苯丙氨酸解氨酶(PAL)

摘要： 【目的】解析涮辣与昆明皱皮椒苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的差异,研究不同发育时期、不同环境和外源因子处理下PAL基因表达规律。【方法】基于基因克隆和生物信息学方法研究PAL基因和蛋白特性;利用荧光定量PCR及酶活性测定方法测定PAL表达量及酶活性。【结果】克隆得到涮辣PAL基因为2166 bp,昆明皱皮椒PAL基因为2154 bp,分别编码721和717个氨基酸。顺式元件预测结果显示:辣椒PAL可能受赤霉素、光与干旱的影响。PAL蛋白预测结果表明:PAL为脂溶性、亲水性的稳定蛋白,主要定位于质膜,无信号肽与跨膜结构,含58个磷酸化位点。在进化上PAL有保守性,但在亚组上存在一定差异。在不同发育阶段,2种辣椒PAL表达水平与酶活性的趋势都为先升高后急剧降低,且在大部分发育阶段均表现为露地栽培高于大棚栽培;同一环境条件下,涮辣PAL表达与酶活性整体高于昆明皱皮椒;且不同外源物质在一定时间内可影响涮辣PAL的表达。【结论】涮辣与昆明皱皮椒PAL基因和蛋白特性相似但存在差异,在辣椒生长发育、环境和外源物质响应方面有重要功能。

摘要： [目的]胡椒瘟病是影响胡椒产量的第一大病害,胡椒苯丙氨酸解氨酶(PnPAL)基因是胡椒抗瘟病的关键基因.探明胡椒PnPAL基因家族的基本特征、进化关系及表达模式,以便于其功能研究.[方法]通过全基因组查找、鉴定得到14条胡椒PnPAL家族成员,分别命名为PnPAL1～PnPAL14,并对这14条序列进行生物信息学及表达模式分析.[结果]蛋白质基本信息分析显示,该家族理论等电点在5.76～9.77,分子量在7.37441～83.43107 kDa.有7条胡椒的PnPAL基因含有8个motif和PLN02457保守结构域,该7条胡椒PnPAL家族成员被进一步鉴定为胡椒PnPAL家族成员.胡椒PnPAL家族成员含有诸多胁迫响应元件,特别是水杨酸、茉莉酸甲酯等与抵抗病原入侵的顺式作用元件.胡椒的PnPAL基因位于系统发生树基部位置,表明胡椒的PnPAL基因较为古老,与胡椒的系统地位相似.表达模式分析显示,PnPAL10在受病原诱导后基本呈上调趋势,表明PnPAL10可能是胡椒抗瘟病的关键基因.[结论]对胡椒PnPAL基因家族开展了生物信息学及表达模式分析,证明其在抗瘟病中的潜在作用,筛选到关键家族成员PnPAL3.

摘要： 苯丙氨酸解氨酶是植物酚酸类化合物合成通路途径中的关键酶.迷迭香酸是冬凌草中的重要的酚酸类活性物质,具有抗菌消炎等药用功效.为了研究PAL基因在冬凌草酚酸类物质合成中的作用,采用RT-PCR技术克隆冬凌草PAL基因,得到序列全长1116 bp的cDNA,最长的开放阅读框522 bp,编码173个氨基酸,相对分子质量为25.45 kD,GenBank登录号为MK304488.通过生物信息学分析,推测其为游离蛋白,三级结构的建模结果支持二级结构由19段 α-螺旋组成的预测.qPCR结果显示,IrPAL基因在冬凌草叶片中表达量最多,茎次之,根中最少.该研究首次获得了IrPAL基因的全长cDNA序列,并检测在冬凌草各组织中的表达差异,为后续进一步研究IrPAL基因在冬凌草迷迭香酸合成途径中的功能奠定了基础.

