单核细胞增生李斯特菌

摘要： 为制备单核细胞增生李斯特菌SigB蛋白及其多克隆抗体,采用PCR方法扩增参考菌株10403S的sig B基因片段,并克隆至原核表达载体pET-30a构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞进行原核表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化Sig B蛋白,通过免疫兔体获得多克隆抗体。结果表明:成功构建SigB重组质粒,并诱导表达出可溶性Sig B蛋白,其相对分子质量约30 ku,纯化后的SigB蛋白质量浓度约为1.5 mg∕mL,获得的多克隆抗体效价为1∶51200。经Western-blot验证,该多克隆抗体能特异性检测Sig B蛋白,表现出良好的抗体特异性。本研究可为探究单增李斯特菌的应激调控机制奠定基础。

摘要： 以鸡胚为感染动物,检测2株冷冻鸡肉单核细胞增生李斯特菌(LM)的鸡胚半数致死量(LD_(50))、鸡胚肝脏指数、确定其毒力,同时检测毒力基因、溶血价、生物被膜形成能力,进行毒力相关因素分析。结果显示,与PBS组和无害李斯特菌(L.innocua)组相比,LM873与LM925均能致死鸡胚,鸡胚LD_(50)分别为4.733和1.533;鸡胚肝脏指数均明显大于PBS组和L.innocua组(P<0.05);8个毒力基因除lmo1116仅存在于LM925中外,其余基因分布一致;LM873与LM925的溶血价分别为2^(3)和2^(4);在生物被膜的形成过程中,同一时间段LM925较LM873的生物被膜更致密;LM925在6、8、10、12、24、36 h生物被膜的形成能力显著高于LM873(P<0.05),且在10、24、36 h时差异极显著(P<0.01),但是LM873与L.innocua生物被膜的形成没有明显差异。综上所述,2株冷冻鸡肉LM分离株均能致死鸡胚,且LM925的毒力强于LM873;溶血价素活性及毒力基因分布与菌株毒力呈正相关性。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)是一种世界范围内的食源性病原菌,食用被该菌污染的食物会引起李斯特菌病,致死率高达20%~30%。单增李斯特菌广泛存在于环境、食品、人和动物宿主中,可以在极端条件下生存并引起食物污染,已成为人们关注的重要公共卫生问题。论文主要综述了近年来国内外几种关于单增李斯特菌的快速检测方法,包括免疫学方法、分子生物学方法、生物传感器技术等,并比较其优缺点,以期为单增李斯特菌的快速检测提供参考。

