响不大.

摘要： 目的:探讨卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善及其作用机制.方法:采用高糖高胰岛素培养基诱导HepG2细胞形成胰岛素抵抗细胞模型,葡萄糖氧化酶法检测正常组、模型组、阳性药组、卷柏总黄酮组、穗花杉双黄酮组细胞葡萄糖消耗情况,并用酶联免疫分析(ELISA)方法和免疫印迹法(Western-blot)检测PI3K-Akt信号通路上PI3K蛋白的表达及糖代谢相关蛋白的表达情况,观察卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮改善HepG2细胞胰岛素抵抗及其作用机制.结果:高糖及高胰岛素培养基培养HepG2细胞,使细胞葡萄糖消耗率明显下降,造成胰岛素抵抗的细胞模型,给予卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮干预之后,细胞葡萄糖消耗率明显上升,同时上调PI3K蛋白的表达、糖代谢相关蛋白6-磷酸果糖激酶(PFK)、葡萄糖激酶(GCK)、丙酮酸激酶(PK)的表达量升高,糖原合成关键蛋白糖原合成酶激酶-3(GSK-3-β)的表达量降低,糖异生相关蛋白磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)表达升高.结论:卷柏总黄酮及穗花杉双黄酮改善胰岛素抵抗作用可能与调节PI3K蛋白表达有关,促进细胞内葡萄糖氧化分解、促进糖原合成降低葡萄糖含量有关.

摘要： 目的:探讨穗花杉双黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的干预作用及其作用机制.方法:建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,葡萄糖氧化酶法检测正常组、模型组、阳性药组、穗花杉双黄酮各剂量组细胞葡萄糖消耗情况,并用酶联免疫分析(ELISA)和免疫印迹法(Western-blot)检测PI3K-PKB信号转导通路上PI3K蛋白的表达及糖代谢相关蛋白的表达,观察穗花杉双黄酮对胰岛素抵抗细胞的干预作用及其作用机制.结果:高糖及高胰岛素培养基培养能够造成胰岛素抵抗的细胞模型,给予穗花杉双黄酮干预之后,细胞葡萄糖消耗率与模型组相比明显上升,PI3K蛋白的表达量升高、糖代谢相关蛋白昏磷酸果糖激酶(PFK)、葡萄糖激酶(GCK)、丙酮酸激酶(PK)的表达量升高,糖原合成关键蛋白糖原合成酶激酶(GSK)的表达量降低.结论:穗花杉双黄酮对胰岛素抵抗的干预作用可能与PI3K-PKB信号转导通路有关,并可通过促进细胞内葡萄糖氧化分解、促进糖原合成降低葡萄糖含量.

摘要： 目的:本研究以具有抗皮肤过敏、抗刺激和抗皱的卷柏特征活性成分穗花杉双黄酮为研究对象,选择乙醇提取后,以D101、AB-8、HPD750、HPD100、NKA、HPD450等型号的大孔吸附树脂为填料,分别以蒸馏水、20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇为洗脱液开展工艺研究,重点考察吸附量、吸附率、解吸率以及穗花杉双黄酮的纯度和回收率,筛选出有效富集穗花杉双黄酮的大孔树脂类型和洗脱条件.结论:通过大孔树脂的动态吸附和静态吸附实验发现,采用HPD100型大孔树脂,以60％乙醇(V/V)为洗脱液,可以有效分离纯化兖州卷柏中的穗花杉双黄酮.

摘要： 目的：采用HepG2细胞葡萄糖消耗模型和胰岛素抵抗模型，探讨穗花杉双黄酮体外降糖作用。rn 方法：用葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养基中葡萄糖的消耗量，并采用高胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型，研究穗花杉双黄酮对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。rn 结果：穗花杉双黄酮在中糖状态下可使HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加24％，对胰岛素刺激的HepG2细胞的葡萄糖消耗量增加有协同作用；穗花杉双黄酮显著增加胰岛素抵抗HepG2细胞模型的葡萄糖消耗量，并能够干预胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素抵抗形成。作用呈量效关系。且最佳剂量均为10μg·m-1.rn 结论：穗花杉双黄酮能增加HepG2细胞对葡萄糖的基础消耗，对HepG2细胞的胰岛素抵抗具有一定的改善作用。

摘要： 本发明涉及提高穗花杉双黄酮稳定性的透明或半透明化妆品组合物，具体地说，涉及提高穗花杉双黄酮稳定性的透明或半透明化妆品组合物，其中，将穗花杉双黄酮封入低聚物结构体的孔洞结构中的水溶性穗花杉双黄酮‑低聚物复合体在含有多元醇的第2剂中稳定化，利用双液型容器，在使用之前混合第1剂和第2剂，通过第1剂含有助水溶剂来提高第1剂和第2剂的混合稳定性。

