多房棘球绦虫

摘要： 泡型包虫病(多房棘球蚴病)是由多房棘球绦虫的幼虫(多房棘球蚴)引起的一种危害严重的人兽共患寄生虫病。因其生活史复杂,感染潜伏期长,术后并发率高,难以根治,故有“虫癌”之称,对疫区人畜健康危害严重,被世界卫生组织列为世界十大寄生虫病之一。本文对该病的病原生活史、国内外流行情况和最新检测技术等研究进展进行了讨论,为进一步明确该病病原生态学和流行情况,研发出更加快速的诊断检测技术和精准的防治措施,有力保障人畜安全和提高疫区公共卫生水平提供参考。

摘要： 目的 设计、构建多房棘球绦虫多表位疫苗GILE,并表达、纯化该重组蛋白。方法 基于课题组前期对多房棘球绦虫EmEMY162、EmLAP、EmGLUT1优势抗原表位鉴定的结果,通过SWISS-MODEL、pyMOL、SOPMA、VMD生物信息学软件预测GILE的结构及疏水性,设计多表位疫苗GILE。合成GILE序列,插入质粒pCzn1中,构建重组质粒pCzn1-GILE。将重组质粒转化入大肠杆菌Artic express中,添加IPTG诱导重组蛋白表达。通过SDS-PAGE和免疫印迹法确定重组蛋白是否表达。结果 通过SWISS-MODEL软件开展同源建模,结果表明抗原表位最优串联方式为EMY162_(95-104)―LAP_(464-479)―LAP_(495-510)―LAP_(396-410)―EMY162_(106-121)―LAP_(504-518)―EMY162_(112-126)。通过SOPMA软件分析GILE的二级结构,结果表明α螺旋占13.84%,β折叠占26.25%,β转角占14.88%,无规卷曲占45.82%。通过酶切和测序验证表明,质粒pCzn1-GILE构建成功。通过IPTG诱导,得到45KD的重组蛋白。通过Ni-NTA柱的亲和纯化,得到纯化重组蛋白GILE。通过Western blotting法验证,纯化后的GILE蛋白能与His抗体特异结合,得到纯化重组蛋白GILE。结论 本研究通过生物信息学软件成功设计、构建了多表位疫苗GILE,并通过GILE原核表达系统表达、纯化了重组蛋白GILE。

摘要： 包虫病主要在中国西北部的农牧地区流行,在湖南省十分少见。现报告1例在湖南省的包虫病的临床资料。该患者为11岁男性,因发现腹部肿块至中南大学湘雅二医院就诊。根据其症状、体征及实验室检查,患者被初步诊断为“腹腔内肿物”和“脾囊肿”,随后行腹腔巨大占位切除术及脾切除术。术后病理检查发现棘球蚴的角皮层和生发层,并见原头蚴,符合包虫病的特征。血清学检查也发现特异性抗包虫IgG抗体阳性。结合患者的病情,给予其吡喹酮治疗。1个月后随访患者无不适症状。

摘要： 为表达多房棘球绦虫钙网蛋白EmCRT,并对其进行初步鉴定及结构与补体结合功能分析.本研究以多房棘球绦虫囊cDNA为模板,通过PCR扩增目的基因,克隆至pcDNA3.3-Myc载体,构建重组质粒pcDNA3.3-Myc-EmCRT;PCR、酶切及测序鉴定其正确后,以脂质体转染法转染Hela细胞,运用Western blot、细胞免疫荧光方法检测重组蛋白在细胞中的表达情况;应用生物学软件分析mCRT结构与功能特点.结果 显示:成功构建了重组质粒pcDNA3.3-Myc-EmCRT,其在Hela细胞中可高效表达重组钙网蛋白,表达产物约为46 kDa;预测该蛋白N端含有1个18aa的信号肽序列,与其他寄生虫CRT氨基酸序列同源性高达41％～56％,存在4个C1q潜在结合位点.本研究结果为抗包虫疫苗和新药的研制提供重要的理论基础.

