分离与鉴定

摘要： 为了解变异后伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)的致病性,采用细胞培养技术从病料中分离PRV,通过PCR方法对PRV相关基因进行扩增,对毒株进行特异性试验和病毒滴度的测定,并通过动物试验对PRV的致病性进行了研究。结果表明:通过PCR可扩增出大小与预期相符的PRV gG基因片段、gE基因片段以及TK基因片段;病毒毒价可达10^(8.0) TCID_(50)∕mL;接种10^(5.0)TCID_(50)∕mL病毒后,家兔于52 h左右全部死亡,小鼠于72 h左右全部死亡,10^(4.0) TCID_(50)∕mL病毒可致28日龄仔猪死亡或发病。本研究可为预防PRV疫病的流行提供防控依据。

摘要： 牦牛乳的营养价值很高,是一种天然、绿色且健康的特色奶源,有十分广阔的市场开发价值。为了了解不同温度贮藏条件下细菌对牦牛牛乳品质的影响和危害,本研究检测了在4°C、15°C、20°C温度下储存的牦牛牛乳中细菌菌落总数的变化和细菌生长特征。用稀释涂布和划线分离结合的方法对牛乳中的细菌进行了分离,通过形态学特征、生理生化试验和16S rRNA序列比对进行菌株鉴定。实验结果表明,从牦牛乳中分离出的细菌主要包括不动杆菌属(Acinetobacter)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、嗜根寡养单胞菌(Stenotrophomonas rhizophila)、短波单胞菌(Brevundimonas)和拜叶林克氏菌属(Beijerinckia)。本研究分析了储存温度对牦牛牛乳中可培养细菌的多样性及其对牛乳品质的潜在影响,为牦牛牛乳食品安全控制提供科学依据。

摘要： 为了解天津小麦茎基腐病的发生情况,本试验分别在天津市蓟州区、宝坻区、武清区、静海区和北辰区5个小麦主栽区采集茎基腐病害样品33份,分离真菌菌株204个。经致病性测定、形态学观察及对rDNA-ITS的分子检测,最终确定为5类病原菌,分别为小麦根腐离蠕孢(Bipolaris sorkiniana)、假禾谷镰刀菌(紫红色、黄色,Fusarium pseudograminearum)、燕麦镰刀菌(F.avenaceum)和木贼镰刀菌(F.equiseti),优势菌株为假禾谷镰刀菌,占分离病原菌总数的74.5%。5类病原菌对8种杀菌剂的敏感性测定结果表明,咯菌腈、丙硫菌唑和咪鲜胺对蠕孢菌的抑制效果最好,咯菌腈、咪鲜胺和多菌灵对镰刀菌的抑制效果最好。

摘要： 山西作为大豆起源地之一,根瘤菌资源丰富。为了进一步挖掘山西省的大豆根瘤菌资源,筛选出与当地主栽大豆品种共生固氮效果好的根瘤菌。本实验在大同广灵、太原清徐、晋中太谷三地采集不同大豆品种的根瘤,经过多次划线,对分离纯化出的单菌落进行菌落形态、刚果红染色、BTB染色表型鉴定;16S rDNA、nodA和nifH基因型鉴定。利用BOX-PCR对所有根瘤菌进行电泳检测,去除条带完全一致的菌株,将目的条带不一致的菌在Bionumerics@7.5软件中聚类分析。选代表性菌株接种到晋大88号和科丰1号两个大豆材料,筛选匹配性好的菌株。共分离出203株菌,其中187株根瘤菌可以扩增出nodA、nifH基因,172株快生型根瘤菌,属于S.fredii;15株慢生型根瘤菌,分别属于B.diazoefficiens和B.daqingense。BOX-PCR将85株条带不一致的根瘤菌分为四大类群,以70%为界限共分为16类。筛选出与晋大88号匹配性较好的根瘤菌GL11和GL43,其地上部分干重较接种USDA110分别增加38.5%、30.1%;根干重分别增加22.2%、27.8%;根瘤鲜重分别增加24.3%、41.5%;根瘤干重分别增加36.6%、31.0%。筛选出与科丰1号匹配性较好的根瘤菌TG37,其株高、地上干重、根干重、根瘤鲜重、根瘤干重和根瘤数较接种USDA110分别增加8.1%、15.0%、28.6%、27.3%、44.3%和60.6%。山西省根瘤菌资源丰富,种类多样,S.fredii为优势种,此外还分离出两类慢生型根瘤菌B.diazoefficiens和B.daqingense,丰富了根瘤菌资源。筛选出共生匹配性好的根瘤菌为大豆生产实践奠定了物质基础和理论依据。

