免疫共沉淀

摘要： 本研究前期发现核内不均一性核糖核蛋白H2能够抑制流感病毒复制,为进一步探究该蛋白抑制流感病毒机制,本研究通过过表达hnRNP H2后,利用双荧光素酶报告基因试验检测hnRNP H2对流感病毒聚合酶活性的影响,利用免疫共沉淀试验检测hnRNP H2与流感病毒RNA相互作用。结果显示:过表达hnRNP H2能够显著抑制流感病毒聚合酶活性,hnRNP H2能够与流感病毒m RNA和v RNA发生相互作用。以上结果表明:hnRNP H2可能通过与流感病毒RNA结合抑制核酸出核发挥抑制流感病毒复制作用。

摘要： 目的:酵母双杂交技术筛选结肠癌细胞中与裸角质层同源蛋白1(naked cuticle homolog 1,NKD1)相互结合的蛋白质,从而进一步了解NKD1。方法:以结肠癌细胞SW480的cDNA为模板,克隆NKD1基因,并将其成功构建在pGBKT7诱饵载体上。利用酵母双杂交技术从结肠癌SW480细胞文库进行筛选。结果:初步筛选获得13个阳性克隆菌株。经测序,在数据库中BLAST比对后,共确定为8种不同基因编码的蛋白片段。回转实验进一步验证了这8种不同基因编码的蛋白均能够激活酵母双杂交系统中的His3、Ade2和LacZ报告基因。这8种不同基因中的4种基因编码的蛋白片段为YWHA蛋白家族成员,其中2种都是编码YWHAE蛋白片段。在结肠癌HCT116细胞中通过免疫共沉淀实验进一步验证,NKD1与YWHAE在结肠癌细胞中可以相互结合。结论:结肠癌细胞中,证实YWHAE是NKD1结合蛋白质,通过调控胰岛素的敏感性,进而调控结肠癌细胞对葡萄糖的摄入。

摘要： 目的:筛选氧化应激状态下CHCHD2(coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing 2)的互作蛋白,以期挖掘出CHCHD2保护神经细胞对抗氧化应激损伤的潜在机制。方法:通过Lipofectamine 2000分别在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y中转染含有Flag标签的对照质粒及CHCHD2过表达质粒,用100μmol/L过氧化叔丁醇(tert-butyl hydroperoxide,TBHP)或蒸馏水处理24 h后,采用免疫共沉淀(CoIP)的方法富集各组细胞中与CHCHD2相结合的蛋白,SDS-PAGE跑浓缩胶,切取条带,胶内酶解后进行液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)分析、数据库检索及生物信息分析,筛选与CHCHD2互作的蛋白,并对功能进行初步分析。结果:(1)CHCHD2具有保护SH-SY5Y细胞对抗TBHP诱导的氧化应激损伤作用;(2)CoIP-MS结果提示,不同于生理状态,在氧化应激状态下共有64个蛋白是与CHCHD2互作的特有差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs);(3)通过GO功能注释和KEGG富集分析,我们发现氧化应激状态下特有DEPs主要在外泌体和细胞浆中发挥作用,参与蛋白翻译及翻译起始等生物过程,在蛋白及poly(A)RNA结合方面发挥分子功能,并参与糖代谢过程;(4)DEPs还参与了负性调控活性氧生物合成过程和对过氧化氢的反应等抗氧化应激相关生物过程,其中肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(tumor necrosis factor receptor-associated protein 1,TRAP1)和热休克蛋白家族D成员1(heat shock protein family D member1,HSPD1)是抗氧化应激过程中重要的候选蛋白;(5)通过蛋白互作网络分析,我们发现在氧化应激状态下特异性存在3个蛋白[Y盒结合蛋白1(Y-box-binding protein 1,YBX1)、含TCP1分子伴侣亚基6A(chaperonin containing TCP1 subunit 6A,CCT6A)和细胞色素C氧化酶装配因子4同源物(cytochrome C oxidase assembly factor 4 homolog,COA4)]与CHCHD2有直接相互作用,也是后续需要重点关注的蛋白。结论:利用CoIP-MS法成功筛选出生理状态及氧化应激状态下CHCHD2的互作蛋白,并挖掘出与其抗氧化应激过程密切相关的2个候选蛋白(TRAP1和HSPD1)及另外3个与其直接作用的候选蛋白(YBX1、CCT6A和COA4),为进一步深入探索CHCHD2抗氧化应激作用中的生物过程及分子机制奠定基础。

