定量PCR

摘要： 复合益生菌产品的菌种组成与活菌数是产品质量的关键,该研究以2种市售复合益生菌固体饮料及其添加的5种(6株)益生菌为研究对象,采用宏基因组测序分析方法及平均核苷酸一致性(average nucleotide identity,ANI)在种水平上精确鉴定产品的菌种组成;通过筛选菌种特异性引物,优化叠氮溴化丙锭-荧光定量PCR(propidium monoazide-quantitative PCR,PMA-qPCR)方法参数,快速定量产品中每种益生菌的活菌数。结果表明,产品1宏基因组数据分箱获得的4个bins分别被鉴定为动物双歧杆菌乳亚种、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌和短双歧杆菌,PMA-qPCR定量检测其活菌数分别为4.86×10^(9)、4.33×10^(9)、3.95×10^(8)和6.38×10^(6)CFU/g;产品2宏基因组数据分箱获得的4个bins分别被鉴定为鼠李糖乳杆菌、植物乳杆菌、发酵乳杆菌、动物双歧杆菌乳亚种,PMA-qPCR定量检测其活菌数分别为3.12×10^(9)、1.53×10^(9)、9.36×10^(8)和4.16×10^(8)CFU/g。PMA-qPCR方法定量2种产品乳酸菌的活菌总数与平板菌落计数结果相比,差异不显著(P>0.05);该研究在菌种水平上精确鉴定的产品微生物组成与产品声称一致。除短双歧杆菌外,其他5种菌的活菌数检测结果与实际添加量基本吻合。该研究在实现精确鉴定产品物种组成的同时,快速、特异、准确的定量了产品中每种乳酸菌的活菌数,为复合益生菌产品的质量控制提供了技术支持。

摘要： 建立快速检测新鲜鸡肉中奇异变形杆菌定量PCR方法,了解分离菌株常用抗菌药物耐药性。设计奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)特异性尿素酶(qrrA基因)设计引物,建立SYBR Green I PCR快速方法;耐药性分析参照CLIS制定方法,采用K-B纸片扩散法调查奇异变形杆菌对17种抗菌药物的耐药情况。结果表明,构建定量SYBR Green I荧光定量PCR方法,与常见的鸡肉污染的7种细菌无交叉,最低检出限为101 CFU/mL,重复变异系数为<2%,市场销售的鸡肉中奇异变形杆菌检出率为66.0%;17种抗菌药物中对红霉素、链霉素、林可霉素、克林霉素耐药率为100%,对青霉素耐药率较低为19.7%(13/66),总体耐药情况较为严重,且呈现多重耐药性。建立的荧光定量PCR方法可以用于新鲜鸡肉中奇异变形杆菌的检测,所分离到的菌株耐药严重。

摘要： 【目的】在鱼淋巴囊肿中国病毒株(LCDV-cn)感染草鱼卵巢细胞系(GCO)过程中,分析cid-miR-146a的表达特性,探索cid-miR-146a的调控作用。【方法】采用颈环RT-PCR方法,从LCDV-cn感染的GCO细胞中获得cidmiR-146a;在LCDV-cn感染GCO过程中,用定量PCR方法获取cid-miR-146a的表达变化;用生物信息学方法预测和双荧光素酶系统验证cid-miR-146a的靶基因;转染cid-miR-146a mimic和cid-miR-146a inhibitor对cid-miR-146a进行上调和下调,用定量PCR检测cid-miR-146a、靶基因Flt1和LCDV-cn mcp基因在GCO中的表达。【结果】LCDV-cn感染GCO后3~6 d细胞聚集形成“疤痕”,之后细胞逐渐脱落、裂解,呈现空洞。cid-miR-146a的长度为23 bp,在LCDV-cn感染GCO过程中,cid-miR-146a的表达先上升(72 h前)后下降(72 h后)。用不同生物信息学方法共同预测到cid-miR-146a的靶基因为Flt1,在双荧光素酶系统验证实验中,cid-miR-146a靶向Flt1重组载体后荧光素酶活性降低(P<0.05),证实Flt1为cid-miR-146a的靶基因。对cid-miR-146a进行上调下调后,GCO中cid-miR-146a的表达差异显著(P<0.05)。在cid-miR-146a上调后,靶基因Flt1的表达显著下降(P<0.05),LCDV-cn mcp基因的表达显著上升(P<0.05);在cid-miR-146a下调后,靶基因Flt1的表达显著上升(P<0.05),LCDV-cn mcp基因的表达显著下降(P<0.05)。【结论】在LCDV-cn感染GCO过程中,CPE的变化与cid-miR-146a的表达变化时间点呈正相关。cid-miR-146a负调控其靶基因Flt1的表达,并对LCDV-cn的复制起着正调控作用。生物信息学方法预测说明cid-miR-146a参与调控的信号通路与免疫和肿瘤发生相关。

