冻存

摘要： 阮祥燕,医学博士,博士后,首都医科大学教授、主任医师二级,博士研究生导师,德国图宾根大学客座教授,首都医科大学附属北京妇产医院妇科内分泌科创始人、科主任,首都医科大学妇产科学系执行主任,卵巢组织冻存库创始人、负责人,负责成功完成中国首例冻存卵巢组织移植,负责实现中国冻存卵巢组织移植后首例自然妊娠、完成中国冻存卵巢组织移植后首例健康婴儿诞生。

摘要： 2021年8月31日14时46分,首都医科大学附属北京妇产医院(以下简称北京妇产医院)手术室内传出最美的中国首例"冻存婴儿"的哭声。听到这哭声,顿时让我百感交集、泪流满面。为了这一天,我带领团队整整奋斗了10年!这是我们继2016年中国首例冻存卵巢组织移植成功、2020年中国冻存卵巢组织移植首例自然妊娠后,第3次实现我国生殖医学史上零的突破!这位幸运妈妈叫李梅(化名),2021年她34岁了,曾是一位骨髓增生异常综合征。

摘要： 2021年8月31日14:46分,首都医科大学附属北京妇产医院的手术室内传出中国首例冻存婴儿的哭声!这哭声让阮祥燕感慨万千,泪流满面。为了这一天,她带领团队,整整奋斗了十年。这是阮祥燕团队继2016年中国首例冻存卵巢组织移植成功、2020年中国冻存卵巢组织移植成功首例自然妊娠后,第三次实现我国生殖医学史上零的突破。

摘要： 采用不同的冻存剂冻存脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSC),冻存复苏后检测细胞活性、细胞周期、成骨分化变化和基因表达谱变化,明确冻存剂的冻存效果.本实验采用三种冻存剂,六组实验;1 号,5％DMSO+10％FBS;2号,5％DMSO;3号,5％Trehalose+10％FBS;4号,5％Trehalose;5号,5％L-carnitine+10％FBS;6号,5％L-carnitine;分别冻存ADSC,复苏后通过CCK-8,检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期,以及成骨诱导分化,并对5％DMSO+10％FBS为冻存剂,冻存前后进行基因表达谱分析.细胞活性检测分析.1号与2号相比,冻存效果差异显著,3号与5号相比,冻存效果相似,总体来看,1号,2号冻存效果要比3号,5号要好.2号不如1号冻存剂效果好.使用4号和6号冻存剂,细胞冻存后基本不能存活.并且使用5％DMSO+10％FBS为冻存剂,分别对冻存前和冻存后的ADSC进行了表达谱分析,结果表明,在冻存过程中,DMSO的存在会对细胞的表达谱会产生一定的影响.

摘要： 目的 探讨自体纯化冻存脂肪颗粒注射移植对面部年轻化的作用.方法 2018年1月至2019年2月,衡阳美莱医疗美容医院美容外科收治64例(男9例,女55例,年龄35～64岁,平均43岁)面部老化萎缩凹陷的美容就医者,在其腹部或大腿用肿胀吸脂术抽吸脂肪,经过低速低压离心纯化脂肪颗粒.在-20°C下低温冻存24周,37°C下复温培养1h后,组织学观察细胞完整性;检测脂肪细胞活力,注射移植填充面部老化凹陷区域.结果 脂肪细胞冻存24周后细胞膜、细胞核仍清楚完整,细胞活力(88.89±1.23)％.64例(186个部位)中21例接受1次脂肪颗粒注射移植,35例接受2次脂肪颗粒注射移植,8例接受3次脂肪颗粒注射移植.术后随访6～24个月,面部老化症状明显改善,效果满意、持久,吸收率低,无感染、脂肪液化等并发症发生.临床疗效美容就医者及医者满意度均＞82.81％,不满意的1.56％.结论 自体纯化冻存脂肪颗粒注射移植对面部年轻化效果明显、吸收率低、可重复注射、易于美容就医者接受,值得临床应用.