摘要： 泛素化是泛素分子在系列特殊酶作用下,对靶蛋白进行特异性修饰的过程,该过程参与细胞周期、基因表达、信号传递等几乎一切生命活动的调控,近年来成为开发新药物的新靶点。泛素化研究中,确定E3泛素连接酶和其特异性底物之间的作用是研究的重点和难点,探索底物蛋白翻译后修饰命运,对于研究E3泛素酶的修饰类型具有指示性的作用。E3D泛素连接酶基因(UBE3D)在人和小鼠中相对保守,小鼠中UBE3D纯合敲除致死,提示UBE3D在胚胎发育过程中具有重要作用。本文选用了酵母双杂交(Y2H)、亲和纯化质谱(AP-MS)及免疫共沉淀(Co-IP)3种方法,筛选出了UBE3D的候选底物切割与聚腺苷酸化因子3(CPSF3).研究中发现,过表达UBE3D可以显著上调CPSF3的蛋白表达水平,敲低UBE3D可以显著下调CPSF3蛋白的表达水平,揭示UBE3D具有稳定CPSF3的作用。细胞外源泛素化实验表明,过表达UBE3D不会改变CPSF3的蛋白泛素化水平,提示UBE3D对CPSF3的泛素化修饰可能不同于常规E3泛素连接酶。CPSF3是一种核酸内切酶,对于mRNA的成熟和基因表达至关重要。因此,UBE3D可能通过稳定CPSF3对胚胎发育起到重要作用。

摘要： PTD-FNK蛋白是人工形成的重组蛋白质,已被证明在细胞凋亡、精子冷冻保存过程中对细胞有一定的保护作用,虽然在实践中应用普遍,但国内未见其机理分析和通过蛋白结合参与调控的报道。结合Protparam、ProtScale等相关在线软件预测和分析PTD-FNK蛋白的理化性质、亲水性、二、三级结构等;分离培养猪睾丸支持细胞,采用HISpulldown技术拉下PTD-FNK未知的互作蛋白,得到的数据用UniProt数据库对比。生物信息学结果表明,PTDFNK蛋白编码295个氨基酸,蛋白质分子量33.195ku,分子式为C_(1456)H_(2225)N_(437)O_(439)S_(10);该蛋白含有PKC、PKA特异性磷酸化的结合位点。得到的互作蛋白有葡萄糖调节蛋白78、波形蛋白-1、组蛋白等。预测PTD-FNK蛋白可能通过PKA、PKC特异性磷酸化结合位点或者与蛋白互作的方式参与细胞凋亡、精子发生等过程。