摘要： 为了解上海市猫上呼吸道疾病病例中猫杯状病毒(FCV)、猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫流感病毒(FIV)的感染比例及其遗传变化特点,对上海市冬季53份表现上呼吸道症状宠物猫的眼结膜、口咽和鼻黏膜拭子,进行FCV、FHV-1和FIV分离与鉴定,并对分离的病毒进行遗传进化分析。结果显示:53份样品中,FCV分离率为58.49%(31/53),FHV-1为3.77%(2/53),未分离到FIV。在FCV阳性样品中,来自宠物医院的分离率为46.67%(14/30),来自猫舍的高达73.91%(17/23)。分离获得的31株FCV分离株VP1基因核苷酸同源性不高,与参考序列同源性为72.9%-86.7%,相互间同源性为75.3%~99.8%。结果表明,FCV是引起猫上呼吸道疾病的重要病原,且毒株进化关系复杂,来源广泛,有必要继续进行FCV等病毒的流行情况调查与监测。本研究为猫上呼吸道疾病的防控和治疗提供了依据,也为猫呼吸道病毒性疾病诊断试剂及疫苗研究打下了良好基础。

摘要： 在黑龙江稻区采集病样、分离病原菌的基础上,获得形态差异明显的20株水稻叶褐条斑病菌,利用ITS序列鉴定其均为Nigrospora oryzae,由此推断Nigrospora oryzae为当地主要的水稻黑孢菌种群。此外,依据水稻叶褐条斑病的生物学特征,摸索了人工接种鉴定技术。该研究结果为抗水稻叶褐条斑病的遗传育种研究奠定基础。

摘要： 在细菌分离鉴定的研究过程中,发现了1株具有抑菌活性的芽胞杆菌,命名为B901。经16S rRNA测序以及同源性比较,鉴定其为高山芽胞杆菌(Bacillus altitudinis)。对该菌进行生物学特性分析、抑菌试验和安全性试验。结果表明:B901菌株对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有抑菌活性,B901抑菌产物产生较快,培养菌液pH值维持在5.6左右时抑菌活性维持在较高水平;提取的胞外多糖粗产物对6种指示菌均有较为明显的抑菌作用;B901对所选择的7种常用的代表性药物均在敏感水平以上,表明高山芽胞杆菌B901不具有对常用抗菌药的抗药性;用B901饲喂BALB/c小鼠,试验期间小鼠食欲明显提高,粪便正常,无死亡、发病情况,表明服高山芽胞杆菌B901对小鼠无致病性。研究表明,高山芽胞杆菌B901株可作为益生素候选优良菌株,在绿色饲用添加剂领域中具有良好的开发潜力。

摘要： 为了解山西地区4型禽腺病毒(FAdV-4)的遗传进化情况及其致病性,为山西省FAdV-4的疫苗研发和防控策略制定提供理论依据,收集了山西中部地区太谷、祁县、介休、临汾、长治、交城、柳林等养鸡场11份疑似心包积水-肝炎综合征病鸡的肝脏组织样本,采用PCR方法进行FAdV-4检测,对阳性样品进行FAdV-4的Hexon和Fiber-2蛋白的全基因序列扩增,将处理后的阳性病料接种于鸡肝癌细胞(LMH)进行病毒分离和PCR鉴定,测定分离毒株的TCID50,研究病毒对SPF鸡胚和SPF鸡的致病性。结果表明,11份样品的FAdV-4检测均为阳性,经比对,11份样品中FAdV-4的Hexon和Fiber-2基因序列相同,与GenBank中不同FAdV分离株的同源性分别为67.7%~100%和43.2%~100%,其中,与GenBank中的基因C型FAdV-4毒株处于同一个分支,同源性分别为98.4%~100%和95.9%~100%,说明11份疑似样品均存在FAdV-4感染,且为同一毒株。分离获得的1株FAdV-4(命名为SX2020)可在LMH细胞中良好复制并产生明显的细胞病变,对SPF鸡胚及SPF鸡均有致病性,感染后出现FAdV-4典型病变,并且病毒可以在感染鸡体内持续向外排毒达21~28 d。