摘要： 目的:分析采集到制备不同的时长对脐带血干细胞的冻前相关质量指标的影响,为确定合适的采集到制备时长提供依据.方法:选取1712份脐带血样本,按照采集到制备的时长分为＜12h组、(12-24)h组、(24-36)h组和(36-48)h组,分析脐带血干细胞冻前有核细胞数量、有核细胞活性、CD34+细胞百分比及CFU-GM集落数的变化.结果:(1)冻前有核细胞数量随着时间延长而下降,但各组冻前有核细胞数量的差异无统计学意义(P＞0.05);(2)各组的有核细胞活性结果比较发现,(12-24)h组和(24-36)h组的有核细胞活性差异无统计学意义(P＞0.05),其余各组间有核细胞活性比较差异均有统计学意义(P＜0.05);(3)CD34+细胞百分比随时间延长有微弱的升高趋势,但是差异无统计学意义(P＞0.05);(4)各组的CFU-GM集落数比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:随着脐带血采集到制备的时长增加,有核细胞活性会逐渐下降.脐带血采集后在36小时内制备是安全的,其干细胞的质量指标可稳定保持在较高水平,脐带血在36-48小时制备虽然质量有微弱下降,其干细胞的冻前质量也满足临床出库需求.

摘要： 本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型.以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养.在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定.然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方.结果 表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞.经纯化后传代的细胞呈现均一的“铺路石”形态,生长曲线明显呈“S”形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达.此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为VFBS∶VDMEM∶VDMS0=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好.因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法.

摘要： 为了获得活力高和再生能力强的甘蔗原生质体,该文对甘蔗原生质体的冻存液浓度、冻存温度和冻存部位进行了研究.结果表明:(1)不同的冻存液、不同的冻存温度和不同的取材部位原生质体冻存后复苏对甘蔗原生质体的活力影响有显著差异性,三个冻存液组合比较,在组合2(70％培养基+20％血清+10％DMSO),冻存30 d后复苏活力最强,高达72％;冻存90 d内复苏,-196°C液氮和-80°C冰箱冻存,甘蔗原生质体的活力差异不显著,活力均在75％以上,但90 d冻存后复苏,-196°C液氮冻存后复苏比-80°C冰箱冻存冻存后复苏原生质活力强;不同取材部位比较,幼叶冻存30 d后复苏所得原生质体活力较高(达79.2％),茎尖冻存30 d后复苏所得原生质体活力仅为42.7％.(2)不同的冻存液和不同的冻存温度,细胞第一次启动分裂和形成细胞团的时间差异不显著,一般培养5～6 d,细胞壁基本形成完整,培养6 d后,细胞启动分裂,培养15 d后形成细胞团.不同的材料部位相比较,茎尖酶解所得原生质体再生能力最强,较幼叶酶解原生质体,形成细胞壁的时间早3 d,第一次分裂时间早2 d.

摘要： 用人类脐血干／祖细胞代替骨髓移植，治疗辐射损伤性疾病，并为辐射损伤病人和核事故受害者的治疗建立脐血干细胞库是一重要课题。而脐血造血干细胞的分离与冻存是建立脐血千细胞库、进行干细胞移植的关键。该文研究了脐血造血干细胞的分离和冻存方法。首先用密度梯度离心法以不同比重的淋巴细胞分离液（Ficoll液）分离脐血单个核细胞（MNC），计数并用单抗经流式细胞仪进行表型分析；然后加冻存保护剂程控降温冻存于液氮中，再间隔同一时间常规复苏MNC，采用“三种梯度降温法”、”五种不同细胞浓度”和“两种细胞冻存保护剂”比较了不同条件下脐血MNC的分离和冻存效果。结果显示，使用比重为1．064的Ficoll液较常规1．077所分离的MNC量为少，但前者CD细胞较多，约为后者的3倍；梯度降温以直接放人液氮口（-96°C）过夜，再置入液氮内（-196°C）低温保存最佳，细胞浓度以2×10为宜；冻存保护剂以含10℅DMSO、90℅胎牛血清最好。