摘要： 本研究以丝瓜络作为生物膜反应器的碳源和生物膜载体,采用同步硝化反硝化(simultaneous nitrification and denitrification,SND)工艺对低碳城市污水进行处理.但长期运行的丝瓜络会失效,导致出水TN浓度不能满足《城镇污水处理厂污染物排放标准》一级A出水标准.为保证系统的持续运行,本研究采用20％、40％和60％的更换比,考察系统的脱氮效果、胞外聚合物(extracellular polymeric substance,EPS)以及功能菌丰度的变化,确定40％为最佳更换比例.

摘要： 目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义.方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量检测mecA和Sa442基因;结合痰标本临床常规培养鉴定结果,分析qPCR定量值的临床意义.结果·筛选1 775例合格痰标本,以细菌培养鉴定结果为金标准,qPCR检测的灵敏度为92.19％(59/64),特异度为89.60％(1 533/1 711),阳性预测值为24.89％(59/237),阴性预测值达到99.67％(1 533/1 538).受试者操作特征曲线分析结果显示,mecA定量对数值和CT值判断MRSA培养阳性的曲线下面积分别为0.755和0.770,最佳临界值分别为5.59和27.1,敏感度分别为72.4％和73.0％,特异度分别为70.2％和74.1％.仅Sa442基因定值为阳性时,细菌培养以甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌为主.当mecA定量对数值＞5.59或CT值＜27.1时,可以预判MRSA培养阳性.结论·痰标本中mecA和Sa442基因的定量结果,可用于早期快速排除MRSA的定植和感染,协助分析不同菌种培养结果的趋势.

摘要： [目的]植物莽草酸途径中的莽草酸脱氢酶(Shikimate dehydrogenase,SDH)与脱氢奎尼酸脱水酶(Dehydroquinate dehydratase,DQD)形成的二聚体复合酶(DQD/SDH),是木质素、单宁和黄酮类物质等生物合成的直接或间接前体.体外分离3个巨尾桉EuDQD/SDH5基因(GenBank登录号:KY401151.1、KY401150.1、KY401149.1),研究3个酶的酶动力学及其在巨尾桉中的表达特性,是开展桉树莽草酸脱氢酶家族研究的重要基础.[方法]利用RT-PCR方法克隆EuDQD/SDH5,原核表达DQD/SDH5蛋白,进行纯化蛋白和酶活性分析,通过实时定量PCR技术研究EuDQD/SDH5基因在桉树各组织中的表达特性.[结果]EuDQD/SDH5的3个突变基因的原核表达体系构建成功,3个DQD/SDH5蛋白均具有SDH活性,但是因为基因序列存在差异,导致其对莽草酸的亲和力存在差异,在植物体内EuDQD/SDH5-10对莽草酸的催化效率最大,而EuDQD/SDH5-6对莽草酸的催化效率最低.在桉树组培苗中EuDQD/SDH5基因在叶片中表达量最高,在茎中的表达量稍低,在根中的表达量最低.盆栽苗不同节间的叶片中,该基因的表达量也有差异,在第一节间的叶片中EuDQD/SDH5表达量最高,在中间节间和最下层节间叶片中的表达量相似且都很低.转基因巨尾桉中木质素含量降低的植株其EuDQD/SDH5基因的表达量也降低.[结论]EuDQD/SDH5具有以莽草酸为底物的SDH活性,该基因在植物的不同组织和不同节间的叶片中差异表达,主要在幼叶和茎中表达量高,可能为巨尾桉木质素的生物合成提供前体物质.

