脂磷壁酸

摘要： 目的利用体外人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)实验研究核转录因子-κB(NF-κB)参与感染诱导诱骗受体3(DcR3)表达升高的信号转导机制。方法针对购置的商品化HUVEC,分别采用低、中、高3种浓度的脂多糖(LPS)0.1、1.0、10.0μg/mL、脂磷壁酸(LTA)5、50、500 ng/mL和酵母聚糖(zymosan)10、100、1000μg/mL刺激HUVEC,设置4个处理组:LPS组、LTA组、zymosan组和正常对照组(未经过LPS、LTA和zymosan刺激的HUVEC)。流式细胞术检测细胞表面Toll样受体2(TLR2)和TLR4的表达,采用特异性抑制剂阻断NF-κB和MAPK信号通路后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中DcR3的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测细胞内DcR3 mRNA表达水平,Western-blot法检测细胞内DcR3蛋白的表达。结果流式细胞术检测HUVEC细胞表面TLR2和TLR4的表达分别为(82.23%±2.15%)和(77.87%±1.06%)。以低、中、高3个浓度刺激HUVEC细胞后,与对照组相比,低浓度组上清液中DcR3水平无明显升高;中、高浓度组DcR3水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);高浓度组DcR3水平比中浓度组明显增高,差异有统计意义(均P<0.05);随着时间延长,高浓度刺激后的HUVEC细胞上清液中DcR3的表达与对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、高浓度LPS组、高浓度LTA组以及高浓度zymosan组细胞内DcR3 mRNA的相对表达水平分别为(1.00±0.05)、(2.28±0.26)、(1.98±0.30)、(2.10±0.16)。3种刺激物组的DcR3 mRNA和DcR3蛋白表达明显升高,与对照组相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。刺激12 h后,细胞内DcR3 mRNA的表达即明显升高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。加入NF-κB抑制剂PDTC后,细胞上清液以及细胞内DcR3表达较未加抑制剂组明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),而加入P38 MAPK抑制剂U0126和PD9859后,细胞上清液及细胞内DcR3的表达无明显影响。结论LPS、LTA以及zymosan通过激活NF-κB信号通路诱导HUVEC表达DcR3。

摘要： 乳酸杆菌作为益生菌的一种,是人和大多数动物肠道内不可缺少的微生物之一.随着科学技术的发展,乳酸杆菌研究的重点从活细菌转移到细菌表面成分.磷壁酸是细菌细胞壁的主要成分之一,特别是锚定在细胞膜上的脂磷壁酸作为宿主免疫调节的活性成分引起了人们的关注.本文主要综述了脂磷壁酸的理化性质、提取方法和生物学活性,包括脂磷壁酸参与乳酸杆菌对宿主的黏附定植作用、体内外肠道免疫调节以及脂磷壁酸的突变对菌株的影响等,以期为乳酸杆菌相关免疫调控研究提供参考.

摘要： 目的 明确脂磷壁酸(LTA)对糠秕马拉色菌诱导的HaCaT细胞白细胞介素(IL)-6及IL-1β影响.方法 将HaCaT细胞分为LTA与糠秕马拉色菌共处理组、糠秕马拉色菌处理组和对照组.在共培养后的不同时间点,应用实时荧光定量聚合酶链反应(Rt-PCR)和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测不同组别HaCaT细胞IL-6及IL-1β的表达.结果 糠秕马拉色菌与HaCaT细胞共培养后1 h,糠秕马拉色菌可诱导HaCaT细胞IL-6及IL-1βmRNA表达升高.LTA和糠秕马拉色菌共同处理组HaCaT细胞IL-6及IL-1βmRNA的表达低于糠秕马拉色菌处理组.与正常培养的HaCaT细胞上清相比,糠秕马拉色菌促进HaCaT细胞分泌IL-6.LTA和糠秕马拉色菌共同处理组上清IL-6分泌低于糠秕马拉色菌处理组.结论 葡萄球菌LTA可以抑制糠秕马拉色菌诱导的炎性因子IL-6及IL-1βmRNA表达,抑制糠秕马拉色菌诱导IL-6分泌.

