遗传载体

摘要： 目的探讨腺病毒载体介导神经生长因子(NGF)体外转染大鼠肌源干细胞(MDSCs)应用于基因治疗的可行性。方法培养并纯化MDSCs细胞株,采用具有高效转染能力的腺病毐载系统将NGF基因导人MDSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术检测转染率、实时荧光定量PCR(qPCR)检测目的基因NGF的表达情况。结果腺病毒感染MDSCs的感染复数为1000时最佳,感染率可达80%。EGFP自72 h时荧光表达开始逐渐增强。转染的MDSCs中NGF基因高表达。结论通过携带NGF的腺病毒载体可以成功转染MDSCs,从而上调目的基因在肌源干细胞中的表达;且通过腺病毒介导转染的目的基因NGF不会导致肌源干细胞的过度增殖和凋亡。

摘要： 目的 探讨腺病毒载体介导神经生长因子(NGF)体外转染大鼠肌源干细胞(MD-SCs)应用于基因治疗的可行性.方法 培养并纯化MDSCs细胞株,采用具有高效转染能力的腺病毒载系统将NGF基因导人MDSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术检测转染率、实时荧光定量PCR(qPCR)检测目的 基因NGF的表达情况.结果 腺病毒感染MDSCs的感染复数为1000时最佳,感染率可达80％.EGFP自72 h时荧光表达开始逐渐增强.转染的MD-SCs中NGF基因高表达.结论 通过携带NGF的腺病毒载体可以成功转染MDSCs,从而上调目的 基因在肌源干细胞中的表达;且通过腺病毒介导转染的目的 基因NGF不会导致肌源干细胞的过度增殖和凋亡.

摘要： 目的 研究瘤内注射慢病毒载体介导的NK4过表达对肺腺癌移植瘤生长、远处转移以及微血管生成的影响.方法 构建人肺腺癌A549裸鼠皮下移植瘤模型并按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、LV-con组和LV-NK4组,每组5只.通过瘤内注射的方式分别向3组注射PBS(25μL)、阴性对照慢病毒载体LV-con(25μL,6×108 TU/mL)和重组过表达慢病毒载体LV-NK4(25μL,6×108 TU/mL),共注射2次,间隔3 d.观察裸鼠皮下移植瘤生长情况,测量瘤体积、瘤质量,计算抑瘤率.HE染色观察肿瘤组织和肺组织的形态变化.免疫组化染色检测c-Met、CD31表达,微血管密度(MVD)检测评估肿瘤血管生成情况.原位缺口末端标记(TUNEL)法检测瘤组织细胞凋亡情况.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和Western blot分别检测NK4 mRNA及蛋白表达水平.结果 成功构建裸鼠肺腺癌移植瘤模型.小鼠荷瘤实验显示,LV-NK4组瘤体积、瘤质量均小于LV-con组和PBS组(P<0.05),而LV-con组和PBS组间差异无统计学意义.LV-NK4组抑瘤率为44.51％,LV-con组抑瘤率为10.35％.LV-NK4组肿瘤组织凋亡、坏死明显增多,c-Met蛋白表达量减少,微血管生成受到抑制.肺组织HE染色结果发现,LV-con组和PBS组可见肿瘤转移灶,LV-NK4组未见明显转移灶.LV-NK4组NK4 mRNA及蛋白表达水平均高于LV-con组和PBS组.结论 慢病毒介导的NK4过表达可以通过抑制c-Met蛋白表达及微血管的形成,抑制裸鼠肺腺癌移植瘤的生长和肺部转移.

摘要： 目的 基于新型微载体microcarrier 6复合人原代肝癌细胞接种于具有正常免疫功能的小鼠,以期建立新型肝癌人源肿瘤异种移植(PDX)模型.方法 从5例新鲜的人源肝癌组织中分离提取出原代肝癌细胞,分别与微载体microcarrier 6共培养,体外构建三维肿瘤细胞培养模型.将75只雄性C57BL/6小鼠按移植物不同随机分为3组:细胞对照组、微载体对照组和实验组(每例患者对应3组,共15组,每组5只).采用皮下接种法将肝癌细胞-微载体复合体植入小鼠体内,观察小鼠成瘤时间、成瘤率、病理组织学表现等.计数资料两组间比较采用Fisher精确检验.结果 5例患者的肝癌细胞接种小鼠后有3例对应的小鼠出现成瘤;此3例实验中,对照组均没有小鼠成瘤,仅实验组出现成瘤,实验组15只小鼠中有12只成功成瘤,成瘤率高达80％,与细胞对照组、微载体对照组相比差异均有统计学意义(P值均<0.05),其成瘤时间为5～7 d,移植瘤生长速度快,HE染色可见排列呈巢状或片状、异形性明显的细胞,可见病理性核分裂象,免疫组化染色CK8/18、Hep、Gpc-3均为阳性,符合人源肝癌细胞特点.结论 本实验成功基于microcarrier 6复合人原代肝癌细胞在正常免疫小鼠体内建立了新型人源肝癌PDX模型,此模型可以更好地研究肝癌在免疫功能正常机体中发生、发展机制,同时也为肝癌精准医疗提供了较以往更有价值的新型动物模型.