摘要： 目的 设计构建及表达纯化多房棘球绦虫葡萄糖转运蛋白1重组抗原肽(GLEP),为后续疫苗研究寻找有效工具.方法 用生物信息学软件预测EmGLUT1跨膜结构,将设计构建的表达载体pC zn1-GLEP转化入大肠杆菌真核表达系统,经IPTG诱导、Ni-NTA纯化获得目的 蛋白.结果 生物信息学软件分析结果表明EmGLUT1为12次跨膜蛋白,用柔性序列GS和KK将筛选后的肽段进行串联,构建重组表达载体pCzn1-GLEP,测序及酶切验证成功后,转化入Artic ex-press大肠杆菌表达系统(表达部位鉴定属于可溶性表达),经Ni-NTA亲和柱层析纯化后获得电泳纯级的GLEP蛋白.结论 成功构建GLEP的原核表达系统,并得到纯化重组蛋白,为后续疫苗研究提供有效工具.

摘要： 建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑.以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(感染多房棘球绦虫)和阴性对照犬犬粪.结果显示,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原具有良好的抗原性并能产生高效价抗体;对该方法的灵敏度进行检测,阳性粪样稀释至1:10000时仍显示为阳性;在感染动态分析中,该方法最早可在犬感染72 h后,最迟6 d后检测到多房棘球绦虫粪抗原.表明建立的方法可用于诊断犬多房棘球绦虫感染,为后期研制犬多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测试剂盒奠定了基础.

摘要： 目的设计构建及表达纯化多房棘球绦虫葡萄糖转运蛋白1重组抗原肽(GLEP),为后续疫苗研究寻找有效工具。方法用生物信息学软件预测EmGLUT1跨膜结构,将设计构建的表达载体pCzn1-GLEP转化入大肠杆菌真核表达系统,经IPTG诱导、Ni-NTA纯化获得目的蛋白。结果生物信息学软件分析结果表明EmGLUT1为12次跨膜蛋白,用柔性序列GS和KK将筛选后的肽段进行串联,构建重组表达载体pCzn1-GLEP,测序及酶切验证成功后,转化入Artic express大肠杆菌表达系统(表达部位鉴定属于可溶性表达),经Ni-NTA亲和柱层析纯化后获得电泳纯级的GLEP蛋白。结论成功构建GLEP的原核表达系统,并得到纯化重组蛋白,为后续疫苗研究提供有效工具。

摘要： 为了探究实验室传代沙鼠的棘球蚴各地理分离株线粒体12S rDNA基因是否发生突变及其与世界各地不同来源多房棘球蚴12S rDNA之间的系统发育关系,本试验利用特异性引物扩增同一实验室相同条件传代且来源于不同地区的多房棘球蚴12S rDNA基因片段,并结合GenBank中已收录的多房棘球绦虫12S rDNA基因序列进行系统发育分析.结果显示本试验扩增、克隆的16个线粒体12S rDNA基因序列大小均为374 bp,分别属于3个单倍型(Hap_1,Hap_9,Hap_10),单倍型多态性为0.242,核苷酸多态性为0.001,与多房棘球绦虫(JAVA株)参考线粒体基因组12S rDNA基因序列相比共存在3个突变位点.单倍型地区聚类网络分析显示,在所分析的140条序列中共有10个单倍型,其中来自土耳其、中国、波兰、德国等8个国家的109条序列均与JAVA参考基因组12S rDNA基因序列为同一单倍型,来自日本和俄罗斯西伯利亚地区的13条序列为同一单倍型,来自斯洛伐克的6条序列为同一单倍型,而其他单倍型均只有1条序列.试验表明多房棘球绦虫12S rDNA基因单倍型多样性和核苷酸多样性都较低,不适于多房棘球绦虫种内遗传多态性分析.本试验结果不仅为本实验室多房棘球绦虫物种鉴定和基因型分析提供基础数据,也为今后多房棘球绦虫种内基因多态性分析时指出了不适的目的基因,为棘球绦虫的分类、鉴定、遗传变异研究提供相关依据.

