双抗体夹心ELISA

摘要： 【目的】制备抗大片形吸虫组织蛋白酶L1(rFgCat L1)特异性单克隆抗体,并构建其双抗体夹心ELISA检测方法。【方法】用1 mg/mL rFgCat L1蛋白分4次对5只BALB/c小鼠进行免疫,分离小鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合构建杂交瘤细胞,筛选强阳性杂交瘤细胞株,每只小鼠腹腔注射1×10^(6)个细胞制备单克隆抗体。ELISA法检测抗体效价及抗原表位,Western blotting法鉴定抗体亚型和特异性;结合抗rFgCat L1多克隆抗体构建双抗体夹心ELISA检测方法,并检测其敏感性和特异性;用建立的方法对20份阴性血清及阳性血清对照进行检测,筛选其阴阳临界值,并用47份山羊阳性血清及47份奶牛阳性血清对所构建的双抗体夹心ELISA方法进行验证。【结果】免疫后,4只小鼠血清中抗体效价均>10^(4);取小鼠脾细胞与SP2/0融合后,共筛选到8株阳性杂交瘤细胞株,其中5D5和7G6为可稳定分泌抗体的强阳性株,抗体效价分别达2^(9)和2^(10),腹水效价分别达10^(7)和10^(8)。经Western blotting鉴定2株抗体均为IgG1型,轻链为Kappa型,均可特异性结合大片形吸虫排泄-分泌产物(excretory-secretory product,ESP)。由于2株抗体识别相同抗原位点,对比2株单抗的抗体效价,选择以7G6作为捕获抗体,抗rFgCat L1多克隆抗体作检测抗体构建双抗体夹心ELISA法。双抗体夹心ELISA法条件为:7G6以2μg/mL浓度包被,抗rFgCat L1多克隆抗体检测浓度为25μg/mL,酶标二抗稀释度为1∶4000,5%脱脂奶粉封闭,显色时间为25 min。经验证,该方法可识别的最低抗原浓度为0.625μg/mL,并且可特异性识别大片形吸虫抗原。利用构建的双抗体夹心ELISA方法对阳性的奶牛和山羊血清样本进行抗原检测,抗原检出率分别为72.3%及78.7%。【结论】本研究成功制备抗rFgCat L1单克隆抗体并构建大片形吸虫病双抗体夹心ELISA检测方法,结果可为研发低成本、快速诊断试剂盒提供良好的理论依据及物质基础。

摘要： 为了研究捻转血矛线虫排泄分泌蛋白生物素脂酰结合和2-氧酸脱氢酶酰基转移酶(BLAODA)在捻转血矛线虫病诊断中的应用,以重组捻转血矛线虫BLAODA为免疫原,通过杂交瘤细胞技术,筛出4株稳定分泌抗BLAODA单克隆抗体细胞株,分别命名为1B2、1G4、2E3和5B4。将这4株杂交瘤细胞分别接种小鼠腹腔,制备腹水,用层析柱纯化抗体并建立双抗体夹心ELISA方法。结果显示:筛选出的1B2、1G4、2E3和5B4细胞株产生的抗体效价高、特异性强,其抗体亚型均为Ig G1型,轻链均为kappa型,纯化的小鼠腹水的效价均可达1∶2^(22);基于抗捻转血矛线虫BLAODA的单抗1B2、5B4建立了双抗体夹心ELISA检测方法,其敏感性为90.6%,特异性为90.6%。本研究获得了捻转血矛线虫抗BLAODA单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA方法,为捻转血矛线虫诊断试剂盒的开发奠定了基础。

