大肠杆菌O157∶H7

摘要： 旨在建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157∶H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌的TaqMan多重荧光定量PCR(qPCR)方法。针对大肠杆菌O157∶H7 rfbE基因、沙门菌invA基因和产单核细胞李氏杆菌hlyA基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行特异性、灵敏性和重复性试验,应用建立的方法检测生鲜食品中致病菌并与国家标准方法对比。结果显示:建立的多重qPCR方法特异性好,只扩增3种靶细菌;灵敏性最低检测值均为10^(4) copies·μL^(-1);重复性良好,批内变异系数为0.09%~2.97%,批间变异系数为0.23%~7.82%;对120份生鲜肉样品进行检测对比,两种方法均检出2份大肠杆菌O157∶H7,21份产单核细胞李氏杆菌,多重qPCR方法检出14份沙门菌,比国标法多检出1份,建立的方法可检出所有受污染样品。综上表明,建立的多重qPCR检测方法能快速、准确检测食品中大肠杆菌O157∶H7、沙门菌和产单核细胞李氏杆菌3种食源性致病菌,为食品安全提供技术保障。

摘要： 为初步了解湘潭县屠宰场及市售猪肉中3种常见食源性致病菌(大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌和单增李斯特杆菌)污染情况,于2021年6—9月从湘潭县部分屠宰场、超市和集市采集猪肉样品共120份,采用商业化检测纸片分别检测以上3种食源性细菌,初步确定阳性率;其后采用细菌分离鉴定法复核阳性样品,并对部分菌株进行药物敏感性试验。结果发现,120份样品中大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌和单增李斯特杆菌检出率分别为7.5%、12.5%和8.33%;屠宰场、超市和集市来源样品检出率分别为7.5%、33.33%和42.0%。进一步药敏试验结果发现,大肠杆菌O157∶H7对氟苯尼考、左氧氟沙星和磺胺嘧啶存在耐药性;大部分沙门氏菌对氟苯尼考、庆大霉素和磺胺嘧啶等具有耐药性;而大部分单增李斯特杆菌对氟苯尼考、头孢类抗生素等耐药。以上结果提示:湘潭县屠宰场及市售猪肉食源性致病菌污染情况较严重,且致病菌对部分抗生素具有耐药性,因此猪肉在加工和售卖过程中应注意卫生安全问题。

摘要： 【目的】探究宽谱大肠杆菌O157∶H7噬菌体的生物学特性和全基因组特征。【方法】采用双层琼脂平板法从广西南宁某猪场污水样品中分离宽谱大肠杆菌O157∶H7裂解性噬菌体,通过空斑试验、噬斑试验对噬菌体进行宿主谱和裂解效价的测定;利用透射电镜观察、最佳感染复数测定、一步生长曲线测定、热稳定性与酸碱稳定性评估、杀菌试验及全基因组测序的方法分析噬菌体的形态学、生物学和全基因组特征。【结果】试验成功分离1株宽谱大肠杆菌O157∶H7裂解性噬菌体,命名为vB_EcoM_GXBP08。噬菌体vB_EcoM_GXBP08能高效裂解14株大肠杆菌,裂解效价可达10^(9)~10^(10)PFU/mL。以大肠杆菌O157∶H7 CVCC4050为宿主菌测得噬菌体的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)为1。一步生长曲线显示,该噬菌体的潜伏期和爆发期分别为20和50 min,爆发量为154 PFU/cell,耐受温度范围为30~70°C,在pH为4.0~10.0的环境中能维持其活性。在宿主菌CVCC4050中的杀菌试验结果显示,MOI为1时噬菌体vB_EcoM_GXBP08具有良好的杀菌效果。根据透射电镜观察和全基因组序列分析,该噬菌体属于有尾噬菌体目肌尾噬菌体科T4-like噬菌体属,基因组片段总长为108114 bp,GC含量为36.23%。噬菌体vB_EcoM_GXBP08基因组中含有8个CDS,编码与噬菌体裂解有关的蛋白,未发现与抗生素耐药性、毒力因子、毒素和溶源性相关的基因。【结论】噬菌体vB_EcoM_GXBP08宿主谱宽、效价高,且温度、酸碱稳定性良好,在液体培养基中的杀菌能力强,本研究结果为后续研制宽谱噬菌体制剂以及在食品业、养殖业防治大肠杆菌O157∶H7感染中的应用提供参考。

