玻璃化法

摘要： 【目的】探讨软枣猕猴桃种质资源的长期保存技术体系。【方法】以软枣猕猴桃‘魁绿’休眠芽为试材,研究了预培养液种类、预培养时间、装载时间、玻璃化保护液、恢复培养基等因素对玻璃化法超低温保存后休眠芽成活率的影响。【结果】休眠芽在0.3 mol·L^-1蔗糖+1 mol·L^-1甘油的预培养液中震荡培养2 d,常温下用装载液(2 mol·L^-1甘油+0.4mol·L^-1蔗糖+MS)处理20 min,0°C条件下用PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol·L^-1蔗糖+MS)脱水120 min,换新鲜PVS2后迅速投入液氮中冻存24 h以上。取出后立即用38°C水浴解冻2 min,用含1.2 mol·L^-1蔗糖的MS卸载液洗涤30 min,无菌滤纸吸干后接种到MS+2 mg·L^-16-BA+0.02 mg·L^-1NAA恢复培养基上,休眠芽成活率达86.30%。用流式细胞仪鉴定再生植株倍性,没有发现明显变化。【结论】建立了高效的软枣猕猴桃‘魁绿’休眠芽玻璃化超低温保存体系。

摘要： 目前棉花转基因技术高度依赖于体细胞胚胎发生方式,而在体细胞胚发生过程中的胚性细胞保存和利用需要继代培养,可能引起保存材料发生遗传变异或导致物种退化,不利于资源保存和利用,而超低温保存能最大限度地保持材料的遗传稳定性.本研究以海岛棉(Gossypium barbadense) XH33胚性细胞为材料,分别从预培养、玻璃化溶液及处理时间、化冻方法以及恢复培养方法等方面进行优化,建立小滴玻璃化法超低温保存新疆海岛棉胚性细胞的方法;进一步通过流式细胞术、SSR分子标记和生理指标检测等方法验证小滴玻璃化法超低温保存后的胚性细胞遗传稳定性.结果 表明,4°C条件下,XH33胚性细胞在0.3、0.5、0.7 mol/L梯度浓度蔗糖培养基上预培养3d,然后在植物玻璃化溶液(plant vitrification solutions 2,PVS2)中装载20 min和脱水20 min;液氮保存12h后,经40°C水浴解冻,并以0.5、0.7、1.0 mol/L梯度浓度蔗糖溶液洗涤;暗培养3d后正常培养,细胞存活率高达55.55％.流式细胞术和SSR分子标记结果表明,超低温冷冻并未影响细胞的遗传稳定性;生理指标检测结果显示,冷冻后细胞的生理活性并未发生显著变化.本研究建立了海岛棉胚性细胞小滴玻璃化法超低温保存的技术体系,为海岛棉胚性细胞的长期保存提供了参考依据.

摘要： [目的]探索更有效的香石竹茎尖超低温保存方法,为球宿根花卉的超低温保存提供相关技术支持.[方法]以香石竹茎尖为材料,研究预培养务件(蔗糖浓度、预培养时间)、玻璃化处理时间和玻璃化方法(常规玻璃化法、小液滴玻璃化法)对香石竹茎尖超低温保存效果的影响.[结果]在0.5 mol/L的蔗糖浓度培养基上预培养5d香石竹茎尖成活率最高,为88.3％;玻璃化处理80 min成活率最高,可达86.7％;常规玻璃化法成活率及再生率在80％以上,小液滴玻璃化法成活率可达90％以上且全部再生,小液滴玻璃化法再生天数比常规玻璃化法少3～5d.[结论]小液滴玻璃化法是一种有发展前景的超低温保存方法.

摘要： 以桃叶卫矛(Euonymus bungeanus Maxim.)为材料,选用茎尖作为外植体进行超低温保存,以期探索桃叶卫矛种质资源保存的新途径.桃叶卫矛茎尖超低温保存中茎尖最适长度为2~3 mm;在预培养阶段,预培养液中蔗糖最适浓度为0.4 mol/L,最佳预处理时间为2 d;在装载液处理阶段,最佳装载时间为10 min;在PVS2溶液处理阶段,最佳处理时间为60 min;在卸载液处理阶段,最佳处理时间为10 min;当茎尖洗涤完毕后应将其接种于1.0 mg/L 6-BA的MS培养基上进行恢复培养,暗培养7 d后转入正常光照下进行培养,茎尖成活率可达70%以上.