摘要： 目的:为提高红细胞冻干保存的回收率,本文探讨了几个相关因素对红细胞冻干回收率的影响.方法:红细胞来自健康人静脉血,ACD抗凝,对红细胞进行预处理,冰冻干燥16小时,再水化.结果:预处理2组红细胞的回收率明显高于预处理1组,分别为81℅和45℅;冻干体系中含高和中浓度葡萄糖,细胞回收率分别为47.2℅±10.5℅和45.1℅±10.7℅(n=10)两组没有差异,但与低浓度葡萄糖组(回收率为30.0℅±13.7℅)有显著性差异;再水化缓冲液渗透压对红细胞冻干回收率也有一定的影响,高、中、低三种再水化缓冲液条件下红细胞回收率分别为77.2℅±8.7℅(n=28)、41.1℅±15.3℅(n=16)和8.2℅±2.2℅(n=6),三组之间差异显著(P<0.01).结论:改进细胞的冻干条件,可明显提高红细胞的回收率.

摘要： 目的:为提高红细胞冻干保存的回收率,本文探讨了几个相关因素对红细胞冻干回收率的影响.方法:红细胞来自健康人静脉血,ACD抗凝,对红细胞进行预处理,冰冻干燥16小时,再水化.结果:预处理2组红细胞的回收率明显高于预处理1组,分别为81℅和45℅;冻干体系中含高和中浓度葡萄糖,细胞回收率分别为47.2℅±10.5℅和45.1℅±10.7℅(n=10)两组没有差异,但与低浓度葡萄糖组(回收率为30.0℅±13.7℅)有显著性差异;再水化缓冲液渗透压对红细胞冻干回收率也有一定的影响,高、中、低三种再水化缓冲液条件下红细胞回收率分别为77.2℅±8.7℅(n=28)、41.1℅±15.3℅(n=16)和8.2℅±2.2℅(n=6),三组之间差异显著(P<0.01).结论:改进细胞的冻干条件,可明显提高红细胞的回收率.

摘要： 目的:为提高红细胞冻干保存的回收率,本文探讨了几个相关因素对红细胞冻干回收率的影响.方法:红细胞来自健康人静脉血,ACD抗凝,对红细胞进行预处理,冰冻干燥16小时,再水化.结果:预处理2组红细胞的回收率明显高于预处理1组,分别为81℅和45℅;冻干体系中含高和中浓度葡萄糖,细胞回收率分别为47.2℅±10.5℅和45.1℅±10.7℅(n=10)两组没有差异,但与低浓度葡萄糖组(回收率为30.0℅±13.7℅)有显著性差异;再水化缓冲液渗透压对红细胞冻干回收率也有一定的影响,高、中、低三种再水化缓冲液条件下红细胞回收率分别为77.2℅±8.7℅(n=28)、41.1℅±15.3℅(n=16)和8.2℅±2.2℅(n=6),三组之间差异显著(P<0.01).结论:改进细胞的冻干条件,可明显提高红细胞的回收率.

摘要： 目的:为提高红细胞冻干保存的回收率,本文探讨了几个相关因素对红细胞冻干回收率的影响.方法:红细胞来自健康人静脉血,ACD抗凝,对红细胞进行预处理,冰冻干燥16小时,再水化.结果:预处理2组红细胞的回收率明显高于预处理1组,分别为81℅和45℅;冻干体系中含高和中浓度葡萄糖,细胞回收率分别为47.2℅±10.5℅和45.1℅±10.7℅(n=10)两组没有差异,但与低浓度葡萄糖组(回收率为30.0℅±13.7℅)有显著性差异;再水化缓冲液渗透压对红细胞冻干回收率也有一定的影响,高、中、低三种再水化缓冲液条件下红细胞回收率分别为77.2℅±8.7℅(n=28)、41.1℅±15.3℅(n=16)和8.2℅±2.2℅(n=6),三组之间差异显著(P<0.01).结论:改进细胞的冻干条件,可明显提高红细胞的回收率.

摘要： 本研究用细胞培养、组织细胞化学、流式细胞术研究了不同冷冻条件对骨髓造血细胞活性的影响,并对大容积骨髓低温冷冻方法加以改良,用于临床实际工作.

摘要： 本研究用细胞培养、组织细胞化学、流式细胞术研究了不同冷冻条件对骨髓造血细胞活性的影响,并对大容积骨髓低温冷冻方法加以改良,用于临床实际工作.

