重组融合蛋白质类

摘要： 目的 观察靶向融合肽MAP2K6-FP联合紫杉醇对卵巢癌细胞HO8910增殖、侵袭、迁移的影响,并探讨其相关机制。方法 以不同浓度MAP2K6-FP(0、0.3、0.6、1.0μg/mL)和紫杉醇(0、5、10、15、20、25μmol/L)分别作用HO8910细胞,CCK-8法测算细胞增殖率,筛选用于侵袭、迁移实验的最佳作用浓度。将细胞分为空白对照组(仅有培养基和细胞,未加药)、MAP2K6-FP组(0.3μg/mL MAP2K6-FP)、紫杉醇组(15μmol/L紫杉醇)、联合用药组(0.3μg/mL MAP2K6-FP+15μmol/L紫杉醇)。采用划痕实验检测细胞侵袭能力,Transwell小室实验检测细胞迁移能力,Western blotting法检测细胞中的JNK、Beclin-1、LC3、HSP27蛋白。将空白对照组、MAP2K6-FP组、紫杉醇组、联合用药组分别设置抑制剂亚组和对照亚组,抑制剂亚组给予SP600125(JNK抑制剂)预作用1 h,对照亚组无预处理,采用Western blotting法检测JNK、Beclin-1、LC3蛋白。结果 随着MAP2K6-FP和紫杉醇浓度增高,卵巢癌细胞HO8910细胞增殖率下降。联合用药组划痕愈合率和穿膜细胞数低于空白对照组、MAP2K6-FP组、紫杉醇组(P均<0.05)。联合用药组、MAP2K6-FP组、紫杉醇组细胞中JNK、Beclin-1、LC3蛋白表达高于空白对照组,HSP27蛋白表达低于对照组(P均<0.05);联合用药组细胞中JNK、Beclin-1、LC3蛋白表达高于MAP2K6-FP组、紫杉醇组,HSP27蛋白表达低于MAP2K6-FP组、紫杉醇组(P均<0.05)。各组细胞给予JNK抑制剂后,抑制剂亚组细胞中JNK、Beclin-1、LC3蛋白表达均低于对照亚组(P均<0.05)。结论 MAP2K6-FP联合紫杉醇可明显抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭、迁移能力,其机制可能与提高JNK信号通路相关蛋白及HSP蛋白表达、增强细胞自噬有关。

摘要： 目的比较玻璃体腔注射康柏西普治疗病理性近视脉络膜新生血管(pathological myopia choroidal neovascularization,pmCNV)与湿性年龄相关性黄斑变性(wet age-related macular degeneration,wAMD)的效果。方法回顾性分析2020年1月—2021年1月我院眼科经玻璃体腔注射康柏西普治疗的14例pmCNV患者和25例wAMD患者的临床资料,收集两组患者治疗前及首次治疗后半年时的最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心凹视网膜厚度(CMT),并分析近黄斑中央凹处外界膜(ELM)、椭圆体带(EZ)的完整性,将ELM和EZ完整性情况标记为ELM(+)和EZ(+),计算其构成比。结果与治疗前相比较,两组患者治疗后BCVA均有明显提高(Z=-2.272、-3.531,P<0.05),且pmCNV组患者BCVA治疗前后差值明显高于wAMD组(Z=-2.187,P<0.05)。与治疗前相比,两组治疗后CMT均明显降低(Z=-2.291、-3.511,P<0.05),但与pmCNV组患者相比wAMD组患者CMT治疗前后的差值更大(Z=-2.137,P<0.05)。另外与治疗前相比两组患者的ELM(+)和EZ(+)的构成比均升高(χ^(2)=4.038~7.000,P<0.05)。两组患者术前、术后BCVA(LogMAR)与ELM(+)和EZ(+)的构成比呈负相关(r=-0.754~-0.559,P<0.05)。结论定期玻璃体腔注射康柏西普对继发于病理性近视与湿性AMD的近中央凹处的CNV可产生良好治疗效果。与wAMD患者相比,pmCNV患者获得了更好的预后视力。

摘要： 目的 构建人IL-2与HBsAg融合基因并转化到BCG中构建重组BCG(recombinant BCG,rBCG),为制备治疗和预防乙型肝炎和结核病的二联疫苗奠定基础.方法 以IL-2 pMalLP质粒和HBsAg pMalLP质粒为模板,设计引物,利用PCR技术扩增HBsAg和IL-2基因,进行重叠PCR获得融合基因IL-2-HBsAg并纯化,将融合基因克隆至穿梭表达载体pMV261得到重组质粒,电转化导入BCG感受态细胞,以蛋白质印迹法检测融合基因在rBCG中的表达.结果 PCR扩增得到JL-2和HBsAg,通过重叠PCR获得IL-2-HBsAg融合基因后成功插入穿梭表达载体,rBCG能表达融合蛋白.结论 构建人IL-2与HBsAg融合基因重组质粒并导人BCG,获得了稳定表达融合蛋白的rBCG.

