猪附红细胞体

摘要： 为了评估猪附红细胞体eno基因核酸疫苗与重组腺病毒疫苗采用Prime-Boost免疫策略对小鼠的免疫效果,本研究应用pVAX1-eno核酸疫苗和Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗免疫接种小鼠,将20只BALB/c小鼠随机分为4组:Prime-Boost策略组、Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组、pVAX1-eno核酸疫苗组及PBS对照组。通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子水平,三免后测定小鼠脾脏细胞中CD4^(+)、CD8^(+)的含量,对试验数据进行统计分析。结果显示,Prime-Boost策略组接种的小鼠血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平均显著高于Ad5-M/eno重组腺病毒疫苗组(P<0.05),极显著高于pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.01);Prime-Boost策略组的IL-4与IFN-γ细胞因子水平、CD4^(+)与CD8^(+)水平显著高于Ad5-M/eno疫苗组和pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.05)。试验结果表明,与猪附红细胞体Ad5-M/eno,PVAX1-eno单疫苗相比,采用Prime-Boost免疫策略更能显著提高小鼠体液免疫水平与细胞免疫水平。

摘要： 随着畜牧业的快速发展,规模化养猪场逐渐增多,养猪业已经成为广大农民增加收益的主要产业,但是随着猪群饲养密度的增加,猪只感染疾病的风险越来越大,给疾病防控工作带来一定难度。猪附红细胞体病属于一种典型的传染性疾病,对不同品种、年龄和性别的猪只都能够产生危害,并且感染日龄越小,对猪群造成的危害越大,仔猪感染猪附红细胞体病后往往引起较高的死亡率。对猪附红细胞体病流行特点和发病原因进行分析,提出防治方法,以降低猪附红细胞体病给猪群带来的影响,保障养殖户效益。

摘要： 猪附红细胞体病是猪、牛、羊、马等多种动物共患的一种溶血性传染病,以发热、黄疸、贫血为本病特征.本病世界各地均有发生,我国很多省和地区也有发病报道并有逐渐蔓延的趋势,对养殖业特别是对养猪业造成的危害较为严重,近年来,猪附红细胞体病的发生有逐年增加、发病积逐年扩大的趋势,成为养殖业的常见病之一.2020年6月,康平县某大型养猪场发生了一起以黄疸、发热为特征的疾病,根据流行病学调查、临床症状、病理变化以及实验室检测,确认为猪附红细胞体病.

摘要： 为建立猪附红细胞体双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,本研究以抗猪附红细胞体单克隆抗体为捕获抗体,兔抗猪附红细胞体多克隆抗体为检测抗体,优化工作条件,建立猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法.结果显示:该方法的最佳工作条件为:捕获抗体包被浓度为5.42 g/mL,检测抗体浓度为6.84 g/mL,酶标二抗的稀释倍数为1∶2000;判定标准为:当检测样品OD492＞0.290为阳性;该方法与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒等常见猪病原微生物均无交叉反应,特异性好,敏感度可达3.25 mg/L,其重复性变异系数均小于10％;平行检测68份猪临床样品,DAS-ELISA检测的阳性率为29.4％,比血涂片染色镜检阳性率(19.1％)高10.3％.本研究所建立的猪附红细胞体DAS-ELISA检测方法可以作为猪附红细胞体的快速检测方法.

摘要： 为建立经济、适用的猪附红细胞体感染动物模型,该试验将45只昆明种小白鼠随机平均分为3组:A组为空白对照组接种PBS;B组为阴性对照组接种猪附红细胞体阴性血液分离物;C组为模型组接种猪附红细胞体.最后测定血常规、血液生化指标、脏器指数,并观察病理变化.结果表明:模型组小鼠白细胞总数减少,其中,粒细胞、淋巴细胞数量减少,血小板数量减少,血红蛋白浓度降低;白球比降低,丙氨酸氨基转移酶、碱基转移酶升高;临床症状为精神萎靡、扎堆、被毛逆立.病理切片对照组无明显变化;模型组小鼠心肌充血;肝脏细胞肿胀、颗粒变性,肝窦变窄.表明模型组小鼠出现猪附红细胞体病的临床症状和病变,建模成功.