摘要： 通过对多房棘球绦虫(Echinococcus multiloculais)主要卵抗原(Em MEA)基因的表达、抗体制备及血清ELISA检测,初步评价其作为诊断抗原的价值。根据WormBase数据库Em MEA基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增Em MEA基因并构建重组表达质粒,诱导表达、纯化重组蛋白Em MEA;制备Em MEA多克隆抗体并进行免疫组织定位;ELISA方法检测Em MEA重组抗原的敏感性和特异性。结果表明,Em MEA基因长度为957 bp,编码319个氨基酸,与其它绦虫中同源蛋白的氨基酸相似性为90.85%~96.93%。Em MEA重组蛋白约为40 ku,制备的多克隆抗体可识别虫体天然Em MEA蛋白,抗体效价达1∶25 600;Em MEA蛋白仅分布于原头蚴体壁。ELISA检测表明,Em MEA重组抗原和虫体天然抗原的特异性均为100%,Em MEA重组抗原的敏感性(100%)优于虫体天然抗原的敏感性(95.83%)。结合以上研究结果,Em MEA抗原具有作为多房棘球蚴病诊断抗原的潜能。

摘要： 用多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)原头蚴继发感染一线仓鼠(坎培尔仓鼠Dwarf Campbells Russian Hamster )、冬白仓鼠(倭仓鼠Phodopus sungoris sungoris)、金丝熊仓鼠(黄金鼠Mesocricetus auratus )、松鼠(Sciurus vulgaris)4种宠物鼠各4只.接种d70后剖解各种宠物鼠1只,一线仓鼠、金丝熊仓鼠、松鼠未发现包囊泡,冬白仓鼠分离出包囊泡4.37 g,占体重的7.23％;接种d 95后4种宠物鼠的平均湿包囊泡重及包囊泡重占体重的百分比分别为:冬白仓鼠13.05 g和33.03％,金丝熊仓鼠2.22 g和1.98％,松鼠2.28 g和3.54％,冬白仓鼠、金丝熊仓鼠和松鼠都出现成熟原头蚴,—线仓鼠未发现包囊泡.试验证明冬白仓鼠、金丝熊仓鼠和松鼠对多房棘球绦虫原头蚴较敏感,可以作为Em的中间宿主.

摘要： 本文主要根据1982-1997年在宁夏地区的西吉、海原、固原、同心、盐池等市县内的犬、狐、猫、灌、鼠类的调查，查阅医院棘球坳病档案，地区的地形、地貌、气候、湿度、降雨量、干燥度等资料，还查阅了近50年来银川平原各市、县有关棘球蝴病资料及汇集全国各地已报道的泡球蚴病，多房棘球绦虫论文及草原资源调查论文各有关自然生太部分，经过综合分析研究。分析出多房棘球绦虫、泡球拗病在西北、东北、中南三个连片区和宁夏回族自治区的地理分布及生态。并就近50年来我国有关学者除对多房棘球绦虫、泡球拗病进行了调查，诊断，治疗等的试验研究工作做了汇报。从而就此病在我国存在的主要因子、分布流行与海拔和经纬度的关系、研究工作的方向等进行讨论。

摘要： 利用(CBMdisc)检索1977～2004年有关泡型包虫病文献,从文献计量学角度对国内泡型包虫病文献年代分布、期刊来源、著者地区分布和核心著者进行了分析.结果:28年间我国泡型包虫病文献共计452篇,泡型包虫病文献在1977～1987年间每年数量较少,占全部论文数的10.1﹪.1988～2004年呈稳定增长之势;载文频次居前5位的期刊为、、、和,共计233篇,占51.6﹪;其中新疆、甘肃、青海、宁夏和四川5省区著者文献,占全部论文的81﹪,与我国泡型包虫病的地理分布相吻合.

摘要： 利用(CBMdisc)检索1977～2004年有关泡型包虫病文献,从文献计量学角度对国内泡型包虫病文献年代分布、期刊来源、著者地区分布和核心著者进行了分析.结果:28年间我国泡型包虫病文献共计452篇,泡型包虫病文献在1977～1987年间每年数量较少,占全部论文数的10.1﹪.1988～2004年呈稳定增长之势;载文频次居前5位的期刊为、、、和,共计233篇,占51.6﹪;其中新疆、甘肃、青海、宁夏和四川5省区著者文献,占全部论文的81﹪,与我国泡型包虫病的地理分布相吻合.

摘要： 利用(CBMdisc)检索1977～2004年有关泡型包虫病文献,从文献计量学角度对国内泡型包虫病文献年代分布、期刊来源、著者地区分布和核心著者进行了分析.结果:28年间我国泡型包虫病文献共计452篇,泡型包虫病文献在1977～1987年间每年数量较少,占全部论文数的10.1﹪.1988～2004年呈稳定增长之势;载文频次居前5位的期刊为、、、和,共计233篇,占51.6﹪;其中新疆、甘肃、青海、宁夏和四川5省区著者文献,占全部论文的81﹪,与我国泡型包虫病的地理分布相吻合.

