反转录病毒

摘要： 目的·通过优化后的CRISPR/Cas9基因编辑系统,研究原代B细胞中转录因子T-bet对抗体类别转换的调控作用。方法·系统性分析GEO公共数据库中体外诱导分化的B细胞转录组测序结果,探索转录因子T-bet对抗体类别转换的调控。构建靶向基因为Tbx21(T-box 21,编码T-bet)的小向导RNA(small guide RNA,sgRNA)反转录病毒表达载体,使用Plat-E细胞系作为病毒包装细胞系获得装有sg-Tbx21质粒的反转录病毒并对其浓缩。使用B细胞受体抗体、抗CD40抗体和Toll样受体激动剂体外协同刺激Cas9转基因小鼠的脾脏B细胞,感染高滴度反转录病毒颗粒实现基因编辑。流式细胞术分选感染细胞,提取基因组DNA进行PCR扩增后对靶向序列进行测序,利用ICE CRISPR分析工具计算基因敲除效率。体外诱导B细胞分化为浆细胞,采用ELISA检测基因编辑后B细胞培养上清液中IgM、IgG2c、IgG3抗体类别的丰度,通过独立样本t检验比较sg-NC组与sg-Tbx21组细胞上清液中抗体水平的差异。结果·①经分析GEO数据库发现,γ干扰素可以诱导B细胞中Tbx21基因的表达,且在T-bet的转录调控下,B细胞展现抗体类别转换相关通路活化的转录组特征。②使用浓缩后的高滴度病毒感染激活的B细胞,可以构建高效的反转录病毒感染原代B细胞体系。③Cas9转基因小鼠原代B细胞转染sg-Tbx21质粒后成功实现Tbx21基因敲除,敲除效率约为59%。④在体外诱导B细胞分化为浆细胞的条件下,sg-Tbx21转染后的B细胞培养上清液中IgG2c水平显著降低(P=0.000),IgM和IgG3的水平无明显的变化。结论·通过浓缩反转录病毒和协同刺激激活原代B细胞的方式可提高sgRNA递送的效率,在Cas9转基因小鼠原代B细胞中敲除Tbx21基因;应用这一系统证明了T-bet敲除后阻碍了IgG2c抗体类别的产生。

摘要： 禽白血病病毒J亚群(ALV-J)是一种致瘤性反转录病毒,于1991年在英国首次报道,在所有ALV亚群中致病性和传染性最强,引起鸡的临床病例最多,占禽类白血病(AL)病例的90%以上。ALV-J在临床上常造成被感染鸡出现持续性病毒血症,并伴随慢性炎症、免疫抑制和肿瘤多样化,其完整的基因组包含gag、pol和env基因,分别编码病毒结构蛋白、反转录酶和囊膜蛋白。目前尚未研制出有效的疫苗对ALV-J进行防控,主要是通过净化控制病毒的传播,由于其独特的传播能力和致病性,给家禽业造成了严重的经济损失。ALV-J主要诱发髓细胞瘤,后期还会诱导肾母细胞瘤、神经胶质瘤、淋巴细胞瘤、血管瘤、成红细胞瘤以及平滑肌肉瘤等多种肿瘤。肿瘤的形成和转移是造成病鸡死亡的主要原因。之前的研究一直认为肿瘤的转移是肿瘤细胞本身诱导实现的。

摘要： 鸡J亚群白血病病毒是一种致瘤性反转录病毒,可引发髓性细胞性白血病及各种肿瘤性疾病,并产生免疫抑制,易继发细菌及其他病毒感染,给养禽业造成了巨大的经济损失[1];鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌引发的疾病,不同年龄的鸡均可感染发病,本病常与其他传染病混合感染,在临床治疗上十分困难。2021年6月,某养殖户的鸡发生一起上述两种病原混合感染病例,现报告如下。

摘要： 牛白血病又名地方流行性白血病、牛淋巴瘤病、牛恶性淋巴瘤和牛淋巴肉瘤,是由牛白血病病毒引起的慢性肿瘤性疾病。1病原特点导致牛白血病的病原为牛白血病病毒,属于反转录病毒正反转录病毒亚科丁型反转录病毒属成员。病毒粒子呈球形,直径为80~120 nm,芯髓直径60~90 nm,外包双层囊膜,膜外有11 nm的纤突,病毒基因组为单股RNA,编码gp35、gp45、gp51、gp55、gp60、gp69等位于囊膜上的糖基化蛋白,P10、P12、P15、P19、P24、P80等位于芯髓的非糖基化蛋白。