摘要： 为莪术种质资源稳定保存提供一条新途径.以莪术组培苗茎尖为试材,用玻璃化法进行超低温保存后,于25°C用0.1% TTC溶液培养24 h后检测生活力.结果表明,切取2~3 mm长、 继代培养60 d的莪术组培苗茎尖,避光条件下,用含0.3 mol/L蔗糖的MS固体培养基预培养7 d,室温下,茎尖用60%的PVS2装载液装载10 min, 0°C用100%的PVS2玻璃化保护液对茎尖脱水处理30 min,快速投入液氮中进行超低温保存16 h;取出茎尖于40°C水浴中解冻2 min,室温下用US溶液洗涤20 min,立即用0.1% TTC溶液于25°C人工气候培养箱中培养24 h,莪术茎尖的生活力最高可达100%.表明该方法可用于莪术种质资源的保存.%Shoot tips of tissue cultured Curcuma zedoaria were subcultured,vitrified and cryopreserved to get a new approach for stable conservation of C. zedoaria. The test-tube plantlets of C. zedoaria were subcultured for 60 d, and their shoot tips were cut 2~3 mm long and cultured in the MS solid medium supplemented with 0.3 mol/L sucrose for 7 days in the dark. Then the shoot tips were loaded with 60% PVS2 for 10 min at 25°C, dehydrated for 30 min at 0°C with 100% PVS2 as vitrification protection solution and placed immediately into liquid nitrogen for cryopreservation for 16 h. The cryopreserved shoot tips were thawed in aqueous bath for 2 min at 40°C,and rinsed with US solution for 20 min at the room temperature. The survival rate of the shoot tips was measured by using 0.1% TTC solution and the highest survival rate was up to 100.00%.This indicates that the vitrified cryopreservation may be used for preservation of germplasm resources of C.zedoaria.

摘要： 本研究揭示了钻喙兰花粉在不同保存方法下的活力变化趋势,并对钻喙兰花粉的离体萌发培养条件和超低温保存方法进行了研究.结果表明:①蔗糖是钻喙兰花粉萌发的必要条件,蔗糖浓度为5％的BK培养液是其体外萌发的最佳培养液;②钻喙兰花粉离体保存前要进行干燥,最佳的干燥方式为4°C下硅胶中放置3h;③钻喙兰花粉1～7d的离体保存可选择在4°C下干燥3h后放置在4°C冰箱中,7～30d的保存可干燥后放置在-20°C冰箱中,而30～270d须进行超低温保存;④钻喙兰花粉超低温保存的程序为:新鲜花粉块干燥后用玻璃化溶液PVS2在0°C下预处理45min,然后投入LN中保存.使用时在室温下用自来水冲洗20min或37°C水浴60s化冻即可.

摘要： 为保持甜樱桃矮化砧木吉塞拉的遗传稳定性和避免种质遗传资源丢失，以玻璃化法超低温冷冻保存过程中涉及的主要因子设计正交试验，摸索适合吉塞拉的最佳保存体系；设计单因子试验，观察不同单因子对吉塞拉超低温冷冻保存的影响。结果表明，取生长90 d 的组培苗于4°C低温锻炼3周或4周，剥取茎尖放于含0．3 mol／L 蔗糖的预培养液中预培养1 d，在装载液中渗透30 min，用 PVS3玻璃化试剂0°C处理60 min 后投入到液氮中保存24 h，取出后经40°C水浴快速化冻1 min，卸载液洗涤两次，每次10 min，后置于恢复培养基上，茎尖的存活率最高且遗传稳定性好。本试验成功建立了甜樱桃矮化砧木吉塞拉的玻璃化法超低温保存技术，为甜樱桃种质资源的长期保存提供了一条有效途径。%To maintain the genetic stability and avoid the loss of germplasm resources of sweet cherry ro-otstock Gisela,based on the main factors involved in the process of cryopreservation by vitrification,the or-thogonal experiment was designed to obtain the optimal preservation system for Gisela.The effect of single fac-tor on cryopreservation of Gisela was observed by single factor test.The results showed that after the 90 -day -old tissue culture seedlings were acclimatized at 4 °Cfor 3 ~4 weeks,the shoot tips were precultured in preculture solution containing 0.3 mol /L sucrose for 1 day,then permeated in loading solution for 30 minutes, vitrified by PVS3 at 0 °C for 60 minutes,stored in liquid nitrogen for 24 hours,rapidly thawed in a water bath at 40 °C for 1 minute,washed by unloading solution for twice and each time for 10 minutes,cultured in recov-ering medium and then the shoot tips got the best survival rate and genetic stability.The vitrification cryopr-eservation technique for sweet cherry dwarf rootstock Gisela was built in this study.It provided an efficient way to conserve the germplasm resources of sweet cherry for a long term.

