核酸检测技术

摘要： 春节前后,国内外新冠肺炎疫情仍在持续。当前肆虐的奥密克戎毒株,虽然引发的症状相对较轻,但其基因突变位点多,传播速度快,不易被发现,在多地成散发态势。因此,针对奥密克戎的核酸检测试剂,灵敏度要非常高。由清华大学医学院生物医学工程系教授郭永团队与北京新羿生物科技有限公司(以下简称新羿生物)等多家单位,采用数字PCR技术联合研发的新型冠状病毒核酸检测试剂盒(荧光PCR法),正式获得国家药品监督管理局(NMPA)医疗器械批文。

摘要： 目的分析乙肝表面抗原(HBsAg)阴性乙肝病毒DNA(HBV DNA)阳性标本的补充试验结果。方法选择2013年至2021年间的献血者样本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛查,无反应性标本用核酸检测技术(NAT)方法检测,对HBV DNA检测呈反应性的部分样本再进行乙肝五项进行补充试验。结果对498279份ELISA阴性的样本进行NAT检测,共检出HBV DNA阳性886例,隐匿性乙肝(OBI)检出率为1.78‰,对其中300份样本进行乙肝五项补充试验,发现抗-HBc阳性27例,抗-HBe、抗-HBc两项阳性62例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性11例,抗-HBs、抗-HBc阳性163例,抗-HBs阳性10例,五项全阴共有27例。结论献血者中存在血清学阳性OBI和血清学阴性OBI,补充试验对指导献血者就医,提升血站服务具有重要意义。

摘要： 2019年12月底,由新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的肺炎——新型冠状病毒肺炎(Coronavirus disease 2019,COVID-19),是近百年来传播速度最快、感染范围最广、防控难度最大的全球性重大突发公共卫生事件。截止2021年5月30日,全球129个国家和地区累计确诊病例1.69亿,其中死亡病例大约为353万[1]。

摘要： 日期:2022年03月22日来源:科技部生物中心实时荧光PCR技术是目前应用最为广泛的核酸检测技术。然而,由于主流荧光PCR仪器检测通道数目的限制,单个反应所能检测的靶基因数目很难超过6个,限制了该技术在检测涉及多靶点的复杂疾病上的应用。2月24日,厦门大学研究团队在《美国国家科学院院刊》(PNAS)杂志上发表了题为“Highly multiplex PCR assays by coupling the 5’-flap endonuclease activity of Taq DNA polymerase and molecular beacon reporters”的文章。

摘要： 目的探讨2种HBsAg血清学试剂检测结果S/CO同时处在50%~80%临界值(cut-off)之间的标本,应用罗氏MPX V2.0试剂进行血液筛查时,由混检模式改为单检模式的检测效果。方法使用罗氏MPX V2.0试剂对2018年至2020年某地无偿献血标本2种HBsAg血清学试剂检测结果均为阴性的标本进行检测,分析混样反应性及拆分/单检结果循环阈值(Ct值)。结果2018年至2020年混样反应性结果Ct值在37.0以下时,其拆分检测结果为阳性的情况分别为86.67%(26/30)、76.92%(20/26)、70.77%(46/65),Ct值在37.1以上时,其拆分检测结果为阳性的情况分别为52.13%(49/94)、38.78%(19/49)、46.39%(45/97);近三年S/CO同时处在50%~80%cut-off之间的标本单检反应性结果Ct值均值分别为35.23、37.04、34.08,此类标本单检反应性结果Ct值在36.0以上标本占比此类标本检测总数的53.33%。结论2种HBsAg血清学试剂检测结果S/CO同时处在50%~80%cut-off之间的标本乙肝病毒载量较低;为降低乙肝病毒经血传播风险,对2种HBsAg血清学试剂检测结果S/CO同时处在50%~80%cut-off之间的标本应用罗氏MPX V2.0试剂进行血液筛查时,宜采用单检模式。