摘要： 为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白对仔猪的免疫效果,本研究将9头仔猪随机平均分为3组:免疫组A皮下多点注射免疫纯化的猪附红细胞体重组蛋白rMseno,剂量为2.5 mg/头;免疫组B皮下注射免疫诱导后的重组菌Mseno/E.coli裂解液,剂量为5×108 cfu/头;对照组C接种等量PBS;共免疫2次,2次免疫间隔21 d.在一免后0、7d、14 d、21d、28 d、35 d采集仔猪血清,通过间接ELISA方法检测血清中重组蛋白特异性抗体、IgG1、IgG2a、细胞因子IFN-γ和IL-4水平;流式细胞术检测免疫仔猪CD4+T细胞、CD8+T细胞水平,评价重组蛋白对仔猪的免疫效果.间接ELISA方法检测结果显示,免疫组A和免疫组B猪血清中重组蛋白特异性抗体、IgG1、IgG2a、细胞因子IL-4和IFN-γ水平均极显著高于对照组C(p＜0.01);流式细胞术检测结果显示,免疫组A和免疫组B CD4+T细胞水平极显著高于对照组C(p＜0.01);免疫组A和免疫组B的CD8+T细胞水平和CD4+T细胞/CD8+T细胞比值显著高于对照组C(p＜0.05);免疫组A与免疫组B比较,上述所测指标均差异不显著(p＞0.05).结果 表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能诱导仔猪产生较高的体液免疫和细胞免疫水平,纯化后的重组蛋白与表达重组蛋白的重组菌裂解液所诱导的免疫效果差异不显著.本研究首次证实猪附红细胞体eno基因重组蛋白对仔猪的免疫效果,为猪附红细胞体病亚单位疫苗的研发提供参考依据.

摘要： 为了解江苏地区猪附红细胞体基因的流行变异情况,以自然感染附红细胞体的猪为试验对象,利用PCR技术扩增其部分16S rRNA基因序列,并对其系统进化进行分析.结果表明:样品均扩增出695 bp左右的特异性条带.序列分析表明:附红细胞体分离株PE1、PE2的核苷酸同源性为76.4％.系统进化分析显示,两分离株的亲缘关系较远;分离株PE1与中国、日本猪细小支原体分离株的亲缘性关系最近;分离株PE2与意大利绿念珠菌支原体分离株的亲缘性关系最近.本研究为掌握江苏地区猪附红细胞体的流行及系统进化情况奠定了基础.

摘要： 以某猪场爆发的猪附红细胞体与奇异变形杆菌混合感染为研究对象,探讨混合感染的诊断与治疗.通过临床诊断、直接镜检、涂片镜检、细菌培养、生化实验、RT-PCR等方法进行诊断.临床诊断可见发病猪精神萎靡、高热、黄疸、便秘、可视黏膜苍白、两耳肿胀发绀;结果显示:支原体、圆环病毒、猪瘟病毒、猪蓝耳病毒和伪狂犬病毒结果均呈阴性,猪附红细胞体为阳性,所感染的细菌为奇异变形杆菌.综合讨论分析,确诊猪场发病猪为猪附细胞体和奇异变形杆菌混合感染.对该猪场采用中西药结合治疗,选用血虫净、长效土霉素及中药复方制剂(白术、干姜、山药、生姜、大枣、茯苓、车前草)等药物持续治疗1周后,病情得到了控制,取得了良好的效果.

摘要： 为了研究猪附红细胞体eno基因重组蛋白的免疫效果,本试验将猪附红细胞体eno基因与pET-15b载体进行连接,转化大肠杆菌BL21感受态细胞.对表达菌株进行诱导表达、纯化,利用纯化后的猪附红细胞体eno重组蛋白(命名为rMseno)对小鼠进行免疫,从而评价该重组蛋白在小鼠体内产生的免疫应答水平.试验将20只4周龄的雄性昆明小鼠随机分为A、B、C、D 4个组.免疫A组接种纯化后的重组蛋白rMseno;免疫B组接种经IPTG诱导表达后的重组菌E.coli-Mseno;对照C组接种等量PBS;对照D组接种未经过诱导表达的重组菌E.coli-Mseno.通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平及 γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)细胞因子水平,最后通过脾脏淋巴细胞增殖试验来反映小鼠体内T淋巴细胞的增殖情况.结果显示,构建的重组pET-15b-eno质粒目的基因片段大小为1632 bp,与预期大小相同;纯化的重组蛋白rMseno大小为61 ku,并能够被鼠抗猪附红细胞体血清所识别;免疫A组和免疫B组小鼠血清中抗猪附红细胞体特异抗体水平,IFN-γ、IL-4细胞因子水平以及T淋巴细胞增殖指数均显著或极显著高于对照组(P<0.05;P<0.01).结果表明,猪附红细胞体eno基因重组蛋白能够诱导小鼠产生较高的体液免疫水平以及细胞免疫应答水平.