摘要： 本研究用细胞培养、组织细胞化学、流式细胞术研究了不同冷冻条件对骨髓造血细胞活性的影响,并对大容积骨髓低温冷冻方法加以改良,用于临床实际工作.

摘要： 本研究用细胞培养、组织细胞化学、流式细胞术研究了不同冷冻条件对骨髓造血细胞活性的影响,并对大容积骨髓低温冷冻方法加以改良,用于临床实际工作.

摘要： 本发明提供一种冻存液组合物、冻存液及类器官冻存方法。所述冻存液组合物包括：低级脂肪醇、低聚异麦芽糖、白蛋白、ROCK抑制剂、原代细胞抗生素。冻存液按照终浓度的组成包括：低级脂肪醇，10‑50％(v/v)；低聚异麦芽糖，0.01‑0.5g/ml；白蛋白，0.01‑0.2g/ml；ROCK抑制剂，0.1‑10μM；原代细胞抗生素，0.2‑20mg/ml；溶剂为Advanced DMEM/F12培养基。类器官冻存方法包括：将培养得到的类器官去掉原培养基后加入细胞回收液反应5‑10min；在体系中进一步加入无菌Hank’s平衡盐溶液混匀，离心后保留沉淀；在沉淀中加入上述类器官冻存液后程序性降温。采用本发明的冻存液及方法对类器官进行冻存，在冻存复苏条件下能维持类器官原始细胞干性，有效保留类器官的冻存前的分化特征。

摘要： 本发明公开了一种免疫细胞冻存稳定剂、冻存液及冻存方法，该免疫细胞冻存稳定剂，按照质量百分比计算，包括甘氨酸2~10%、明胶0.1~2%、甘露醇5~10%、乳糖0.1~5%、人血白蛋白10~20%、右旋糖苷1~10%，余量为基础细胞培养液。冻存稳定剂可以有效保护细胞表型，能够显著性的提高免疫细胞在冻存条件下的活性，从而保持了细胞复苏后的生理功能和生物学功能；且稳定剂采用无血清培养液，无引入外源性动物蛋白，降低了动物源污染的可能性，也避免了细胞复苏后回输患者时出现的不良反应和毒副作用。

摘要： 本发明提供一种冻存液组合物、冻存液及类器官冻存方法。所述冻存液组合物包括：低级脂肪醇、低聚异麦芽糖、白蛋白、ROCK抑制剂、原代细胞抗生素。冻存液按照终浓度的组成包括：低级脂肪醇，10‑50％(v/v)；低聚异麦芽糖，0.01‑0.5g/ml；白蛋白，0.01‑0.2g/ml；ROCK抑制剂，0.1‑10μM；原代细胞抗生素，0.2‑20mg/ml；溶剂为Advanced DMEM/F12培养基。类器官冻存方法包括：将培养得到的类器官去掉原培养基后加入细胞回收液反应5‑10min；在体系中进一步加入无菌Hank’s平衡盐溶液混匀，离心后保留沉淀；在沉淀中加入上述类器官冻存液后程序性降温。采用本发明的冻存液及方法对类器官进行冻存，在冻存复苏条件下能维持类器官原始细胞干性，有效保留类器官的冻存前的分化特征。

摘要： 本发明提供了一种细胞冻存液、细胞冻存液制备方法和细胞冻存方法，采用以重量计，每100份所述细胞冻存液包括：4～12份海藻糖、20～35份人血白蛋白、50～75份0.9％氯化钠注射液和余量的蒸馏水的细胞冻存液。该细胞冻存液不含有DMSO、动物源成分或者羟乙基淀粉130，毒副作用低，并且冻存液的成分简单，成本低；同时保持了细胞高复苏活率，不影响细胞的特性和细胞的增殖能力，有助于细胞冻存技术的快速应用和推广。

