密度梯度离心

摘要： 细菌囊泡(Bacterial membrane vesicles,BMVs)是细菌在生长过程中分泌的纳米尺度脂质小泡,其携载核酸、蛋白质,特别是毒力因子和免疫调节因子等,进行种间、种内以及与宿主的信息交流和物质交换.BMVs不仅影响多种生物过程,而且在疫苗和抗癌药物研发方面显示出重要的应用价值.但是,由于BMVs具有高度的个体差异性、粒径微小且内容物稀少,其纯化和表征均面临严峻挑战.基于本研究组自行研制的纳米流式检测装置(Nano-flow cytometer,nFCM)可在单颗粒水平对纳米粒子进行高灵敏、高通量分析的独特优势,本研究结合差速离心和密度梯度离心对BMVs进行分离纯化,建立了BMVs的纯度、浓度及粒径分布的单颗粒水平定量表征方法.采用nFCM对密度梯度离心后密度层中BMVs的纯度进行快速评估,可获得纯度>90％的BMVs样品.此外,基于以上单颗粒表征方法,本研究发现,革兰氏阴性菌大肠杆菌(E.coli)O157:H7与革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(S.aureus)分泌BMVs的浓度、密度和粒径存在较大差异,从相同数目细菌中提取到的E.coli O157:H7 BMVs的浓度比S.aureus BMVs的浓度高一个数量级;E.coli O157:H7 BMVs的密度约为1.10 g/mL,粒径分布中位值为83.5 nm,而S.aureus BMVs的密度约为1.06 g/mL,粒径分布中位值为64.9 nm.本研究建立了一种在单颗粒水平对BMVs纯度、浓度及粒径分布进行表征的方法.nFCM有望为BMVs更深层次的生物学功能研究提供有力的技术支持.

摘要： 目的 评估密度梯度离心结合上游法和不离心直接上游法优化精液对体外受精—胚胎移植中胚胎发育的影响.方法 以新疆佳音医院生殖医学中心2019年11月-2020年6月29个IVF-ET治疗周期的492个卵子为研究对象,采用自身对照,将同一个患者的卵子随机均分成两份,其中246个卵子授精的精液采用不离心直接上游法(A组),另外246个卵子授精的精液采用密度梯度离心结合上游法(B组),比较两种精液优化方法对受精率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚形成率、优质囊胚率的影响.结果 两组在受精率、囊胚形成率和优质囊胚率的比较,差异均无统计学意义(P>0.05),A组的卵裂率和优质胚胎率高于B组,且具有统计学意义(P<0.05).结论 与密度梯度离心结合上游法相比,不离心直接上游法可得到更高的卵裂率和优质胚胎率,且操作简单,减少了成本和时间,降低错配的风险,可广泛应用于辅助生殖实验室.

摘要： 目的:建立从实验树鼩外周血中分离单个核细胞的可靠方法.方法:使用不同密度的Percoll?分离溶液对树鼩的静脉血进行密度梯度离心,并通过Wright-Giemsa染色和细胞计数分析树鼩的单核细胞的最佳分离密度.结果:采用60％和67％Percoll?分离溶液的不连续密度梯度离心方法可以分离出树鼩粒细胞.60％～63％的分离溶液可以成功地将静脉血分为4层,随着密度的增加,分离的细胞越多,粒细胞和红细胞受到污染的风险就越高.结论:在确保淋巴细胞纯度的前提下,60％Percoll?分离液可分离外周血中更多的单核细胞,可用于从树鼩静脉血中分离外周血单个核细胞.

摘要： 本研究运用Percoll密度梯度离心的方法对出芽短梗霉Aureobasidium pullulans的两种细胞形态进行分选,并对两种形态的细胞进行多糖产量的分析.通过对转速、分选时间、Percoll分离液浓度的优化,确定了两种细胞形态分选效果最佳的条件是Percoll分离液浓度为60％、转速为5000r/min、离心时间为30min.经过光学显微镜和透射电子显微镜观察发现上层为酵母状细胞(YL)、下层为膨大细胞(SC),并发现膨大细胞外有明显的薄膜包被,且产大量多糖.也为今后在相应状态下研究出芽短梗霉膨大细胞的其他代谢机理提供了可行的方法,满足后续研究的需要.