摘要： 目的 构建重组白喉毒素(diphtheria toxin,DT)与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)融合蛋白,研究其对裸鼠肿瘤模型的治疗效果.方法 采用PCR扩增法从人外周血淋巴细胞cDNA中获取编码含8-110位氨基酸片段的VEGF8-110基因,并从DT基因中扩增得到编码含1-384位氨基酸片段的DT384基因,将目的基因克隆到质粒载体pET9a中,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21-Plys菌株表达重组蛋白,通过阴离子交换层析和分子筛层析纯化.将滴有融合蛋白的滤纸放到暴露的鸡胚绒毛尿囊膜上,孵育24 h后,观察融合蛋白对鸡胚绒毛尿囊膜的影响.对接种肿瘤1周后的裸鼠进行尾静脉注射治疗,第21天处死裸鼠取下肿瘤,测量其体积和质量,观察融合蛋白对裸鼠肿瘤模型的治疗效果.结果 重组质粒经测序鉴定构建正确.融合蛋白在大肠埃希菌中以包涵体形式表达,包涵体具有高效的复性效果.DT384-VEGF8-110融合蛋白无法抑制鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生长,DT384-(VEGF8-110)2融合蛋白可以抑制鸡胚绒毛尿囊膜上的血管生长,也可抑制裸鼠肿瘤生长.经DT384-(VEGF8-110)2融合蛋白治疗接种Bxpc3胰腺癌细胞的裸鼠,其肿瘤平均质量(t=5.908,P＜0.001)和平均肿瘤体积(t=4.619,P＜0.001)均小于对照组,且差异有统计学意义.结论 DT384-(VEGF8-110)2融合蛋白能够有效抑制裸鼠肿瘤生长.

摘要： 目的 观察渗出型老年性黄斑变性(wAMD)患者负荷抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗反应与单核苷酸多态性(SNP)基因型的关系.方法 回顾性临床研究.2019年8月至2020年9月在天津医科大学眼科医院检查确诊的wAMD患者103例103只眼纳入研究.其中,男性59例(57.28％,59/103),女性44例(42.72％,44/103);平均年龄(68.74±7.74)岁.采用标准对数视力表检测患眼BCVA,统计时换算为最小分辨角对数(logMAR)视力.采用光相干断层扫描(OCT)检测患眼黄斑中心凹视网膜厚度(CRT).同时检测患者的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C).所有患眼均行玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗,每月1次,连续3个月.初次治疗前,采集患者外周静脉血,质谱法检测白细胞介素-8(IL-8、补体C3基因(C3)、补体因子H(CFH)、肝脂肪酶(LIPC)、胆固醇脂蛋白转移酶(CETP)、三磷酸腺苷结合盒亚家族A成员1(ABCA1)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、脂肪酸去饱和基因簇(FADS1)的SNP.按照基因频率将基因型分为野生型和突变型.临床表型中各基因型分布的频率差异和基因型分布的Hardy-Weinberg平衡等定性数据比较行x2检验或Fisher确切检验.结果 IL-8 rs4073突变型(TA+AA)患者中CRT有反应者较野生型(TT)少[比值比(OR)=0.310,95％可信区间(CI) 0.106～0.910,P＜0.05).其中药物分层检验后,康柏西普治疗组中IL-8 rs4073位点TT基因型患者CRT无反应者占比更少(OR=0.179,95％ CI =0.034～0.960,P=0.033).LIPC rs2043085突变型(CT+TT)患者中BCVA提高≥0.2 logMAR单位者较野生型(CC)可能性更高(OR=3.031,95％ CI 1.036～8.867,P＜0.05);HDL-C水平显著低于野生型(CC),差异有统计学意义(t=2.448,P=0.016).IL-8 rs4073、LIPC rs2043085突变型和野生型患者治疗前logMAR BCVA、CRT比较,差异无统计学意义(IL-8 rs4073:Z=-0.198、-1.651,P=0.843、0.099;LIPC rs2043085:Z=-0.532、-0.152,P=0.595、0.879).C3 rs 225066、CFH rs800292、CETP rs708272、ABCA1 rs1883025、FADS1 rs 174547、LPL rs12678919与抗VEGF药物治疗反应无相关性.结论 wAMD患者负荷抗VEGF药物治疗,IL-8 rs4073位点A基因型者可能对CRT反应性更差;LIPC rs2043085位点T基因型者可能对BCVA反应性相对更好.

