重组,遗传

摘要： 卵巢癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,由于卵巢位于盆腔深部,起病隐匿,约70％～75％的患者出现症状时已达晚期,严重威胁着女性的健康.目前已知的大多数卵巢癌易感基因通过同源重组在修复DNA双链断裂中发挥作用,乳腺癌易感基因1(BRCA1)和BRCA2是卵巢癌最常见的两大基因,是双链DNA断裂同源重组修复过程中的关键因子,以其为核心组成的BRCA肿瘤抑制因子网络中多种致病性突变均可损伤基因组的完整性和稳定性,增加卵巢癌的易感性.多项研究表明同源重组相关基因或蛋白的表达与肿瘤对放疗及基因药物的敏感性相关,并可成为生物标记物被用于肿瘤的个体化治疗.现对同源重组修复通路中与卵巢癌关联最密切的几种重要基因突变与卵巢癌的关系进行初步探讨,为卵巢癌的筛查和早期预防奠定临床基础.

摘要： [目的]探讨重组人p53腺病毒注射液(rAd-p53)联合化疗治疗复发性卵巢癌患者的疗效.[方法]将84例复发性卵巢癌患者随机分为对照组和观察组,每组42例.两组均接受常规化疗,观察组加用重组人p53腺病毒治疗,比较两组治疗效果、存活率、生活质量、复发及不良反应发生情况.[结果]观察组疾病进展率、随访复发率均低于对照组(P＜0.05),其2年生存率、3年生存率均高于对照组(P＜0.05),同时其总生存期长于对照组(P＜0.05).治疗6个月、1年、3年,两组KPS评分均上升(P＜0.05),且观察组评分上升幅度高于对照组(P＜0.05);两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]采用rAd-p53联合化疗治疗复发性卵巢癌患者疗效显著,可延长患者存活时间,改善生活质量,且安全性高,值得临床推广应用.

摘要： [目的]探讨重组人血管内皮抑制素(恩度)联合化疗治疗晚期肺鳞癌的疗效及对患者血清肿瘤标志物及血管内皮生长因子(VEGF)水平的影响.[方法]80例肺鳞癌患者按照治疗方式不同分为对照组(常规化疗)与观察组(恩度+化疗),比较两组疗效,治疗前后患者血清癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)、VEGF水平的变化及不良反应和患者生存期.[结果]①观察组总缓解率高于对照组(P 0.05);治疗后两组上述指标与同组治疗前比较均降低(P <0.05),且观察组各指标下降幅度均高于对照组(P <0.05);③观察组总生存期、疾病进展时间、无疾病进展生存期均长于对照组(P <0.05).[结论]采用恩度联合化疗方案治疗晚期肺鳞癌可提高疗效,降低患者血清肿瘤标志物及 VEGF水平,延长其生存期.

摘要： 线粒体疾病是线粒体基因组发生基因突变所导致的一类遗传疾病,目前尚无治愈方法.近年核质置换技术的出现为线粒体疾病的治疗提供了新思路.现有的核质置换技术包括生发泡移植、纺锤体移植、极体移植和原核移植技术,其中生发泡移植涉及的体外成熟可影响卵母细胞的发育潜能;纺锤体移植最大的挑战是纺锤体组装对机械刺激敏感,缺乏核膜包绕,操作过程可能对纺锤体造成损伤;极体移植违背了自然选择过程,其远期影响尚不明了;原核移植操作方便、基础研究证据充分,具有短期内向临床转化的潜能,但使用已经受精的合子作为胞质供体面临的伦理争议较大.本文就4种核质置换技术治疗线粒体疾病的应用现状进行综述.

摘要： 上皮性卵巢癌是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤,其起病隐匿,5年生存率不足50％,上皮性卵巢癌的早期筛查和治疗效果欠佳.如何辨别筛查高危人群,确立有效筛查手段及预防方法是亟待解决的问题.同源重组修复是DNA双链损伤修复的主要方式,主要是利用DNA序列间的同源性来识别,而负责配对和重组的蛋白质因子并无碱基序列特异性对于保持哺乳动物细胞的基因组完整性十分重要.乳腺癌易感基因1、2(BRCA1/2)是同源重组修复通路中的关键因子,以其为核心组成的BRCA肿瘤抑制因子网络中多种致病性突变均可损伤基因组完整性和稳定性,增加上皮性卵巢癌的易感性.随着全基因组关联性研究的开展,以BRCA1/2为核心的同源重组修复通路中的关键因子突变被检测出来,其功能及意义有待进一步研究证实.本文结合最新研究进展,对同源重组修复通路中的相关基因基本概况、相关基因检测的必要性及目前我国同源重组修复基因检测存在的问题进行综述.