摘要： 【目的】对保定市临床真菌感染病鸭进行菌株分离鉴定,并筛选分离菌株的体外抑菌药物。【方法】通过形态学观察、PCR扩增、测序及动物回归试验对菌株进行鉴定,并采用微量稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)及体外药敏试验统计菌落数量和直径来探究石菖蒲、黄柏、决明子、苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英对烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)的体外抑菌活性。【结果】成功分离到烟曲霉菌和黄曲霉菌。动物回归试验结果显示,雏鸡出现与病鸭相似的症状,剖检可见肝脏长出灰白色结节,且病变组织出现肉芽肿病变,说明2种病原菌均可使雏鸡感染。烟曲霉菌MIC_(80)结果显示,石菖蒲、黄柏、决明子和苦参MIC_(80)分别为8、16、32和64μg/μL,辣蓼、白头翁和蒲公英均为128μg/μL;黄曲霉菌的MIC_(80)结果显示,石菖蒲、决明子和黄柏MIC_(80)分别为8、16和32μg/μL,苦参和辣蓼均为64μg/μL,白头翁和蒲公英均为128μg/μL。体外药敏试验结果显示,在石菖蒲浓度为16μg/μL时培养基长出烟曲霉菌和黄曲霉菌菌落,在决明子浓度为32μg/μL时培养基长出黄曲霉菌菌落,黄柏浓度为32μg/μL时培养基中长出烟曲霉菌菌落,而在苦参、辣蓼、白头翁和蒲公英浓度128μg/μL培养基中就已长出直径较大的烟曲霉菌和黄曲霉菌菌落。【结论】石菖蒲、黄柏和决明子对烟曲霉菌和黄曲霉菌的生长具有显著的抑制作用,其中石菖蒲的抑制作用最为显著。本试验可为抗家禽曲霉病的中药研发提供新的思路。

摘要： 为解决红烧肉和酱料包的胀袋和腐败问题,该研究对胀袋红烧肉、牛排酱与番茄酱的微生物进行分离鉴定,并通过16S rDNA鉴定和产气验证试验确定导致产品胀袋的主要产气微生物。结果显示,从3种胀袋产品中共分离出9株优势菌,编号为1~9。其中菌株1号和5号为革兰氏阳性球菌,经鉴定1号菌株为枝状葡萄球菌(Staphylococcus edaphicus)、5号菌株为戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus);4号和8号菌为革兰氏阴性杆菌,经鉴定4号菌株为巴氏柠檬酸杆菌(Citrobacter braakii)、8号菌株为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii);2号、3号、6号、7号和9号为革兰氏阳性杆菌,经鉴定2号菌株为魏斯氏菌(Weissella cibaria)、3号菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)、6号菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、7号菌株为太平洋芽孢杆菌(Bacillus pacificus)、9号菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。经产气验证试验,可以确定Bacillus velezensis、Citrobacter braakii、Bacillus cereus、Bacillus pacificus和Citrobacter freundii为产气微生物,是引起红烧肉和酱料包胀袋的主要污染微生物。综合分析,芽孢杆菌是导致包装食品胀袋的主要产气微生物之一,有效控制芽孢及芽孢杆菌的污染是解决食品胀袋问题的关键。

摘要： 本发明提供无需利用细胞表面标记物，可以高效率、高纯度地由哺乳类或鸟类分离浆细胞和浆母细胞的方法。荧光探针，与对内质网以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞的内质网的染色选择性高。涉及鉴定浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞进行染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。荧光探针，与对细胞核以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞核的染色选择性高。鉴定淋巴结组织等中的浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。