摘要： B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分化.本研究首先将Drosha酶特异性小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)与反转录病毒包装质粒共转染至病毒包装细胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培养基中加入抗CD180抗体,构建了原代B细胞的体外培养体系,使B细胞在保持自身特性的同时具有较强的增殖能力;再次,增加离心感染(spin infection)次数,进一步提高了B细胞的转导效率;另外,通过小鼠预先感染,可收获更多增殖、分化的B细胞以供表型分析.通过上述改进措施,成功敲除了B细胞功能基因Bcl6的表达,验证了其抗凋亡功能.该方法的建立为研究病毒急、慢性感染中B细胞的增殖、分化与缺陷机制奠定了良好基础.

摘要： (括号内为正确用法)阿斯匹林(阿司匹林),松驰(松弛),海棉(海绵),探察(探查),基因片断(基因片段),图象(图像),幅射(辐射),成份(成分),机率(概率),瘀血(淤血),血色素(血色蛋白),综合证(综合征),适应症(适应证),禁忌症(禁忌证),合并症(并发症),指证(指征),机能(功能),抗菌素(抗生素),机理(机制),脑梗塞(脑梗死),H-E染色(苏木精-伊红染色),粘稠(黏稠),疤痕(瘢痕),报导(报道),化验检查(实验室检查),血象(血常规),华法令(华法林),无显著性差异(差异无统计学意义),敲出小鼠(敲除小鼠),临床实验(临床试验),病人(患者),几率(概率),其它(其他),肌肉注射(肌内注射),逆转录病毒(反转录病毒),副作用(不良反应),死亡率(病死率),敏感度(灵敏度),酒精(乙醇),层黏连蛋白(层粘连蛋白)。

摘要： 为构建Sirtl基因低表达的LMH细胞系,根据鸡Sirtl基因的3′UTR序列设计gSmiR30、gSmiR70和gSmiR913个miRNAs,以质粒pLNCX-gSmiRn(n为30,70或91)分别过表达这3个miRNAs48h后,依次检测其对CHO-K1细胞中报告载体psiCHECH2-gSirtl-UTR672所表达的荧光素酶活性的影响以及对LMH细胞中Sirtl基因表达的干扰情况;然后选用干扰效果较好的pLNCX-gSmiR30包装的反转录病毒感染LMH细胞,以终浓度1μg·mL^-1的G418筛选稳定过表达gSmiR30的LMH-gSmiR30细胞系,荧光定量PCR和Westernblot检测Sirtl基因的表达。结果表明:人工设计的3个miRNAs可抑制含靶位点的海肾荧光素酶活性在97%以上;且LMH细胞中Sirtl的mRNA表达水平均能被这3个miRNAs下调40%以上;筛选得到的LMH-gSmiR30细胞中绿色荧光蛋白的表达率在99%以上,细胞内Sirt1基因的mRNA水平下降75%,SIRT1蛋白也明显减少。这一研究成功获得了Sirt1基因低表达的LMH-gSmiR30细胞系,为进一步研究Sirt1基因在鸡肝脏中的功能提供了一种很好的细胞模型。

摘要： 反转录病毒可以通过模式识别受体触发一系列固有免疫应答反应,反转录病毒复制过程中会产生一系列的DNA中间体,包括RNA/DNA杂合体、单链DNA和双链DNA等,这些不同形式的DNA可被不同的DNA识别受体所识别,激活固有免疫应答反应,从而抑制反转录病毒的复制.环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)、γ干扰素诱导蛋白16(IFI16)及Ku70等细胞内DNA识别受体能够识别人类免疫缺陷病毒、成人T淋巴细胞病毒Ⅰ型、猴免疫缺陷病毒及鼠白血病病毒等反转录病毒的DNA中间体,与下游干扰素相关基因刺激因子(STING)相结合,诱导Ⅰ型干扰素(IFN)的产生及抗病毒免疫应答反应的启动.STING与TANK结合激酶1结合可以磷酸化和激活干扰素调节因子3,启动IFN-β和核因子κB的转录,从而抑制反转录病毒感染.本研究主要对反转录病毒感染过程中IFI16、cGAS、Ku70、STING及DExD/H盒解螺旋酶41等细胞内DNA识别受体对反转录病毒感染的影响进行综述.