摘要： 目的对江苏地区5776例孕妇进行脊髓性肌萎缩症(SMA)的携带者筛查,确定本地区SMA的携带频率,通过对高风险胎儿进行产前诊断,减少SMA患儿的出生。方法荧光定量PCR法检测SMN1基因第7和第8外显子的拷贝数,筛查SMA携带者,并通过多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对高风险胎儿进行产前诊断。结果对16549例孕妇进行SMA携带者筛查的宣教,其中5776例孕妇自愿接受携带者筛查,接受率约为34.9%。5776例孕妇中,共筛查到100例孕妇(100/5776,1.73%)携带SMN1基因E7单拷贝或E7和E8单拷贝,其中E7和E8单拷贝的孕妇有93例,单纯E7单拷贝有7例,携带者频率为1∶58。经遗传咨询,100例携带者中,91例配偶(91/100,91%)接受SMA筛查,结果提示3对夫妇同时为SMA携带者,并且对3例高风险胎儿进行了产前诊断,最终提示这3个胎儿均为SMN1基因单拷贝,即SMA携带者。结论荧光定量PCR技术适用于大样本量的人群携带者筛查,确定了江苏地区人群的SMA携带频率,并且对于高风险胎儿进行产前诊断,避免SMA患儿的出生,对出生缺陷的防控具有重要的临床意义。

摘要： [目的]研究木质素对土壤微生物的影响,为木质素后期的资源化利用提供一定的基础资料.[方法]采集农田土壤进行培养试验,设置空白对照和木质素处理组,培养结束后提取土壤DNA,结合定量PCR和高通量测序等技术,研究木质素对土壤微生物的影响,对微生物的群落组成及多样性进行分析.[结果]定量PCR结果表明,木质素的加入减少了细菌16S rRNA基因丰度,且显著降低了真菌18S rRNA基因丰度.高通量测序结果显示,Alpha多样性分析上,细菌的空白对照多样性指数均高于木质素处理,真菌则相反,但均未达显著水平;PCoA分析表明,木质素的加入对细菌和真菌群落均产生了显著影响,不同处理间的群落结构差异较大.在门水平上对微生物群落组成分析表明,木质素的加入显著提高了细菌中γ-变形菌、拟杆菌、厚壁菌的相对丰度,降低了酸杆菌、放线菌、δ-变形菌的相对丰度;真菌中明显增加了担子菌、被孢霉菌的相对丰度,而降低了子囊菌的相对丰度.[结论]木质素的加入对土壤中细菌、真菌的数量及群落结构均产生了一定影响.总体上,木质素不利于土壤微生物群落的生长繁殖和代谢.由于对木质素的利用能力不同,不同微生物呈现出了不同的效果.

摘要： 新生儿遗传病筛查目前以代谢物生化指标检测为主,检测结果假阳性率较高,且有一定的假阴性,筛查的病种较少.近几年逐步开展的新生儿遗传病筛查基因检测技术包括定量聚合酶链反应技术和高通量测序.高通量测序又分为基因包测序、全外显子组测序和全基因组测序.但目前用于新生儿遗传病筛查的基因技术主要为定量聚合酶链反应技术和基因包测序.新生儿基因筛查病种由单病种筛查如耳聋、脊髓性肌萎缩及重症联合免疫缺陷病等向多病种筛查发展.新生儿基因筛查结果解读除遵循美国医学遗传学与基因组学学会联合分子病理协会在2015年提出的"序列变异解读标准和指南"外,还需要结合生化指标检测及其他检测结果综合分析.新生儿遗传病基因筛查的开展需要遵循伦理原则,包括将新生儿基因筛查作为公共卫生项目的伦理、新生儿及其家庭成员知情选择权和隐私权伦理等.新生儿遗传病基因筛查的开展将使更多的遗传病患者能够早期诊断,改善其预后,在新生儿遗传病筛查领域具有里程碑意义.

摘要： 对桑花叶卷叶病相关病毒外壳蛋白抗原性较好的核心结构域进行克隆和序列多样性分析,结果表明50个克隆中有19个克隆株,CP16为优势株.构建重组表达载体pET-28a-SUMO-CP16,成功在大肠杆菌Rosetta中诱导表达该蛋白,利用亲和层析纯化重组蛋白并制备多克隆抗体.经Western杂交和ID-ELISA检测合格的抗体偶联Tosylactivated磁珠,用于桑花叶卷叶病相关病毒的纯化.经qPCR技术检测显示,纯化后的病毒样本中的背景RNA得到极大的减少,获得了高纯度的病毒样品.