摘要： 自2010年起，癌症荣登我国死亡原因榜首，2015年一年我国新确诊的癌症患者多达4，292，000例。但同时，医疗技术的进步为癌症患者带来福音，我国最新统计显示癌症的五年生存率可达到36.9%，女性（47.3%）高于男性（29.3%）[1]。癌症的主要治疗方法为放化疗，放化疗会损伤卵巢中的早期卵泡，造成不可逆的卵巢早衰，从此剥夺了这些女性癌症幸存者的生育能力及维持女性激素水平的能力[2]。

摘要： Cryopreservation of the shoot of Xanthoceras Sorbifolia Bunge by vitrification was studied. e procedure and corresponding conditions of conservation were as follows: the shoot were subcul-tured by 45 days and detached the size of 2~3mm shoot precultured on MS medium with 0.5M su-crose for 2 days ,then it was dehyrated with 60%PVS2 Solution for 5 minutes at room temperature, then with 100%PVS2 Solution for 30 minutes at 0°C. The materials were plunged into liquid nitro-gen. After 48h,The material was taken off from liquid nitrogen and thawed in 37- 40°C 2 minute, then it was cultivated on MS+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1+GA 0.3 mg·L-1+sucrose 30g·L-1+agar 7g·L-1.%以7年生文冠果新抽嫩枝为试材，探讨文冠果萌发芽超低温玻璃化法保存技术.结果表明：文冠果超低温玻璃化法保存程序：采用继代培养45d的萌发芽，切取2~3mm，于0.5mol/L蔗糖浓度的MS培养基内预培养2d，60%PVS2室温处理5min，100%PVS20°C下处理30min，迅速投入液氮，48h后，37～40°C水浴快速化冻2min，1.2mol/L蔗糖的MS培养液洗涤20min.将洗涤过的萌发芽转移至MS+0.5mg/L BA+0.1mg/L NAA+0.3mg·L-1 GA3+30g/L蔗糖+7g/L琼脂的恢复培养基上恢复培养.

摘要： 利用电镜细胞化学焦锑酸钾沉淀法及Ca2+荧光探针Fluo-3AM染色法,研究了玻璃化法超低温保存过程中预培养、装载、脱水和洗涤4个关键步骤对百子莲胚性愈伤组织细胞内Ca2+分布情况及浓度变化的影响.结果表明,在预培养后细胞液泡内Ca2+数量多于细胞质基质,Ca2+主要贴膜分布,且细胞内的Ca2+荧光强度降到最低值.经装载处理后,细胞内出现较多囊泡和淀粉粒,在线粒体和囊泡中观察到Ca2+数量增多,淀粉粒周围有较多的Ca2+分布,细胞内的荧光强度增加.经脱水处理后,细胞内的Ca2+荧光强度升高到最大值呈梯度分布,含有Ca2+的囊泡增多,细胞内淀粉粒周围的Ca2+数量较多.经洗涤处理后,随着细胞内玻璃化溶液的减少,细胞内Ca2+数量减少并且荧光强度降低,细胞质中Ca2+浓度回落到与对照相近的正常水平,淀粉粒数量增加但周围Ca2+分布较少.在超低温保存处理过程中,细胞经受包含低温、渗透、氧化等复合胁迫,Ca2+分布和浓度的变化可能对提高细胞低温抗性及抗氧化能力起到了一定作用.推测Ca2+的变化决定了植物细胞在超低温保存过程中对复合胁迫的不同适应能力,为优化百子莲胚性愈伤组织超低温保存体系提供了理论依据,为超低温保存过程中植物的细胞信号转导及生理调控机制提供一定的理论基础.