摘要： 本发明公开了一种干细胞冻存液，由下述组分配制而成：二甲基亚砜、甘油、乙二醇、甘露醇、海藻糖、羟乙基淀粉、人血清白蛋白、白藜芦醇‑羟基化磷脂复合物、无血清基础培养基。本发明还公开了该干细胞冻存液的制备方法以及采用该干细胞冻存液进行冻存的方法。本发明干细胞冻存液的使用安全性高，且使用其对干细胞进行冻存的复苏存活率高，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了一种湖羊精液冻存液。所述湖羊精液冻存液包含以下浓度的组分：Tris 25～40g/L、柠檬酸15～18g/L、果糖5～15g/L、山梨醇5～20g/L、甘油3～10v/v％、BSA 2～7g/L、湖羊间充质干细胞冻干粉0.2～0.8g/L。所述湖羊精液冻存液可以有效降低湖羊精液在冻存过程中的损伤和“衰老”现象，能很好地保持精子的活力和顶体完整性。使用本发明冻存液和冻存方法对湖羊精液进行超低温冻存，解冻后精子仍然具有较好的授精能力，受胎效果稳定，可满足湖羊冷冻精液人工授精的要求，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明提供了无血清免疫细胞冻存液，包括：抗冻剂和保存液，所述抗冻剂包括甲基甘油、葡聚糖和聚乙二醇，所述保存液包括葡萄糖氯化钠溶液、人血白蛋白溶液、复方电解质溶液和EDTA‑Na2，所述抗冻剂和保存液中各溶液的体积占比为甲基甘油5％、葡聚糖10％、聚乙二醇5％、葡萄糖氯化钠溶液30％、人血白蛋白溶液20％、复方电解质溶液30％，EDTA‑Na2的终浓度为2mM。本发明采用了无动物源性蛋白的人血白蛋白作为营养物质保护剂，解决了动物源性物质激活免疫细胞产生免疫应答的问题。并弃用传统冻存液常使用的二甲基亚砜(DMSO)，减少冻存液的细胞毒性，提高了细胞活力。

摘要： 本发明公开了一种细胞保存液、冻存套装及细胞冻存方法，细胞保存液，＝包括二甲基亚砜、HAS；还包括羟乙基淀粉、Dextran 40和勃脉力A中的至少一种；其冻存套装包括了细胞保存液以及可与医用输液器连接的细胞保存袋，通过大体积保存袋冻存。本发明通过优化细胞冻存液的组分及配比，避免较大体积的冰晶形成，提高冻存过程中细胞的存活率；同时在复温过程中，选用大体积的保存袋，使得解冻过程中传热更为均匀，复苏时间更短，保证较高的细胞存活率。

摘要： 本实用新型公开了一种智能冻存盒标签及整合智能冻存盒标签的冻存盒，属于医疗器械技术领域。本实用新型的一种智能冻存盒标签及整合智能冻存盒标签的冻存盒，包括冻存盒主体和盒体标签，所述冻存盒主体的上方设置有翻转盒盖。本实用新型解决了现有的医学课题中在对一些组织和细胞进行冻存时会遇到冻存盒或者物品结霜过厚，需待霜融化后才能看清，但这个过程中不可避免地导致了样品温度升高，影响冻存效果的问题，每个冻存盒主体都对应一个独立的盒体标签，而盒体标签以人最敏锐的色觉为标签底色，即红黄蓝绿，这样在结霜后也可轻易分辨，旁边衬有白色的书写区便于进行传统的文字标记，具体标记内容可根据需求定制。

摘要： 本实用新型涉及冻存设备技术领域，具体提供一种冻存盒及包括该冻存盒的冻存设备。旨在解决现有的冻存盒的结构强度不佳，易发生变形的问题。为此，本实用新型的冻存盒包括壳体以及设置在所述壳体内的第一分隔板和第二分隔板，所述第一分隔板与所述第二分隔板垂直交叉，所述第一分隔板的数量为多个且平行间隔分布，所述第二分隔板的数量为多个且平行间隔分布，多个所述第一分隔板和多个所述第二分隔板共同将所述壳体的内部空间分隔成多个容纳腔，所述冻存盒还包括第一加强结构，所述第一加强结构设置在所述第一分隔板与所述第二分隔板的连接处。通过在第一分隔板与第二分隔板的连接处设置加强结构，能够提高冻存盒的结构强度，使其不易发生变形。