摘要： 苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)为茉莉花(Jasminum sambac)花香物质苯丙烷类合成的限速酶.为了解茉莉花花香形成的分子机理,以双瓣茉莉花瓣为材料,采用RT-PCR和RACE技术相结合的方法,克隆获得茉莉花苯丙氨酸解氨酶基因的全长cDNA (GenBank:KM406501.1),命名为Js PAL,其全长cDNA为2 220 bp,开放阅读框(ORF)为2 140 bp,编码712个氨基酸,含有lyase_I_like超家族蛋白保守域、活性位点及多肽结合位点.采用染色体步移技术,获得该基因的启动子序列.Js PAL基因上游调控序列为1 201 bp,其含有开花相关元件(CCAATBOX1)、PAL相关元件(BOXLCOREDCPAL、PALBOXPPC、PALBOXLPC、TATABOXOSPAL)以及花特异苯丙烷类相关元件(MYBPLANT)等与花香形成相关的重要顺式作用元件.实时荧光定量PCR检测结果表明,在不同组织和花瓣发育过程中,JsPAL基因在茉莉花的花蕾、花瓣中表达量较高,并且在花瓣开放过程中的22:00前表达量较高,而后呈下调趋势.

摘要： 以北京园林科研所大花蕙兰组培瓶苗为材料,采用热激法对大花蕙兰叶片外植体进行处理,研究了热激处理对引起大花蕙兰褐变的总酚含量、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)生理指标的影响,并对各生理指标间的相关性进行分析,以探讨热激处理对大花蕙兰组培褐变有效抑制的生理机制.结果 表明,热激处理明显降低了大花蕙兰叶片外植体组培褐变程度,使总酚含量、PAL和PPO活性降低,POD活性没有明显降低.热激处理因降低了PAL及PPO活性,而抑制了底物酚类物质的合成;降低了酚类物质发生催化氧化反应的速率,从而抑制了醌类物质的生成,最终抑制了外植体的褐变.

摘要： 本研究通过拍照、利用CAD软件计算对比明确了0.2mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯酚代乙酚)能显著促进翠云草生长;激素和土壤对翠云草叶色变化影响不明显;翠云草叶片中叶绿素a/b比值为2.26±0.04;在蓝色光照射下叶片中两种叶绿素含量显著增加,单克叶片中PAL的活性和翠雀素-3-O-葡萄糖的浓度显著增加,肉眼观察翠云草叶片呈蓝色.

摘要： To investigate the role of LcPAL from Lycium chinense in drought and salt stress,a phenylalanine ammonialyase(PAL)gene was cloned from Lycium chinense by the methods of reverse-transcription PCR and RACE.The fulllength cDNA of L.chinense PAL (designated as LcPAL)was 2 544 bp(Genbank No.KX781247)containing a complete open reading frame(ORF)of 2 163 bp,which encoded 720 amino acid residues.Sequence analysis showed that it had typical PAL enzyme active site sequence(GTITASGDLVPLSYIA).Homology analysis indicated that the deduced LcPAL protein was highly homology to other PAL proteins from different species.Phylogenetic tree analysis revealed that LcPAL had closer relationship with PALs from Solanaceae plants than from other plants.The results from Real-Time PCR indicated that the epression of LcPAL gene was the strongest in the leaves of L.chinense,and the least in fruits.Furthermore,LcPAL transcription level was induced under the treatment of PEG and NaCl stresses,but the expression patterns were different.As a result,the gene LcPAL which was cloned and characterized from L.chinense is a member of PAL family typically.The result of study indicated that LcPAL played a role in the development of L.chinense plant.LcPAL also played a role in resistance to drought and salt stress processes.%为研究枸杞苯丙氨酸解氨酶基因LcPAL在干旱和盐逆境中的作用,采用RT-PCR和RACE方法克隆了LcPAL基因(Genbank No.KX781247).该基因cDNA长度为2 544 bp,含有2 163 bp的完整开放阅读框,编码720个氨基酸.蛋白序列分析表明,其包含典型的PAL酶活性中心序列(GTITASGDLVPLSYIA),与其他植物的PAL蛋白有很高的同源性.系统进化树表明,枸杞LcPAL与茄科植物的PAL蛋白聚为一类,说明两者的亲缘关系较近.利用实时荧光定量PCR方法检测发现,LcPAL基因在枸杞的叶中表达量最高,果实中表达量最少.其在聚乙二醇(PEG)、氯化钠(NaCl)胁迫下诱导表达,但表达模式不同.研究结果推测从枸杞中克隆获得苯丙氨酸解氨酶(LcPAL),是典型的PAL家族成员,在枸杞各组织发育过程中具有重要功能,且在枸杞抗干旱和抗盐逆境过程也起一定作用.