摘要： 以玻璃化超低温保存后的龙眼胚性愈伤组织为材料,进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生,建立玻璃化法超低温保存龙眼胚性愈伤组织再生体系.利用RAPD技术从分子水平对玻璃化超低温保存的龙眼胚性愈伤组织进行遗传稳定性检测.结果表明,超低温保存的体细胞无性系遗传稳定性基本得到保持,但也发现存在小量的变异现象,有个别引物扩增的谱带,在超低温保存前和超低温保存后存在一些差异,变异率为3.2％.

摘要： 目的:采用玻璃化法对杏资源茎尖进行超低温保存.超低温保存是目前植物种质资源长期稳定保存的最好方法,保存后的材料遗传上较为稳定.方法:以库车小白杏为试材,对茎尖(外植体)组织培养的培养基及激素浓度做了初步选择.结果:选择Ms+0.5NAA+0.26-BA激素配方可使杏的茎尖最易形成愈伤材料,而选择Ms+0.1 NAA+0.1 6-BA+0.1GA激素配方可使由茎尖获得的愈伤材料最易分化出根.结论:用玻璃化法对组织培养获得的愈伤材料结合不同的低温保存时间、脱水处理时间与化冻方法进行比较试验可知,预冻温度-30°C、玻璃化液保护剂脱水60min、40°C水浴5min解冻,可使超低温保存的材料复活率最高.

摘要： 试验采用玻璃化法建立非洲菊离体茎尖的超低温保存体系.结果表明:取继代25天的试管苗4°C低温驯化3周,剥取2～3mm茎尖,在0.7mol·L-1蔗糖浓度的MS培养基上暗培养3天,室温装载30min,再于0°C条件下PVS2脱水25min后,转入新鲜PVS2并迅速投入液氮.24h后,40°C水浴化冻2min,用含1.2mol·L-1蔗糖的MS去装载液洗涤两次,每次10min,先暗培养3天再正常光照培养,成活率达63.3％,成苗率为58.3％,试管苗生根后可移栽成活.

摘要： 以切花百合西伯利亚试管苗离体茎尖为试材,通过正交设计试验对预培养基中蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间等影响超低温保存存活率的主要因素进行了分析,初步建立了切花百合种质玻璃化法超低温保存的技术方案:将继代培养45～60d的试管苗置于4°C低温锻炼一周以上,剥取茎尖1～2 mm用0.3 mol.L-1蔗糖液体预培养基培养2～3 d后用MS+0.4 mol.L-蔗糖+2 mol.L-1甘油混合溶液装载20 min,0°C下用冰冻保护剂PVS2处理60～120 min后迅速投入液氮中保存.40°C水浴中快速化冻2 min,用MS+1.2 mol.L-1蔗糖溶液洗涤10 min,接种在MS+0.5 mg.L-1 BA+0.1 mg.L-1 NAA+0.3 mg.L-1 GA3+30g.L-1蔗糖+7g.L-1琼脂的再生培养基中常温下暗培2周,之后转移至正常光照下培养,存活率可达到50％以上.通过形态观察、可溶性蛋白和同工酶检测,冻存前后材料的遗传稳定性没有发生改变.

摘要： 本研究以荔枝(Litchi chinesis Sonn)胚性悬浮细胞为材料,首次研究了荔枝胚性悬浮细胞玻璃化法超低温保存的一些影响因素,通过此项研究,建立了比较适宜于荔枝胚性悬浮细胞的玻璃化法保存方法:将继代培养3d的胚性悬浮细胞,在含有0.4 mol/L山梨醇培养基上预培养2 d后,先在室温下用60％的玻璃化溶液(PVS2)中装载15 min,再用PVS2于0°C下处理15～20 min,换一次新鲜的PVS2溶液后,迅速投入液氮.保存24 h后,在40°C水浴中快速化冻,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,经TTC检测,相对存活率达到27.1％.