摘要： 梯型熔解温度等温扩增(LMTIA)技术是许昌学院王德国教授课题组研究开发的国际前沿核酸检测技术,在国际期刊BioTechniques上刊出后,该课题组在LMTIA的应用研究领域取得重要进展。构建了LMTIA检测食品中植物源成分的内标方法,启动了淀粉基食品LMTIA掺假检测研究,并建立了红薯粉条掺假木薯粉的LMTIA检测方法。

摘要： 乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)感染是导致乙肝肝硬化和原发性肝细胞癌(HCC)发生的主要因素之一.目前临床上使用抗病毒药物抑制HBV的复制,但抗病毒药物耐药性的发生很难被及时发现,因此HBV核酸检测(NAT)作为预测HBV耐药性发生的主要手段,在慢性乙肝患者诊断及抗病毒治疗的应用中不可或缺.本文从乙肝DNA定量检测、HBV基因P区检测和基因分型、微小RNA(miRNA)检测等方面进行综述,分析NAT在HBV耐药性诊断以及HCC癌变检测中的应用,讨论NAT对减少乙肝抗病毒药物耐药性和降低HCC在慢性乙肝患者中的发病率的价值.

摘要： 目的 探究核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用效果.方法 选取2018年6月至2020年6月于基层血站进行无偿献血的45520名志愿者作为研究对象,采用核酸检测技术对志愿者血液进行筛查,分析和研究检测结果,分析本地区的酶免阴性核酸阳性标本感染特征,并比较核酸检出率的准确度.结果 47例患者为HBV-DNA阳性,阳性确认率为58.75％;HBV感染患者31例,感染率为88.57％.结论 在基层血站血液筛查中开展核酸检测技术,应用效果显著,血液筛查结果准确,值得在血液筛查中推广应用.

摘要： 经历了2020年,大家对于新冠肺炎疫情,对于核酸检测,都不再陌生了。虽然世界多地出现过新冠肺炎疫情,但是我国的疫情防控十分严格。其中,核酸检测是防控的关键环节。最近,我看到新闻中提到的一项新的核酸检测技术——核酸混采检测技术,这是一件令我惊叹不已的技术,想知道它的奥秘吗?那就往下看吧。

摘要： 食源性致病微生物是引起食品安全问题的重要因素.针对食源性致病微生物,快速而准确的检测是保障食品安全的关键举措.随着微生物学、分子生物学技术的发展,基于新型基因组编辑技术和先进生物传感器的检测技术不断涌现,食源性致病微生物的检测技术展现出多样性和综合性的特点,并得到了广泛应用和商业化发展.本文从食源性致病微生物分类出发,深入总结和探讨传统培养分离法、免疫学检测技术、核酸检测技术和生物传感器检测技术的优缺点,并重点介绍了近年来开发的基于核酸等温扩增技术和CRISPR基因编辑技术的核酸检测新方法.通过对最新的针对食源性致病微生物检测方法进行综述,为研究者开辟食源性致病微生物检测新方法提供重要的理论参考.

摘要： 目的:探讨检测原料血浆中B19病毒含量在凝血因子产品生产中的必要性.方法:采用Roche公司的COBAS S201全自动核酸检测系统对原料血浆及凝血因子产品进行B19含量检测.结果:小批量混浆(90人份血浆/样)112个,B19阳性率为6.25％;经NAT初筛阴性的大规模混浆样品3个,阳性率0％;使用B19检测阴性血浆所生产的3批人纤维蛋白原(Fg)检测均为阴性;3批人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的检测中2批阴性,1批低于75IU/ml;3批人凝血酶原复合物(PCC)检测中1批阴性,2批低于75IU/ml;从市场上购买凝血因子产品进行B19检测,A厂家一批Fg为1.66×102IU/ml,B厂家一批Fg为阴性,C厂家一批FⅧ为2.36×105IU/ml,D厂家一批PCC为4.50×106IU/ml. 结论:NAT检测技术用于原料血浆筛查可有效控制凝血因子类产品中B19病毒的含量.