摘要： Objective To establish an orthotropic mouse model of combined hepatocellular-cholangiocarcinoma.Methods Hepatoblasts were isolated by E-cadherin conjugated microbeads from E13.5 fetal liver of C57BL/6J mice.After culture for several days,expended hepatoblasts were transfected with retrovirus encoding c-Myc mutant T58A.Then 1 × 106 modified hepatoblasts were delivered into portal system of retrosine pretreated mice by splenic injection (c-Myc mutant T58A group,n =6).Non-modified hepatoblasts served as control for injection (wildtype group,n =6).Eight weeks after surgery,all 12 recipient mice were sacrificed for pathological examination.Immunohistochemistry and double-fluorescence immunostaining were performed on 4 μm sections to determine the phenotype of tumors.Results Mice delivered with hepatoblasts constructively expressing c-Myc mutant T58A showed high incidence of hepatocarcinogenesis (4 in 6 mice,66.7％),while those delivered with wildtype hepatoblasts showed no tumor (0 in 6 mice,0.0％).The tumors pathologically mimicked human combined hepatocellular-cholangiocarcinoma.By immunohistochemistry and double-fluorescence immunostaining,the tumor ceils were confirmed with colocalization of ALB and K19.Conclusion We generated an orthotropic mouse model of combined hepatocellular-cholangiocarcinoma derived from oncogene transformed hepatoblasts.%目的 建立一种肝脏原位混合型肝细胞-胆管细胞癌小鼠模型.方法 提取E13.5d小鼠胚胎肝细胞,使用标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)分离出肝祖细胞,使用反转录病毒使之组成性表达c-Myc(T58A突变),进而采用脾注射的方法将1×l06基因操作后的肝祖细胞通过门脉系统递送到受体鼠肝脏汇管区(实验组,6只).脾注射相同数量的野生型小鼠肝祖细胞作为对照(对照组,6只).脾注射8周后处死所有12只小鼠,病理学检查肿瘤发生情况,厚4μm组织切片行免疫组织化学、免疫荧光检查鉴定肿瘤表型.结果 实验组成瘤率66.7％ (4/6),对照组成瘤率0％(0/6);组织学表现符合人类混合型肝细胞-胆管细胞癌特征.免疫组织化学及免疫荧光检查提示肿瘤组织肝细胞标志物白蛋白(ALB)和胆管细胞标志物细胞角蛋白19(K19)的共定位表达.结论 脾注射组成性表达c-Myc(T58A突变)肝祖细胞成功诱导肝脏原位混合型肝细胞-胆管细胞癌小鼠模型.

摘要： 自噬是一种高度保守的生理代谢途径,双层膜囊泡将其内容物运送到溶酶体进行降解.因此,自噬是哺乳动物细胞清除胞内病毒等病原体的一种手段.然而,在病毒感染过程中自噬的角色比较复杂,一些病毒已进化出逃逸自噬依赖性降解的方法,甚至利用自噬为自己的复制而服务.本文主要综述了自噬的基本机制和功能、自噬在病毒感染中的角色以及自噬在人类免疫缺陷病毒和T细胞白血病病毒1型等反转录病毒感染过程中的作用.