摘要： 目的:鉴定肝癌相关抗原KTN1相互作用蛋白,旨在筛选出与KTN1相结合的重要蛋白,为进一步研究KTN1在肝细胞癌(HCC)中发挥生物学功能的机制提供实验依据。方法:选取HCC细胞株Huh7、HepG2和正常肝细胞株WRL68为实验对象。RIPA法提取各组细胞的总蛋白,考马斯亮蓝染色鉴定蛋白质提取效果,Co-IP实验下拉KTN1蛋白结合蛋白并用Western blotting和蛋白质银染鉴定下拉效果。利用label-free技术对下拉蛋白质进行鉴定,采用ProteinPilot软件分析质谱的结果,采用Skyline软件对蛋白质进行定性和定量分析。利用生物信息学数据库对富集的蛋白质进行GO功能注释和KEGG通路注释分析。结果:考马斯亮蓝染色显示3种细胞的蛋白条带清晰可见。Western blotting和蛋白质银染鉴定Co-IP实验下拉的蛋白中可见KTN1蛋白条带,各组Co-IP富集后均可见10个以上的条带,而阴性对照IgG的泳道则没有蛋白条带或者极少的蛋白条带。Label-free技术共鉴定出29种KTN1结合蛋白,其中H2B1L、IGHG2、VSXL2、RS18、H32、SHRM3、CALL5、SIK3等8种蛋白仅在HCC细胞系Huh7样本中检出。GO分析显示Huh7细胞株中下拉20种KTN1结合蛋白富集于14个生物过程、11个细胞组分和7种分子功能。KEGG通路注释显示这20种蛋白主要富集于Alcoholism和Systemic lupus erythematosus两个通路。结论:在肝细胞癌株Huh7中鉴定出了20种KTN1蛋白结合蛋白,其中H2B1L、IGHG2、VSXL2可能共同参与了KTN1在HCC中的生物学作用。

摘要： 流感病毒在宿主细胞核内复制时会存在大量的病毒RNA,在这个过程中细胞核内会存在相关的蛋白来参与流感病毒复制。为了探讨不均一性核糖蛋白F(hnRNP)抑制流感病毒复制的机理,研究在细胞内过表达hnRNP F蛋白,结果出现流感病毒复制被抑制的现象,免疫共沉淀和间接免疫荧光试验进一步证实了hnRNP F通过与流感病毒RNA结合抑制核酸出核,发挥抑制流感病毒复制作用。说明hnRNP F蛋白可能通过与流感病毒的RNA结合而阻止核酸出核来发挥抑制流感病毒的作用。

摘要： 目的 我们前期通过串联亲和偶联蛋白质组学技术成功地筛选出胃癌细胞SGC7901中与TXNDC5相互作用的蛋白质,在这些蛋白质中除去功能意义较为明确的蛋白,TXNIP、PRDX2、PDCD4和ADIPOR1可能在肿瘤发生发展中具有一定作用,但其具体分子作用机制尚不清楚。本研究进一步验证在胃癌组织和细胞中TXNDC5蛋白与上述蛋白的关键相互作用。方法 以pcDNA3.1为基础构建pcDNA3.1-TXNDC5真核表达载体,并以此载体瞬时转染人胃癌SGC7901细胞,RT-PCR法及Western blotting法检测TXNDC5蛋白表达。采用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)法验证TXNDC5高表达细胞系中其与TXNIP、PRDX2、PDCD4、ADIPOR1的相互作用。取人胃腺癌新鲜手术标本提取总蛋白,采用Western blotting法检测TXNDC5蛋白表达,选取确认为TXNDC5高表达的胃癌组织总蛋白采用Co-IP验证TXNDC5与TXNIP、PRDX2、PDCD4、ADIPOR1的相互作用。结果 通过Co-IP法验证,TXNDC5高表达胃癌细胞系中,TXNDC5与TXNIP、PRDX2、PDCD4存在相互作用;TXNDC5高表达胃癌组织中,TXNDC5与TXNIP、PDCD4存在相互作用。结论 本研究通过Co-IP技术成功地验证了胃癌细胞和组织中TXNDC5与TXNIP、PDCD4存在相互作用,提示TXNDC5在胃癌中的促癌分子机制可能通过与TXNIP和PDCD4相互作用影响其相关信号通路有关。