摘要： 目的 观察玻璃体腔注射阿柏西普(IVA)初始治疗及换药治疗对渗出型老年性黄斑变性(eAMD)的短期疗效.方法 回顾性临床研究.2018年6月至2021年2月于解放军中部战区总医院眼科行IVA治疗的eAMD患者38例49只眼纳入研究.其中,男性24例29只眼,女性14例20只眼;平均年龄(66.82±8.71)岁.所有患眼均行IVA治疗.起始负荷剂量2.0 mg,每月注射1次,连续3个月,随后每月复查并评估按需治疗.49只眼中,26只眼为初始治疗(初治组),即首次发病3个月内确诊并行1VA治疗,且从发病到初诊未进行眼内药物及手术治疗;23只眼为换药治疗(换药组),其换用阿柏西普治疗前6个月接受玻璃体腔注射雷珠单抗和(或)康柏西普治疗≥4次,期间存在持续性黄斑区视网膜层间囊样水肿和(或)视网膜下积液(SRF)、无改善的色素上皮脱离(PED).IVA治疗前两组患眼最佳矫正视力(BCVA)、黄斑中心凹视网膜厚度(CMT)、PED高度(PEDH)、PED体积(PEDV)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).治疗后1、3、6个月采用与治疗前相同的设备和方法行相关检查,记录两组患眼BCVA、CMT、PEDH、PEDV变化及并发症发生情况.两组间的BCVA、CMT、PEDH、PEDV比较采用重复测量方差分析.结果 治疗后6个月,初治组、换药组患眼IVA注射次数分别为(4.15±0.73)、(4.39±0.72)次,差异无统计学意义(t=-1.141,P=0.260).初治组(F=5.345、22.995、6.764、5.425)、换药组(F=12.519、15.576、8.843、9.406)患眼治疗后1、3、6个月BCVA、CMT、PEDH、PEDV均较治疗前明显改善,差异均有统计学意义(P＜0.05).初治组与换药组患眼治疗后各时间点BCVA、CMT、PEDH、PEDV比较,差异均无统计学意义(F=1.741、0.069、0.876、3.455,P＞0.05).随访期间所有患眼均未出现持续性眼压升高、眼内炎、视网膜色素上皮撕裂等并发症的发生.结论 IVA治疗eAMD可提高患眼视力,降低CMT、PEDH、PEDV;初始治疗与换药治疗疗效相当.

摘要： 目的 观察康柏西普治疗不同类型糖尿病黄斑水肿(DME)的疗效.方法 回顾性临床研究.2019年3月至2021年3月于西安市第三医院眼科检查确诊的DME患者136例136只眼纳入研究.其中,男性65例,女性71例;平均年龄(56.65±8.65)岁.所有患者均行最佳矫正视力(BCVA)、光相干断层扫描(OCT)检查以及糖化血红蛋白(HbA1c)水平检测.采用糖尿病视网膜病变早期治疗研究视力表行BCVA检查,统计时换算为最小分辨角对数(logMAR)视力.采用OCT仪测量黄斑中心凹视网膜厚度(CRT).依据OCT特征,将DME分为弥漫性黄斑水肿(DRT)型、囊样黄斑水肿(CME)型、浆液性视网膜脱离(SRD)型、混合型,并据此分组,分别为30、38、33、35只眼.4组患者年龄(F=1.189)、性别构成比(x2=1.331)、HbA1c水平(F=3.164)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).所有患眼均行玻璃体腔注射10 mg/ml的康柏西普0.05 ml(含康柏西普0.5 mg)治疗,每一个月1次,连续3次,其后经评估按需治疗.治疗后1、3、6个月采用与治疗前相同的设备和方法行BCVA、OCT检查.对比观察患眼治疗前后的BCVA、CRT变化.服从正态分布的计量资料,组间比较行单因素方差分析;计数资料比较行x2检验.结果 治疗前,DRT型组、CME型组、SRD型组、混合型组患眼logMAR BCVA分别为0.68±0.11、0.69±0.15、0.71±0.12、0.73±0.14,CRT分别为(631.4±50.7)、(640.6±55.7)、(652.3±63.4)、(660.4±61.8) μm.与治疗前比较,治疗后1、3、6个月,DRT型组(BCVA:t=8.139、11.552、11.672;CRT:t=16.163、21.653、25.855)、CME型组(BCVA:t=8.923、9.995、13.842;CRT:t=16.163、21.653、25.855)、SRD型组(BCVA:t=5.171、7.315、6.051;CRT:t=9.099、13.731、21.306)、混合型组(BCVA:t=5.072、6.939、7.142;CRT:t=6.920、15.352、17.538)患眼BCVA均明显提高,CRT明显下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗后6个月,4组患眼logMARBCVA、CRT比较,差异均有统计学意义(x2=58.478、64.228,P＜0.05).DRT型组、CME型组、SRD型组、混合型组患眼平均注射次数分别为(3.37±1.35)、(3.68±1.38)、(4.18±1.40)、(4.13±1.50)次;4组患眼平均注射次数比较,差异有统计学意义(x2=9.139,P=0.028).结论 康柏西普可有效降低不同类型DME患眼CRT,提高BCVA.与SRD型、混合型比较,DRT、CME型患眼视力改善更有效,CRT降低程度更大,注射次数更少.