摘要： 目的:制备抗甲型流感病毒单克隆抗体(mAbs)并分析抗体反应特性,评价mAbs在免疫荧光(IFA)和细胞免疫化学染色中的应用,初步建立H1N1流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA方法.方法:取A/PR/8/34(H1N1)毒种接种于鸡胚尿囊腔,培养72 h后收获尿囊液,甲醛灭活,蔗糖密度梯度超离心法纯化,用于mAbs免疫原开发.病毒颗粒免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,ELISA和IFA筛选稳定分泌抗甲型流感病毒mAbs的杂交瘤细胞株.ELI-SA、IFA、血凝抑制试验(HI)和中和试验(MN)分析抗体反应特性.依据mAbs特性建立细胞IFA试验、HI试验和双抗体夹心ELISA方法.结果:共制备13株mAbs,其中6株(PR8-10、PR8-19、PR8-20、PR8-26、PR8-28、PR8-30)具有较高血凝抑制活性,血凝抑制滴度≤3μg/ml.PR8-13和PR8-15无中和活性,其他11株均具有中和活性.部分mAbs可用于IFA试验和细胞免疫化学染色.依据PR8-24和PR8-25抗体反应特性初步建立H1N1流感病毒抗原检测的双抗体夹心ELISA法.结论:制备出可用于IFA试验和细胞免疫化学染色的A/PR/8/34(H1N1)mAbs,初步建立了快速H1N1检测的ELISA方法,为H1N1流感病毒或病毒血凝素蛋白快速定量方法建立提供依据.

摘要： 为建立猪附红细胞体双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,本研究以抗猪附红细胞体单克隆抗体为捕获抗体,兔抗猪附红细胞体多克隆抗体为检测抗体,优化工作条件,建立猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法.结果显示:该方法的最佳工作条件为:捕获抗体包被浓度为5.42 g/mL,检测抗体浓度为6.84 g/mL,酶标二抗的稀释倍数为1∶2000;判定标准为:当检测样品OD492＞0.290为阳性;该方法与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒等常见猪病原微生物均无交叉反应,特异性好,敏感度可达3.25 mg/L,其重复性变异系数均小于10％;平行检测68份猪临床样品,DAS-ELISA检测的阳性率为29.4％,比血涂片染色镜检阳性率(19.1％)高10.3％.本研究所建立的猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法可以作为猪附红细胞体的快速检测方法.

摘要： 目的 探索即时、快速、准确的新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原检测方法,提高新型冠状病毒感染者检出率,并建立2019-nCoV的S蛋白特异性检测方法.方法 本研究利用ELISA方法对前期研发的2019-nCoV基因工程单克隆抗体(mAb)进行配对检测,从中挑选出最优检测抗体组合,建立了新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心ELISA方法,并对检测方法进行条件优化.结果 本实验室前期筛选出的12株2019-nCoV基因工程单克隆抗体对2019-nCoV S蛋白具有良好的结合活性,是抗原检测候选抗体.本研究所建立的新型冠状病毒抗原检测双抗体夹心ELISA方法可快速有效的检测2019-nCoV S蛋白,灵敏度较高,对S蛋白检出限小于1 ng/ml.结论 本研究所建立的抗原检测方法可特异性检测2019-nCoV的S蛋白,为COVID-19感染的早期、敏感、特异诊断提供了有意义的参考.

摘要： 目的:制备柯萨奇病毒A组5型(CV-A5)多克隆抗体和单克隆抗体,建立CV-A5抗原定量ELISA检测方法,用于CV-A5疫苗研制中抗原定量及质量控制.方法:纯化后的CV-A5全病毒颗粒作为免疫原,制备兔多克隆抗体并免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备、中和试验和ELISA法筛选获得CV-A5单克隆抗体.建立CV-A5抗原检测方法,确定线性范围,验证其准确度、精密度、稳定性、特异性;检测CV-A5病毒颗粒纯化过程样品抗原含量.结果:制备了高效价的CV-A5兔多克隆抗体及单克隆抗体并建立ELISA抗原检测法,检测范围为15.6～1 000.0 ng/ml;高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率为88.5％～128.7％;重复性验证Cv分别为1.3％、3.2％、1.2％;中间精密度验证CV分别为2.1％、2.2％和3.5％;耐用性验证回收率为97.4％～127.6％;包被微孔板37°C放置3 d,样品回收率为101.7％～106.9％;特异性验证结果显示抗原检测方法仅识别CV-A5抗原,与CV-A5以外的抗原均无交叉反应.结论:建立的CV-A5 ELISA抗原检测法可用于纯化过程样品的抗原检测,为含CV-A5的手足口病(HFMD)多价疫苗的研制提供质量控制方法.