摘要： [目的]探讨重组人P53腺病毒注射液联合调强放疗(IMRT)治疗中晚期宫颈癌的临床疗效.[结果]选取2013年9月至2016年9月在本院诊治的中晚期宫颈癌患者80例,按照随机原则分为观察组与对照组,每组40例.对照组给予单纯调强放疗,观察组在对照组基础上,给予重组人P53腺病毒注射液治疗,比较两组治疗结束后及治疗结束2个月的疗效、不良反应及生命质量核心量表(EORTC2C30)评分.[结果]治疗结束后,观察组总有效率为65.00%,明显高于对照组总有效率35.00%,差异有统计学意义(P0.05);观察组EORTC2C30评分为(16.42±3.17)分,明显高于对照组(14.31±2.36)分,差异有统计学意义(P<0.05).[结论]重组人P53腺病毒注射液联合腔内放疗治疗中晚期宫颈癌近期疗效满意,且未增加明显不良反应,值得临床推广应用.

摘要： [目的]探讨山莨菪碱及重组人脑利钠肽(rhBNP)单用或联合对急性心肌梗死(AMI)经皮冠状动脉介入术(PCI)患者冠脉微循环及心肌损伤标志物水平的影响.[方法]随机将行PCI术的150例AMI患者分成A、B、C三组,各50例.A组予以常规药物治疗+PCI术,B组在A组基础上于梗死相关血管(IRA)开通后立即予以冠脉内注射rhBNP治疗,C组在B组基础上在导丝通过病变后、球囊扩张前予以冠脉内注射山莨菪碱治疗.比较三组治疗前后心肌损伤标志物[肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)]及左心功能指标[左室舒张末期内径(LVDd)、左室射血分数(LVEF)、左室治疗指数(LVMI)]结果差异,记录其术后血流灌注分级(TMPG)情况、心肌灌注损伤并发症[无复流现象(NRP)、低血压、心律失常]发生情况及术后1个月内主要不良心脏事件(MACE)的发生率差异.[结果]治疗后24 h时,三组CK-MB、cTnI水平均较治疗前明显降低,且C组B组>A组(均P0.05).三组低血压发生率比较差异无显著性(P>0.05);B、C组NRP、心律失常发生率均明显低于A组(P0.05).[结论]山莨菪碱+rhBNP疗法在AMI患者的PCI治疗中对减轻其心肌血流再灌注损伤程度、改善冠脉微循环状态等具有积极意义.

摘要： 目的 构建重组慢病毒载体pCDH-BTG2,并检测其转染肺癌A549细胞后的表达与功能. 方法 通过PCR技术以含B细胞转位基因(BTG2)的cDNA克隆质粒(HsCD00330081)为模板获得BTG2基因片段,将此片段克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro,形成pCDH-BTG2,转染PC3细胞检测BTG2的表达;将重组慢病毒载体质粒pCDH-BTG2包装成重组慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞后,通过蛋白免疫印迹法检测BTG2的表达,细胞计数法检测BTG2对A549细胞生长的影响. 结果 pCDH-BTG2重组质粒构建成功,转染PC3细胞后可检测BTG2蛋白的表达,pCDH-BTG2包装成慢病毒感染A549细胞后,显著抑制A549细胞的生长. 结论 成功构建了重组慢病毒载体pCDH-BTG2,并发现BTG2抑制A549细胞的生长,为研究BTG2的功能奠定了基础,同时为肺癌的药物研究提供了靶点.