摘要： 卵巢癌是一种常见的妇科恶性肿瘤,具有发病率高、致死率高的特点.由于其发病隐蔽且缺乏有效检测手段,确诊时一般已处于中晚期,因此提高卵巢癌早期诊断率可有效提高患者的预后及生存率.肿瘤内皮细胞标志物1(tumor endothelial marker 1,TEM1)是一种新近发现的卵巢癌特异性肿瘤标志物,其表达于卵巢癌细胞表面,而在正常组织中不表达或仅极低表达.该特点使TEM1成为极具潜能的卵巢癌诊断和治疗的新靶点.应用TEM1的特异性抗体结合影像学、基因工程学等技术,无论在卵巢癌影像以及治疗方面都显示出了极好的抗肿瘤效果.同时大量基于靶向TEM1的临床试验正在进行中.本文综述TEM1的发现、结构、组织表达以及其在卵巢癌诊断及治疗中的研究进展,以期为卵巢癌的治疗提供新思路.

摘要： 目的 以冻干重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,“EC”为重组融合蛋白“结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)”](以下简称“EC”)原液为原材料,研制EC变态反应原原液效力评价用国家参考品.方法 以电泳法、高效液相色谱法分别测定备选EC原液纯度,纯度合格后经精密称量、分装、冻干制成候选国家参考品,再测定其蛋白质和水分含量.将候选国家参考品稀释成不同稀释度后,皮内注射结核分枝杆菌活菌致敏的豚鼠,根据皮肤试验硬结或红晕反应平均直径大小(简称“反应平均直径大小”)结果探索原液效价测定的适宜稀释度.在此基础上,将候选国家参考品用于EC原液的效价测定并进行方法验证,初步评价其适用性能.研究还初步观察了候选品在-20°C放置24个月的稳定性.结果 EC原液电泳法纯度为100.00％,高效液相色谱法纯度为95.33％,候选国家参考品蛋白质含量为508 μg/瓶,水分含量为1.57％,分装精度控制在±1％以内.稀释度探索结果显示:候选品稀释度为2.5 μg/ml(12.5U/ml)、5μμg/ml(25 U/ml)和10 μg/ml(50 U/ml)时剂量对数反应平均直径大小曲线有良好的线性关系(R2=0.9944),可作为后续研究的适宜稀释度.将候选国家参考品用于EC原液效价测定,两者剂量对数反应平均直径大小曲线趋势基本一致(R2=0.9878,R2=0.9643),且每个稀释度EC原液与相应稀释度候选国家参考品反应平均直径大小的比值均满足1.0±0.2.方法 验证结果显示:候选国家参考品和EC原液的剂量对数反应平均直径大小曲线趋势基本一致(R2=0.9999,R2=0.9815),且两者相应稀释度反应平均直径大小的比值均满足1.0±0.2,方法可行.初步稳定性研究结果显示:-20°C放置24个月的候选国家参考品效价测定性能稳定.结论 候选国家参考品的纯度、蛋白质含量、水分含量及均匀性检测均符合国家参考品质量要求,将其稀释到适宜稀释度后可用于EC原液的效价测定;经方法验证与稳定性观察,显示其性能良好,为国家参考品申报提供了基础.