摘要： 血友病的基因治疗是通过基因转导的方法,将正常的FⅧ、FⅨ基因导入患者体内,纠正遗传性基因缺陷,以持久产生可满足止血需要的正常FⅧ、FⅨ,这种治疗方法将为血友病的治疗带来新希望.血友病的基因治疗过程包括:目的基因的改造,以及载体和靶细胞的选择.血友病基因治疗的核心技术是基因转移载体技术,而基因治疗载体可分为非病毒载体和病毒载体.目前,虽然已经有多项血友病的基因治疗研究取得突破性进展,但是该治疗方法仍面临载体的应用、靶细胞的选择、针对载体和表达产物的免疫反应等许多问题,仍需要进一步研究.因此,笔者拟就血友病的基因治疗过程及其研究进展进行综述.%Hemophilia gene therapy is the process that vectors transfer normal FⅧ and FⅨ gene into patients with hemophilia,in order to correct genetic defects and produce normal FⅧ and FⅨ protein,which can meet the hemostatic requirements and bring new hope for treatment of hemophilia.The transformation of the target gene,as well as how to choose vectors and target cells are important parts of this process.The core technology of hemophilia gene therapy is gene transfer vector technology,and vectors for gene therapy can be divided into non-viral vectors and viral vectors.At present,many researches of gene therapy for hemophilia have made a breakthrough progress.However,hemophilia gene therapy still have some problems,such as the application of the vectors,the selection of target cells,the immune response to the vectors and the expression products,and the like,so further researchs are still needed.Therefore,thisarticle summarizes the gene therapy process and clinical research progress of hemophilia.

摘要： 基因组学和基因治疗的快速发展为许多难以治愈的疾病提供了解决方案,但如何设计安全有效的基因载体是阻碍其临床应用的关键.石墨烯及其衍生物因其独特的物理化学、热学、电学、光学等优良性能,被众多学者认为是一种具有潜在利用价值的基因载体.本文就石墨烯及其衍生物作为基因载体所具有的性能和常见的功能化类型进行综述.%The rapid development of genomics and gene therapy could offer solutions to many diseases that remain incurable.However,the biggest obstacle of its clinical application is how to design a safe and effective gene transfer vector.To date,graphene and its derivatives have attracted much attention due to its extrardinary physicochemical,optical and photothermal properties,so it is believed that they have a great potential in the field of gene transfer vector. The purpose of this article is to review the properties and main types of functionalized graphene and its derivatives as gene transfer vectors.

摘要： 目的:研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.rn 方法:构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.rn 结果:缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力.rn 结论:人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助.

摘要： 目的:研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.rn 方法:构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.rn 结果:缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力.rn 结论:人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助.

摘要： 目的:研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.rn 方法:构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.rn 结果:缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力.rn 结论:人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助.

摘要： 目的:研究人锌指蛋白Kaiso特异性识别甲基化CpG序列的结构域.rn 方法:构建人锌指蛋白Kaiso不同区段的原核表达载体,诱导表达获得融合蛋白,凝胶迁移实验分析其与甲基化cpG探针的特异性结合能力.rn 结果:缺失蛋白结合段POZ结构域的GST-KaisoZF能够特异性结合甲基化的E-cadherin启动子区CpG岛探针;单纯的Kaiso三锌指或二锌指则无结合甲基化探针的能力.rn 结论:人Kaiso蛋白锌指区能够特异性结合甲基化CpG,这种结合需要锌指结构侧翼序列的辅助.

摘要： 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及抗草甘膦EPSPS突变基因、含有该基因的植物遗传转化筛选载体及其应用。本发明提供的牛筋草5‑烯醇式丙酮酰莽草酸‑3‑磷酸合成酶突变基因及能够赋予植物草甘膦高抗性。本发明提供的以该表达盒作为筛选标记的植物遗传转化筛选载体及其筛选方法使得愈伤组织在组培阶段可以草甘膦作为筛选剂，所获得的转基因植株具备草甘膦除草剂的高抗性。该载体可作为转基因筛选载体附加其他功能元件使用，在转基因过程中利用植物源基因替代菌源等外源筛选标记基因，不仅丰富了植物转基因筛选方法，还可有效降低外源基因引起的转基因植物的潜在安全风险，有利于转基因植物的商业化应用，市场价值和社会效益均良好。