摘要： 研究建立了免疫磁珠和荧光量子点标记的抗体检测大肠杆菌O157∶H7的方法。采用溶剂热法制备了Fe_( 3)O_( 4)纳米颗粒,并用SiO_(2)、羧基和大肠杆菌O157∶H7抗体依次包覆制得免疫磁珠。游离的大肠杆菌O157∶H7首先与免疫磁珠结合,然后由量子点标记的抗体与大肠杆菌结合,形成一个三明治结构;随后分析磁分离采集的磁珠的荧光强度(激发/发射波长为370 nm/472 nm)。SiO_(2)壳结构的引入,减少了传统免疫磁珠的非特异性吸附,提高了对目标菌的选择性,同时有效的阻止了三明治结构中量子点因电子转移至Fe_(3)O_(4)而引起的荧光猝灭,保证了分析方法的可行性。动态范围为10~10^(8) CFU/mL,检出限为10 CFU/mL。牛肉、牛奶和蜂蜜样品中大肠杆菌O157∶H7的平均加样回收率分别为95%~104%、90%~94%和90%~110%;相对标准偏差分别为2.1%~3.8%、3.2%~7.8%和5.8%~6.3%。

摘要： 针对食品中致病菌快速检测的需求,开发了一种电化学免疫方法用于检测食品中大肠杆菌O157∶H7。大肠杆菌O157∶H7的检测通过测量HRP酶催化之后的过氧化氢的氧化还原电流来实现。结果显示,该传感器能在5.2×10~5.2×10;CFU/mL的动态检测范围内实现食品中大肠杆菌的检测。该生物传感器被成功应用于实际样本(牛肉和苹果汁)中的大肠杆菌O157∶H7的定量检测。

摘要： 目的 了解不同来源大肠杆菌O157∶H7菌株遗传标志物的分布频率.方法 对1999年徐州地区O157∶H7暴发疫情中分离到的73株O157∶H7菌株,用PCR方法对stx1和stx2阳性菌株分别进行亚型分型;对stx2阳性菌株检测q933和q21基因;用RT-PCR进行tir等位基因检测.结果 73株菌中除1株tir(255A)和tir (255T)均为阴性外,其余菌株均携带tir(255T)基因;10株携带stx1,亚型分型检测显示均为stx1a;全部分离株均为stx2阳性,其中携带stx 2a 13株(17.81％),携带stx2c 60株(82.19％).食品中未检出stx2a;病人分离株中stx2a检出率高于动物分离株,差异有统计学意义(P＜0.01),食品、动物分离株中stx2c检出率(100.00％、87.30％)较高.13株(17.81％)菌株为单q933阳性,60株(82.19％)为单q21阳性.食品中未检出q933,病人分离株中检出率高于动物分离株(P＜0.01);q21在病人分离株中未检出,食品、动物分离株检出率较高(100.00％、87.30％).结论 不同来源的O157∶H7分离菌株的遗传标志存在多样性,这可能有助于从外环境来源菌株中识别具有潜在人类疾病风险的基因型.

摘要： 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件，成功地建立了可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，同时还初步应用到临床样品的检测中。结果: 本试验所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fkiC基因(247 bp)的特异性片段，特异性结果显示其它非大肠杆菌O157：H7的扩增结果均为阴性，表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102 cfu/mL。结论: 初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法，为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查。

摘要： 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件，成功地建立了可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，同时还初步应用到临床样品的检测中。结果: 本试验所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fkiC基因(247 bp)的特异性片段，特异性结果显示其它非大肠杆菌O157：H7的扩增结果均为阴性，表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102 cfu/mL。结论: 初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法，为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查。

摘要： 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件，成功地建立了可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，同时还初步应用到临床样品的检测中。结果: 本试验所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fkiC基因(247 bp)的特异性片段，特异性结果显示其它非大肠杆菌O157：H7的扩增结果均为阴性，表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102 cfu/mL。结论: 初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法，为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查。