摘要： 本研究利用定量PCR方法对MYH10基因在不同鸡种中组织表达差异进行了比较研究.研究结果显示:在2周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌组织中MYH10基因的表达量显著高于大恒鸡(P＜0.05),白羽肉鸡母鸡胸肌中MYH10基因的表达极显著低于其余的鸡种(P＜0.01),藏鸡腿肌组织中的表达量极显著高于其余的鸡种(P＜0.01);在6周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌组织中MYH10基因的表达量显著高于大恒鸡(P＜0.05),藏鸡母鸡胸肌组织和腿肌组织中MYH10基因的表达分别显著高于大恒鸡和白羽肉鸡(P＜0.05);在10周龄,胸肌组织中MYH10基因各个鸡种间均达到显著水平(P＜0.05),并且藏鸡极显著高于其它的鸡种(P＜0.01).由此推测该基因在肌肉组织的生长和发育过程中有调节作用.

摘要： 本研究利用定量PCR方法对MYH10基因在不同鸡种中组织表达差异进行了比较研究.研究结果显示:在2周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌组织中MYH10基因的表达量显著高于大恒鸡(P＜0.05),白羽肉鸡母鸡胸肌中MYH10基因的表达极显著低于其余的鸡种(P＜0.01),藏鸡腿肌组织中的表达量极显著高于其余的鸡种(P＜0.01);在6周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌组织中MYH10基因的表达量显著高于大恒鸡(P＜0.05),藏鸡母鸡胸肌组织和腿肌组织中MYH10基因的表达分别显著高于大恒鸡和白羽肉鸡(P＜0.05);在10周龄,胸肌组织中MYH10基因各个鸡种间均达到显著水平(P＜0.05),并且藏鸡极显著高于其它的鸡种(P＜0.01).由此推测该基因在肌肉组织的生长和发育过程中有调节作用.

摘要： 本研究利用定量PCR方法对MYH10基因在不同鸡种中组织表达差异进行了比较研究.研究结果显示:在2周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌组织中MYH10基因的表达量显著高于大恒鸡(P＜0.05),白羽肉鸡母鸡胸肌中MYH10基因的表达极显著低于其余的鸡种(P＜0.01),藏鸡腿肌组织中的表达量极显著高于其余的鸡种(P＜0.01);在6周龄,白羽肉鸡公鸡胸肌组织中MYH10基因的表达量显著高于大恒鸡(P＜0.05),藏鸡母鸡胸肌组织和腿肌组织中MYH10基因的表达分别显著高于大恒鸡和白羽肉鸡(P＜0.05);在10周龄,胸肌组织中MYH10基因各个鸡种间均达到显著水平(P＜0.05),并且藏鸡极显著高于其它的鸡种(P＜0.01).由此推测该基因在肌肉组织的生长和发育过程中有调节作用.

摘要： 目的:前期作者利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了连作地黄的正反消减cDNA文库.本研究从两库中各选5个可能引起地黄连作障碍的基因做时空表达分析,以探讨其在地黄连作障碍中的作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测这10个基因在正茬、重茬地黄中不同时期不同组织的相对表达量.结果:正库中筛选的5个编码基因(钙依赖性蛋白激酶、SAM合成酶、ACC氧酶、甲基转移酶、钙蛋白酶)在重茬地黄中有较高的表达量,在正茬地黄中几乎无表达；反库中筛选的5个编码基因(RNA依赖的RNA聚合酶、RNA复制酶、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa、细胞周期蛋白D、RNA结合蛋白)在正茬地黄中均得到较高表达,而在重茬中却被下调或关闭.结论:参与核心生命过程的关键调控基因(如细胞周期蛋白D、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa)在重茬地黄中被抑制或关闭,扰乱了植株正常的基因表达程序,通过钙信号传导和乙烯合成信号,干扰了地黄生长发育的重要代谢过程,从而导致连作地黄植株矮小,发育不良,引起地黄的连作障碍现象.