摘要： 利用(CBMdisc)检索1977～2004年有关泡型包虫病文献,从文献计量学角度对国内泡型包虫病文献年代分布、期刊来源、著者地区分布和核心著者进行了分析.结果:28年间我国泡型包虫病文献共计452篇,泡型包虫病文献在1977～1987年间每年数量较少,占全部论文数的10.1﹪.1988～2004年呈稳定增长之势;载文频次居前5位的期刊为、、、和,共计233篇,占51.6﹪;其中新疆、甘肃、青海、宁夏和四川5省区著者文献,占全部论文的81﹪,与我国泡型包虫病的地理分布相吻合.

摘要： 本发明公开了一种重组细粒棘球绦虫Severin蛋白在检测囊型包虫病和细粒棘球绦虫感染试剂盒中的应用；所述试剂盒中的包被抗原为重组细粒棘球绦虫Severin蛋白。本发明首次克隆、表达出细粒棘球蚴重组蛋白rEgSeverin，免疫印迹显示，该蛋白具有良好的反应原性；发现rEgSeverin免疫小鼠后，诱导产生良好的体液和细胞免疫反应，以诱导产生Th2型细胞因子为主。本发明基于rEgSeverin蛋白建立了检测细粒棘球绦虫抗体的间接ELISA方法，制备了ELISA试剂盒，其特异性高于商品化ELISA试剂盒，为家畜细粒棘球绦虫感染及囊型包虫病流行病学调查和诊断提供了一种有效的方法。

摘要： 本发明公开了一种重组细粒棘球绦虫Severin蛋白在检测囊型包虫病和细粒棘球绦虫感染试剂盒中的应用；所述试剂盒中的包被抗原为重组细粒棘球绦虫Severin蛋白。本发明首次克隆、表达出细粒棘球蚴重组蛋白rEgSeverin，免疫印迹显示，该蛋白具有良好的反应原性；发现rEgSeverin免疫小鼠后，诱导产生良好的体液和细胞免疫反应，以诱导产生Th2型细胞因子为主。本发明基于rEgSeverin蛋白建立了检测细粒棘球绦虫抗体的间接ELISA方法，制备了ELISA试剂盒，其特异性高于商品化ELISA试剂盒，为家畜细粒棘球绦虫感染及囊型包虫病流行病学调查和诊断提供了一种有效的方法。

摘要： 本发明公开了一种基于POCKIT Micro荧光PCR平台的犬细粒、多房棘球绦虫的试剂盒及应用，该试剂盒包含荧光定量PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品；荧光定量PCR反应液包括细粒、多房棘球绦虫上游通用引物，细粒、多房棘球绦虫下游通用引物，细粒、多房棘球绦虫通用探针，Taq酶，预混buffer和去离子水；细粒、多房棘球绦虫上游通用引物、下游通用引物的核苷酸序列和细粒、多房棘球绦虫通用探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本试剂盒设计针对两种包虫的通用引物和探针，一次检测即可确定结果，极大节约了时间，降低了检测成本。

摘要： 本发明公开了一种抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原单克隆抗体的制备方法及应用，该方法通过杂交瘤技术采用Balb/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株Anti‑XJEmSfAg‑4D6。由该细胞株通过体外培养法、动物体内诱生腹水法获得特异性单克隆抗体，制备了多房棘球绦虫成虫免疫组化试剂盒。本发明为临床和科研机构提供了抗多房棘球绦虫成虫表膜抗原的特异性单克隆抗体，它既可用于ELISA实验对临床样品进行检测，也可用于免疫组化实验对病理标本进行检测，还可为包虫病研究部门提供便利的研究工具，在终末宿主感染多房棘球绦虫的检测中有广泛的应用价值，为泡型包虫病的基线调查和防控效果评估提供了技术支撑。