摘要： 目的:探讨检测原料血浆中B19病毒含量在凝血因子产品生产中的必要性.方法:采用Roche公司的COBAS S201全自动核酸检测系统对原料血浆及凝血因子产品进行B19含量检测.结果:小批量混浆(90人份血浆/样)112个,B19阳性率为6.25％;经NAT初筛阴性的大规模混浆样品3个,阳性率0％;使用B19检测阴性血浆所生产的3批人纤维蛋白原(Fg)检测均为阴性;3批人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的检测中2批阴性,1批低于75IU/ml;3批人凝血酶原复合物(PCC)检测中1批阴性,2批低于75IU/ml;从市场上购买凝血因子产品进行B19检测,A厂家一批Fg为1.66×102IU/ml,B厂家一批Fg为阴性,C厂家一批FⅧ为2.36×105IU/ml,D厂家一批PCC为4.50×106IU/ml. 结论:NAT检测技术用于原料血浆筛查可有效控制凝血因子类产品中B19病毒的含量.

摘要： 目的:探讨检测原料血浆中B19病毒含量在凝血因子产品生产中的必要性.方法:采用Roche公司的COBAS S201全自动核酸检测系统对原料血浆及凝血因子产品进行B19含量检测.结果:小批量混浆(90人份血浆/样)112个,B19阳性率为6.25％;经NAT初筛阴性的大规模混浆样品3个,阳性率0％;使用B19检测阴性血浆所生产的3批人纤维蛋白原(Fg)检测均为阴性;3批人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的检测中2批阴性,1批低于75IU/ml;3批人凝血酶原复合物(PCC)检测中1批阴性,2批低于75IU/ml;从市场上购买凝血因子产品进行B19检测,A厂家一批Fg为1.66×102IU/ml,B厂家一批Fg为阴性,C厂家一批FⅧ为2.36×105IU/ml,D厂家一批PCC为4.50×106IU/ml. 结论:NAT检测技术用于原料血浆筛查可有效控制凝血因子类产品中B19病毒的含量.

摘要： 目的:探讨检测原料血浆中B19病毒含量在凝血因子产品生产中的必要性.方法:采用Roche公司的COBAS S201全自动核酸检测系统对原料血浆及凝血因子产品进行B19含量检测.结果:小批量混浆(90人份血浆/样)112个,B19阳性率为6.25％;经NAT初筛阴性的大规模混浆样品3个,阳性率0％;使用B19检测阴性血浆所生产的3批人纤维蛋白原(Fg)检测均为阴性;3批人凝血因子Ⅷ(FⅧ)的检测中2批阴性,1批低于75IU/ml;3批人凝血酶原复合物(PCC)检测中1批阴性,2批低于75IU/ml;从市场上购买凝血因子产品进行B19检测,A厂家一批Fg为1.66×102IU/ml,B厂家一批Fg为阴性,C厂家一批FⅧ为2.36×105IU/ml,D厂家一批PCC为4.50×106IU/ml. 结论:NAT检测技术用于原料血浆筛查可有效控制凝血因子类产品中B19病毒的含量.

摘要： 根据先前在云南地区分离的乙型脑炎病毒Yunnan0901株基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法.建立的荧光定量PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系.而且与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸,均不发生非特异性扩增,具有良好的特异性.本实验建立了检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的实时荧光定量PCR方法,具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可应用于临床检查工作为乙型脑炎病毒的监控提供技术支持.

摘要： 根据先前在云南地区分离的乙型脑炎病毒Yunnan0901株基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法.建立的荧光定量PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系.而且与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸,均不发生非特异性扩增,具有良好的特异性.本实验建立了检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的实时荧光定量PCR方法,具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可应用于临床检查工作为乙型脑炎病毒的监控提供技术支持.