摘要： 目的:前期作者利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了连作地黄的正反消减cDNA文库.本研究从两库中各选5个可能引起地黄连作障碍的基因做时空表达分析,以探讨其在地黄连作障碍中的作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测这10个基因在正茬、重茬地黄中不同时期不同组织的相对表达量.结果:正库中筛选的5个编码基因(钙依赖性蛋白激酶、SAM合成酶、ACC氧酶、甲基转移酶、钙蛋白酶)在重茬地黄中有较高的表达量,在正茬地黄中几乎无表达；反库中筛选的5个编码基因(RNA依赖的RNA聚合酶、RNA复制酶、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa、细胞周期蛋白D、RNA结合蛋白)在正茬地黄中均得到较高表达,而在重茬中却被下调或关闭.结论:参与核心生命过程的关键调控基因(如细胞周期蛋白D、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa)在重茬地黄中被抑制或关闭,扰乱了植株正常的基因表达程序,通过钙信号传导和乙烯合成信号,干扰了地黄生长发育的重要代谢过程,从而导致连作地黄植株矮小,发育不良,引起地黄的连作障碍现象.

摘要： 目的:前期作者利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了连作地黄的正反消减cDNA文库.本研究从两库中各选5个可能引起地黄连作障碍的基因做时空表达分析,以探讨其在地黄连作障碍中的作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测这10个基因在正茬、重茬地黄中不同时期不同组织的相对表达量.结果:正库中筛选的5个编码基因(钙依赖性蛋白激酶、SAM合成酶、ACC氧酶、甲基转移酶、钙蛋白酶)在重茬地黄中有较高的表达量,在正茬地黄中几乎无表达；反库中筛选的5个编码基因(RNA依赖的RNA聚合酶、RNA复制酶、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa、细胞周期蛋白D、RNA结合蛋白)在正茬地黄中均得到较高表达,而在重茬中却被下调或关闭.结论:参与核心生命过程的关键调控基因(如细胞周期蛋白D、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa)在重茬地黄中被抑制或关闭,扰乱了植株正常的基因表达程序,通过钙信号传导和乙烯合成信号,干扰了地黄生长发育的重要代谢过程,从而导致连作地黄植株矮小,发育不良,引起地黄的连作障碍现象.

摘要： 目的:前期作者利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了连作地黄的正反消减cDNA文库.本研究从两库中各选5个可能引起地黄连作障碍的基因做时空表达分析,以探讨其在地黄连作障碍中的作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测这10个基因在正茬、重茬地黄中不同时期不同组织的相对表达量.结果:正库中筛选的5个编码基因(钙依赖性蛋白激酶、SAM合成酶、ACC氧酶、甲基转移酶、钙蛋白酶)在重茬地黄中有较高的表达量,在正茬地黄中几乎无表达；反库中筛选的5个编码基因(RNA依赖的RNA聚合酶、RNA复制酶、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa、细胞周期蛋白D、RNA结合蛋白)在正茬地黄中均得到较高表达,而在重茬中却被下调或关闭.结论:参与核心生命过程的关键调控基因(如细胞周期蛋白D、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa)在重茬地黄中被抑制或关闭,扰乱了植株正常的基因表达程序,通过钙信号传导和乙烯合成信号,干扰了地黄生长发育的重要代谢过程,从而导致连作地黄植株矮小,发育不良,引起地黄的连作障碍现象.

摘要： 目的:前期作者利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了连作地黄的正反消减cDNA文库.本研究从两库中各选5个可能引起地黄连作障碍的基因做时空表达分析,以探讨其在地黄连作障碍中的作用.方法:应用实时荧光定量PCR技术检测这10个基因在正茬、重茬地黄中不同时期不同组织的相对表达量.结果:正库中筛选的5个编码基因(钙依赖性蛋白激酶、SAM合成酶、ACC氧酶、甲基转移酶、钙蛋白酶)在重茬地黄中有较高的表达量,在正茬地黄中几乎无表达；反库中筛选的5个编码基因(RNA依赖的RNA聚合酶、RNA复制酶、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa、细胞周期蛋白D、RNA结合蛋白)在正茬地黄中均得到较高表达,而在重茬中却被下调或关闭.结论:参与核心生命过程的关键调控基因(如细胞周期蛋白D、依赖于DNA的RNA聚合酶Ⅱa)在重茬地黄中被抑制或关闭,扰乱了植株正常的基因表达程序,通过钙信号传导和乙烯合成信号,干扰了地黄生长发育的重要代谢过程,从而导致连作地黄植株矮小,发育不良,引起地黄的连作障碍现象.