摘要： 目的:解析肺腺癌中PR结构域锌指蛋白5(PRDM5)发挥抑癌功能的分子机制,寻找与PRDM5相互作用的蛋白因子。方法:免疫共沉淀实验(Co-IP)检测肺腺癌细胞系A549和H1299中PRDM5与核小体重塑和去乙酰化酶复合物(NuRD复合物)各组分之间内源性结合。构建含有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-1-HDAC1、pGEX-4T-1-MTA1、pGEX-4T-1-MTA2以及带有His标签的原核表达载体pET-28a(+)-PRDM5。将上述重组质粒转化入大肠埃希菌(E.coli)BL21中诱导融合蛋白成功表达并纯化相应的蛋白。GST-pull down体外实验检测PRDM5与NuRD复合物直接结合的组分。结果:在肺腺癌细胞系A549和H1299中证实PRDM5与NuRD复合物多个主要组分CHD3、CHD4、MTA1/2、HDAC1/2、RbAp46/48、MBD2/3间存在内源性结合。体外GST-pull down实验证实PRDM5与NuRD复合物中的组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、转移相关蛋白1(MTA1)和转移相关蛋白2(MTA2)组分存在直接结合。结论:肺腺癌细胞中PRDM5与NuRD复合物存在相互作用。

摘要： 目的通过扩增多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)RNA结合蛋白28(RBP28)基因并构建重组表达质粒,诱导表达并纯化重组RBP28蛋白,探索多房棘球绦虫RBP28的分子特征。方法根据WormBase数据库RBP28基因序列设计特异性引物;RT-PCR扩增RBP28基因并构建重组表达质粒,诱导表达并纯化重组RBP28蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;用Western blot检测多克隆抗体特异性,并通过免疫荧光观察RBP28在多房棘球蚴及其细胞中的分布;利用免疫共沉淀技术,获得与RBP28互作的蛋白沉淀产物后,对二者进行蛋白银染和质谱鉴定。结果RBP28编码基因大小约为1245bp;重组RBP28相对分子质量约为M_(r)50000;Western blot结果表明,多克隆抗体能够特异性识别重组蛋白RBP28及多房棘球蚴全蛋白中的天然RBP28蛋白,但与猪带绦虫、泡状带绦虫和细粒棘球绦虫无明显的抗原交叉反应;免疫荧光定位表明,RBP28主要分布在多房棘球蚴的生发层,在多房棘球蚴细胞则主要分布于细胞质中;对银染和质谱鉴定结果比较分析,获得了7种可能与RBP28相互作用的蛋白质。结论本研究确定了RBP28蛋白编码基因的大小、分子量及其多克隆抗体的特异性。通过免疫荧光定位,发现RBP28主要分布在多房棘球蚴的生发层,并利用质谱鉴定获得了7种与RBP28有互相作用的蛋白质,为研究多房棘球绦虫病的致病机制奠定了基础。