摘要： 为筛选高抗烟粉虱的黄瓜新品种，本试验以“大青把”黄瓜为不抗烟粉虱对照（CK1），“无毛黄瓜”为抗烟粉虱对照（CK2），对国内外370份黄瓜种质资源进行烟粉虱抗性筛选，并对筛选出的抗性黄瓜材料接种烟粉虱，研究接种前后叶片中过氧化物酶（POD）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）、多酚氧化酶（PPO）的活性变化，以期为黄瓜烟粉虱抗性的鉴定提供理论依据。试验共筛选出四份高抗烟粉虱黄瓜材料，分别为4号、13号、19号、76号。其叶片经烟粉虱为害后，4号的 PPO 活性最高，13号的 POD 和 PAL 活性最高；4份材料的POD、PAL、PPO 活性均极显著高于 CK1。由此得出结论：不同黄瓜材料对烟粉虱的抗性与 POD、PAL、PPO 中的一种或几种物质的综合作用有密切关系。%To screen new cucumber varieties with high resistance to Bemisia tabaci,using Daqingba cu-cumber as the non Bemisia tabaci -resistance control (CK1 )and glabrous cucumber as the Bemisia tabaci -resistance control (CK2 ),the resistances of 370 cucumber germplasm resources at home and abroad were screened.The chosen cucumber materials were inoculated with Bemisia tabaci,and then the activity changes of peroxidase (POD),phenylalnine ammonialyase (PAL)and polyphenol oxidase (PPO)in the leaves before and after inoculation were studied to provide theoretical bases for the identification of Bemisia tabaci resistance of cucumber.The results showed that 4 cucumber materials with high resistance to Bemisia tabaci were screened out,including No.4,No.13,No.19 and No.76.After inoculation with Bemisia tabaci,the activity of PPO in the leaves of No.4 cucumber was the highest;the activities of POD and PAL in the leaves of No. 13 cucumber were the highest;the activities of POD,PAL and PPO in the leaves of 4 anti -Bemisia tabaci materials were all very significantly higher than those of CK1 .In conclusion,the resistance to Bemisia tabaci of different cucumber materials had close relationships with the synthetical effects of one or several substances of POD,PAL and PPO activities.

摘要： 研究了荔枝果肉中苯丙氨酸解氨酶(L-phenylalanine ammonia-lyase,PAL)的酶学特性.荔枝PAL动力学曲线并不遵循米氏方程,其最适底物浓度为2 mmol/L.在硼砂-硼酸缓冲液中,荔枝PAL的最适反应pH为8.7.PAL不耐酸碱,尤其不耐酸.荔枝PAL的最适反应温度为45°C,高于75°C则易于钝化,具有较强的耐热性.L-酪氨酸和L-半胱氨酸对荔枝PAL均有明显的抑制作用;金属离子中,Fe2+和Fe3+对荔枝PAL活性具有明显的促进作用,而Ca2+、Cu2+、Co2+、Ag+离子则对其活性有明显的抑制作用.

摘要： 以铁棍山药(Dioscorea opposita Thunb.cv.Tiegun)为试材,采用分光光度法研究了其与褐变相关的山药苯丙氨酸解氨酶(PAL)的特性以及不同抑制剂对PAL活力的影响.结果表明,在试验范围内铁棍山药PAL的最适pH为8.6,不耐碱,更不耐酸;最适温度为50°C,有一定的高温耐受性,即使在80°C条件下保温30 min仍有约12％的活力残存;L-半胱氨酸盐酸盐和柠檬酸对铁棍山药PAL活力具有明显抑制作用,植酸对PAL的抑制作用不明显,而氯化钠能促进PAL活力.为有效抑制PAL引起的鲜切铁棍山药片的褐变,应在酸性(pH＜2.0)、低温(＜20°C)或高温(＞80°C)条件下进行山药切片的加工和贮藏,鲜切片的无硫护色剂应首选L-半胱氨酸盐酸盐,其次是柠檬酸.

摘要： 黄瓜苗期用不同浓度的BTH进行诱导处理,可诱导黄瓜植株产生对霜霉病的抗性.应用30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml的BTH进行叶面喷雾,各处理病情指数均显著低于接种对照,相对防治效果分别为51.80％、55.52％、56.66％、47.38％.对已发生霜霉病的大棚黄瓜于发病实期用50μg/ml的BTH诱导处理,病害发展可得到有效控制.BTH处理后13d,相对防治效果达62.63％,处理后27d,相对防治效果为67.78％.处理后41d,相对防效仍可达53.80％.对诱导抗病机制进行了初步研究,结果表明,BTH诱导处理后,黄瓜叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL),多酚氧化酶(PPO)活性提高.