摘要： 目的 分析采用密度梯度离心进行精液处理时,不同离心力和离心时间对精子回收率的影响.方法 选取2019年6月至2020年12月在邢台市第三医院行精液常规检测的84例不育患者作为研究对象.其中36例精子浓度低于15×106/mL而精子活动率正常(低浓度患者),48例精子活动率低于40％而精子浓度正常(低活动率患者).按照密度梯度离心操作时的不同离心条件,将离心力300×g、离心时间20min处理的精液纳入A组,400×g 、20min处理的纳入B组,500×g、10min处理的纳入C组,分析比较各组精子处理后的精子情况.结果 低浓度患者处理后B组和C组的精子浓度及回收率均高于A组,差异具有统计学意义(P＜0.05);而B组和C组的回收率比较,差异无统计学意义(P＞0.05);但C组的精子活动率明显低于A组和B组,差异具有统计学意义(P＜0.05).低活动率患者处理后B组精子浓度、精子活动率及精子回收率均高于A组,差异具有统计学意义(P＜0.05);B组活动率及精子回收率高于A组,差异具有统计学意义(P＜0.05);但是C组精子活动率及回收率与B组、A组比较,差异无统计学意义(P＜0.05).结论 不同离心条件会对精子的浓度、活动率及回收率有一定影响,应根据精液情况选择合适的离心条件,从而提高优化处理的效果.

摘要： 目的 探讨宫腔内人工授精(IUI)中,精子参数对密度梯度离心法进行精液优化处理回收率的影响.方法 选取2017年5月至2019年5月邢台市第三医院生殖医学科行IUI的236例男性不育患者作为研究对象.按照精液回收率分为三组:低回收率组(≤30％),中回收率组(31％ ～50％)组,高回收率(≥51％)组,分析影响回收率的精液参数,并分别按不同精液体积、精子浓度、精子活动率、前向运动精子总数,分低、中、高三组,分析对精子优化回收率的影响.结果 不同回收率组男性年龄比较差异无统计学意义(P>0.05),低回收率组的精液体积、前向运动精子数均高于其他两组,中回收率组精液体积及前向运动精子数高于高回收率组,差异均具有统计学意义(均P<0.05);低体积组的男性年龄及精子回收率均高于其他两组,中体积组精子回收率高于高体积组,差异均具有统计学意义(均P<0.05);中浓度组的患者年龄低于低浓度组和高浓度组,低浓度组精子回收率高于其他两组;低活动率组的男性年龄高于中活动率组,高活动率组的精子回收率低于中活动率组,差异均具有统计学意义(均P<0.05);低PR组的男性年龄及回收率高于其他两组,高PR组精子回收率明显低于其他两组,差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 精液体积、浓度、活动率及前向运动精子总数均在一定程度上影响精子回收率,可以根据处理前的精液参数预测优化精子后的回收率,从而寻找更合适的优化方法,提高精子回收率,进一步提高IUI的成功率提供理论依据.

摘要： [背景]噬藻体是一类特异性侵染蓝藻的病毒,广泛存在于淡水和海水水体中,参与调控宿主蓝藻的丰度和种群密度,被认为是潜在的蓝藻水华生物防控工具.但目前的研究多集中于海洋噬藻体,对淡水噬藻体的生物学特性和结构生物学等研究较少.[目的]分离更多种类的淡水噬藻体,为研究淡水噬藻体的三维结构、侵染机制、与宿主的共进化关系,及其在蓝藻水华防治中的应用提供理论基础.[方法]采集中国科学技术大学西校区内景观湖也西湖水华暴发水域的水样,利用液体培养基和双层固体平板法对17种宿主蓝藻进行筛选,通过NaCl-PEG沉淀法和氯化铯密度梯度离心分离和纯化噬藻体,并利用负染电镜观察噬藻体的形态,同时采用梯度稀释法测定裂解液的效价.[结果]发现也西湖的水样可特异性侵染本实验室分离自巢湖的一株拟鱼腥藻Pan.侵染后的裂解液中存在4株形态各异的噬藻体,包括1株短尾噬藻体和3株长尾噬藻体,其中包括首次发现的1株含有非典型长轴状头部结构的淡水噬藻体.[结论]也西湖作为巢湖流域的一个小型水体,具有与巢湖类似的水华蓝藻及其噬藻体分布谱,因此可以用于模拟大型湖泊进行相关分子生态学和生物防控的研究.