摘要： 本发明提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

摘要： 本发明涉及融合蛋白质或融合肽，所述融合蛋白质或融合肽的体内半衰期通过维持体内持续释放而增加，本发明还涉及使用所述融合蛋白质或融合肽增加体内半衰期的方法。与固有的生理活性蛋白质或生理活性肽相比，根据本发明的融合蛋白质或融合肽通过将生理活性蛋白质或生理活性肽与α-1抗胰蛋白酶突变体或含有一个或一个以上突变氨基酸的α-1抗胰蛋白酶突变体结合以维持所述生理活性蛋白质或生理活性肽在体内持续释放并且显著地增加所述生理活性蛋白质或生理活性肽的血液半衰期(T

摘要： 本发明揭示了包含二氢叶酸还原酶(DHFR)启动子的可诱导的高表达盒，所述启动子中富含GC重复序列被部分或完全去除，所述表达盒能够更有效地改善基因扩增系统。本发明还揭示了包含所述可诱导的表达盒和任选编码重组目的蛋白质的基因的表达载体，用所述表达载体转化的动物细胞系和通过培养所述转化体大量生产和纯化重组蛋白质的方法。本发明能够缩短建立使用低浓度DHFR抑制剂以高水平生产重组目的蛋白质的细胞系所需的时间，因此更高效地生产所述重组蛋白质。

摘要： 本发明揭示用以增进重组多肽/蛋白质(recombinantpolypeptide/protein)的生产的核酸构建体与表达载体，以及用以大量生产重组多肽/蛋白质的方法，其中一编码硫氧还蛋白(thioredoxin)的第一核酸序列以及一编码血红蛋白的第二核酸序列被克隆至一重组宿主细胞内，由此而增强该重组宿主细胞生产一选定的基因产物的生产力以及帮助该重组宿主细胞缓解由于该基因产物的过量生产所致的细胞内应激(intracellular stress)。

摘要： 本发明提供一种含有生物活性胜肽的重组蛋白质、含有该重组蛋白质的医药组成物以及该重组蛋白质的制备方法，其将连续多套的生物活性胜肽置换于一个蛋白质中，再由无毒性安全可食用的酵母菌大量生产富含连续多套生物活性胜肽的高浓度胜肽蛋白。

摘要： 本发明涉及蛋白质和/或其片段和衍生物及它们在疫苗和生物技术方法中的应用。该疫苗特别包括从牛蹄炎分离出的密螺旋体的免疫原性蛋白质。本发明进一步涉及针对所述蛋白质或其片段的抗体，和所述蛋白质在诊断方法中的应用，其中检测所述抗体作为牛蹄炎的标志。

摘要： 使用基因重组技术,用不带电荷并且尺寸小的丝氨酸取代位于去铁铁蛋白的通道3的谷氨酸以及天冬酰酸。接着,用赖氨酸的碱性氨基酸或中性氨基酸取代位于保持部4的谷氨酸。再在保持部导入一个以上的半胱氨酸。由此,能防止带负电荷的(AuCl

摘要： 本发明涉及融合蛋白质或融合肽，所述融合蛋白质或融合肽的体内半衰期通过维持体内持续释放而增加，本发明还涉及使用所述融合蛋白质或融合肽增加体内半衰期的方法。与固有的生理活性蛋白质或生理活性肽相比，根据本发明的融合蛋白质或融合肽通过将生理活性蛋白质或生理活性肽与α-1抗胰蛋白酶突变体或含有一个或一个以上突变氨基酸的α-1抗胰蛋白酶突变体结合以维持所述生理活性蛋白质或生理活性肽在体内持续释放并且显著地增加所述生理活性蛋白质或生理活性肽的血液半衰期(T

摘要： 本发明揭示了包含二氢叶酸还原酶(DHFR)启动子的可诱导的高表达盒，所述启动子中富含GC重复序列被部分或完全去除，所述表达盒能够更有效地改善基因扩增系统。本发明还揭示了包含所述可诱导的表达盒和任选编码重组目的蛋白质的基因的表达载体，用所述表达载体转化的动物细胞系和通过培养所述转化体大量生产和纯化重组蛋白质的方法。本发明能够缩短建立使用低浓度DHFR抑制剂以高水平生产重组目的蛋白质的细胞系所需的时间，因此更高效地生产所述重组蛋白质。

摘要： 本发明揭示用以增进重组多肽/蛋白质(recombinant polypeptide/protein)的生产的核酸构建体与表达载体，以及用以大量生产重组多肽/蛋白质的方法，其中一编码硫氧还蛋白(thioredoxin)的第一核酸序列以及一编码血红蛋白的第二核酸序列被克隆至一重组宿主细胞内，由此而增强该重组宿主细胞生产一选定的基因产物的生产力以及帮助该重组宿主细胞缓解由于该基因产物的过量生产所致的细胞内应激(intracellular stress)。