摘要： 目的 探讨微小小单胞菌(P.micra)ATCC33270脂磷壁酸(LTA)的致炎作用.方法 使用丁醇和疏水交换层析柱法进行P.micra LTA的提纯,将P.micra LTA作用于小鼠巨噬细胞,观察炎性细胞因子的表达.结果 成功提纯P.micra LTA,将P.micra LTA作用在小鼠巨噬细胞上,发现随着LTA浓度的升高,TNF-α 和NO的表达均增强,具有浓度相关性.结论 小鼠巨噬细胞对P.micra LTA的刺激产生明显反炎症应,P.micra LTA具有致炎的生物学活性.

摘要： 目的 探讨微小小单胞菌(P.micra)ATCC33270脂磷壁酸(LTA)的致炎作用细胞信号转导通路.方法 将P.micraLTA作用在CHO/CD14/TLR4,CHO/CH14/TLR2细胞系,流式细胞术检测P.micra LTA致炎作用的细胞信号转导通路.结果 随着P.micra LTA浓度逐渐增加,CD14/TLR2和CD14/TLR4,2条细胞信号转导通路的CD25表达均增强.结论 通过以上实验结果,可以发现P.micra LTA可能依赖2条细胞信号转导通路激活NF-κB,启动炎症反应.

摘要： 目的:研究在粪肠球菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid,LTA)作用的炎症微环境下,成骨和破骨细胞中磷脂酶Cγ(phospholipase c-gamma,PLCγ)和活化T细胞核因子1(nuclear factor-activated T cell 1,NFATC1)mRNA的表达。方法:将小鼠RAW264.7及MC3T3-E1分别诱导为破骨细胞和成骨细胞。免疫荧光观察LTA作用破骨细胞及成骨细胞后PLCγ和NFATC1的定位。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR)检测LTA作用破骨细胞和成骨细胞后PLCγ和NFATC1 mRNA的表达。细胞增殖及毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测LTA作用破骨细胞和成骨细胞后的增殖活性。结果:破骨和成骨细胞诱导成功。免疫荧光检测可见PLCγ定位在胞质,NFATC1定位在胞核;Real-time PCR结果发现LTA刺激后成骨细胞中PLCγ和NFATC1 mRNA表达量明显减少(P<0.05);LTA刺激后破骨细胞中PLCγ和NFATC1 mRNA表达量明显增高(P<0.05);10 mg/L LTA组可抑制成骨细胞增殖,促进破骨细胞增殖(P<0.05)。结论:PLCγ和NFATC1可能在难治性根尖周炎的炎症反应和骨破坏中发挥一定的作用。

摘要： 目的 研究脂磷壁酸(LTA)对牙周膜干细胞(PDLSCs) 分化能力的影响,从而探讨G+细菌毒素LTA对人牙周膜干细胞再生牙周组织的影响.方法 用0.1、1和10μg/ml的LTA作用于PDLSCs,采用MTT方法及流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡情况,使用碱性磷酸酶染色和茜素红染色对细胞的成骨分化能力进行比较;应用油红O染色鉴定成脂分化能力,实时定量PCR检测成骨成脂相关基因的变化,研究LTA在PDLSCs分化中的作用.结果 1μg/ml及10μg/ml LTA显著降低PDLSCs增殖率,细胞凋亡增加.ALP染色及活性结果表明,早期成骨能力各组之间没有显著差异;茜素红染色结果及钙离子浓度定量测定显示,随LTA浓度升高,PDLSCs晚期成骨能力降低,并具有LTA浓度依赖性.成骨相关基因Runx2表达表现相同变化趋势.油红O染色结果表明,随着LTA浓度的增加,PDLSCs的成脂分化能力升高,成脂相关基因PPARγ表达升高,具有LTA浓度依赖性.结论 LTA降低PDLSCs成骨分化能力,同时促进细胞成脂分化能力,表明LTA抑制PDLSCs介导的牙周组织再生.%Objective To investigate the effect of lipoteichoic acid on osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells. Methods Human PDLSCs were treated with different concentrations of LTA (0.1,1,10 μg/ml),then the effects of LTA on the differentiation of PDLSCs including osteogenic and adipogenic differentiation were evaluated. The osteogenic differentiation potential was compared among each group using ALP(alkaline phosphatase) staining,ALP activity,AR-S staining (alizarin red-staining). Adipogenic differentiation capacity was assessed by Oil-red staining. Real-time RT-PCR was used to detect the expression of RUNX2 and PPAR-γ. Results 1μg/ml and 10μg/ml LTA significantly decreased the proliferation rate and increased the apoptosis rate of PDLSCs. The osteogenic potential with stable ALP staining and activity showed no significant difference among each group. AR-S staining showed a decreasing trend in groups of 1 and 10μg/ml LTA treatment. Along with the increasing concentration of LTA, the adipogenic differentiation of PDLSCs was elevated. Conclusion High concentration of LTA could enhance the adipogenic differentiation and reduce the osteogenic differentiation of HPDLSCs, which suggests a inhibitory effect of LTA on PDLSCs-mediated periodontal regeneration.