摘要： 以一锅法合成一种新型的铁-铜双金属有机骨架(Fe/Cu-MOFs)纳米材料,将其作为荧光猝灭平台,以革兰氏阳性菌-单增李斯特菌和革兰氏阴性菌-副溶血性弧菌为例进行研究,建立一种简单快速的食源性致病菌检测方法。该方法对单增李斯特菌的检出限为1.00×10^(6) CFU/mL,对副溶血性弧菌的检出限为1.00×10^(4) CFU/mL,将该方法应用于基围虾和八爪鱼中单增李斯特菌和副溶血性弧菌的分析,加标回收率为94.4%~111%和89.3%~101%。本方法具有简单、快速、准确的优点,适合革兰氏阳性和阴性菌的分析,具有一定的普适性,在实际样品的分析中具有一定的应用潜力。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌在食品接触表面的长期存活,可导致其在食品中暴露可能性升高,增加引发严重食源性疾病的风险。本文研究了无营养冷藏(4°C)和室温(25°C)条件下,单核细胞增生李斯特菌在7种典型食品接触材质表面的存活情况。同时采用失活模型Bigelow模型进行拟合,便于理解其存活动力学。结果发现,单核细胞增生李斯特菌在木材质表面上的存活时间较短,但在其他材质表面可存活46 h以上。显著性分析表明,除玻璃和ABS塑料材质外,单核细胞增生李斯特菌在4°C条件下较25°C条件下存活量更高,表明冷藏环境有助于其长期存活。同时,单核细胞增生李斯特菌在玻璃和聚丙烯表面的存活能力相对较强。因此,为了更准确地推断单核细胞增生李斯特菌在食品链中导致危害发生的可能性,应纳入对其在不同材质及不同温度组合环境下存活能力的考量。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,引起的李斯特菌病致死率较高,研究其分子流行病学规律有助于该病的预防与控制。近年来,随着多种分子分型方法的建立,特别是基于全基因组测序(WGS)的核心基因/全基因组多位点序列分型(cg/wgMLST)、单核苷酸多态性(SNP)分析,在LM分子流行病学研究中得到了应用,在细菌分子进化研究、风险评估和溯源调查中发挥了重要作用。本文对基于基因组学的LM分型和溯源技术相关文献进行综述,为LM的分子流行病学研究提供参考。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌(LM)是一种重要的食源性病原菌,可适应不同的应激环境。为探究LM sRNA rli106基因的生物学功能,本研究以LM EGD-e为亲本株,通过PCR方法扩增sRNA rli106基因,并分析其分子特征;利用同源重组技术构建了LM-Δrli106基因缺失株和CLM-Δrli106基因回补株,分析比较LM EGD-e、LM-Δrli106、CLM-Δrli106在不同应激环境中的适应能力、运动性以及生物被膜(BF)形成能力,并通过qRT-PCR检测BF生成相关基因gltB和gltC的相对转录水平。结果显示,sRNA rli106基因大小为225 bp,上游序列含有-10 box和-35 box启动子核心区域,有转录调节因子CpxR的结合位点。与LM EGD-e、CLM-Δrli106相比,LM-Δrli106在42°C、5%NaCl、8%NaCl、5 mmol/L H2O2的环境应激下的适应性显著减弱,运动性无明显差异,在不同时间段的BF形成能力显著降低。qRT-PCR检测结果显示,LM-Δrli106中gltB和gltC基因的相对转录水平均有所降低。本研究结果首次表明,rli106基因在环境适应性和BF形成中发挥重要的调控作用,但不参与细菌运动性,为揭示rli106基因在LM环境适应性和BF形成中的分子调控机制奠定基础。

摘要： 为了筛选与单增李斯特菌(LM)生物被膜形成相关的非编码小RNA(sRNA),并初步探索sRNA及其靶基因生物学功能,本研究通过高通量测序和实时荧光定量PCR比较LM浮游菌和生物被膜形成不同时段sRNA的差异情况,筛选与LM生物被膜形成相关的sRNA;预测sRNA的靶基因及分析其可能参与生物被膜形成的调节通路。结果表明:与LM浮游菌相比,预测到38个新的sRNA,其中sRNA00085、sRNA00019、sRNA00058在LM生物被膜形成中显著上调,sRNA00054、sRNA00081、sRNA00111显著下调;3个上调sRNA和3个下调sRNA的靶基因可能参与碳代谢、不同环境中微生物代谢、核糖体、糖代谢、氨酰基-tRNA生物合成及脂肪酸代谢6条调控通路,是潜在的LM生物被膜调控因子。研究结果为深入研究LM生物被膜sRNA调控机制提供了理论依据。

摘要： 为了研究单核细胞增生李斯特菌(Lm)RsbS蛋白的抗应激机制,本研究设计针对rsbS基因完整ORF的引物,PCR扩增rsbS基因,构建重组表达质粒pET-30a-rsbS,转化至表达菌株Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导培养后SDS-PAGE检测,结果显示获得18.8 ku带His标签的重组RsbS蛋白,利用His-Ni纯化柱纯化重组RsbS蛋白,得到浓度约1μg/mL的纯化蛋白。以纯化的重组RsbS蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,经间接ELISA测定抗体效价为1:128 000;经western blot检测RsbS多克隆抗体具有良好的反应原性。通过等温滴定量热试验检测与RsbS互作的蛋白,结果显示RsbS与其上游RsbR蛋白存在体外互作。将Lm野生株10403S和缺失株ΔrsbR分别接种至BHI液体培养基和含5%NaCl的BHI应激培养基培养后,分别采用荧光定量PCR和western blot对rsbS的转录和表达水平进行分析,结果显示经5%NaCl应激30 min后,野生株中rsbS的转录和表达水平增高,而缺失株中rsbS的转录和表达水平均降低。综上,本研究首次证实RsbS通过与RsbR蛋白互作参与Lm的抗应激反应。本研究为进一步揭示RsbS蛋白的生物学功能及Lm的抗应激机制研究奠定基础。