摘要： 目的：通过免疫共沉淀结合质谱分析技术筛选与不育症患者血清中抗精子抗体结合的精子蛋白,从而进一步揭示抗精子抗体相关免疫性不育的机制.rn 方法：首先利用ELISA试剂盒进行抗精子抗体阳性血清的筛选,再采用混合抗球蛋白试验(MAR)对抗精子抗体阳性血清进行确认.收集正常人精液,提取精子膜蛋白,然后进行免疫共沉淀反应,分别将抗精子抗体阳性血清、抗精子抗体阴性血清与精子膜蛋白孵育后,同时加入protein A/G孵育,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,切胶酶解后,进行液相色谱结合二级质谱(LC-MS/MS)分析,得到相应的蛋白质ID.通过搜索UniProt数据库检索查找这些蛋白的名称、生物学功能、细胞定位等信息.rn 结果：筛选出抗精子抗体阳性不育患者血清56例(女性39例、男性17例),抗精子抗体阴性正常生育者血清31例(女性17例、男性14例).共鉴定出40种相关蛋白,可分为3组蛋白,分别是：①仅与正常组血清相结合的蛋白(11种);②既与正常组血清结合,也与抗精子抗体阳性不育组血清结合的蛋白(14种);③仅与抗精子抗体阳性不育组血清结合的蛋白(15种).15种可能与免疫性不育相关的候选精子蛋白分别是精子阳离子通道蛋白家族成员(Cationchannel sperm-associated protein1、3、4,CatSper1,CatSper3,CatSper4),精子相关抗原9(Sperm associated antigen9,SPAG9),载脂蛋白A-I(Apolipoprotein A-I,APOA-I),轴丝动力蛋白重链14(Dynein heavy chain14,DNAH14),Cylicin-2(CYLC2),精卵融合蛋白4(Izumo sperm-egg fusion protein4,Izumo-4),硫氧还蛋白结构域蛋白2(Thioredoxin domain-containing protein2,Txndc2),IQ domain-containing protein H(IQCH),IQ domain-containing proteinF1(IQCF1),精子发生相关蛋白5(Spermatogenesis-associated protein5,SPATA5),SPATA5L1,精子顶体膜相关蛋白1(Sperm acrosome membrane-associated protein1,SPACA1),E3泛素蛋白连接酶RNF114(E3ubiquitin-protein ligase RNF114,RNF114).rn 结论：利用免疫共沉淀联合液相色谱串联质谱分析技术筛选出15种免疫性不育相关的候选蛋白,其参与精子发生、精卵融合、顶体反应等受精中关键过程,进一步深入研究对揭示男性生殖有重要意义.

摘要： 利用免疫共沉淀技术验证CFL2(丝切蛋白)和MEF2C(肌细胞增强因子-2)之间的相互作用关系.构建带绿色荧光蛋白的pEGFP-N1-CFL2和pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C重组载体,经双酶切鉴定正确后,分别将上述重组载体共转染至人宫颈癌Hela细胞,利用免疫共沉淀方法验证CFL2和MEF2C之间的相互作用关系.结果显示,pEGFP-N1-CFL2和pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C重组载体共转染人宫颈癌Hela细胞,分别用抗CFL2和抗MEF2C抗体沉淀蛋白复合物,用抗MEF2C和抗CFL2抗体进行Western blot检测,检测到pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C和pEGFP-N1-CFL2的表达.成功构建pEGFP-N1-CFL2和pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP-his-MEF2C真核表达重组载体,在人宫颈癌Hela细胞中表达后利用免疫共沉淀的方法证实了CFL2和MEF2C之间存在相互作用.

摘要： 目的：探讨RNA干扰技术沉默基质交感分子1基因后对内皮祖细胞周期的影响。方法：培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,用构建好的大鼠基质交感分子1干扰腺病毒载体和人重组基质交感分子1腺病毒载体进行转染,逆转录PCR检测细胞基质交感分子1表达,流式细胞技术检测细胞周期,激光共聚焦测量钙离子浓度,免疫共沉淀检测基质交感分1与瞬时受体电位通道1之间的相互作用,酶联免疫吸附测定法检测大鼠1,4,5-三磷酸肌醇I含量。结论：TRPC1的钙库操纵性钙通道参与基因沉默STIM 1对EPCs的钙库操纵性钙内流的调控，诱导细胞周期停滞在G1期，进而抑制细胞增殖。

摘要： 为了进一步阐明GBLP在普萘洛尔（PRO）生物学效应发生机制中的作用，本文采用免疫共沉淀法结合HPLC-CHIP-IT-MS/MS系统筛选并鉴定了GBLP相互作用蛋白。结果表明，有7种蛋白与GBLP存在相互作用，分别为Caseina-S1、Caseina-S2、bcasein、桥粒芯蛋白1前体、a-烯醇化酶、果糖二磷酸醛缩酶C、硫氧还原蛋白过氧化物酶2。这些蛋白的生物信息学检索结果提示，GBLP可能参与了细胞的能量代谢调节和抗氧化机制，与PRO的生物学效应发生机制密切相关。