摘要： 目的：探索嗅球来源嗅鞘细胞的低温冷冻保存方法,寻找最佳的冷冻保护剂种类和浓度,降温方法及速率,提高冻存复苏后细胞的存活率和贴壁率,为临床上人胚胎嗅鞘细胞保存提供指导.材料与方法：取出生24h内SD大乳鼠嗅球,用改良Nash差速贴壁法+Ara-c对细胞进行培养纯化,以P75、GFAP染色鉴定.收集处于对数生长期OECs,调整细胞密度5×106/ml备用.A组采用传统慢冻方法:5％DMSO+6％HES作为冰冻保护剂,4°C30～60min,-20°C1～2h,-80°C过夜,然后置于液氮内;B组采用玻璃化法:20％(v/v)DMSO,20％(v/v)EG,10％(w/v)乙酞胺,0.5M海藻糖为冰冻保护剂,程控降温仪降温则以1°C/min的降温速率降至-40°C,再以10°C/min的降温速率降至-80°C,然后投入液氮内保存.两周后快速复温至37°C,经台盼蓝拒染法、MTT比色法检测细胞复苏率,绘制生长曲线比较细胞增殖能力.结果：在复苏率方面,A组74.3 ％;B组86.9％,两组具有统计学显著性差异(P＜0.05)贴壁率:A组9.72％;B组10.22％,两组无统计学差异.在增殖能力方面B组也明显优于A组.结论：采用玻璃化法对嗅鞘细胞进行冻存,是一种高效可行的方法,冻存细胞经快速符文,可达到较高的复苏率,对于复苏细胞的增殖能力也没有很大的影响.然而玻璃化需要较高的保护剂浓度,DMSO对细胞有毒性,其毒性作用随浓度的增大,低温可以减轻其毒性作用.因此使用之前需在4°C下进行预冷,复苏后也应及时洗脱保护剂.较高的溶质浓度同样也会造成细胞内外渗透压梯度过大,造成细胞脱水过快、皱缩,不利于细胞活性的维持.因此可以采用多次导入的方法,是的冰冻保护剂浓度逐渐上升.冻存细胞是,细胞密度较一般培养为高,可以提高抗冻性.在复苏后,换液时应加大培养液血清浓度,避免细胞密度过大营养不足造成凋亡.

摘要： 目的:阐述异体皮低温储存研究进展以及临床应用步骤和意义。方法:列举今年来某院皮库异体皮肤低温储存以及临床实际应用救治大面积烧伤病人的方法,玻璃化的基本原理和皮肤细胞外基质(纤维连接蛋白、层粘连蛋白等)、骨架蛋白(微丝、微管、中间丝)等新的低温损伤关键位点,推荐新型抗冻剂海藻糖的对低温抗冻液配方的优化方案.结果:每年异体尸体皮采集及储存40余具,深低温速冻玻璃化法异体皮保存的改进使保存皮片活力稳定保持在70％以上,皮片移植成活率达95％以上.不仅仅细胞本身的低温损伤,细胞外基质以及细胞连接同样是低温损伤的重要位点,可以影响低温储存皮肤的活力.结论:随着皮肤低温储存研究的不断发展,更为有效的提高异体皮活力.

摘要： 本研究的目的是探讨三种冷冻方法对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力、线粒体及脂肪颗粒分布变化的影响，同时也对冻后卵母细胞的超微结构进行了观察。结果显示：(1)孤雌激活后，CLV法的染色存活率和卵裂率(72.00％，7.22％)最高，OPS法(60.00％，4.85％)次之，straw法(42.22%，0%)最低;(2)CLV法线粒体的正常分布率(52.24％)要比其它两组要高(OPS，48.65%;straw，37.68％)，且三者之间没有显著差异(P>0.05);(3)CLV法和OPS法的脂肪颗粒正常分布率之间没有显著差异(P>0.05)，但两者均显著高于straw法(P<0.05);(4)超微结构表明：冻后卵母细胞线粒体变得粗糙和模糊，大的脂肪颗粒含量在明显减少;大部分脂肪颗粒为均质化状态，只有很少的异质化脂肪颗粒存在。

摘要： 本研究的目的是探讨三种冷冻方法对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力、线粒体及脂肪颗粒分布变化的影响，同时也对冻后卵母细胞的超微结构进行了观察。结果显示：(1)孤雌激活后，CLV法的染色存活率和卵裂率(72.00％，7.22％)最高，OPS法(60.00％，4.85％)次之，straw法(42.22%，0%)最低;(2)CLV法线粒体的正常分布率(52.24％)要比其它两组要高(OPS，48.65%;straw，37.68％)，且三者之间没有显著差异(P>0.05);(3)CLV法和OPS法的脂肪颗粒正常分布率之间没有显著差异(P>0.05)，但两者均显著高于straw法(P<0.05);(4)超微结构表明：冻后卵母细胞线粒体变得粗糙和模糊，大的脂肪颗粒含量在明显减少;大部分脂肪颗粒为均质化状态，只有很少的异质化脂肪颗粒存在。