摘要： 为了解猪附红细胞体的感染机制,本试验利用酵母双杂交方法,筛选与猪附红细胞体α-烯醇化酶相互作用的宿主蛋白.采用定点突变引物和Overlap-PCR方法扩增猪附红细胞体α-Eno基因的全长序列,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒转化至酵母菌株Y2H中,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活现象,利用酵母双杂交系统从猪外周血单个核细胞(PBMC)文库中筛选与α-Eno相互作用的宿主蛋白.结果显示,构建的诱饵载体pGBKT7-α-Eno无毒性作用和自激活现象.以pGBKT7-α-Eno为诱饵,筛选共获得了4个与α-Eno蛋白存在相互作用的宿主蛋白:β-肌动蛋白、前导丛生蛋白、60S核糖体蛋白L11、核酸内切酶/反转录酶.本试验通过酵母双杂交技术筛选出与猪附红细胞体α-Eno相互作用的多种宿主蛋白,为进一步研究猪附红细胞体的感染机制奠定了基础.

摘要： 为筛选猪附红细胞体α-烯醇化酶与宿主互作的靶蛋白,本试验构建了可以用于酵母双杂交技术筛选的α-烯醇化酶的诱饵载体pGBKT7-Eno.采用Overlap-PCR技术从感染猪附红细胞体血液DNA中扩增了Eno基因全长序列,定向克隆到酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组诱饵载体转化酵母Y2H,并验证其在酵母细胞中毒性作用和有无自激活现象.结果显示,本试验成功构建了诱饵载体pGBKT7-Eno,并证明其对酵母细胞无毒性,且对报告基因无自激活.表明诱饵载体pGBKT7-Eno可用于酵母双杂交系统筛选与α-烯醇化酶相互作用的宿主蛋白.

摘要： 为研究猪附红细胞体(M.Suis)MSGl基因的遗传变异特点,从上海地区3个屠宰场采集自然感染附红细胞体的猪血液,提取基因组DNA,根据GenBank已经报道的猪附红细胞体MSG1基因序列(登录号A-M407404.1),设计引物进行PCR扩增,将扩增产物连接到pMD18-T载体上,进行序列测定和分析.结果共获得了82条猪附红细胞体MSG1基因序列,序列长度为1011bp,共编码336个氨基酸.同源性分析显示与GenBank中已经发表的猪附红细胞体MSG1基因核苷酸序列相似性在96.5％～98.3％,氨基酸的相似性为97.9％～99.1％.MSG1基因核苷酸序列的系统进化分析表明上海地区猪附红细胞体分离株与GenBank登录的德国54/96分离株亲缘关系较远.

摘要： 本试验建立了一种基于猪附红细胞体MSG1蛋白的间接ELISA方法,确立了试验程序中的最佳抗原包被浓度,最佳血清稀释倍数,并从封闭剂的选择,封闭剂的作用时间,待检血清的作用时间,二抗血清的作用浓度和作用时间等方面进行了条件的优化.此ELISA方法不与猪场中常见的猪病阳性血清发生交叉反应,证明此方法具有良好的特异性.批间重复试验和批内重复试验结果表明此ELISA方法具有良好的重复性.利用建立的ELISA方法对湖北省不同规模的猪场随机采集不同阶段的血清样品进行抗体水平检测,根据季节和猪群的年龄阶段对猪附红细胞体病的流行情况进行了分析.

摘要： 猪附红细胞体病是由立克次氏体目附细胞体引起的一种散发、热性、溶血性疫病，主要特征为贫血、高热、黄疸、仔猪排黄白色稀便并高度致死的。猪链球菌病在临床上较为多见，常表现为败血症、关节炎和局部肿胀。这两种病单独发病时治疗不难，一旦混合感染后，会给诊断和治疗带来一定困难。本文对一起猪附红细胞体与链球菌混合感染的发病情况、临床症状、剖检变化、实验室检查与防治措施进行介绍。

摘要： 通过人工合成猪附红细胞体MSG1基因的编码序列，提高目的基因在大肠杆菌中的高效表达。根据GenBank注册的AM407404的544-942氨基酸序列，选择大肠杆菌偏爱的密码子，设计并合成了12条寡核苷酸片段．用PAS方法，全基因合成MSG1部分目的基因，克隆入pjet1.2/blunt载体。经测序证实正确后，构建原核表达载体pET-28c/MSGl，并转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，获得含重组表达质粒的转化子，IPTG诱导表达，并进行SDS-PAGE分析．测序、酶切鉴定等结果表明表达载体构建成功，诱导表达后大约在16KD的位置出现明显的蛋白条带．