摘要： 目的：探讨不同严重程度的实验性急性胰腺炎(AP)时动物肝脏和胰腺组织中伴侣因子60(Cpn60)的表达特点及可能的意义。rn 方法：用蛙皮素腹腔注射复制急性轻型胰腺炎(MAP)小鼠模型;用去氧胆酸钠逆胰胆管注射复制急性重型胰腺炎(SAP)大鼠模型;分别设各自假手术对照组(Sham组)。造模后1、5、10h分批处死动物，取肝、胰组织。病理切片观测胰腺组织病变情况：免疫共沉淀(IP)及Western blot技术确定肝、胰组织Cpn60蛋白条带位置及表达的改变。rn 结果：MAP及SAP组的胰腺组织分别出现水肿性和出血坏死性改变。MAP组及其Sham组1h Cpn60表达量明显低于正常小鼠，而5h的显著升高。SAP组和棚应的Sham组1hCpn60表达量明显增高，随后降低，从1h到10h SAP组的下降幅度明显大于相应Sham组。发现小鼠、大鼠胰腺和肝脏组织Cpn60蛋白有两条带，在各组及其不同时段，该蛋白条带的变化各有不同。rn 结论：大鼠、小鼠胰腺和肝脏组织中 Cpn60蛋白表达呈双带，且在AP时变化不一。提示AP时不仅有Cpn60蛋白量的表达异常，还可能存在质的异常，这些异常可能参与了AP的发生和发展。

摘要： 严重急性呼吸综合征(severe acute re-spiratorysyndrome，SARS)是一种具有明显传染性、可累及多脏器系统的特殊肺炎，其病原体为SARS冠状病毒(SARScoron-avirus，SARS-CoV)。SARS-CoV的N蛋白(nucleocapsid protein)是一种重要的结构蛋白，位于病毒颗粒的核心部分与病毒RNA结合，在病毒的包装等过程中起重要作用。本研究构建了pCDNA3.1/N载体，瞬时转染人胚肺成纤维细胞，将抗Sars冠状病毒N蛋白的单克隆抗体(mAb )交联到Sepharose 4B，采用免疫共沉淀方法，寻找到与N蛋白相关的myosin ⅡA ( non-muscle)蛋白，为SARS-CoV的研究提供了新方向和依据。

摘要： 真核细胞DNA与组蛋白相互作用形成复杂的高级结构被包裹在染色质内,因此,染色质结构的变化是调控DNA复制、重组、修复和转录等代谢活动的第一个关键点.染色质可分为常染色质和异染色质,异染色质的显著特征是:浓缩深染,常分布于核周和核仁区,基因稀少并处于沉默状态.HP1是构成异染色质结构蛋白的关键成分,它与Ku70相互作用,在维持端粒的稳定性方面发挥重要作用.由于Ku70在DNA链断裂修复中具有重要作用,因此推测HP1在DNA损伤修复中也发挥一定的功能.HR24L是一个多功能DNA修复基因,它不仅参与DNA切除修复和重组修复,而且还参与细胞周期检定点调控.本实验用反义技术及免疫共沉淀分析表明HP1和HR24L在辐射损伤修复过程中具有协同作用.

摘要： HR24L基因是本实验室用功能互补法从人胎肝cDNA文库中克隆出的与芽生酵母(Saccharomyces cerevisiae)RAD24同源的DNA修复基因,它与国外学者随后报道的HRAD17是同一个基因.该基因参与细胞周期检定点调控,并与辐射的抗性有关.在单细胞真核生物酵母内,RAD24基因参与DNA切除修复和重组修复.然而到目前为止,尚未有直接的生化证据表明酵母或人类该基因产物参与切除复合物或重组复合物的形成.为寻找HR24L参与上述修复的生化证据,我们用免疫共沉淀技术研究HR24L是否参与上述修复复合物的形成及其与其他DNA修复蛋白之间的关系.