摘要： 目的：制备特异性的鼠源单克隆抗DNAH2（Homo sapiens dynein，axonemal，heavy chain 2）抗体。方法首先针对人DNAH2蛋白N端1~300 aa序列，构建可表达His标签的免疫原融合表达质粒，在大肠杆菌内以IPTG诱导His-免疫原的表达并纯化；然后免疫BALB/c小鼠，分离出脾淋巴细胞，并与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞；最后以酶联免疫吸附测定（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）筛选阳性杂交瘤细胞。结果利用IPTG有效诱导了大肠杆菌内DNAH2免疫原的表达；筛选的阳性杂交瘤细胞检测出DNAH2蛋白条带。结论成功制备针对人DNAH2蛋白的鼠源单克隆抗体。%Objective To prepare specific mouse monoclonal antibodies against Homo sapiens dynein,axonemal, heavy chain 2 (DNAH2). Methods Firstly, recombinant plasmid encoding His tagged immunogen, targeting N-terminal sequence of DNAH2 protein (1-300 aa), in E. coli was constructed. IPTG was used to induce the expression of His-immunogen, which was then purified and immunized in BALB/c mice. Hybridoma cells were obtained through the fusion between myeloma cells and splenocytes isolated from BALB/c mice. Finally, ELISA and Western blot assays were performed to screen the positive hybridoma. Results IPTG was used efficiently to induce the expression of DNAH2 immunogen in E. coli. DNAH2 protein bands were detected in screened positive hybridoma. Conclusion Mouse monoclonal anti-DNAH2 antibody is prepared successfully.

摘要： 本发明公开了耐热表型稳定遗传、携带负标记的重组口蹄疫病毒无毒株及O/A型口蹄疫二价灭活疫苗。本发明构建FMDV病毒cDNA感染性克隆质粒，其携带有病毒衣壳耐热表型的分子决定因素、在体内失去复制能力的分子因素、3A和3B蛋白表位缺失的负标记因素及在P1编码区两侧引入Pst I酶切位点，可针对任何流行株替换其衣壳蛋白编码区快速构建并拯救热稳定而且被标记的口蹄疫病毒无毒株，用作口蹄疫灭活疫苗种子病毒。用该通用质粒针对当前两个优势流行株构建两株重组病毒并用其制备O/A型口蹄疫二价灭活疫苗，免疫动物诱导高水平中和抗体并产生免疫保护；用该疫苗接种动物进行抗体检测可实现疫苗接种动物与自然感染动物的鉴别诊断。

摘要： 本发明提供了一种改变囊膜病毒热稳定性的遗传改造方法及重组病毒与其应用。该方法包括如下步骤：比较囊膜病毒的多序列，得出显著影响待改造病毒株的吸附蛋白电荷值的氨基酸突变；分析所述氨基酸突变对吸附蛋白电荷的改变值，筛选其中可显著增加或减少吸附蛋白负电荷的氨基酸突变组合；运用病毒的遗传操作技术，在转录质粒水平对囊膜病毒进行突变改造，拯救并获得耐热改造的重组囊膜病毒。本发明首次以人工突变的方式显著改变了囊膜病毒的耐热特性。本发明可广泛应用于囊膜病毒疫苗株的耐热改造，在研发耐热、安全、高效的囊膜病毒疫苗方面具有广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了经过遗传改造的紫色杆菌素生物合成基因簇、重组表达载体、工程菌及其应用，通过对紫色杆菌素生物合成基因簇的核糖体结合位点进行定点突变和密码子缺失突变改造，促进紫色杆菌素合成蛋白的有效翻译，获得生产潜力显著提高的改造基因簇；通过将上述改造基因簇或者含有改造基因簇的重组载体导入到宿主菌，获得了高产紫色杆菌素的工程菌；进一步对工程菌的发酵条件进行了优化并提供紫色杆菌素的分离纯化方法。本发明构建的基因工程菌株不仅能够显著提高紫色杆菌素的产量，且与常规的紫色杆菌素20°C或25°C低温发酵不同，在25‑37°C的温度条件下均可高效生产紫色杆菌素代谢产物，解决了发酵过程中的降温成本高的问题，适用于规模化生产。

摘要： 本发明公开了一种在染色体上定点产生遗传重组的方法。该方法通过敲除/RNAi等方法使得生物体减数分裂过程中DSB产生相关蛋白的功能受到阻碍，同时以减数分裂时期特异表达基因的启动子驱动产生DSB的外源蛋白表达，在染色体上特异位点产生DSB，通过生物体自身修复机制发展成CO，实现定点遗传重组。本发明尤其能够在重组冷点、盲点等引入遗传重组，打破基因之间的强连锁，加速优良性状聚合，剔除不利性状，使得育种过程更加高效，对于生物新品种培育有重大的应用价值。