摘要： 目的 通过研究粪肠球菌脂磷壁酸(LTA)对巨噬细胞自噬功能的影响,为后续进一步深入探讨顽固性根尖周炎的发病机制提供实验依据.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系RAW 264.7,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测LTA的细胞毒性作用;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测LTA作用下巨噬细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1的表达水平;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测自噬相关基因LC3、Beclin1 mRNA表达水平的变化;构建稳定表达自噬双荧光慢病毒载体HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO的巨噬细胞系,激光共聚焦显微镜观察自噬情况;SPSS 20.0统计软件进行数据分析.结果 CCK-8结果表明,选用20 μg/mL LTA及其以下浓度处理巨噬细胞24 h均未见明显毒性作用(t=2.102,P=0.1106);Western blot结果表明,LTA刺激巨噬细胞后:LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值表达量(0.42 ± 0.04)与对照组(0.04 ± 0.02)相比显著提高,差异有统计学意义(F=14.25,P<0.001), Beclin1蛋白表达量(0.56 ± 0.11)与对照组(0.28 ± 0.08)相比呈上升趋势(F=3.459,P=0.0258),均存在剂量依赖效应;实时荧光定量PCR结果表明,LTA刺激巨噬细胞后,LC3基因表达水平(5.94 ± 0.85)与对照组(1.03 ± 0.28)相比显著提高(F=12.93,P<0.001);Beclin1基因表达水平(2.22 ± 0.21)与对照组(1.02 ± 0.28)相比呈上升趋势(F=6.036,P<0.001),存在剂量依赖效应;成功构建稳定表达HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO的巨噬细胞系,激光共聚焦显微镜下观察显示,LTA作用组自噬体形成量(58 ± 6)与对照组(18 ± 8)相比差异有统计学意义(F=12.36,P=0.0021).结论 粪肠球菌LTA可诱导巨噬细胞产生自噬,且存在剂量依赖效应.%Objective By investigating the effect of Enterococcus faecalis lipoteichoic acid(LTA) on macrophages autophagy,this study aimed to provide experimental evidence for further exploration of the pathogenesis of persistent periapical periodontitis. Methods RAW 264.7 was cultured and cell counting kit-8(CCK-8)was used to detect the cytotoxicity of LTA. Western blot was used to detect the expression level of autophagy-related protein LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰand Beclin1 and qPCR was applied to detect the expression level of LC3 and Beclin1.RAW 264.7 cell strain stably expressing HBLV-mRFP-GFP-LC3-PURO was established,and laser confocal microscopy was used to observe the formation of autophagosome. SPSS 20.0 statistical software for data analysis.Results The result of CCK-8 showed no obvious toxicity to macrophage when stimulated with 20 μg/mL and the lower concentration of LTA for 24 hours(t=2.102, P=0.1106).After LTA stimulated,Western blot suggested that the expression of LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.42 ± 0.04)and Beclin1(0.56 ± 0.11)significantly increased with dose-dependent effect(F=14.25,P<0.001;F=3.459,P=0.0258).In the meanwhile,qPCR results showed that the expression of LC3(5.94 ± 0.85) and Beclin1(2.22 ± 0.21)significantly increased with dose-dependent effect(FLC3=12.93,PLC3<0.001;FBeclin1=6.036,PBeclin1<0.001)after LTA stimulated. Laser confocal microscopy detected that LTA group(58 ± 6)had significant difference(F=12.36,P=0.0021)compared with control group(18 ± 8). Conclusion Enterococcus faecalis LTA may regulate macrophages autophagy with dose-dependent effect.