摘要： 阐明小鼠胚胎心脏发育过程中转录因子Islet-1的时序表达规律,并探讨其在组蛋白乙酰化调控网络中的枢纽作用。

摘要： 阐明小鼠胚胎心脏发育过程中转录因子Islet-1的时序表达规律,并探讨其在组蛋白乙酰化调控网络中的枢纽作用。

摘要： 本发明公开了一种正极材料前驱体共沉淀反应设备，包括主体；过滤组件；搅拌单元；回流单元，用于将主体中的前驱体浆料回流至反应釜；出清单元，用于将滤清液排至主体外；第一液位控制单元，包括用于调控滤清液排放流量的出清阀，所述出清阀用于与设置于反应釜上的第一液位计联锁控制；第二液位控制单元，包括设置于主体上的第二液位计、用于调控浓缩前驱体浆料回流量的回流阀，所述第二液位计与回流阀联锁控制。本发明还公开了一种正极材料前驱体共沉淀反应设备构成的共沉淀反应系统。本发明保证了系统稳定，保证了最终生产出的产品品质稳定。

摘要： 本发明公开基于双色荧光标签蛋白GFP和mCherry进行免疫共沉淀检测蛋白互作的方法，将目标基因分别构建到表达载体的N端，提质粒后转化农杆菌，制备农杆菌侵染液共注射模式植物，提取共注射烟草叶片蛋白，用GFP‑Trap A beads去富集带有GFP标签的目标蛋白，同时将带有mCherry标签的其他目标蛋白免疫下来，最后分别使用GFP和mCherry标签抗体检测目标蛋白在免疫前和免疫后的表达及互作情况。本发明在实现荧光可视化实时监控目标蛋白在活细胞内表达及共定位的同时，可实时选择表达量最高的时期直接进行免疫共沉淀高效验证蛋白互作，极大提高蛋白互作验证的成功率，大幅度降低时间和经济成本。

摘要： 本发明公开一种用于免疫共沉淀的缓冲液及其应用，所述用于免疫共沉淀的缓冲液包括Tris‑HCl、NaCl、NP‑40和PEG，其中，所述Tris‑HCl和NaCl在所述缓冲液中的摩尔浓度对应为10～50mM和100～150mM。本发明采用温和的NP‑40去污剂，同时采用有机聚合物PEG来影响蛋白周围的水环境以及蛋白质之间的相互作用，促进大分子聚集，帮助相互作用的蛋白质靠近并结合，并使蛋白质之间的相互作用变得特异，减少了非特异性反应，从而使免疫共沉淀试验得到的照片中条带清晰、单一、可靠，从而有助于对试验结果做出正确的判断，提高免疫共沉淀试验结果的准确性。

摘要： 本发明涉及一种利用免疫共沉淀从苹果花粉管中获得级联激酶蛋白的方法。本发明属于分子生物学和基因功能领域，涉及2个在苹果花粉管生长过程中发挥重要调控作用的促分裂原活化蛋白质激酶MdMAPK3和MdMAPKK4基因，MdMAPK3基因含有1110个核苷酸，编码370个氨基酸，属于MAPK家族成员；MdMAPKK4基因含有1068个核苷酸，编码356个氨基酸，属于MAPKK家族成员。本发明公开了在苹果自交不亲和反应中，由花粉管蛋白激酶MdMAPK3筛选上游蛋白激酶MdMAPKK4并验证其互作关系的方法。

摘要： 一种利用Flag蛋白标签沉淀目的蛋白的染色质免疫共沉淀技术是在目的蛋白的序列上加上了一小段Flag蛋白标签序列，构建这样一种真核表达载体后，将其转染进细胞内表达，在做染色质免疫共沉淀的过程中，突破传统的方法，用Flag蛋白标签抗体代替目的蛋白抗体进行免疫沉淀。与传统的方法相比，此方法提高了抗体沉淀目的蛋白的特异性，减少了抗体的使用，大大降低了实验的费用。