摘要： 目的: 建立快速、特异的分离鉴定大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法。方法: 根据GenBank上已发表的大肠杆菌O157：H7菌体抗原和鞭毛抗原的基因序列(rfbE和fliC基因)设计两对特异引物，分别建立了针对rfbE、fliC基因的单一PCR方法;通过优化扩增条件，成功地建立了可用于动物粪便检测的大肠杆菌多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，同时还初步应用到临床样品的检测中。结果: 本试验所建立的多重PCR方法能同时扩增出rfbE基因(327 bp)和fkiC基因(247 bp)的特异性片段，特异性结果显示其它非大肠杆菌O157：H7的扩增结果均为阴性，表明该方法有较高的特异性;灵敏度试验结果显示细菌纯培养物的检测灵敏度为102 cfu/mL。结论: 初步建立了快速、灵敏、特异的检测大肠杆菌O157：H7的多重PCR方法，为从动物粪便中分离鉴定大肠杆菌O157∶H7提供了一种简单、灵敏的试验方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查。

摘要： 目的: 建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因hyIA的多重PCR方法。方法: 以编码大肠杆菌P157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因，设计三对特异性引物，建立并优化了检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，且用单重PCR和多重PCR进行初步临床验证。结果: 成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠杆菌O157∶H7的O抗原.H抗原和毒力基因hylA的方法，其特异性和灵敏性均较高，细菌纯培养物的检测灵敏度为2×102 cfu/mL。结论: 本研究初步建立了检测动物源大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查.

摘要： 目的: 建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因hyIA的多重PCR方法。方法: 以编码大肠杆菌P157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因，设计三对特异性引物，建立并优化了检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，且用单重PCR和多重PCR进行初步临床验证。结果: 成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠杆菌O157∶H7的O抗原.H抗原和毒力基因hylA的方法，其特异性和灵敏性均较高，细菌纯培养物的检测灵敏度为2×102 cfu/mL。结论: 本研究初步建立了检测动物源大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查.

摘要： 目的: 建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因hyIA的多重PCR方法。方法: 以编码大肠杆菌P157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因，设计三对特异性引物，建立并优化了检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，且用单重PCR和多重PCR进行初步临床验证。结果: 成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠杆菌O157∶H7的O抗原.H抗原和毒力基因hylA的方法，其特异性和灵敏性均较高，细菌纯培养物的检测灵敏度为2×102 cfu/mL。结论: 本研究初步建立了检测动物源大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查.

摘要： 目的: 建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因hyIA的多重PCR方法。方法: 以编码大肠杆菌P157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因，设计三对特异性引物，建立并优化了检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，且用单重PCR和多重PCR进行初步临床验证。结果: 成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠杆菌O157∶H7的O抗原.H抗原和毒力基因hylA的方法，其特异性和灵敏性均较高，细菌纯培养物的检测灵敏度为2×102 cfu/mL。结论: 本研究初步建立了检测动物源大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查.

摘要： 目的: 建立一种快速检测动物源大肠杆菌O157∶H7及其毒力基因hyIA的多重PCR方法。方法: 以编码大肠杆菌P157抗原的rfbE基因、编码H7抗原的fliC基因以及编码细胞溶血素A的hylA基因为靶基因，设计三对特异性引物，建立并优化了检测大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，并进行了特异性和灵敏性试验，且用单重PCR和多重PCR进行初步临床验证。结果: 成功建立了快速检测和鉴定动物源大肠杆菌O157∶H7的O抗原.H抗原和毒力基因hylA的方法，其特异性和灵敏性均较高，细菌纯培养物的检测灵敏度为2×102 cfu/mL。结论: 本研究初步建立了检测动物源大肠杆菌O157∶H7的多重PCR方法，可用于临床动物携带大肠杆菌O157：H7的分子流行病学调查.

摘要： 本发明公开了一种合成致新生儿脑膜炎大肠杆菌糖蛋白结合疫苗的大肠杆菌工程菌及用途。涉及构建合成致新生婴儿脑膜炎大肠杆菌O1血清型糖蛋白结合疫苗细胞工厂的方法。它是利用酿酒酵母高效的同源重组效率，基于DNA Assembler的方法，构建O1抗原合成基因簇质粒。在大肠杆菌JM109中转化O1抗原合成基因簇穿梭质粒，通过脂多糖提取，凝胶电泳和银染鉴定质粒；在FLP‑FRT辅助下删除JM109中的waaL和wecA，排除原始不完整O抗原的干扰。改造pET28a(+)质粒，经诱导，合成糖蛋白结合疫苗，借助于AKTA Primeplus蛋白纯化工作站纯化糖蛋白并通过western‑blotting鉴定该糖蛋白。本发明构建的重组大肠杆菌为生物法合成糖蛋白结合疫苗提供了新的思路。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死产志贺毒素F18型大肠杆菌菌株的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑COP‑1，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12662BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗产志贺毒素F18型大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明公开了一种用于对溶液中大肠杆菌浓度检测的传感器的制作方法，制备了一种基于石墨烯的1‑氨基芘和麦芽糖的复合膜，通过嫁接刀豆凝聚素A制成对糖类具有敏感性的改性石墨烯复合膜，并将其涂敷在光纤上制成基于改性石墨烯复合敏感膜涂敷粗锥型的生物传感器。其不仅制作简单容易，另外通过此方法制得的传感器在对溶液中大肠杆菌浓度的检测中，具有灵敏度高、检测效果好，响应时间快，精度和可靠性高的优点。