摘要： 根据先前在云南地区分离的乙型脑炎病毒Yunnan0901株基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法.建立的荧光定量PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系.而且与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸,均不发生非特异性扩增,具有良好的特异性.本实验建立了检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的实时荧光定量PCR方法,具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可应用于临床检查工作为乙型脑炎病毒的监控提供技术支持.

摘要： 根据先前在云南地区分离的乙型脑炎病毒Yunnan0901株基因组核苷酸序列设计特异性引物,构建pMD18-T-JEV-E质粒作为模板进行SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,摸索最佳反应体系条件,建立乙型脑炎病毒荧光定量PCR检测方法.建立的荧光定量PCR标准曲线呈现良好的重复性和特异性,与模板浓度呈现良好的线性关系.而且与猪瘟病毒、猪蓝耳病毒、猪圆环病毒、基孔肯雅病毒、辛德毕斯病毒核酸,均不发生非特异性扩增,具有良好的特异性.本实验建立了检测基因Ⅲ型乙型脑炎病毒的实时荧光定量PCR方法,具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可应用于临床检查工作为乙型脑炎病毒的监控提供技术支持.

摘要： 本发明公开了一种基于核酸质谱技术检测心血管疾病用药相关基因的核酸组合物、试剂盒和检测方法，涉及基因检测技术领域。本发明公开的核酸组合物包括用于进行多重PCR扩增心血管疾病用药相关基因的扩增引物组以及用于进行单碱基延伸反应的延伸引物组。使用本发明提供的核酸组合物、试剂盒或检测方法，采用核酸质谱技术可以检测心血管疾病用药相关基因的15个位点的基因型，其具有灵敏度高，特异性强，结果易于识别，并提高了准确性，操作方便等特点，本发明为心血管疾病用药相关基因的检测提供了更为可靠的检测手段，也为心血管疾病的个体化用药提供了更为合理的用药指导。

摘要： 一种核酸检测盒，包括一个可以改变内部容积并包含一种试剂的流体容置通道，一个连接流体容置通道并可选择打开状态或封闭状态的进出口(在所述打开状态下可以实现从检测盒(100)外部分向外注射流体，在所述封闭状态下流体注射中断)，与流体容置通道(111)相连并可选择打开状态或封闭状态的连接通道(116和117)(在所述打开状态下可实现流体向其它流体容置通道(111)的转移，在所述封闭状态下所述流体转移中止)，可保持进出口封闭的进出口垫(404和405)，可保持连接通道(116和117)封闭的连接垫(406和407)。

摘要： 本发明涉及核酸检测系统、核酸检测系统阵列、核酸检测方法以及候选引导核酸的筛选方法。所述核酸检测系统包含：基底，所述基底包含基底表面和至少两个电极；连接分子，所述连接分子具有与所述基底表面结合的第一配基和与Cas酶结合的第二配基；Cas酶，所述Cas酶与所述连接分子的第二配基结合并与引导核酸形成酶复合物，所述Cas酶包含选自Cas12(VA型)、Cas13(VI型)和Cas14(VF型)中的至少一种；引导核酸，所述引导核酸包含分别能够与酶和靶核酸结合的序列；和报告核酸，所述报告核酸包含非特异性序列。本发明的核酸检测系统具有优异的信噪比、灵敏度可达aM水平，并且检测时间大大缩短。

摘要： 本发明公开了一种基于核酸质谱技术检测心血管疾病用药相关基因的核酸组合物、试剂盒和检测方法，涉及基因检测技术领域。本发明公开的核酸组合物包括用于进行多重PCR扩增心血管疾病用药相关基因的扩增引物组以及用于进行单碱基延伸反应的延伸引物组。使用本发明提供的核酸组合物、试剂盒或检测方法，采用核酸质谱技术可以检测心血管疾病用药相关基因的16个位点的基因型，其具有灵敏度高，特异性强，结果易于识别，并提高了准确性，操作方便等特点，本发明为心血管疾病用药相关基因的检测提供了更为可靠的检测手段，也为心血管疾病的个体化用药提供了更为合理的用药指导。