摘要： 本发明公开了一种微生物实时分离检测方法，包括以下步骤：(1)在真空作用下，将微生物颗粒引入分离装置；(2)利用所述分离装置具有将不同颗粒粒径的微粒差异分离的特性，将不同粒径的微生物进行分散，并沉积在收集装置中的不同位置处；(3)将所述收集装置取出，加入基质进行干燥处理；(4)将干燥后收集装置放入微生物鉴定装置中进行鉴定，得到微生物的鉴定结果。本发明还提供一种分离检测装置在微生物分离检测鉴定中的应用。本发明克服了微生物分离检测鉴定技术中难以实现快速检测的技术问题，实现了直接对不同颗粒的微生物进行检测，实现了各种检测场合下的微生物快速分离检测。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明提供无需利用细胞表面标记物，可以高效率、高纯度地由哺乳类或鸟类分离浆细胞和浆母细胞的方法。荧光探针，与对内质网以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞的内质网的染色选择性高。涉及鉴定浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞进行染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。荧光探针，与对细胞核以外的细胞器的染色选择性相比，其对细胞核的染色选择性高。鉴定淋巴结组织等中的浆细胞和浆母细胞的方法，该方法包括：使用该荧光探针，对来自淋巴结组织等的细胞染色，根据来自染色的细胞的荧光强度来鉴定浆细胞和浆母细胞。

摘要： 本发明涉及一种细胞分离用微流控芯片及其在肿瘤细胞分离中的应用、细胞分离鉴定方法。该微流控芯片包括进液流道、捕获区和出液流道，进液流道具有进液口，进液流道与捕获区的进液侧对应连通，出液流道具有出液口，出液流道与捕获区的出液侧对应连通；捕获区具有多个捕获单元，各捕获单元具有多个分流柱。该微流控芯片采用柱子分选方法，分流柱在捕获区的流道中可以起到分流阻挡的作用，通过分流柱阻挡分别形成捕获流道和通过流道，待捕获的目的细胞可被截留在捕获流道中，而其他非目的细胞可经由通过流道流出，整个微流控芯片结构设计精巧，可用于具有多种不同细胞直径的细胞混合液中目的细胞的分离，分离效果高且操作简单，可广泛推广应用。

摘要： 本发明公开了一种微生物实时分离检测方法，包括以下步骤：(1)在真空作用下，将微生物颗粒引入分离装置；(2)利用所述分离装置具有将不同颗粒粒径的微粒差异分离的特性，将不同粒径的微生物进行分散，并沉积在收集装置中的不同位置处；(3)将所述收集装置取出，加入基质进行干燥处理；(4)将干燥后收集装置放入微生物鉴定装置中进行鉴定，得到微生物的鉴定结果。本发明还提供一种分离检测装置在微生物分离检测鉴定中的应用。本发明克服了微生物分离检测鉴定技术中难以实现快速检测的技术问题，实现了直接对不同颗粒的微生物进行检测，实现了各种检测场合下的微生物快速分离检测。

摘要： 本发明提供了从组织或细胞来源样品的DNA中检测和分类AAV序列的方法。本发明还提供了用该方法鉴定的AAV序列以及用这些序列构建的载体。

摘要： 本发明属于分子生物技术领域，具体涉及一种快速鉴定果园高效解磷细菌的特异性引物及其试剂盒、分离鉴定方法。本发明所提供的特异性引物为pqqB1‑F和pqqB1‑R引物对：所述pqqB1‑F的序列如SEQ ID NO:1所示；所述pqqB1‑R的序列如SEQ ID NO:2所示。本发明采用改良后的PVK培养基，同时，使用百里溴酚蓝作为指试剂，阳性解磷菌菌株易于观察和计数，快速且易于操作和观察。本发明设计的引物pqqE1‑F和pqqE1‑R能够快速检测溶磷细菌，具有特异性好，能够准确的检测溶磷细菌，解决了常规方法耗时且成本高，基因特异性研究针对目标功能组进行研究，可以解决细菌中众多的未知机制。