摘要： 2019年高考理科综合将坚持把创新思维和学习能力的考查渗透到命题全过程中,向学生提供新知识或原有知识的延伸拓展信息,考查学生的探究能力和创新精神。生物学科要求学生能够对生物学问题进行探究,包括提出问题、做出假设、制订和实施计划、得出结论、科学表达等,同时要求学生具备实验设计、实验结果预测的能力。

摘要： 目的:观察雌二醇(E2)对体外培养骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)分化及凋亡的影响。方法：密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞,流式细胞分析、FITC-荆豆凝集素Ⅰ、DiI-乙酰化低密度脂蛋白荧光双染鉴定。单个核细胞培养7d后进行实验分组,分为对照组和雌二醇治疗组。结论：雌二醇可抑制EPCs凋亡、促进EPCs体外血管新生。

摘要： 精子处理和优选以去除其他精液成分和获得活动精子是ART成功的关键步骤。常用的精子处理方法是上游和密度梯度离心,在精子质量较差的情况下,用于ICSI的精子常通过直接离心获得。在评价优选后精子的指标中,精子活动率和形态是既往主要的评价指标。研究表明,上游可获得更好活动力和形态的精子,而梯度离心回收率较高。ART中精子优选不但要考虑获得高比例的活动精子和正常形态精子，更应考虑是否负筛选掉遗传物质异常的精子。

摘要： 间充质干细胞(MSCs，mesenehymal stem cells)是目前组织工程研究中重要的种子细胞来源，具有广泛的应用前景。本实验中，我们从人胎盘基蜕膜分离得到间充质于细胞(placental decidua basalis-mesenchymal stem cells，PDB-MSCs)，并探讨其在低氧无血清培养环境下的牛物学特性。联合运用酶消化和密度梯度离心的方法从人胎盘基蜕膜分离MSCs；在体外构建低氧(1％O2)和无血清的培养模型(0％FBS/H-DMEM)；利用MTT法、集落形成单位(CFU-F，Colony-forming unit-fibroblast assay)和凋亡流式试剂盒检测PDB-MSCs在低氧无血清环境下的增殖、克隆形成以及凋亡情况。实验发现，PDB-MSCs具有与骨髓MSCs(BM-MSCs，bone marrow derived mesenehymal stem cells)相似的形态特征，为长梭形；同时表达与BM-MSCs相似的细胞表型，并且部分表达SSEA-1，SSEA-3，SSEA-4，TRA-1-60，TRA-1-81，Oct-4等只存在于胚胎干细胞的相关表型；此外PDB-MSCs可以分化为成骨、成脂和成软骨样细胞，具有多向分化潜能。在96h内PDB-MSCs能较好的耐受低氧无血清的培养环境，与常规培养比，细胞没有发生显著性的凋亡(P>0.05)；低氧促进PDB-MSCs增殖和克隆的形成(P<0.01)，但PDB-MSCs在低氧无血清的培养环境下，生长缓慢，克隆形成能力明显降低(P<0.01)。总的来说，胎盘是MSCs的一个新来源，优势明显，PDB-MSCs在一定程度上耐受低氧和无血清培养环境，可以作为缺血相关组织工程产品种子细胞的。

摘要： 进行了从鸭胚成纤维细胞(DEF)培养物中分离纯化鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)的研究.结果表明:首先采用标称孔径为0.22μm和标称截留分子量为1000K超滤膜依次对病毒液依次进行过滤和浓缩、然后用Sepharose4B层析介质进行过柱处理、最后通过30﹪、40﹪、50﹪、60﹪(W/W)蔗糖密度梯度离心的方法可以提纯得到多量的DEV-CHv完整病毒粒子.