摘要： 黄瓜苗期用不同浓度的BTH进行诱导处理,可诱导黄瓜植株产生对霜霉病的抗性.应用30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml的BTH进行叶面喷雾,各处理病情指数均显著低于接种对照,相对防治效果分别为51.80％、55.52％、56.66％、47.38％.对已发生霜霉病的大棚黄瓜于发病实期用50μg/ml的BTH诱导处理,病害发展可得到有效控制.BTH处理后13d,相对防治效果达62.63％,处理后27d,相对防治效果为67.78％.处理后41d,相对防效仍可达53.80％.对诱导抗病机制进行了初步研究,结果表明,BTH诱导处理后,黄瓜叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL),多酚氧化酶(PPO)活性提高.

摘要： 黄瓜苗期用不同浓度的BTH进行诱导处理,可诱导黄瓜植株产生对霜霉病的抗性.应用30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml的BTH进行叶面喷雾,各处理病情指数均显著低于接种对照,相对防治效果分别为51.80％、55.52％、56.66％、47.38％.对已发生霜霉病的大棚黄瓜于发病实期用50μg/ml的BTH诱导处理,病害发展可得到有效控制.BTH处理后13d,相对防治效果达62.63％,处理后27d,相对防治效果为67.78％.处理后41d,相对防效仍可达53.80％.对诱导抗病机制进行了初步研究,结果表明,BTH诱导处理后,黄瓜叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL),多酚氧化酶(PPO)活性提高.

摘要： 黄瓜苗期用不同浓度的BTH进行诱导处理,可诱导黄瓜植株产生对霜霉病的抗性.应用30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml的BTH进行叶面喷雾,各处理病情指数均显著低于接种对照,相对防治效果分别为51.80％、55.52％、56.66％、47.38％.对已发生霜霉病的大棚黄瓜于发病实期用50μg/ml的BTH诱导处理,病害发展可得到有效控制.BTH处理后13d,相对防治效果达62.63％,处理后27d,相对防治效果为67.78％.处理后41d,相对防效仍可达53.80％.对诱导抗病机制进行了初步研究,结果表明,BTH诱导处理后,黄瓜叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL),多酚氧化酶(PPO)活性提高.

摘要： 黄瓜苗期用不同浓度的BTH进行诱导处理,可诱导黄瓜植株产生对霜霉病的抗性.应用30μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、90μg/ml的BTH进行叶面喷雾,各处理病情指数均显著低于接种对照,相对防治效果分别为51.80％、55.52％、56.66％、47.38％.对已发生霜霉病的大棚黄瓜于发病实期用50μg/ml的BTH诱导处理,病害发展可得到有效控制.BTH处理后13d,相对防治效果达62.63％,处理后27d,相对防治效果为67.78％.处理后41d,相对防效仍可达53.80％.对诱导抗病机制进行了初步研究,结果表明,BTH诱导处理后,黄瓜叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL),多酚氧化酶(PPO)活性提高.

摘要： 本发明涉及使用源自Idiomarina loihiensis的苯丙氨酸解氨酶从肉桂酸衍生物生产光学活性苯丙氨酸化合物的方法。本发明涉及制备对映异构体富集的苯丙氨酸化合物的工艺，所述工艺通过在存在立体选择性苯丙氨酸解氨酶时用相应的肉桂酸与氨基供体反应来实现，所述苯丙氨酸解氨酶与SEQ ID NO.4(来自Idiomarina loihiensis的PAL的氨基酸序列)具有至少50％的序列同一性。

摘要： 本发明涉及一种以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体及其制备方法,包括以下步骤：a、粗孔微球硅胶的活化,b、酶‑硅胶混合液的共沉淀,c、酶‑硅胶混合液的共沉淀聚体的共价交联，d、以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的回收和保存，本发明方法克服了传统交联酶聚体需要反复的离心或过滤所导致交联酶聚体凝聚成块的问题，提高了催化效率，且可降低生产成本、多次重复使用，更适合于大规模酶反应器。