摘要： MC1是通过“外淘汰法”筛选到的一组能够高效分解纤维素类的高温复合菌系.前期研究表明:MC1要关键菌是5种细菌,分别是没有纤维素分解能力的Pseudoxanthomonas sp.strain M1-3,Brevibacillus sp.strain M1-5,Bordetella sp.strain M1-6、Clostridium sp.strain FG4,及具有纤维素分解能力的Clostridium straminisolvens CSK1；这5种细菌之问有重要的协同代谢关系,其中M1-3对纤维素分解的促进作用最显著.本研究以探明M1-3的大量外加在复合菌系MC1降解水稻秸秆过程中对其他4种关键菌的影响为目的,向复合菌系MC1中大量添加单独培养的M1-3,分别在培养的0,1,2,3,4,5,6,9天取样,利用定量PCR技术检测5种关键菌的数量变化.结果表明,与对照组相比,CSK1增多,FG4减少,M1-5减少,M1-6减少；3-5天之后,添加组的M1-3,CSK1,FG4,M1-5,M1-6的数量与对照组数量变化趋势相同.大量添加M1-3,能促进纤维素降解菌CSK1的增多,但对其他没有纤维素分解能力的关键菌有抑制的作用.从而可见,复合菌系MC1具有很强的调节能力.

摘要： MC1是通过“外淘汰法”筛选到的一组能够高效分解纤维素类的高温复合菌系.前期研究表明:MC1要关键菌是5种细菌,分别是没有纤维素分解能力的Pseudoxanthomonas sp.strain M1-3,Brevibacillus sp.strain M1-5,Bordetella sp.strain M1-6、Clostridium sp.strain FG4,及具有纤维素分解能力的Clostridium straminisolvens CSK1；这5种细菌之问有重要的协同代谢关系,其中M1-3对纤维素分解的促进作用最显著.本研究以探明M1-3的大量外加在复合菌系MC1降解水稻秸秆过程中对其他4种关键菌的影响为目的,向复合菌系MC1中大量添加单独培养的M1-3,分别在培养的0,1,2,3,4,5,6,9天取样,利用定量PCR技术检测5种关键菌的数量变化.结果表明,与对照组相比,CSK1增多,FG4减少,M1-5减少,M1-6减少；3-5天之后,添加组的M1-3,CSK1,FG4,M1-5,M1-6的数量与对照组数量变化趋势相同.大量添加M1-3,能促进纤维素降解菌CSK1的增多,但对其他没有纤维素分解能力的关键菌有抑制的作用.从而可见,复合菌系MC1具有很强的调节能力.

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本发明提供了一种三重荧光定量PCR引物探针组与三重荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域。本发明的PCR引物探针组包括SEQ ID NO.1所示的APP‑F、SEQ ID NO.2所示的APP‑R、SEQ ID NO.3所示的APP‑探针，SEQ ID NO.4所示的HPS‑F、SEQ ID NO.5所示的HPS‑R、SEQ ID NO.6所示的HPS‑探针，SEQ ID NO.7所示的Pm‑F、SEQ ID NO.8所示的Pm‑R、SEQ ID NO.9所示的Pm‑探针。将该引物探针组制备成试剂盒，可特异的同时检测APP、HPS和Pm，灵敏度能达到10拷贝/μl。

摘要： 本发明公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测方法，包括以下步骤：第一步，以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增，获得PCR扩增产物；第二步，检测扩增产物的荧光信号；第三步，以检测结果的Ct值判定样品中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。本发明还公开了一种可同时检测多种微生物的多重荧光定量PCR检测试剂盒，可以用于定性检测蔬菜中是否含有大肠埃希氏菌O157、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、诺如病毒GI、诺如病毒GII和轮状病毒。

摘要： 一种用于检测水貂圆环病毒的荧光定量PCR引物组和荧光定量PCR试剂盒，涉及水貂圆环病毒检测领域，包括：MiCV荧光定量PCR反应液、阳性质控品和阴性质控品；MiCV荧光定量PCR反应液包括上下游引物、TBPremix Ex TaqTMII和ddH2O；上游引物：5'‑AGGGCCTTTGGGCATCATTG‑3'；下游引物：5'‑CCCGCCTGCAAACTGAAGAA‑3'。本发明根据水貂圆环病毒的Cap基因保守序列设计引物，通过反应体系和条件优化建立了基于SYBR Green II的实时荧光定量PCR技术并组装试剂盒，该试剂盒具有稳定性好、敏感性和特异性较高等优点。