摘要： 本发明公开了一种基于生态位模型多房棘球绦虫自然疫源地分级预测方法，包括：S1：获取多房棘球绦虫自然疫源地监测点数据以及地理环境数据；S2：对地理环境数据做logistic回归分析，筛选出地理环境风险因子数据；根据筛选的地理环境风险因子建立生态位模型；S3：将监测点数据分为训练集和测试集；S4：将训练集输入生态位模型并检测，获取各环境风险因子变量在多房棘球绦虫自然疫源地中的相对重要性；S5：基于S4处理后的生态位模型对测试集进行分析，并输出多房棘球绦虫自然疫源地流行分布情况。本发明根据地理环境风险因子，可对多房棘球绦虫自然疫源地流行区进行相应的分级定性，填补了我国多房棘球绦虫传播风险预测技术领域空白。

摘要： 本发明公开了一种抗多房棘球绦虫原头蚴抗原单克隆抗体的制备方法及其应用，属于生物技术及细胞工程领域。本发明通过杂交瘤技术采用Balb/C小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合建立杂交瘤细胞株。由上述细胞通过体外培养法、动物体内诱生腹水法制备单克隆抗体；制备了泡球蚴免疫荧光试剂盒。本发明为临床和科研机构提供了抗多房棘球绦虫原头蚴抗原的特异性单克隆抗体，它既可用于ELISA试验对临床样品进行检测，也可用于免疫组化试验对病理标本进行临床诊断，还可为包虫病研究部门提供便利的研究工具，在多房棘球蚴病的诊断、检测中有广泛的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种用于鉴定多房棘球绦虫引物对、引物探针组以及他们的应用。本发明提供了特异引物对，由序列2所示单链DNA分子和序列3所示单链DNA分子组成。本发明还保护引物探针组，由特异引物对和特异探针组成；特异探针自上游至下游依次由如下元件组成：区段甲、四氢呋喃和区段乙；区段甲如序列4所示，且3’末端第2位核苷酸被荧光基团修饰；区段乙如序列5所示，且5’末端第2位核苷酸被淬灭基团修饰，且3’末端进行C3 Spacer修饰。特异引物对或引物探针组可用于：鉴定多房棘球绦虫；鉴定待测样本中是否含有多房棘球绦虫。本发明提供特异引物对或引物探针组用于鉴定多房棘球绦虫，操作简便、快速、特异性强、灵敏度高。

摘要： 本发明公开了一种基于POCKIT Micro荧光PCR平台的犬细粒、多房棘球绦虫的试剂盒及应用，该试剂盒包含荧光定量PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品；荧光定量PCR反应液包括细粒、多房棘球绦虫上游通用引物，细粒、多房棘球绦虫下游通用引物，细粒、多房棘球绦虫通用探针，Taq酶，预混buffer和去离子水；细粒、多房棘球绦虫上游通用引物、下游通用引物的核苷酸序列和细粒、多房棘球绦虫通用探针的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。本试剂盒设计针对两种包虫的通用引物和探针，一次检测即可确定结果，极大节约了时间，降低了检测成本。

摘要： 本发明提供了一种用于检测犬粪中多房棘球绦虫的引物，其上游引物的序列如SEQ ID No.1所示；下游引物的序列如SEQ ID No.2所示；还提供了一种用于检测犬粪中多房棘球绦虫的探针，序列如SEQ ID No.3所示。还提供了一种用于检测犬粪中多房棘球绦虫的试剂盒，含有用于检测犬粪中多房棘球绦虫的引物，其上游引物的序列如SEQ ID No.1所示；下游引物的序列如SEQ ID No.2所示；还含有用于检测犬粪中多房棘球绦虫的探针，序列如SEQ ID No.3所示。本发明利用该引物和探针对多房棘球绦虫进行荧光定量PCR反应可有效扩增，可特异性地针对多房棘球绦虫感染情况进行鉴别诊断。

摘要： 本发明公开了一种从狐粪中检测多房棘球绦虫(Echinococcus？multilocularis)病原的方法。本发明所提供的方法包括以下步骤：将收集的藏狐粪便样本置于70％乙醇中，-80°C冷冻保存3周以上。通过双层灭菌纱布富集粪样虫卵，利用组织破碎仪机械振荡破碎虫卵胚膜，使用粪便DNA提取试剂盒提取粪样中虫卵DNA，巢式PCR扩增鉴定虫卵。此方法操作简单，能快速检测狐粪中是否存在多房棘球绦虫的感染，敏感性高，特异性强。