摘要： 建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑.以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(感染多房棘球绦虫)和阴性对照犬犬粪.结果显示,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体;对该方法的灵敏度进行检测,阳性粪样稀释至1:10000时仍显示为阳性;在感染动态分析中,该方法最早可在犬感染72 h后,最迟6 d后检测到多房棘球绦虫粪抗原.表明建立的方法可用于诊断犬多房棘球绦虫感染,为后期研制犬多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础.

摘要： 为建立奶制品中单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,分别制备抗LM的单克隆抗体和家兔多克隆抗体,以方阵滴定法确定最佳单抗包被浓度和多抗工作浓度,从而建立LM的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。结果表明,抗LM的单抗和多抗效价分别为1∶128000和1∶2560000,分别以抗LM单抗和多抗作为捕获抗体与检测抗体;经优化后选择抗LM单克隆抗体稀释至1∶1000、抗LM兔多抗稀释至1∶4000建立ELISA检测方法。结果显示:所建立的双抗体夹心ELISA方法对LM的最低检测限可达到1×10^(5)CFU/mL,与常见的10种食源性病原微生物均无交叉反应,表明该方法的特异性良好。重复性试验结果显示,该方法的批内、批间变异系数均小于10%,表明该方法具有良好的重复性。模拟样品试验结果表明,在牛奶样本中添加LM至细菌浓度为1×10^(0)CFU/mL时,增菌培养10 h后用本方法即可检出阳性;牛奶样本的添加回收试验进一步表明回收率可达70.22%~91.59%,提示本方法可有效用于牛奶样本中LM的检测。综上,利用抗LM的单抗和兔多抗成功建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可为牛奶中LM的监测提供技术支撑。

摘要： 为建立一种快速检测牛细小病毒(BPV)的方法,本研究通过PCR扩增BPV VP2基因,构建pProHTa-BPV-VP2重组表达载体,转化后获得重组大肠杆菌,通过诱导表达获得VP2重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠(100 μg/只),经细胞融合、克隆和筛选共获得了5株阳性杂交瘤细胞株,分别命名为5G9、2B5、6A3、7E8和2B6.经鉴定,其分泌抗体亚型分别为IgG2a、IgG2b、IgM、IgM和IgA.间接免疫荧光结果显示,5株单克隆抗体(MAb)与BPV均可发生特异性反应.同时,将纯化后的BPV VP2重组蛋白免疫新西兰兔,制备兔抗BPV VP2多抗.利用制备的2B5作为检测抗体,BPV VP2多抗作为捕获抗体,初步建立检测BPV的双抗体夹心ELISA方法.该方法的特异性试验结果显示,除BPV外,与牛轮状病毒、猪伪狂犬病毒、猪传染性肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、牛病毒性腹泻病毒均不发生反应.敏感性试验结果显示,该方法对BPV最低检出量为3.125×102.8TCID50/mL.重复性试验结果显示,该方法批内、批间变异系数均小于10％.利用该方法对269份临床猪腹泻病料样品进行检测,检出BPV阳性样品14份,与PCR方法符合率达100％.综上,本研究利用抗BPV VP2蛋白的MAb和兔抗BPV VP2多抗建立了双抗体夹心ELISA方法,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为BPV感染的快速诊断提供一种有效的检测方法,并为流行病学研究和疫病防控提供一种可靠的手段.