摘要： 本发明涉及从自然界分离的并可以特异性地杀死肠致病性大肠杆菌的肌尾噬菌体科噬菌体Esc‑CHP‑2，其具有由SEQ ID NO：1的核苷酸序列表示的基因组（登记号：KCTC 12661BP），以及使用包含所述噬菌体作为活性成分的组合物来预防和治疗肠致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的肌病毒科噬菌体Esc‑COP‑7(受托编号：KCTC 13130BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明涉及一种从自然中分离的长尾病毒科噬菌体Esc‑COP‑9(受托编号：KCTC 13131BP)，其特征在于，携带具有特异性杀灭大肠杆菌能力、并用序列号1标记的基因组，且本发明还涉及利用以所述噬菌体为有效成分包含在内的组合物防止及治疗致病性大肠杆菌感染的方法。

摘要： 本发明提供了一种使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具在大肠杆菌基因编辑中的应用，所述使大肠杆菌获得有效NHEJ系统的高通量筛选工具包括：pDual‑Cas9‑Parental质粒载体：含有DNA解旋酶基因、复制子、抗生素抗性基因、核酸酶基因、araC基因、阿拉伯糖启动子和Ⅱs型限制酶识别位点；和pDual‑sgRNA‑lacZ质粒载体：含有靶向lacZ基因的sgRNA序列、组成型表达的强启动子、复制子和抗生素抗性基因。本发明筛选得到的NHEJ系统在大肠杆菌中具有良好的连接效率，并可以进行高效的基因编辑，应用前景广阔。

摘要： 本发明提供了一种大肠杆菌重组核酸、重组大肠杆菌及培养方法和生物合成L‑苏氨酸的方法，涉及生物工程技术领域。本发明所述大肠杆菌重组核酸，利用磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶pck的编码基因、丙酮酸羧化酶pyc的编码基因和苏氨酸操纵子的编码基因对大肠杆菌进行改造，获得一株以葡萄糖为底物的重组大肠杆菌LMT4，利用所述LMT4进行发酵生产，L‑苏氨酸产量以及转化率明显提高，为L‑苏氨酸的工业化生产奠定基础。

摘要： 本发明提供了大肠杆菌重组菌及利用大肠杆菌重组菌生产3,4‑二羟基苯乙醇的方法，大肠杆菌重组菌共表达四种酶，分别为酪氨酸酶、L‑氨基酸氧化酶、酮酸脱羧酶和醇脱氢酶；利用大肠杆菌重组菌，以酪氨酸为底物生产3,4‑二羟基苯乙醇。本发明以酪氨酸为底物，酪氨酸廉价易得，且大多数为生物基来源，不依赖于石化产品，属于可再生资源，此外，由于它的天然属性，在食品、保健品、化妆品领域更易于被消费者认可接受。

摘要： 本发明公开了一种在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒及其构建方法。所述的穿梭质粒是基于细菌‑酵母人工染色体，从pGEN‑MCS质粒上通过PCR扩增得到hok‑sok和par元件，然后通过连接将稳定遗传元件hok‑sok和parA构建入细菌‑酵母人工染色体中，进而获得方便克隆长片段DNA、无抗性且在大肠杆菌内稳定遗传的酵母‑大肠杆菌穿梭质粒。优选的，所述的穿梭质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明提供的穿梭质粒载体，不但可实现酵母、细菌内穿梭，可在酵母中通过同源重组进行多片段DNA组装，还可以稳定的在大肠杆菌中复制、遗传，便于进行DNA提取。