摘要： 本研究的目的是探讨三种冷冻方法对猪MII期卵母细胞玻璃化冷冻后发育能力、线粒体及脂肪颗粒分布变化的影响，同时也对冻后卵母细胞的超微结构进行了观察。结果显示：(1)孤雌激活后，CLV法的染色存活率和卵裂率(72.00％，7.22％)最高，OPS法(60.00％，4.85％)次之，straw法(42.22%，0%)最低;(2)CLV法线粒体的正常分布率(52.24％)要比其它两组要高(OPS，48.65%;straw，37.68％)，且三者之间没有显著差异(P>0.05);(3)CLV法和OPS法的脂肪颗粒正常分布率之间没有显著差异(P>0.05)，但两者均显著高于straw法(P<0.05);(4)超微结构表明：冻后卵母细胞线粒体变得粗糙和模糊，大的脂肪颗粒含量在明显减少;大部分脂肪颗粒为均质化状态，只有很少的异质化脂肪颗粒存在。

摘要： 本发明属于辅助生育的技术领域，涉及植物蛋白多肽在玻璃化冷冻液中的应用，所述植物蛋白多肽用于制备玻璃化冷冻液，为冷冻液提供合适的粘度、渗透压以及接近血清的环境，所述植物蛋白多肽的分子量为60000～80000道尔顿；上述植物蛋白多肽的制备方法是：以植物蛋白为原料，在中性磷酸缓冲液中，使用蛋白酶在37°C下水解，使植物蛋白酶解成分子量为60000～80000道尔顿的植物蛋白多肽，之后升温至90°C～100°C灭酶，降至室温，用微滤膜透析，收集透析液；本发明还提供了玻璃化冷冻液组合物及其制备方法。本发明提供了一种人血清蛋白的替代方案，使用植物蛋白多肽制备玻璃化冷冻液，具有成本更低，安全性更高的优点。

摘要： 本发明公开了一种湿法冶炼渣玻璃化配方及玻璃化无害化处理工艺，包括如下步骤：(1)对湿法冶炼渣进行脱水和初步干化；对含钙矿物、含硅矿物、含钠矿物和废玻璃分别进行破碎和过筛；(2)将过筛后的含钙矿物、含硅矿物、含钠矿物和废玻璃中的至少一种与初步干化后的湿法冶炼渣以及废活性炭按配比混合，得混合物；(3)将所得混合物二次干化后进行高温煅烧，得玻璃化产物。本发明通过熔融玻璃化的方式实现湿法冶炼渣的无害化。本发明从简单易行、普适性的角度出发，利用湿法冶炼渣、含硅矿物、含钙矿物、含钠矿物、废玻璃以及废活性炭，通过玻璃化的方式实现湿法冶炼渣的无害化。

摘要： 本发明包括：一种新的物质组合物(一种复合物，包括原位眼中天然存在的体内角膜以及在天然存在的角膜基质组织内形成的至少一个体积的玻璃化的非天然存在的角膜基质组织)，其中，该玻璃化组织的结构和性质从它的天然存在的状态改变成非天然存在的玻璃样状态，所述改变包括但不限于增加的弹性模量；产生和使用所述新的物质组合物的方法，所述新的物质组合物用于改变角膜结构和性质，包括但不限于角膜光学像差；伤口愈合粘连和移植粘连；以及用于产生所述新的物质组合物的光致玻璃化系统，该系统包括具有可控处理参数的至少一个光子源。可以将反向模板加入到角膜玻璃化系统中，以增强玻璃化以及结构和性质的改变。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体是一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法，其特征是：将烟草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织和不定芽在超净工作台内与正常组织分离开来，转移至空置的无菌组培瓶中，盖上瓶盖，置于光照培养箱（与正常组培条件一致）中进行饥饿处理1‑7天。待玻璃化组织恢复正常状态后，转移至分化培养基（愈伤组织）或伸长培养基（不定芽）中继续培养。应用本技术可以使烟草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织或不定芽去玻璃化，再经继代培养可以形成正常的再生植株。本发明的优点在于：采用了无培养基的空瓶饥饿培养方法，无需增加任何培养成分，也不需要增加其他专用设备，操作简便，效果显著。