摘要： 目的:分析不液化精液行夫精人工授精经密度梯度离心处理后的精液质量、精子回收率、达标率及妊娠率,与液化正常精液作比较,探讨精液不液化对AIH的影响以及AIH前纠正精液不液化的必要性. 方法:回顾性分析2014年1月至2016年12月1553例共2525周期AIH资料,根据精液检查结果,分为液化组及不液化组,其中液化组2350周期,不液化组175周期,比较两组处理后精子质量、精子回收率、不达标率及妊娠率. 结果:两组精液密度梯度离心处理后精液量、存活率无显著性差异,不液化组处理后的前向运动精子总数(24.92±15.38×106)低于液化组(29.59±17.66×106)(P＜0.05),液化组不达标率(7.1％)显著低于不液化组(12.0％)(P＜0.05);不液化组精子回收率(31.87±15.21％)低于液化组(38.54±12.64％)(P＜0.05);不液化组AIH周期妊娠率(9.14％)、累积妊娠率(14.55％)均低于正常组(12.60％、20.51％)(P＜0.05). 结论:精液液化状态与AIH精浆优化后的精液质量、精子回收率、精液达标率、妊娠率相关.行AIH前纠正精液不液化可能有助于提高精浆优化后精液质量,提高精子回收率及妊娠率.

摘要： 本发明公开了一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比的浓度梯度溶液，然后将待测花粉混入10%的蔗糖溶液中，注入离心管底。接着采用层铺法配制20~70%的蔗糖密度梯度离心液。在20°C下，以4000~10000rpm速度，离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置，取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度蔗糖溶液中的吸光度标准曲线，以该曲线为参照，采用分光光度计在290nm波长下，测定花粉悬浮所在层蔗糖溶液的吸光度值，根据下列公式计算花粉密度：

摘要： 本发明提供了一种精子密度梯度离心液及其制备方法，所述精子密度梯度离心液包括溶液1和溶液2；所述溶液1由包括基础液和以下原料的组分制备而成：Percoll 40‑50wt％；辅酶Q10 0.5‑2.0mg/L；HEPES 5‑15mmol/L；所述溶液2制备原料与溶液1相同，不同之处在于Percoll的质量分数为80‑98％。上述精子密度梯度离心液能够减小精子在离心过程中受到的活性氧自由基的损伤，优选精子，保持精子的完整性和活力。

摘要： 本发明涉及一种碘克沙醇密度梯度离心纯化虫卵的方法，属于虫卵纯化技术领域。本发明所述方法包括以下步骤：1)将含虫卵样品进行破碎和均质；2)将匀浆与次氯酸钠水溶液混合进行消化，过筛，得到滤液；3)将滤液进行离心，得到的沉淀用饱和食盐水进行悬浮，离心，得到上清液；4)将上清液与水混合，离心，得到第一沉淀；5)将第一沉淀和次氯酸钠水溶液混合，在冰上放置，离心，得到第二沉淀；6)将第二沉淀溶于TE缓冲液中，得到TE虫卵悬浮液，进行碘克沙醇密度梯度离心，得到纯化虫卵。本发明所述方法能够从粪便和盲肠内容物中纯化出高纯度虫卵，这些高纯度虫卵可进一步用于体外培养、疫苗研发和分子生化研究。