摘要： 本发明提供一种简便、高产、廉价且不用经历复杂合成路线的α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-酯(也称为α-L-(β-o-取代天冬氨酰)-L-苯丙氨酸)生产方法，α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-β-酯是α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-α-甲酯(也称为α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸甲酯，产品名：阿斯巴甜)的一种中间体。此外，本发明提供一种简便、廉价且高产的α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-α-甲酯生产方法。使用能够催化以下反应的酶或含酶物质由L-天冬氨酸-α，β-二酯和L-苯丙氨酸生产α-L-天冬氨酰-L-苯丙氨酸-α-甲酯：在所述反应中，L-苯丙氨酸不对L-天冬氨酸-α，β-二酯的β-酯位点进行亲核攻击，而对其α-酯位点进行亲核攻击。

摘要： 本发明提供了一种台湾金线莲的苯丙氨酸解氨酶及其编码基因、重组载体、重组工程菌及应用，属于蛋白质工程技术领域。本发明提供的台湾金线莲的苯丙氨酸解氨酶，其序列是一种新的苯丙氨酸解氨酶基因序列，是金线莲主要药用成分黄酮类物质合成过程中的关键酶基因，在黄酮类化合物合成代谢途径中起重要作用。

摘要： 本发明公开了一种杜鹃花苯丙氨酸解氨酶PAL蛋白及其编码基因，包括序列表的氨基酸序列及其编码基因；该基因在叶、雄蕊、雌蕊以及花瓣中均有表达，叶子中的表达显著高于其他组织；在不同发育阶段中，盛开期的表达量最大；本发明为今后利用基因工程技术改了植物品质、获得不同花香的植物提供理论依据，弥补了目前在杜鹃花研究的相关领域的空白，具有应用价值。

摘要： 本发明涉及一种石榴苯丙氨酸解氨酶PAL及其表达基因与应用。一种石榴苯丙氨酸解氨酶PAL的表达基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的石榴苯丙氨酸解氨酶PAL，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明采用RT‑PCR和RACE技术，从石榴果实中克隆苯丙氨酸解氨酶PAL的表达基因，进行生物信息学分析，并研究了其在不同品种果实发育中的表达特性，为揭示石榴果实外观品质和褐变形成的机理提供理论依据。

摘要： 本发明涉及使用源自Idiomarina？loihiensis的苯丙氨酸解氨酶从肉桂酸衍生物生产光学活性苯丙氨酸化合物的方法。本发明涉及制备对映异构体富集的苯丙氨酸化合物的工艺，所述工艺通过在存在立体选择性苯丙氨酸解氨酶时用相应的肉桂酸与氨基供体反应来实现，所述苯丙氨酸解氨酶与SEQ？ID？NO.4(来自Idiomarina？loihiensis的PAL的氨基酸序列)具有至少50％的序列同一性。

摘要： 本发明涉及制备对映异构体富集的苯丙氨酸化合物的工艺，所述工艺通过在存在立体选择性苯丙氨酸解氨酶时用相应的肉桂酸与氨基供体反应来实现，所述苯丙氨酸解氨酶与SEQ ID No.4(来自Idiomarina loihiensis的PAL的氨基酸序列)具有至少50％的序列同一性。

摘要： 本发明涉及一种以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体及其制备方法，包括以下步骤：a.粗孔微球硅胶的活化；b.酶-硅胶混合液的共沉淀；c.酶-硅胶混合液的共沉淀聚体的共价交联；d.以粗孔微球硅胶为内核的苯丙氨酸解氨酶交联酶聚体的回收和保存，本发明方法克服了传统交联酶聚体需要反复的离心或过滤所导致交联酶聚体凝聚成块的问题，提高了催化效率，且可降低生产成本、多次重复使用，更适合于大规模酶反应器。

摘要： 本发明提供一种简便、高产、廉价且不用经历复杂合成路线的α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－β－酯(也称为α－L－(β－o－取代天冬氨酰)－L－苯丙氨酸)生产方法，α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－β－酯是α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－α－甲酯(也称为α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸甲酯，产品名：阿斯巴甜)的一种中间体。此外，本发明提供一种简便、廉价且高产的α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－α－甲酯生产方法。使用能够催化以下反应的酶或含酶物质由L－天冬氨酸－α，β－二酯和L－苯丙氨酸生产α－L－天冬氨酰－L－苯丙氨酸－α－甲酯：在所述反应中，L－苯丙氨酸不对L－天冬氨酸－α，β－二酯的β－酯位点进行亲核攻击，而对其α－酯位点进行亲核攻击。