摘要： 本发明公开了一种通过免疫共沉淀建立植原体与微管蛋白互作的方法。所述目标蛋白为微管蛋白，所述植原体为小麦蓝矮植原体，所述介体为异沙叶蝉；所述方法包括：介体目标蛋白基因全长克隆，免疫共沉淀验证植原体免疫膜蛋白与介体目标蛋白的互作，植原体免疫膜蛋白与介体目标蛋白在Sf9昆虫细胞共定位，酵母双杂交复验，明确植原体与微管蛋白互作。本发明探明了小麦蓝矮植原体与异沙叶蝉微管蛋白产生互作作用，该方法避免了验证植原体与介体目标蛋白的互作作用时出现假阳性的情况，并对植原体与介体目标蛋白发生互作的位置进行了定位。

摘要： 本发明公开了一种PLGA微球‑CRISPR免疫共沉淀法检测杜氏肌萎缩症的试剂盒，属于分子生物学和医药领域。所述试剂盒具体包括：PLGA微球，PLGA微球表面羧基活化剂，dCas9蛋白，杜氏肌萎缩症检测用sgRNA。所述杜氏肌萎缩症检测用sgRNA，为SEQ ID NO.7至SEQ ID NO.10中的任意一条。本发明是利用CRISPR技术将dCas9蛋白‑sgRNA‑捕获的杜氏肌萎缩症相关的特定基因片段结合，用PLGA微球免疫共沉淀法抓取dCas9蛋白与基因片段的复合体，并分别分析dCas9蛋白和基因片段含量。这是一种快速进行早期筛查杜氏肌萎缩症患者的方法。

摘要： 本发明涉及生物检测技术领域，公开一种基于TP0136建立的梅毒病期检测免疫共沉淀试剂盒，包括以下组分：(1)样本稀释液；(2)NanoLuc荧光素酶和梅毒螺旋体黏附素蛋白TP0136抗原组成的融合蛋白液；(3)proteinA/G包被的酶标板；(4)洗涤液；(5)荧光素酶底物。本发明利用分子生物学基因克隆表达技术，获得梅毒TP0136重组蛋白，建立检测TP0136抗体的荧光素酶免疫共沉淀方法，并组装成试剂盒，基于梅毒感染者TP0136抗体水平来区分梅毒病期，有利于指导临床合理用药，避免过度治疗，为梅毒的诊治提供一种快速、简便的检测方法。

摘要： 本发明公开了一种精子染色质免疫共沉淀方法。属靶向核酸纯化及二代测序建库样本预处理领域。包括精子消化：将精子经多聚甲醛固定、清洗、裂解后，采用微球菌核酸酶消化‑超声相结合的方法进行消化得消化液；超声参数：超声30s、间隔45s，10个循环；微球菌核酸酶消化参数：酶加入量200U/106个精子，酶解温度37°C，酶解时间30min；染色质分离：消化液经初清后得染色质；染色质免疫共沉淀：抗体与protein A agarose形成复合物，再与染色质中相应的抗原结合，之后经清洗、洗脱得免疫共沉淀反应液。本发明把超声与酶消化结合，提高消化效率，增加DNA回收率，有助于降低建库难度，提高精子免疫共沉淀效率。

摘要： 本发明公开了一种用于少量样本高通量染色质免疫共沉淀测序样品制备的方法。本发明方法包括芯片上步骤：细胞接种、交联、细胞裂解、染色质片段化、特异性免疫共沉淀反应、原位DNA文库构建和高通量样本编码；和芯片外步骤：将编码后样本从芯片上回收后进行非特异性清洗、解交联、纯化、预扩增和上机测序。所述芯片为新型超疏水微孔阵列芯片。本发明所提供的基于新型超疏水微孔阵列芯片所搭建的高通量染色质免疫共沉淀‑测序(ChIP‑seq)技术平台能够为实现少量细胞的ChIP‑seq技术提供方便可行的解决方案。