摘要： 利用引物重叠扩增法人工合成猪附红细胞体粘附蛋白基因MSG1，将扩增产物插入到pMD18-T载体中，亚克隆至原核表达载体pET28c，构建pET28c_msg1表达载体，转入E.coli BL21，IPTG诱导表达。用SDS-PAGE，Westem blot方法分析鉴定，表达产物具有很好的抗原性．纯化后的重组蛋白接种昆明小白鼠后，用重组蛋白作为抗原包被酶标板，以检测接种昆明小白鼠血清抗体的产生。结果表明MSG1基因在大肠杆菌中能够得到高效的表达，并能够刺激小鼠产生较好的抗体，对我们今后研究附红细胞体MSG1基因功能具有重要的意义。

摘要： 根据猪附红细胞体(Mycoplasma suis)3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白1基因(msgl)序列设计引物,对上海地区分离的小附红细胞体(M.Parvum)阳性猪全血DNA进行PCR扩增,获得小附红细胞体3-磷酸甘油醛脱氢酶样蛋白l基因(mpgl)并进行测序和分析,研究其遗传变异特点.结果共获得了11条小附红细胞体mpgl基因序列,序列长度均为1011bp.同源性分析显示所获得的11条小附红细胞体mpgl基因序列之间的相似性为96.8％～99.9％,预测氨基酸序列的相似性为97.9％～100％之间；与GenBank中已经公布的猪附红细胞体msgl基因核苷酸序列相似性在96.6％～98.2％之间,氨基酸序列的相似性为98.2％～99.1％.系统进化分析表明每个聚簇都由msgl基因与mpgl基因共同组成.

摘要： 本文研发了一种实时荧光定量PCR方法，用于从血样中诊断猪附红细胞体，并调查日本商品猪场该病的流行情况。首先根据16s rRNA序列设计4条通用引物和两条特异性引物。运用先前检测感染阳性的样本建立基于SYBR染料的实时荧光定量PCR检侧方法，然后进行溶解曲线分析。随后使用6个阳性样本利用终点PCR方法评价2中引物配比的PCR检测方法，包括特异性引物对和通用引物对。并进一步运用日本11个猪场的119个健康猪的血样进行监测，以确定其流行率。通过对11个猪场的检测发现了猪嗜血支原体和解脲支原体，而且在日本猪场具有较高的感染率。

摘要： 从自然感染附红细胞体的浙江猪体内无菌采集血液,提取病原基因组,用血营养菌的16S rRNA基因的通用引物进行PCR扩增,得到两株长约1.5kb的扩增片段,将其克隆到pMD18-T载体后进行测序和分析.获得全长为1445bp两条16S rRNA基因序列,分析表明两者的同源性为99％,该序列与猫的类附红细胞体的16S rRNA基因序列同源性达到92％,与感染猪的附红体M.suis和M.parvum同源性仅为80％和81％.将该序列与1种支原体、16种血营养菌16S rRNA基因序列及进行比较,用MEGA5.1软件,neighbor-joiningprogram建立系统发育树,结果表明该附红细胞体同血营养菌的分类中的haemofelis group关系较近,与原来猪的两种附红体M.suis和M.parvum所属的haemominutum group的关系较远,证实该病原为一种感染猪的新种附红细胞体.姬姆萨染色血液涂片显示该病原为紫红色,蓝紫色的颗粒,有折光性；扫描电镜观察其大小约为0.3-0.5lμM,附着于红细胞表面,形态特征与目前我国流行的猪附红体没有显著区别.

摘要： 本发明公开了一组实时荧光定量检测猪全血弓形体和附红细胞体的PCR引物探针组，包括弓形体529基因的上游引物TG‑529‑F、下游引物TG‑529‑R和弓形体特异性荧光探针TG‑529‑P，附红细胞体16SrRNA的上游引物ES‑F、下游引物ES‑R和附红细胞体特异性荧光探针ES‑P。在该引物探针组基础上组装的双重荧光定量PCR试剂盒，能够同时检测猪弓形体病和附红细胞体病，具备高灵敏性、高特异性、稳定性和准确性的优势，且可一次性检测出混合感染，为一线猪场临床弓形体病和附红细胞体病的早期诊断和防控监测工作提供可靠的技术和产品。

摘要： 本发明公开了猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体检测用引物和检测试剂盒。所述检测用引物为序列表SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：4，本发明还提供了猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体的检测试剂盒。本发明所选引物特异性强，且能同时检测三种病原，节约成本、减少步骤，提高效率。本发明方法具有高特异性、高灵敏度，高效率、稳定性好的特点。