摘要： 在没有供给靶标(30)的情况下，当通过保持经由结合部的结合以激发供体荧光分子(11)时，能量转移到接近于供体荧光分子(11)的受体荧光分子(21)，从而受体荧光分子(21)呈现荧光。在供给了靶标(30)的情况下，靶标(30)与检测部结合而使经由结合部的结合被解除，受体荧光分子(21)远离供体荧光分子(11)，从而供体荧光分子(11)呈现荧光。

摘要： 本发明的目的在于研发一种也可适用于短链核酸的检测的新式核酸检测法。本发明提供一种包括如下工序的核酸检测方法，即，i)使检测对象核酸(1)与核酸检测用引物(3)杂交而形成DNA/RNA复合体，ii)用核酸酶(4)分解DNA/RNA复合体的至少一部分，从而从核酸检测用引物(3)中去除第一多核苷酸部分(301)，iii)使核酸检测用引物(3)与模板核酸(2)杂交，进而通过聚合酶(5)来进行扩增模板核酸(2)的反应。

摘要： 本发明公开了一种核酸提取与检测一体化耗材，其包括用于进行核酸扩增的第一腔室，用于对核酸进行检测的第二腔室和用于对核酸进行提取的第三腔室。第三腔室的下端与第一腔室的上端相互卡接，第一腔室的下端与第二腔室的上端相互卡接，第一腔室、第二腔室和第三腔室均可实现独立密封。利用本发明的耗材能够实现生物样本中核酸检测的一体化操作，给分子诊断的临床应用提供了一种更便捷、高效的工具。本发明还公开了一种核酸提取与检测方法，通过将生物样本在低浓度强碱和机械震荡的综合作用下使得核酸提取效率大幅增加，利用本发明的核酸检测方法，与传统的试剂盒检测方法相比结果具有一致性，但是整个检测过程的用时明显缩短，且操作更为简便。

摘要： 本发明提供了一种等温扩增技术结合核酸外切酶介导的可视化核酸检测方法，利用等温扩增技术扩增待检测核酸，Exo III剪切扩增子3’末端序列暴露单链DNA靶标，茎环探针结合靶标，Exo III能够剪切探针3’末端并释放荧光基团，通过裸眼或横向流动试纸条可快速、灵敏地检测病毒核酸。该方法无需特殊检测装置，检测速度快、灵敏性高、成本低，且在室温条件下均可完成检测，裸眼和试纸条可视化过程在25~30 min内完成，检测灵敏度可达到2个拷贝。

摘要： 本发明用肽核酸(PNA)替代传统单链DNA(ssDNA)固定到微梁金表面上的方法，可以提高表面探针密度，提升对目标核酸的捕获效率，在基于光杠杆的检测模式下，这样带来了极大的表面应力增强；控制肽核酸的链长，有效的提高应力增强的效果。本方法已成功应用与新冠病毒核酸和肺癌临床标记物检测，与基于ssDNA的微悬臂梁核酸检测技术相比灵敏度提高高达7个数量级，该技术有望普及于多领域的核酸检测。

摘要： 本发明涉及一种核酸检测技术，具体而言是一种依赖核酸内切酶活性的核酸检测技术和试剂。本发明所使用的分子探针在没有和目的核酸片段结合时，保持一种二级结构，此时在该结构上没有特定的核酸内切酶的切点。而当有目的核酸片段存在时，探针DNA分子能够和目的片段结合改变其二级结构，具有能够被特定DNA内切酶识别的识别位点和能够被该内切酶切开的酶切位点。内切酶切开探针后可被检测。该方法具有识别序列较短，对引物位置要求较低，检测体系简单，检测效率较高，DNA和RNA均能直接检测等特点。