摘要： 中国特有小型猪有望为异种移植提供安全可靠的合适供体。猪内源性反转录病毒是异种移植中最受关注的病毒。然而，目前对中国特有小型猪来源的猪内源性反转录病毒的研究尚不深入。本研究中，应用PcR技术将五指山猪内源性反转录病毒前病毒全基因分为两段进行扩增，然后构建前病毒全基因克隆，运用生物信息学方法对其序列进行分析，并与Genbank中收录的其他PERV全基因序列进行比对，在此基础上还进行了进化分析，构建了基于Env氨基酸序列的进化树。结果表明，五指山猪来源的PERV前病毒全长为8899bp，含有完整的gag、pol、env的0RF，两端为5’LTR与3’LTR两个长末端重复序列。序列比对分析发现PERV—wzsP与其他来源的PERV毒株高度相似但仍具有一定的差异性。进化分析结果表明PERV—wzs与其他A亚型毒株属于同一分支，这与PCR分型鉴定的结果也相一致。此外，我们还发现该株PERV前病毒的5’LTR中有多个u3重复金的存在，这可能会导致PERV—wzs在宿主细胞中复制能力的增强;3’LTR中含有PERV—c亚型中的特异性序列，这将可能导致部分的PERV—c序列与PERV—A序列发生重组。然而，我们还需要进行更深入的研究来对这种推测进行验证。本研究有助于深入了解五指山猪内源性反转录病毒的分子生物学特性，并为下一步构建PERV感染性克隆奠定了良好基础。

摘要： 本文对整合有禽反转录病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的马立克氏病病毒(命名为GX0101)的毒力进行了测定.对用HVT疫苗免疫的SPF鸡人工接种MDV野毒株GX0101及国际标准超强毒株rMd5毒力比较试验显示,rMd5对HVT免疫的SPF鸡的致死率高达64.63%而GX0101对HVT免疫的SPF鸡的致死率仅仅只有28.24%,比标准株rMd5低36.39个百分点,差异极显著.

摘要： 肿瘤是机体在各种致瘤因素的作用下，局部组织的细胞在基因水平上失掉了对其生长的正常调控，致使一些组织细胞发生突变，表现生长迅速、代谢异常，新生的细胞有的始终不向成熟方向分化而保持幼稚的胚胎细胞形态特征，此种异常增生而形成的新生物称为肿瘤。本文就近年来本实验室接诊的临床由病毒引起家禽肿瘤性病例，即疱疹病毒所致的马立克病(MD)、反转录病毒引起的禽白血病和网状内皮组织增殖病(RE)的病理学诊断结果进行了介绍。

摘要： 禽白血病是由反转录病毒科禽白血病病毒和肉瘤病病毒群中的病毒引起的鸡的各种可传播的良性和恶性肿瘤。本文针对ALV的保守序列LTR设计引物和探针，建立了ALV的实时荧光定量RT-PCR检测方法，为快速诊断和监测禽白血病提供了一种新的快速有力的手段。

摘要： 本文用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。研究结论:成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。

摘要： 本文用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。研究结论:成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。

摘要： 本文用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。研究结论:成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。

摘要： 本文用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。研究结论:成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。

摘要： 本发明涉及合成的非天然存在的寡核苷酸化合物，该化合物含有其序列定义了一个保守催化区的核苷酸和其序列能够与RNA病毒包装序列内预定的靶序列杂交的核苷酸。优选的，病毒包装序列是反转录病毒包装序列，或是HIV-1Psi包装序列。RNA病毒可以是HIV-1，猫白血病病毒，猫免疫缺损病毒或表I中所列病毒之一。保守催化区可以得自锤头核酶，发夹核酶，肝炎δ核酶，RNAase P核酶，I组内含子，II组内含子。本发明还涉及以RNA病毒为靶的多核酶，含有或不含有反义链的核酶组合物和含有反义链和polyTAR，RRE或TAR引诱物的核酶组合物。本发明还描述了载体。此外，还描述了体内和间接体内的治疗方法和使用方法。

摘要： 本发明涉及动物病毒学、免疫学、表观遗传学和新型免疫增强剂开发领域，提供了一种抗J亚群禽白血病病毒增殖的内源性反转录病毒RNA及其制备方法和应用。该RNA来源于鸡1号染色体基因组中内源性反转录病毒ALVE1衍生的反义长链非编码RNA，采用RACE和PCR克隆技术鉴定后，将其命名为lnc‑ALVE1‑AS1，其cDNA具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本发明通过构建lnc‑ALVE1‑AS1过表达载体质粒，体外实验显示lnc‑ALVE1‑AS1可激活细胞抗病毒干扰素应答反应并抑制J亚群禽白血病病毒增殖。本研究发明不仅提供了抵抗禽白血病病毒的新手段，也为禽白血病病毒的防控提供了新思路。