摘要： 本发明公开一种用于桑黄遗传表达的重组载体及构建方法和遗传转化方法。载体序列如SEQ ID No:13所示。构建方法：将双元载体pCAMBIA‑1301的CaMV35S启动子替换为桑黄同源启动子,获得适用于桑黄的双元载体。遗传转化方法：利用冻融法将重组双元载体转入根癌农杆菌，获得阳性菌；利用农杆菌侵染桑黄菌丝，并在培养基上共培养，随后覆盖低熔点PDA培养基；随后将菌落转移至新的培养基，选取长势旺盛的菌落提取DNA，利用PCR技术鉴定阳性菌株。本发明具有操作简单，转化率高等优点，成功实现了桑黄的遗传转化，使得在桑黄中进行同源敲除、过表达、异源表达成为可能，解决了无法建立桑黄遗传转化体系的问题。

摘要： 本发明公开了一种适用于甘蔗遗传转化的表达载体及其构建方法和应用，涉及基因工程技术领域。该适用于甘蔗遗传转化的表达载体为SEQ ID NO：13所示序列。本发明还公开了该适用于甘蔗遗传转化的表达载体的构建方法及其在甘蔗转基因中的应用。本发明还公开了一种甘蔗转基因方法，包括：将目的基因插入该适用于甘蔗遗传转化的表达载体，进行甘蔗的遗传转化。本发明提供的适用于甘蔗遗传转化的表达载体大幅度提高了基因枪介导的甘蔗的遗传转化效率及阳性苗筛选效率。

摘要： 本发明属于基因工程和转基因技术领域，具体涉及一种表达载体及其在植物遗传转化中的应用。本发明构建了一种新的表达载体，使用该载体作为辅助载体应用于作物遗传转化，可以提升植物尤其是玉米、小麦等依赖基因型且难转化植物物种的转化效率和优质转化苗的数量。

摘要： 本发明属于植物基因工程技术领域，具体设计一种提高草莓遗传转化效率的载体及其应用。从草莓中鉴定得到GRF5、GIF1基因，合成GRF5‑GIF1嵌合基因序列，构建得到该基因的植物过表达载体GRF5‑GIF1载体，以森林草莓‘Hawaii 4’为材料，用农杆菌介导法遗传转化森林草莓叶盘，观察遗传转化control和GRF5‑GIF1外植体芽再生情况。与control相比，转化GRF5‑GIF1的外植体芽再生率显著提高，表明GRF5‑GIF1嵌合基因的过表达能够提高草莓遗传转化效率。本发明对提高草莓遗传转化效率，加快草莓新品种培育进程具有重要意义。

摘要： 提供了具有修饰的肠病毒基因组(例如，脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒或艾柯病毒基因组)的复制型溶瘤病毒载体，其中所述修饰的肠病毒基因组具有与肠病毒基因组的非翻译区(UTR)可操作地连接的一种或多种miRNA靶序列的一个或多个拷贝。还提供了用于治疗癌症(包括例如肺癌)的组合物和方法。

摘要： 本发明公开了一种用于橡胶树白粉菌遗传转化的多菌灵抗性筛选标记，属于生物技术领域。本发明提供了一种可用于橡胶树白粉菌等丝状真菌遗传转化的多菌灵抗性筛选载体，具体使用重组质粒转化至橡胶树白粉菌，转化成功的橡胶树白粉菌产生多菌灵抗性基因，应用此多菌灵抗性基因作为橡胶树白粉菌遗传转化筛选标记。重组质粒包含第一酶切位点、第二酶切位点、橡胶树白粉菌RP60基因启动子、β‑Tub(E198A)突变基因、终止子和抗性基因。使用此重组质粒转化橡胶树白粉菌时，可用多菌灵对转化后的转化子进行筛选，转化成功的重组白粉菌可产生多菌灵抗性。该筛选标记的开发应用解决了橡胶树白粉菌转化的筛选标记问题。

摘要： 本文提供了通过使具有HAE的受试者中的C1酯酶抑制剂蛋白的水平正常化来治疗C1酯酶抑制剂缺乏的组合物和方法。

摘要： 本公开尤其提供了一种重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述rAAV载体包含AAV8衣壳和编码人C1‑酯酶抑制剂的密码子优化的SERPING1序列。本公开还提供了一种治疗患有遗传性血管性水肿(HAE)的受试者的方法，所述方法包括向所述有需要的受试者施用重组腺相关病毒(rAAV)载体，所述rAAV载体包含AAV8衣壳和编码人C1‑酯酶抑制剂的密码子优化的SERPING1序列。

摘要： 本发明公开了一种可用于指示新冠病毒受体ACE2表达量的载体、细胞株及其制备方法与应用，通过表观遗传基因编辑载体CRISPRoff‑v2.1中的蓝色荧光蛋白TagBFP替换为绿色荧光蛋白EGFP的编码序列、导入抗生素筛选标记基因和荧光标记基因，同时加入能切割ACE2启动子基因组的sgRNA，获得表观遗传修饰载体，并最终得到能够降低ACE2表达量的细胞株。本发明构建的载体和细胞能特异性地降低新冠病毒受体ACE2的表达，为治疗新冠提供了另一种具有可能性的技术手段和临床思路。