摘要： 本文概述了脂多糖、脂磷壁酸和酵母多糖这3种常见热原诱导炎症细胞分泌细胞因子,发生炎症反应的机制.重点介绍了热原的分类以及这三种热原的胞外传递过程和相应Toll样受体介导的胞内信号传导通路.%Lipopolysaccharide(LPS),lipteichoic acid(LTA) and zymosan can be recognized by Toll-like receptors (TLRs) ex-pressing in the inflammatory cells membrane,such as macrophages,monocytes and endothelial cells,and then induce the secretion of pyrogenic cytokines followed by triggering inflammatory reaction. The signaling pathway mechanisms were summarized, including the extracellular signaling cascades from pyrogens to individual TLRs,and intracellular signaling cascades from TLRs to nucleus.

摘要： 研究脂磷壁酸(LTA)作为一种原始免疫刺激物引发系统性炎症反应的能力。LTA刺激BALB/C小鼠后，给予ApoA-I治疗。ApoA-I能降低LTA诱导的急性肺损伤和炎症，显著降低LTA诱导的血浆和肺灌洗液中IL-1B和TNF-α的浓度(血浆中分别为P<0.01、P<0.05，肺灌洗液中分别为P<0.01、P<0.05)。另外，ApoA-I能剂量依赖性地显著降低LTA激活的巨噬细胞诱导L-929细胞致死率。而且，给予ApoA-I治疗能抑制LTA诱导的巨噬细胞NFKKB核转位。在体外结合实验中，ApoA-I能与LTA直接结合。ApoA-I能有效保护LTA诱导的小鼠急性肺损伤和脓毒血症，其机制可能与ApoA-I结合与中和LTA有关。

摘要： 子宫内膜炎作为困扰奶牛养殖业的三大疾病之一，给奶牛养殖业的发展带来严重影响。革兰氏阳性菌是引起的子宫内膜炎的主要原因之一，而脂磷壁酸(Lipoteichoic acid，LTA)则是革兰氏阳性菌细胞壁中的重要组成部分。Toll样受体2(Toll-likereceptor 2，TLR2) 是天然免疫系统识别病原微生物的主要受体，在天然免疫反应中具有重要的作用，与革兰氏阳性菌引起的子宫内膜炎密切相关。本试验用LTA刺激，通过体内、体外试验，观察小鼠子宫内膜组织中TLR2表达的变化，以及炎性细胞因子TNF-α、IL6的表达变化，为TLR2信号途径的研究提供一定依据。

摘要： 本发明公开了具有免疫原性的模拟金黄色葡萄球菌LTA表位的多肽及其应用，多肽的核心氨基酸序列为GHKEDRQWCQHS。本发明的多肽，具有较好的抗原性，能与两种不同的抗脂磷壁酸单克隆抗体特异性结合，说明这种多肽能良好模拟脂磷壁酸保守性表位。同时以此核心序列合成的四分支多架抗原肽（序列为HSGHKEDRQWCQHSGG）免疫小鼠后，诱导小鼠体内产生抗脂磷壁酸的抗体，说明该核心序列有望开发为新型的金黄色葡萄球菌疫苗以及诊断性试剂。

摘要： 提供用于治疗或预防炎性病症的方法和组合物。本发明组合物包含经遗传修饰以减少细胞表面上脂磷壁酸展示的重组细菌。本发明方法包括给予受试者经修饰以减少细胞表面上脂磷壁酸展示的重组细菌。给予所述重组细菌促进所需的治疗反应。所述重组细菌可以以单独剂量或系列剂量给予。本发明方法在治疗或预防多种炎性病症包括，例如，治疗或预防炎性肠病、结肠炎或克罗恩病中得到应用。

摘要： 本发明提供了一种植物乳杆菌脂磷壁酸及其在抑制淀粉样蛋白聚集中的应用。本发明一种植物乳杆菌脂磷壁酸主链中含有甘油，侧链上含有大量的N‑乙酰葡萄糖胺及丙氨酸修饰。该脂磷壁酸能有效抑制β‑淀粉样蛋白1‑42(Aβ42)的聚集，是Aβ42潜在聚集抑制剂，可应用于开发预防和/或改善阿尔茨海默病药物、保健品或功能性食品。