摘要： 用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体，用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282μg／mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1∶10 000，酶标抗体工作浓度为1∶8 000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为1h，多克隆抗体作用时间为1h，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以D450nm≥0.130作为阴阳临界值。特异性检测试验表明，用该ELISA方法分别检测大片形吸虫ES抗原、胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原，结果表明用该ELISA方法检测以上病原抗原时均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93 ng／mL。用该方法检测了247份临床样品，抗原检出率为23.89％。该方法的建立为大片吸虫的检测及流行病学调查提供了有效工具。

摘要： 用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体，用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282μg／mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1∶10 000，酶标抗体工作浓度为1∶8 000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为1h，多克隆抗体作用时间为1h，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以D450nm≥0.130作为阴阳临界值。特异性检测试验表明，用该ELISA方法分别检测大片形吸虫ES抗原、胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原，结果表明用该ELISA方法检测以上病原抗原时均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93 ng／mL。用该方法检测了247份临床样品，抗原检出率为23.89％。该方法的建立为大片吸虫的检测及流行病学调查提供了有效工具。

摘要： 用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体，用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282μg／mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1∶10 000，酶标抗体工作浓度为1∶8 000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为1h，多克隆抗体作用时间为1h，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以D450nm≥0.130作为阴阳临界值。特异性检测试验表明，用该ELISA方法分别检测大片形吸虫ES抗原、胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原，结果表明用该ELISA方法检测以上病原抗原时均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93 ng／mL。用该方法检测了247份临床样品，抗原检出率为23.89％。该方法的建立为大片吸虫的检测及流行病学调查提供了有效工具。

摘要： 用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体，用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282μg／mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1∶10 000，酶标抗体工作浓度为1∶8 000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为1h，多克隆抗体作用时间为1h，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以D450nm≥0.130作为阴阳临界值。特异性检测试验表明，用该ELISA方法分别检测大片形吸虫ES抗原、胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原，结果表明用该ELISA方法检测以上病原抗原时均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93 ng／mL。用该方法检测了247份临床样品，抗原检出率为23.89％。该方法的建立为大片吸虫的检测及流行病学调查提供了有效工具。

摘要： 用单克隆抗体7D1作为包被ELISA板抗体，用大片形吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片形吸虫ES抗原(分泌排泄抗原)的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282μg／mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1∶10 000，酶标抗体工作浓度为1∶8 000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为1h，多克隆抗体作用时间为1h，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以D450nm≥0.130作为阴阳临界值。特异性检测试验表明，用该ELISA方法分别检测大片形吸虫ES抗原、胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原，结果表明用该ELISA方法检测以上病原抗原时均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93 ng／mL。用该方法检测了247份临床样品，抗原检出率为23.89％。该方法的建立为大片吸虫的检测及流行病学调查提供了有效工具。

摘要： 目的：制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法，对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。rn 方法：将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化，建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。rn 结果：经细胞融合、筛选及克隆化，共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株，其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法，该方法灵敏度达到870U/L，平均回收率为107.81％，批内变异系数平均为6.7％，批间变异系数平均为9.3％，可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。rn 结论：成功地制备了抗青霉素的mAb，并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。

摘要： 目的：制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法，对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。rn 方法：将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化，建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。rn 结果：经细胞融合、筛选及克隆化，共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株，其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法，该方法灵敏度达到870U/L，平均回收率为107.81％，批内变异系数平均为6.7％，批间变异系数平均为9.3％，可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。rn 结论：成功地制备了抗青霉素的mAb，并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。

摘要： 目的：制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法，对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。rn 方法：将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化，建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。rn 结果：经细胞融合、筛选及克隆化，共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株，其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法，该方法灵敏度达到870U/L，平均回收率为107.81％，批内变异系数平均为6.7％，批间变异系数平均为9.3％，可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。rn 结论：成功地制备了抗青霉素的mAb，并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。

摘要： 目的：制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法，对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。rn 方法：将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化，建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。rn 结果：经细胞融合、筛选及克隆化，共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株，其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法，该方法灵敏度达到870U/L，平均回收率为107.81％，批内变异系数平均为6.7％，批间变异系数平均为9.3％，可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。rn 结论：成功地制备了抗青霉素的mAb，并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。

摘要： 目的：制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法，对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。rn 方法：将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠，应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸硫酸铵法纯化，并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化，建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。rn 结果：经细胞融合、筛选及克隆化，共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株，其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法，该方法灵敏度达到870U/L，平均回收率为107.81％，批内变异系数平均为6.7％，批间变异系数平均为9.3％，可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。rn 结论：成功地制备了抗青霉素的mAb，并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。