摘要： 本发明公开了一种基于密度梯度离心和超速离心的外泌体的提取方法，包括以下步骤：采集人外周静脉血，并使其在37°C下凝结0.5‑1.5小时而不进行抗凝；在常温下进行1500‑2500g离心5‑15min获得血清；4°C，血清以2500‑3500g离心5‑15min；取上清，上清液采用无菌PBS以1:0.5‑1.5的比例进行稀释；4°C，15000‑20000g条件下离心去除大直径多囊泡体；取上清，4°C，100000‑150000g条件下离心收集沉淀；用无RNAse水重悬沉淀；4°C，140000‑200000g条件下离心收集沉淀。本发明步骤简单，缩短了实验过程，适合实验室使用，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种改良密度梯度离心法测定花粉密度的方法。首先将蔗糖溶于水中，配制成不同质量百分比的浓度梯度溶液，然后将待测花粉混入10%的蔗糖溶液中，注入离心管底。接着采用层铺法配制20~70%的蔗糖密度梯度离心液。在20°C下，以4000~10000rpm速度，离心5~15min，待花粉达到沉降平衡后静置，取花粉悬浮所在层相应浓度的蔗糖溶液，绘制待测花粉在该相应浓度蔗糖溶液中的吸光度标准曲线，以该曲线为参照，采用分光光度计在290nm波长下，测定花粉悬浮所在层蔗糖溶液的吸光度值，根据下列公式计算花粉密度：

摘要： 本发明涉及一种病毒密度梯度离心纯化装置。具体地，本发明提供一种病毒密度梯度离心纯化装置，所述的装置包括环形管路和连续流密度梯度离心机，所述的连续流密度梯度离心机包括连续流密度梯度离心转子。本发明所述的病毒密度梯度离心纯化装置在用于蔗糖密度梯度纯化病毒过程中，能够简单方便及时将连续流密度梯度离心转子中的气泡去除，尤其能够将蔗糖密度梯度中气泡去除，从而避免气泡引起转子的震动和转子内部蔗糖密度梯度的分布，从而能够制备高质量的病毒疫苗。

摘要： 本发明公开了基于密度梯度离心提取细胞内体的方法，所述方法包括以下步骤：将含有内体的细胞膜破坏获取去核后上清液，将去核后上清液缓慢添加至蔗糖梯度溶液液面，然后进行离心，离心结束后从管底自溶液密度由高至低收集分离液即可获得含有内体的溶液，所述蔗糖梯度溶液为含有不同浓度梯度的蔗糖溶液，所述蔗糖溶液的浓度范围为15％‑40.6％。本发明方法可以更快速获得更高纯度的内体，获得的内体可以用于研究经内体途径内吞的各类分子。

摘要： 本实用新型公开了一种用于密度梯度离心的离心管，包括管帽、离心管主体、母接头、公接头，所述离心管主体上端为开放式开口，且离心管主体上部外壁设有外螺纹口，外螺纹口上套有管帽，离心管主体侧壁底部开设有母接头，母接头上开设有螺纹接口，母接头上套有公接头，公接头内开设有内螺纹槽。本实用新型封闭出口方式均为螺纹，相对于其他产品更能保障形成密闭的环境，在高速离心过程中减少发生漏液情况的可能性；并且操作简单方便，无需依赖实验人员的操作熟练程度；无须热封器辅助部件，降低实验成本，降低操作难度，减少操作步骤；更易控制样品体积，增加样品回收率，减少目的产物丢失。

摘要： 本实用新型涉及分离技术领域，具体涉及一种密度梯度离心溶液快速收集检测装置。该装置包括：通过软管依次连接的密度梯度离心管、蠕动泵、二极管阵列检测器和收集管；其中，所述二极管阵列检测器上设置有数字显示器。所述密度梯度离心溶液快速收集检测装置可以快速在线收集密度梯度离心后的区带溶液，可防止密度梯度离心后的蛋白或组织在常温下降解，可适用于所有应用密度梯度离心法的生物实验。

摘要： 本实用新型涉及一种病毒密度梯度离心纯化装置。具体地，本实用新型提供一种病毒密度梯度离心纯化装置，所述的装置包括环形管路和连续流密度梯度离心机，所述的连续流密度梯度离心机包括连续流密度梯度离心转子。本实用新型所述的病毒密度梯度离心纯化装置在用于蔗糖密度梯度纯化病毒过程中，能够简单方便及时将连续流密度梯度离心转子中的气泡去除，尤其能够将蔗糖密度梯度中气泡去除，从而避免气泡引起转子的震动和转子内部蔗糖密度梯度的分布，从而能够制备高质量的病毒疫苗。