摘要： 本发明公开了一种乳杆菌脂磷壁酸的提取方法及其抗炎活性应用，特点是包括以下步骤：（1）将乳杆菌通过三氯乙酸法、TritonX‑114法或正丁醇法进行提取，获得乳杆菌脂磷壁酸粗体物；（2）将乳杆菌脂磷壁酸粗体进行疏水层析和阴离子交换层析进行纯化，得到乳杆菌脂磷壁酸产品，该乳杆菌为植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌或嗜酸乳杆菌，其具有在抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞的细胞因子表达方面、制备TNF‑α和/或IL‑6抑制剂方面的应用和/或抗炎因子IL‑10的分泌激活剂方面以及以浓度依赖的方式减弱LPS诱导的p65磷酸化的应用，优点是提取方法快速高效且证明多种乳杆菌LTA均能降低LPS引起的炎症反应。

摘要： 本发明涉及一种从在过量葡萄糖中培养的双歧杆菌分离的脂磷壁酸，其具有减肥活性，因此可用于以下应用领域的开发：食品和饮料、动物饲料(包括宠物食品)、营养补充剂、婴儿营养、化妆品(包括营养学)、医疗食品、和医药、以及兽医应用等。

摘要： 本发明公开了一种脂磷壁酸疫苗制剂及其应用，涉及疫苗领域，具体是一种脂磷壁酸为载体和自佐剂的疫苗制剂及其应用。本发明提供的脂磷壁酸疫苗制剂是将肿瘤相关糖抗原或多肽抗原和脂磷壁酸以共价连接的方式进行组合得到，成分明确、免疫原性强，能够引起高滴度的IgG抗体。疫苗分子热稳定性好，易于保存。

摘要： 本发明公开了金黄色葡萄球菌来源的脂磷壁酸作为活性成分制备促进动物骨量增加的组合物的应用。动物实验数据表面：相对于注射生理盐水组，LTA注射的小鼠的骨体积分数(BV/TV)，骨小梁数量(Tb.N)和骨小梁平均厚度(Tb.Th)明显更高，说明LTA明显增加了小鼠的骨量。将小鼠卵巢切除后，小鼠出现了明显的骨质疏松表现。相对于卵巢切除+生理盐水组，卵巢切除+LTA组骨体积分数(BV/TV)和骨小梁平均厚度(Tb.Th)明显更高，说明LTA在一定程度上改善了骨质疏松。金黄色葡萄球菌来源的脂磷壁酸作为活性成分制备的组合物有益于增加动物骨量，改善骨质疏松及脆性骨折、肩周炎、椎间盘突出、椎管狭窄、骨质增生、颈椎病、骶管囊肿等并发症。

摘要： 本发明涉及促bta‑miR‑223高表达的试剂在制备预防或治疗金葡菌源脂磷壁酸诱导炎症的药物中的应用，属于药物制备技术领域。本发明所述药物可下调TNF‑α、IL‑6和IL‑1β的表达水平，从而缓解LTA诱导的Mac‑T细胞炎症反应。

摘要： 提供用于治疗或预防炎性病症的方法和组合物。本发明组合物包含经遗传修饰以减少细胞表面上脂磷壁酸展示的重组细菌。本发明方法包括给予受试者经修饰以减少细胞表面上脂磷壁酸展示的重组细菌。给予所述重组细菌促进所需的治疗反应。所述重组细菌可以以单独剂量或系列剂量给予。本发明方法在治疗或预防多种炎性病症包括，例如，治疗或预防炎性肠病、结肠炎或克罗恩病中得到应用。

摘要： 本发明公开了具有免疫原性的模拟金黄色葡萄球菌LTA表位的多肽及其应用，多肽的核心氨基酸序列为GHKEDRQWCQHS。本发明的多肽，具有较好的抗原性，能与两种不同的抗脂磷壁酸单克隆抗体特异性结合，说明这种多肽能良好模拟脂磷壁酸保守性表位。同时以此核心序列合成的四分支多架抗原肽（序列为HSGHKEDRQWCQHSGG）免疫小鼠后，诱导小鼠体内产生抗脂磷壁酸的抗体，说明该核心序列有望开发为新型的金黄色葡萄球菌疫苗以及诊断性试剂。