摘要： 食源性单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)引发的食品安全问题日益严重,寻求快速灵敏的检测方法对保障人体健康、减少经济损失具有重要意义。该研究研发了一种过氧化氢(H_(2)O_(2))介导的Au-Fe_(3)O_(4)磁探针组装策略,并基于此,构建了一种用于单增李斯特菌快速检测的磁弛豫免疫传感方法。H_(2)O_(2)能够将银离子还原为银单质,而银单质沉积到Au部分的表面,进而将分散的Au-Fe_(3)O_(4)磁探针组装为聚集状态,从而引起横向弛豫时间(T_(2))的变化。结合免疫反应,单增李斯特菌浓度决定辣根过氧化物酶(HRP)-抗体的含量,而HRP能够调控H_(2)O_(2)浓度,进而调控Au-Fe_(3)O_(4)磁探针组装程度,引起T;信号的改变,从而实现单增李斯特菌的定量检测。本方法检测单增李斯特菌的灵敏度为50 CFU/mL,线性范围为10^(2)CFU/m L~10^(6)CFU/m L,回收率为79.4%~105.9%,在火腿中单增李斯特菌的检测中与荧光定量PCR方法一致性良好。该研究所构建的Ag@Au-Fe_(3)O_(4)-MRS免疫传感器具有灵敏度高、稳定性好、方法简单、特异性强的优点,对食源性致病菌的快速检测提供了有力的工具。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌是一种重要的人畜共患食源性致病菌,普遍存在于生鲜乳中,严重威胁生鲜乳质量安全.本文就单核细胞增生李斯特菌的生物学特征和致病性、检测方法和生鲜乳中单核细胞增生李斯特茵的检出率的研究进展以及对生鲜乳中单核细胞增生李斯特茵的防控措施进行综述,为生鲜乳质量安全风险评估提供一定的理论基础.

摘要： 本实验室所研究的单核细胞增生李斯特菌是一种胞内菌，其主要的调节因子PrfA在整个过程中起着举足轻重的作用，而PrfA的活性受多方面的影响，尤其是碳水化合物的代谢，两者之间有千丝万缕的关系。此外，PrfA作为毒力基因的主要调节因子，也直接或间接的影响毒力的表达。PrfA与碳水化合物有关系，也在毒力调节中起作用。那么，PrfA是否起到桥梁作用来研究碳水化合物的摄入与毒力的关系，这是笔者的初步猜测及接下来的研究工作。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌(LM)属于典型的细胞内寄生革兰氏阳性菌,能够引起食源性疾病—李斯特菌病。LM的感染周期和主要的毒力因子的研究很已经透彻。尽管如此,但这些研究并未阻止李斯特菌病的再次出现,目前在一些欧洲国家仍有报道。LM不仅可以在食品的储藏环境及加工过程中生存和繁殖,而且能够形成生物被膜,增加了其在食品加工流水线上的抵抗力,而导致食品污染。不同的血清型分离株其生物被膜形成能力有显著差异，但生物被膜形成与各血清型菌株之间的关系目前还未建立。胞外多糖、胞外DNA和鞭毛在LM被膜形成中起一定的作用，但其原理尚未被完全阐明。细胞之间的代谢交流和密度感应信号系统LuxS和Agr均参与调控生物被膜的形成。而且，一些分子，如PPGPP合成酶ReIA以及BapL在被膜形成中起一定的作用。本文简单介绍了LM被膜的形成过程及结构，重点对LM生物被膜形成的相关分子机制进行了综述与讨论。