摘要： 一种基于单克隆抗体的检测食品中李斯特菌属的双抗体夹心ELISA法，属于免疫分析技术领域。本发明用原核表达的单增李斯特菌P60蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠，经免疫、融合、多重筛选得到15株李斯特菌属特异性单克隆抗体，分别标记辣根过氧化物酶HRP，并以单增李斯特菌CMCC54003为目标物进行两两配对。经筛选不同配对的交叉反应，以2G7为包被抗体、2H8‑HRP为酶标抗体建立夹心ELISA方法对包括单增李斯特菌在内的李斯特菌属均有交叉反应。对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌没有交叉反应。本发明制备了李斯特菌属特异性的单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA法，为食品中李斯特菌属的特异性快速检测提供了技术手段。

摘要： 本发明涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用，该双抗体夹心ELISA方法可以更为准确地检测RSV病毒滴度，同时提供直观数据，其分别选择融合前特异性抗体AM14作为包被抗体，选择D25作为检测抗体，包被抗体浓度为1000ng/孔，检测抗体稀释比例为1:3000。本发明建立的双抗体夹心ELISA方法与人轮状病毒、人3型副流感病毒以及牛血清均无交叉反应，特异性良好。本发明用该方法对不同稀释倍数的RSV病毒进行多次重复试验，结果证明该方法CV＜10%。本发明重复性、广谱性、灵敏度良好，具有易操作，周期短的特点。

摘要： 本发明公开了一种用于检测番鸭呼肠孤病毒的单链抗体、嵌合抗体和双夹心ELISA检测试剂盒，所述单链抗体的序列如SEQ ID No:1所示。所述嵌合抗体包括所述的单链抗体和鸭IgG恒定区Fc段基因。所述双夹心ELISA检测试剂盒包括包被有捕获抗体的酶标板、检测抗体和酶标抗体；其中，所述捕获抗体为如上所述的嵌合抗体；所述检测抗体为鼠抗番鸭呼肠孤病毒多克隆抗体；所述酶标抗体为HRP标记的羊抗鼠IgG。本发明通过提供一种特异性识别番鸭呼肠孤病毒的抗体，并在此基础上通过鸭IgG恒定区Fc段基因进行修饰，降低排斥作用，提高重组后的嵌合抗体对于抗原的针对性识别，提高对番鸭呼肠孤病毒识别的敏感性。

摘要： 本发明公开了犬I型腺病毒单克隆抗体/多克隆抗体、双抗夹心ELISA试剂盒和应用。本发明用CAdV‑1作为免疫原分别免疫小鼠和家兔，最终获得了1株特异性单抗并制备得到特异性兔源多抗；进一步采用单克隆抗体和酶标多抗以及筛选的最佳反应条件建立了双抗夹心ELISA检测方法。采用本发明所建立的双抗夹心ELISA检测方法具有较好的批内和批间重复性，敏感性和特异性。与RT‑PCR方法比较，本发明双抗夹心ELISA方法的敏感性为93.75％，特异性为90.9％，符合率为92.86％，表明本发明所建立的CAdV‑1抗原双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，能用于CAdV‑1的临床检测。

摘要： 一种基于单克隆抗体的检测食品中李斯特菌属的双抗体夹心ELISA法，属于免疫分析技术领域。本发明用原核表达的单增李斯特菌P60蛋白免疫8周龄BALB/c小鼠，经免疫、融合、多重筛选得到15株李斯特菌属特异性单克隆抗体，分别标记辣根过氧化物酶HRP，并以单增李斯特菌CMCC54003为目标物进行两两配对。经筛选不同配对的交叉反应，以2G7为包被抗体、2H8-HRP为酶标抗体建立夹心ELISA方法对包括单增李斯特菌在内的李斯特菌属均有交叉反应。对测试的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、大肠杆菌O157、沙门氏菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲杆菌、结肠弯曲杆菌没有交叉反应。本发明制备了李斯特菌属特异性的单克隆抗体并建立了双抗体夹心ELISA法，为食品中李斯特菌属的特异性快速检测提供了技术手段。