摘要： 本发明涉及一种抗体、其片段或衍生物，用作针对属于人内源性反转录病毒W型(HERV‑W)的病毒的抗反转录病毒药物，其中所述抗体、其片段或衍生物针对HERV‑W包膜蛋白(HERV‑W Env)。本发明还涉及一种组合物，其包含所述抗体和反转录病毒的反转录酶抑制药物，用作靶向属于HERV‑W的病毒的抗反转录病毒药物。

摘要： 本发明涉及一种抗体、其片段或衍生物，用作针对属于人内源性反转录病毒W型(HERV‑W)的病毒的抗反转录病毒药物，其中所述抗体、其片段或衍生物针对HERV‑W包膜蛋白(HERV‑W Env)。本发明还涉及一种组合物，其包含所述抗体和反转录病毒的反转录酶抑制药物，用作靶向属于HERV‑W的病毒的抗反转录病毒药物。

摘要： 本发明涉及合成的非天然存在的寡核苷酸化合物，该化合物含有其序列定义了一个保守催化区的核苷酸和其序列能够与RNA病毒包装序列内预定的靶序列杂交的核苷酸。优选的，病毒包装序列是反转录病毒包装序列，或是HIV-1 Psi包装序列。RNA病毒可以是HIV-1，猫白血病病毒，猫免疫缺损病毒或表I中所列病毒之一。保守催化区可以得自锤头核酶，发夹核酶，肝炎δ核酶，RNAase P核酶，I组内含子，II组内含子。本发明还涉及以RNA病毒为靶的多核酶，含有或不含有反义链的核酶组合物和含有反义链和polyTAR，RRE或TAR引诱物的核酶组合物。本发明还描述了载体。此外，还描述了体内和间接体内的治疗方法和使用方法。

摘要： 本发明涉及动物病毒学、免疫学、表观遗传学和新型免疫增强剂开发领域，提供了一种抗J亚群禽白血病病毒增殖的内源性反转录病毒RNA及其制备方法和应用。该RNA来源于鸡1号染色体基因组中内源性反转录病毒ALVE1衍生的反义长链非编码RNA，采用RACE和PCR克隆技术鉴定后，将其命名为lnc‑ALVE1‑AS1，其cDNA具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。本发明通过构建lnc‑ALVE1‑AS1过表达载体质粒，体外实验显示lnc‑ALVE1‑AS1可激活细胞抗病毒干扰素应答反应并抑制J亚群禽白血病病毒增殖。本研究发明不仅提供了抵抗禽白血病病毒的新手段，也为禽白血病病毒的防控提供了新思路。

摘要： 本发明涉及嵌合RSV-F多肽、和慢病毒或α-反转录病毒基于GAG的病毒样颗粒(VLP)。本发明也包括制备和使用这种嵌合VLP的方法。在某些实施方案中，所述嵌合VLP的GAG多肽包含HIV或者ALV GAG多肽。

摘要： 本发明公开了一种组合物。此组合物含有至少一种杆状病毒成分和至少一种反转录病毒成分,其中的反转录病毒成分能够被包装在反转录病毒颗粒中。

摘要： 本发明涉及病毒学领域，具体提供了CCND1在制备禽反转录病毒生产增强剂中的应用，所述的CCND1为细胞周期蛋白D1(G1/S‑specific cyclin‑D1，CCND1),其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，发明人首次建立了CCND1作为禽反转录病毒生产增强剂的制备和使用方法；首次明确了CCND1促进禽反转录病毒复制的机理：CCND1通过调控病毒宿主细胞的周期由G1期向S期转变，并延长S期时间，从而促进反转录病毒的复制。

摘要： 本发明涉及病毒学领域，具体提供了MSI1在制备禽反转录病毒生产增强剂中的应用，所述的MSI1为musashi RNA结合蛋白1(musashi RNA binding protein1，MSI1)，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示，发明人首次发现MSI1能够提高禽反转录病毒囊膜蛋白ENV的表达量，进而促进病毒颗粒的组装，可应用于禽反转录病毒颗粒表达增效剂、禽反转录病毒样颗粒生产增效剂。