摘要： 本发明公开一种猪源附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：针对SEQ ID NO:1所示猪附红细胞体a1基因序列设计的TaqMan探针；针对SEQ ID NO:1所示猪附红细胞体a1基因序列设计的引物对。本发明基于a1基因的猪源附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒，具有特异性强、灵敏性高、重复性好的特点，可快速、准确、高通量地检测出猪血样品中是否存在附红细胞体，可应用于猪的附红细胞体病的临床诊断、分子流行病学调查、疗效评估和猪场净化等方面，对于猪的附红细胞体病的早期快速诊断、防控和净化具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种用于治疗猪附红细胞体病的饲料及其制备方法，饲料包括以下原料：玉米、豆粕、米糠、花生粕、干姜粉、麦芽粉、食盐、中药添加剂和维生素预混料。本发明的有益效果是：本发明对患有猪附红细胞体病治疗具有疗效显著，扶正祛邪，治愈率高，无毒副作用，不易复发，无药害，成本低等优点。

摘要： 本发明公开了一种用于治疗猪附红细胞体病的饲料添加剂及其制备方法，包括以下原料药：黄连、黄柏、马齿苋、连翘、夏枯草、板蓝根、甘草、蒲公英、黄芪、陈皮、玄参、石斛、常山、焦三仙、水牛角、土茯苓、地皮消、商陆和地八角。本发明的有益效果是：本发明对患有猪附红细胞体病治疗具有疗效显著，扶正祛邪，治愈率高，无毒副作用，不易复发，无药害，成本低等优点。

摘要： 本发明公开了猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体检测用引物和检测试剂盒。所述检测用引物为序列表SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：4，本发明还提供了猪附红细胞体、小附红细胞体和未定种附红细胞体的检测试剂盒。本发明所选引物特异性强，且能同时检测三种病原，节约成本、减少步骤，提高效率。本发明方法具有高特异性、高灵敏度，高效率、稳定性好的特点。

摘要： 本发明公开了一种检测脐带血中猪附红细胞体的实时荧光PCR试剂盒及其用途。该试剂盒是首次根据猪附红细胞体膜蛋白OxaA基因而研制的实时荧光PCR试剂盒，包括针对猪附红细胞体OxaA基因序列设计的Taqman荧光探针及引物，所述引物的序列如SEQ ID NO:1以及SEQ ID NO:2所示，所述荧光探针的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明的实时荧光PCR试剂盒，具有特异性强、灵敏度高、准确度高和重复性优的优点，可以实现大通量样品的检测。本发明的试剂盒不仅可用于猪脐带血的附红细胞体病检测，也可用于常规血液与组织样品的检测，指导该病的预防，进行分子流行病学调查，评估疗效；同时通过脐带血还可达到母仔猪同时监测的目的，对于附红细胞体病的早期快速诊断、防控具有重要意义。

摘要： 本发明公开一种鉴别猪源附红细胞体种类的试剂盒，该试剂盒包含：用于扩增SEQ？ID？NO:1或SEQ？ID？NO:2所示猪源附红细胞体16S？rRNA基因序列的引物对，以及限制性内切酶Sca？Ⅰ或Ssp？Ⅰ。本发明基于16S？rRNA基因的鉴别猪源附红细胞体种类的试剂盒，能够正确快速地鉴定感染猪的两种附红细胞体，包括猪附红细胞体和小附红细胞体，有利于猪的附红细胞体病的临床诊断、分子流行病学调查和猪场净化等工作，对于猪源附红细胞体病的早期快速诊断、防控和净化具有重要意义。

摘要： 本发明公开一种猪源附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒包括：针对SEQ ID NO:1所示猪附红细胞体a1基因序列设计的TaqMan探针；针对SEQ ID NO:1所示猪附红细胞体a1基因序列设计的引物对。本发明基于a1基因的猪源附红细胞体荧光定量PCR检测试剂盒，具有特异性强、灵敏性高、重复性好的特点，可快速、准确、高通量地检测出猪血样品中是否存在附红细胞体，可应用于猪的附红细胞体病的临床诊断、分子流行病学调查、疗效评估和猪场净化等方面，对于猪的附红细胞体病的早期快速诊断、防控和净化具有重要意义。

摘要： 本发明提供了一种血浆中猪附红细胞体的快速检测胶体金试纸条，包括底层的支撑层和中间层的吸附层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从测试端依次为样品吸附纤维层、红细胞过滤膜、金标抗体纤维层、纤维素膜层及吸水材料层。在所述的纤维素膜层中部有一条包被抗猪附红细胞体的单克隆抗体的检测线和一条包被羊抗鼠IgG抗体或兔抗鼠IgG抗体的质控线，采用这种结构的试纸条具有特异性强，操作简便、快速，结果显示直观、准确，减少投资和检测成本，应用范围广等优点，能广泛应用于基层对于猪附红细胞体的检测。