摘要： 本发明公开了四氢穗花杉双黄酮在制备蛋白质N‑乙酰葡萄糖胺修饰抑制剂中的应用，四氢穗花杉双黄酮作用受体为N‑乙酰葡萄糖胺转移酶；四氢穗花杉双黄酮通过与UDP结合口袋内His920，Thr922和Lys842形成氢键，同时与尿嘧啶结合口袋附近的Asn557残基形成氢键，进而占据N‑乙酰葡萄糖胺转移酶的UDP结合口袋，抑制N‑乙酰葡萄糖胺转移酶活性。通过体外及细胞内的OGT抑制活性分析发现，四氢穗花杉双黄酮具有较好的OGT抑制活性，能够有效抑制蛋白质的O‑GlcNAc修饰。同时四氢穗花杉双黄酮不会影响细胞内蛋白质的其他糖基化修饰，说明四氢穗花杉双黄酮是特异性OGT抑制剂。

摘要： 本发明涉及穗花杉双黄酮在制备治疗鸡坏死性肠炎的药物中的用途，并通过产气荚膜梭菌滑动运动抑制试验、生物被膜形成抑制试验雏鸡坏死性肠炎模型治疗试验、病理组织学切片观察及肠道菌群分析试验验证穗花杉双黄酮对产气荚膜梭菌感染所致的鸡坏死性肠炎具有保护作用。由于传统抗生素的滥用和细菌耐药性的不断加强，穗花杉双黄酮具有治愈率高，无耐药性及药物残留的特点，因此穗花杉双黄酮用于治疗鸡坏死性肠炎可以增加使用药物的选择性,对开发新药有着重要意义。

摘要： 本发明公开了一种从卷柏属植物中提取分离高纯度穗花杉双黄酮的方法，本发明采用非极性大孔吸附树脂作为分离材料，采用含水乙醇‑pH梯度洗脱工艺，从卷柏属植物醇提液中分离得到穗花杉双黄酮粗品，进一步通过碱性甲醇溶解酸沉及乙醇重结晶工艺分离得到高纯度的穗花杉双黄酮，含量98％以上，工艺转移率50％以上。

摘要： 本发明提供了穗花杉双黄酮在制备保护和/或修复神经细胞药物中的应用，属于医药技术领域，所述穗花杉双黄酮能够修复神经细胞，改善神经功能在保护和/或修复神经细胞中，具有疗效确切、作用稳定和毒副作用小等特点。

摘要： 本发明公开了穗花杉双黄酮在制备促进伤口愈合药物中的应用，穗花杉双黄酮是黄酮类小分子化合物，本发明是基于新型促进伤口愈合靶点GPR39开发一个全新激动剂。实验证明，通过激动GPR39靶点，穗花杉双黄酮具有显著的促进伤口愈合活性，可用于促进伤口愈合药物的研发。

摘要： 本发明公开了一种穗花杉双黄酮在制备治疗胶质瘤药物中的应用，用穗花杉双黄酮对胶质母细胞瘤JAK2‑STAT3通路活化及肿瘤细胞凋亡和增殖的的影响。用0μM、50μM、100μM、150μM、200μM穗花杉双黄酮处理胶质母细胞瘤细胞系U87MG 24、48、72h，然后分别用CCK‑8、Annexin V/PI染色检测其对细胞增殖和凋亡的影响，再用Western blotting检测其对细胞JAK2‑STAT3通路活化及其下游调控的凋亡相关蛋白Bcl‑2表达的影响。应用穗花杉双黄酮阻断JAK2‑STAT3信号通路，促进肿瘤细胞凋亡、抑制其增殖，为胶质母细胞瘤治疗或辅助治疗的新方法。

摘要： 本发明涉及穗花杉双黄酮在制备金黄色葡萄球菌转录调控因子MgrA抑制剂中的应用，以金黄色葡萄球菌转录调控因子MgrA为药物靶标，使用荧光各向异性分析法从天然化合物中筛选出能够显著抑制MgrA的活性的药物穗花杉双黄酮，并在不影响细菌正常生长的前提下可显著降低耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的毒力，不易导致细菌耐药性的产生。在体内实验中，穗花杉双黄酮对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染引起的小鼠肺炎的治疗效果显著，能够大幅提高感染小鼠的生存能力和减轻肺脏组织的炎症反应。综上所述，本研究提出穗花杉双黄酮作为一种有效的金黄色葡萄球菌转录调控因子MgrA抑制剂，为临床上有效防治耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染提供了新的研发策略和先导化合物。

摘要： 本发明提供了穗花杉双黄酮在制备保护和/或修复神经细胞药物中的应用，属于医药技术领域，所述穗花杉双黄酮能够修复神经细胞，改善神经功能在保护和/或修复神经细胞中，具有疗效确切、作用稳定和毒副作用小等特点。

摘要： 本发明属分析化学领域，涉及一种萃取中药中有效成分的方法，具体涉及一种红外提取卷柏中穗花杉双黄酮的方法。本发明方法，采用红外灯照射卷柏样品的溶液，经过一定时间的提取后，处理提取液，运用高效液相色谱仪进行分离分析。根据样品和对照品的色谱信息进行定性和定量分析。所述方法快速、环保、回收率高。