摘要： 隔绝玻璃化物(100)、尤其三重隔绝玻璃化物，包括：至少一个间距保持件(4)，其环绕地成型为间距保持件框架(4')且围住内部区域(9)；布置在间距保持件框架(4')的第一盘片接触面(4.1)上的第一外部盘片(3a)和布置在间距保持件框架(4')的第二盘片接触面(4.2)上的第二外部盘片(3b)；至少一个中间盘片(2)，其插入到至少一个保持型材(1)的至少一个间隙(7)中且保持型材(1)环绕地成型为保持型材框架(1')，其框上中间盘片(2)，其中中间盘片(2)连同保持型材框架(1')布置在间距保持件框架(4')的内部区域(9)内且在外部盘片(3a,3b)之间。

摘要： 本发明属于辅助生育的技术领域，涉及植物蛋白多肽在玻璃化冷冻液中的应用，所述植物蛋白多肽用于制备玻璃化冷冻液，为冷冻液提供合适的粘度、渗透压以及接近血清的环境，所述植物蛋白多肽的分子量为60000～80000道尔顿；上述植物蛋白多肽的制备方法是：以植物蛋白为原料，在中性磷酸缓冲液中，使用蛋白酶在37°C下水解，使植物蛋白酶解成分子量为60000～80000道尔顿的植物蛋白多肽，之后升温至90°C～100°C灭酶，降至室温，用微滤膜透析，收集透析液；本发明还提供了玻璃化冷冻液组合物及其制备方法。本发明提供了一种人血清蛋白的替代方案，使用植物蛋白多肽制备玻璃化冷冻液，具有成本更低，安全性更高的优点。

摘要： 本发明公开了一种萱草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的培养基及方法，通过使用无菌镊子在超净工作台内将萱草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织和不定芽与正常组织分离开来，转移所述培养基中进行组织培养。待玻璃化组织恢复正常状态后，转移至分化培养基(愈伤组织)或伸长培养基(不定芽)中继续培养。本发明可直接用于萱草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织或不定芽去玻璃化，再经继代培养可以形成正常的再生植株；本发明的优点在于针对萱草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织和不定芽能够有效去玻璃化的同时，无需增加任何特殊培养成分，也不需要增加其它专用设备，操作简便，效果显著。

摘要： 本发明的目的在于，由胶原制造即使不进行交联处理膜强度也高、容易工业性地、机械性地制造、加工容易、处理容易、安全性高的胶原玻璃化凝胶及其精制物。一种胶原玻璃化凝胶的制造方法，其特征在于，将用于实现该目的的胶原利用含有无机碳酸盐类和选自由无机氯化物和无机磷酸盐组成的组中的化合物的胶凝剂进行凝胶化，接着，将所得胶原凝胶玻璃化，进而对其施加水合处理；以及一种精制胶原玻璃化凝胶的制造方法，其特征在于，对该胶原玻璃化凝胶进行脱盐、平衡化，进而进行干燥；及通过这些方法而得到的胶原玻璃化凝胶和精制胶原玻璃化凝胶。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体是一种烟草玻璃化愈伤组织和不定芽去玻璃化的方法，其特征是：将烟草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织和不定芽在超净工作台内与正常组织分离开来，转移至空置的无菌组培瓶中，盖上瓶盖，置于光照培养箱（与正常组培条件一致）中进行饥饿处理1‑7天。待玻璃化组织恢复正常状态后，转移至分化培养基（愈伤组织）或伸长培养基（不定芽）中继续培养。应用本技术可以使烟草组织培养过程中产生的玻璃化愈伤组织或不定芽去玻璃化，再经继代培养可以形成正常的再生植株。本发明的优点在于：采用了无培养基的空瓶饥饿培养方法，无需增加任何培养成分，也不需要增加其他专用设备，操作简便，效果显著。

摘要： 本实用新型公开了一种玻璃化冷冻载体及玻璃化冷冻操作系统，该玻璃化冷冻载体包括手柄、装载件和盖合件；装载件设置有敞口的承载槽，装载件与手柄连接；盖合件与手柄活动连接，且盖合件能够相对手柄活动至第一位置或第二位置，以使盖合件盖合或打开于承载槽的敞口端。该玻璃化冷冻载体及玻璃化冷冻操作系统提供的技术方案能够有效避免在冷冻或解冻的操作过程中生物样本从承载槽处掉落，从而能够有效避免在冷冻或解冻操作过程中存在生物样本丢失的问题，操作简单便捷。