摘要： 本申请公开了一种荧光定量PCR反应系统、试剂盒及核酸定量检测方法，所述荧光定量PCR反应系统利用核酸内切酶特异性地产生一段Flap序列，所述Flap序列可作为一段核苷酸序列扩增时的引物，而该核苷酸序列上存在多个的发光探针结合区段，因此，当该核苷酸序列扩增时，发光探针被DNA聚合酶切割而产生荧光信号。由于该核苷酸序列上结合有多个发光探针，且Flap序列的数量与待荧光定量PCR检测的目标基因的数量相关，所以所述荧光定量PCR反应系统可实现对目标基因的特异性扩增，且信号强度大大提升，从而提高了对临界样本的检测灵敏度。

摘要： 本发明属于D型流感病毒检测技术领域，具体涉及D型流感病毒荧光定量PCR与LAMP荧光定量PCR引物对及其应用。D型流感病毒主要感染动物中包括猪和牛，对畜牧业的发展具有一定的威胁，提供稳定可靠的检测方法具有重要的意义。本发明提供了一种用于D型流感病毒实时荧光定量PCR检测的引物序列及相应的试剂盒，该引物针对D型流感病毒HE基因中的保守序列进行设计，能够实现良好的检测特异性和灵敏度，敏感性比普通PCR和荧光定量LAMP均高100倍，可以实现大量通用样品的检测，可对D型流感病毒进行快速、高敏感度的实时荧光定量PCR检测，对于提高D型流感病毒的检测精度具有重要的意义。

摘要： 本发明提供了一种鉴别肝螺杆菌的荧光定量PCR方法，将包含有PCR引物的反应体系进行荧光定量PCR反应；PCR引物包括上游引物和下游引物；反应体系包括以下组分：上游引物，下游引物，SYBR Premix Ex TaqⅡ，ROX Reference DyeⅡ，样品DNA模版，ddH

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液及试剂盒和荧光定量PCR方法。所述荧光定量PCR反应液，包括如下的原料制备而成：二甲亚砜，牛血清蛋白，DNTP，10×SYBR荧光染料，10×PCR buffer，溶质体积百分数为30％的甘油溶液和Ex-Taq酶。本发明优化了PCR实验的荧光定量PCR反应液，特别是加入一定比例的甘油溶液，以保证Ex-Taq酶的活性，加入BSA与DMSO的组合保证了Tag酶的稳定性及活性并减少引物二聚体的形成，减少荧光定量PCR反应液配置时间，所得PCR反应液可以长期保存在-20°C中，使用方便。

摘要： 本发明属于分子生物学技术和实验方法领域，具体涉及一种荧光定量PCR反应液，其特征在于包含PCR反应增强剂，所述PCR反应增强剂选自二甲亚砜、甘油、牛血清白蛋白、甲酰胺、聚乙二醇6000、亚精胺、硫酸铵和甜菜碱中的一种或多种，例如二甲亚砜、牛血清白蛋白和甜菜碱。本发明的荧光定量PCR反应液还包含具有5′-3′聚合酶活性和5′-3′外切酶活性的耐热DNA聚合酶，优选为同时具有3′-5′外切酶活性的耐热DNA聚合酶和热启动耐热DNA聚合酶。本发明还涉及包含所述反应液的试剂盒以及利用所述反应液进行荧光定量PCR的方法。

摘要： 本实用新型公开了一种荧光定量PCR光学激发装置及成像装置、荧光定量PCR仪，其中荧光定量PCR光学激发装置包括光源，该光源的出光方向上设有激发光滤光片和二向色镜，还包括设于激发光滤光片与二向色镜之间的光均匀化透镜组；所述光均匀化透镜组包括平行透镜、复眼透镜和积分透镜，激发光滤光片、平行透镜、复眼透镜、积分透镜、二向色镜沿光源的出光方向依次设置；所述光源为宽光谱光源。本实用新型能够获得照度均匀的激发光，并能够在不同的光谱通道进行检测，使用寿命长，光源更换次数少；成像效果好；尤其适用于微流体芯片的荧光定量PCR检测。