摘要： 本发明涉及一种用于生产大分子量透明质酸的遗传重组质粒，所述遗传重组质粒是将CovR基因或CovS基因和长度为221bp的Ppgk启动子插入pSET4s::oriB.s载体的多克隆位点处，构建成功。本发明工程菌的HA产量明显高于野生型，以工程菌CovR/OP进行透明质酸的发酵生产，其透明质酸的产量比野生型菌株提高10％，透明质酸分子量比野生型提高10％；以工程菌CovS/OP进行透明质酸的发酵生产，其透明质酸的产量比野生型菌株提高20％，透明质酸分子量比野生型提高15％；本发明丰富了透明质酸的分子量类型，满足市场对不同分子量透明质酸的需求。

摘要： 本发明涉及可诱导性遗传重组酶系统CrexER，该CrexER是一种融合蛋白，该融合蛋白是重组酶Cre、雌激素受体ER以及重组酶Dre特异性识别的重组位点rox融合形成的蛋白。本发明还提供该融合蛋白的编码序列、含该编码序列的核酸构建物、宿主细胞等。本发明利用Dre‑rox同源重组的先行发生诱导Cre‑loxP同源重组的随后发生，实现了A‑Dre和B‑Cre标记细胞交集(A+B+)的靶向操纵。本发明极大的拓展了遗传靶向操纵的应用范围，为更为精准的遗传靶向操纵和生物医学研究提供了宝贵的策略。

摘要： 本发明公开了一种基于自然转化的拟态弧菌高效遗传重组方法及应用，该方法以拟态弧菌SCCF01株基因组为模板，使用目的基因上臂和目的基因下臂引物对扩增目的基因上臂序列和下臂序列；并扩增卡那霉素抗性基因片段；将扩增得到的卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段进行融合，得到含有卡那霉素抗性基因片段、目的基因上臂序列和下臂序列片段的融合PCR产物；将获得融合PCR产物与受体拟态弧菌SCCF01株进行自然转化，经过对抗性标记基因的筛选，获得拟态弧菌SCCF01株的缺失株。本发明操作过程相较于自杀质粒介导的基因重组技术和λ‑RED重组技术，无需电转质粒或打靶DNA，操作简单。

摘要： 本发明涉及一种表征遗传毒性的重组菌及其构建方法与应用。该重组菌是含有Vibrio natriegens的recA启动子和报告基因的重组载体pVrecA_luxYZ的Escherichia coli Pro 2017菌；所述报道基因使用Vibrio natriegens中的recA启动子。该重组菌暴露于具有遗传毒性的物质或具有DNA损伤能力的辐射后，诱导recA启动子引动，并使报道基因表达产生报道产物，报道产物的量与遗传毒性呈剂量效应关系，可被用于评价样品的遗传毒性和辐射的DNA损伤强度。该重组菌宿主为健康人的肠道微生物，同时该报道产物在缺氧条件下也会被遗传毒物诱导表达，因此可用于人体体内原位遗传毒性评价。

摘要： 本发明公开一种用于桑黄遗传表达的重组载体及构建方法和遗传转化方法。载体序列如SEQ ID No:13所示。构建方法：将双元载体pCAMBIA‑1301的CaMV35S启动子替换为桑黄同源启动子,获得适用于桑黄的双元载体。遗传转化方法：利用冻融法将重组双元载体转入根癌农杆菌，获得阳性菌；利用农杆菌侵染桑黄菌丝，并在培养基上共培养，随后覆盖低熔点PDA培养基；随后将菌落转移至新的培养基，选取长势旺盛的菌落提取DNA，利用PCR技术鉴定阳性菌株。本发明具有操作简单，转化率高等优点，成功实现了桑黄的遗传转化，使得在桑黄中进行同源敲除、过表达、异源表达成为可能，解决了无法建立桑黄遗传转化体系的问题。

摘要： 本发明公开了一种在染色体上定点产生遗传重组的方法。该方法通过敲除/RNAi等方法使得生物体减数分裂过程中DSB产生相关蛋白的功能受到阻碍，同时以减数分裂时期特异表达基因的启动子驱动产生DSB的外源蛋白表达，在染色体上特异位点产生DSB，通过生物体自身修复机制发展成CO，实现定点遗传重组。本发明尤其能够在重组冷点、盲点等引入遗传重组，打破基因之间的强连锁，加速优良性状聚合，剔除不利性状，使得育种过程更加高效，对于生物新品种培育有重大的应用价值。