摘要： 本发明提供了一种快速检测Aβ42的双抗体夹心ELISA试剂盒，具体包括：包被抗体：单克隆抗体BJ‑1；检测抗体：单克隆抗体6E10；所述单克隆抗体BJ‑1由2011年7月1日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国，武汉，武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：C201155的杂交瘤细胞株BJNA分泌获得；采用本发明的Aβ42检测试剂盒，可以高效、灵敏、稳定地测定脑脊液中Aβ42的含量。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗体夹心ELISA试剂盒。本发明的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的双抗夹心ELISA试剂盒，包括：包被有兔抗SADS‑CoV N蛋白多克隆抗体的酶标板、HRP标记的鼠抗SADS‑CoV N蛋白单克隆抗体。还包括酶标二抗、封闭液、稀释液、洗涤液、显色液以及终止液。本发明所建立的双抗体夹心ELISA试剂盒具有较好的特异性、敏感性、批内和批间重复性。该试剂盒最低病毒的检出量为10‑4.42TCID50/0.1mL，并且不与PEDV、TGEV和PDCoV反生反应，批内和批间重复变异系数小于10%。与RT‑PCR方法比较，本发明双抗夹心ELISA试剂盒检测的符合率为93.93％。本发明所建立的SADS‑CoV抗原双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性，能用于SADS‑CoV的临床检测。

摘要： 本发明公开的是一种检测非洲猪瘟病毒的双抗体夹心ELISA诊断试剂盒及其方法，试剂盒包括包被有捕获抗体的酶标板、P30抗原、抗P30蛋白多克隆抗体、HRP标记羊抗兔酶标抗体、阴性对照、显色液、洗涤液、终止液、封闭液，构建重组质粒pET‑32a‑P30，并表达和纯化，免疫获得抗P30蛋白的多克隆抗体，以rP30、抗P30蛋白的多克隆抗体和单克隆抗体为材料，通过对封闭液、抗原孵育时间、抗体孵育时间及显色时间优化，在实验室条件下初步建立了一套检测ASFV血样抗原的双抗体夹心ELISA诊断体系，可以有效检出ASFV，为非洲猪瘟防控提供了新的技术手段，检测快速、准确且特异性强。

摘要： 本发明涉及一种检测生物样本中黄原胶含量的双抗体夹心ELISA方法，属于免疫分析技术领域。本发明提供的一种生物样本中黄原胶含量的双抗体夹心ELISA检测方法，包括以下步骤：1)抗体包被；2)封闭；3)加样品；4)加酶标抗体；5)加显色液；6)加终止液；7)测定：用酶标仪测定波长450nm处的OD值；该方法具有较高的灵敏度，对黄原胶具有较好的特异性，定量准确，简单易用的特点，可用于生物样本中黄原胶含量的检测，具有实际应用价值，具有良好的推广性。

摘要： 本发明公开了一种基于改良双抗体夹心ELISA法的尖吻蝮蛇蛇毒检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：步骤一：初步提纯，采用饱和硫酸铵方法初步纯化马抗尖吻蝮蛇血浆中的马抗尖吻蝮蛇IgG；步骤二：重复提纯，采用亲和层析法对马抗尖吻蝮蛇IgG进一步层析纯化，收集目标峰对应的抗体，再次过柱层析提纯，得到较纯的马抗尖吻蝮蛇IgG；步骤三：包被抗体，取部分步骤二纯化后的抗体作为包被抗体，包被到48孔板中；步骤四：标记抗体，取部分步骤二纯化后的抗体与辣根过氧化物酶(HRP)进行反应获得辣根过氧化物酶标记抗体(HRP‑IgG)，以此作为夹心抗体；步骤五：包装试剂盒，将步骤三中包被好的48孔板真空密封后与步骤四的夹心抗体装入盒中备用，试剂盒制备完成，可用于检测人或动物血清中是否含有尖吻蝮蛇毒素。