摘要： 本研究通过比较研究单核细胞增生李斯特菌(LM)野生株、调控因子PrfA缺失株、无害李斯特菌以及携带组成性表达PrfA蛋白的重组无害李斯特菌和重组单核细胞增生李斯特菌生物被膜形成能力的差异，探讨LM重要的毒力调控蛋白PrfA对生物被膜形成的影响。表明PrfA在LM生物被膜形成中具有重要的促进作用。在进一步探索PrfA促进LM生物被膜形成的机制的研究中，发现PrfA有可能通过CCR效应的关键调控因子CcpA参与LM生物被膜形成过程的调控。

摘要： 李斯特菌引起的疾病主要表现为脑膜炎，败血症，流产等，虽然发病率不高，但死亡率高达20%-30%，危害很大，已成为全球性疾病，引起了国际上的高度重视。因此快速，准确检测出单增李斯特菌对临床诊断和治疗有重要意义。本文详细论述了检测单核细胞增生李斯特菌的分离培养鉴定方法、免疫学方法和分子生物学方法，探讨了其临床应用效果。

摘要： 单核细胞增生李斯特菌是重要的食源性病原菌,可引起人与动物的胃肠炎、脑膜炎、败血症、流产等.其感染过程的每一步均由特定的毒力因子介导.本试验应用荧光定量PCR,比较分析单核细胞增生李斯特菌弱毒株H4(4a型)与强毒株10403S(1/2a型)、681(4b型)主要毒力基因(prfA、plcA、hly、mpl、actA、plcB、inlA、inlB和sigB)的表达水平差异.除应激调控因子σB(sigB)外,H4株主要毒力基因的表达水平均显著高于10403S与681.膜裂解因子的高表达导致H4更易暴露于宿主免疫系统而被清除,从而引起毒力下降.本研究为探明这类菌株的弱毒机制奠定了基础.

摘要： 精氨酸脱亚胺酶(ADI)可能介导单核细胞增生李斯特菌抗酸应激,由arcA基因编码.利用分子克隆技术从单核细胞增生李斯特菌10403S扩增得到ADI基因,测序正确后将其插入pET30a表达载体中,构建该基因的原核表达质粒pET30a-ADI,并转化入大肠埃希菌Rosetta中进行诱导表达.核苷酸序列分析显示,ADI基因的完整开放阅读框为1 233 bp,编码410个氨基酸.SDS-PAGE表明:该基因在大肠埃希菌中成功表达,重组蛋白的分子质量约为52.5 ku.为进一步研究精氨酸脱亚胺酶的活性提供了条件,同时也为探索单核细胞增生李斯特菌抗酸应激的机理奠定了重要的基础.

摘要： 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)属革兰氏阳性、胞内兼性寄生菌,是重要的食源性致病菌之一。多年来, LM被用作研究胞内感染的模式微生物。一系列的实验已经阐明了胞内感染的基本机制,目前的研究开始集中在LM感染胃肠道的阶段。事实上,该菌已被证明能引起胃肠道症状,尤其是缺乏免疫力的个体。LM在胃肠道内各种微环境生存的能力是食源性传染至关重要的因素。LM在胃酸条件下的生存需要有谷氨酸脱羧酶系。此外，肉碱摄取系统(OpuC)在LM感染小鼠胃肠道及其后的侵入性感染中起重要作用。LM在胆汁盐条件下生存，无论在体外还是体内都需要胆盐水解酶(Bsh)、以及胆汁排除系统BiIE的作用。最后，这些系统(包括Bsh,OpuC and BiIE)是由两个因素Sigma B和PrfA所控制的。本文重点对LM与宿主胃肠道的交互作用的最新研究进展进行了综述和分析。

摘要： 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及鉴别单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌的方法。本发明通过对单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌的基因组序列进行分析，提供了用于高分辨熔解曲线技术鉴别单核细胞增生李斯特氏菌、伊氏李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.1‑2所示。在此基础上，建立了利用高分辨熔解曲线技术鉴别三种李斯特氏菌的方法，具有较高的灵敏度、特异性和准确性，能够高效检出上述三种李斯特氏菌，具有操作简单、成本低、快速、高通量等优点，可用于临床检测、农业生产、食品安全等领域的李斯特氏菌的鉴别。

摘要： 本发明为单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失菌的构建方法，主要包括以下步骤：根据选择的

摘要： 本发明提供一种单核细胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌多重PCR检测试剂盒。试剂盒中包括基因lmo0601检测引物以及基因

摘要： 本发明公开了一种金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法，属微生物检验领域。利用环介导等温扩增(LAMP)技术来进行，通过使用特异性引物，利用LAMP技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌进行核酸筛查或检测。本发明的方法具有简便、经济、快速、灵敏和特异的特点，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121型菌株的多重PCR检测引物、试剂盒、方法及应用。本发明的多重PCR检测方法，包括检测靶标多重PCR引物设计、多重PCR体系扩增和电泳检测，若结果同时出现目标基因0609，0171、prfA条带，则证明菌株是持留型单核细胞增生李斯特菌ST121菌株，若结果出现目标基因0609，0171、prfA三条条带中的任意两条，则为其他ST型单增李斯特菌，若结果只出现prfA基因条带，则为单增李斯特菌。本发明能有效鉴定持留型单核细胞增生李斯特菌ST121菌株，具有快速、高效、灵敏度高、经济、准确和操作简单等优点，便于应用于食品、检验检疫等领域。

摘要： 本发明提供一种单核细胞增生李斯特菌和伊氏李斯特菌多重PCR检测试剂盒。试剂盒中包括基因lmo0601检测引物以及基因

摘要： 本发明提供了一种从临床血液中检测单核细胞增生李斯特菌病原菌的方法，包括以下步骤：S1、血液中单核细胞增生李斯特菌基因组DNA的提取；S2、PCR检测：S2.1、利用单核细胞增生李斯特菌基因组DNA序列设计特异性的PCR引物，PCR引物包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.2所示的反向引物；S2.2、以提取的单核细胞增生李斯特菌基因组DNA为模板，采用PCR引物进行PCR扩增；S2.3、对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳及检测，扩增出长度为106bp的片段则判定为检测出单核细胞增生李斯特菌病原菌。本发明对血液中单核细胞增生李斯特菌感染的检测极限达到10CFU/mL。本发明实现了对临床血液中单核细胞增生李斯特菌感染的快速灵敏诊断。

摘要： 本发明涉及一种抗单核细胞增生李斯特菌的枯草芽孢杆菌((Bacillus subtilis))C3(CGMCC No.9713)活菌制剂的制备方法，适用于畜禽水产养殖业中饲用功能性活菌制剂等饲料添加剂及微生态制剂的生产。本发明利用筛选自果园土壤中的抗单核细胞增生李斯特菌的枯草芽孢杆菌C3菌株，经过活化、扩大培养、高密度发酵、离心浓缩和冷冻干燥等工序制备而成的高活菌数的活菌制剂。本发明通过对发酵培养基和发酵条件的优化，利用全自动发酵罐发酵，使C3菌株的活菌数量达7.9×10

摘要： 本发明公开了一种金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌核酸筛查方法，属微生物检验领域。利用环介导等温扩增(LAMP)技术来进行，通过使用特异性引物，利用LAMP技术平台扩增靶基因的特定区域，在阳性和阴性质控和内对照检测体系的辅助下，从分子水平对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌及单核细胞增生李斯特菌进行核酸筛查或检测。本发明的方法具有简便、经济、快速、灵敏和特异的特点，具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种单核细胞增生李斯特菌灭活疫苗及其制备方法和用途，1)将血清型4h的单核细胞增生李斯特菌液与β‑丙内酯灭活剂混合后进行灭活；2)将灭活菌液与水包油型纳米乳佐剂混合并乳化即得到单核细胞增生李斯特菌灭活疫苗。本发明的灭活疫苗对宿主脏器无毒副作用，具有良好的安全性，同时具有生产制备工艺简单、成本低等优点；通过皮下注射所述灭活疫苗能够有效地激发细胞免疫和体液免疫应答，同时提供较好的免疫保护效果，有效提高宿主对Lm感染的免疫保护能力，预防单核细胞增生李斯特菌感染。