限制酶

摘要： 一、限制性内切酶限制酶的命名,1973年由Smith和Nathans提出:用属名的头1个字母和种名的头2个字母,组成3个字母的略语,表示寄主菌的物种名称;如有菌株名,再加上一个字母,即第4个字母表示菌株;1种特殊的菌株,具有几个不同的限制与修饰体系,则以罗马数字表示在该菌株中发现某种酶的先后次序。例如:Eco R I,第1个大写字母E为大肠杆菌Escherichia coli的属名的第1个字母;第2、3两个小写字母co为其种名的2个字母;第4个字母大写R表示所用大肠杆菌的菌株编号。再如,流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)用Hin表示。例如,从流感嗜血杆菌d株(Haemophilus influenzad d)中先后分离到3种限制酶,则分别命名为Hin d I、Hin dⅡ和Hin dⅢ。

摘要： 催化特异性反应的工具酶在基因工程中发挥着重要的作用,根据其催化反应特性可分为限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶和末端修饰酶4种类型.对这四种工具酶的发现和作用机制进行概述,并展望工具酶的应用前景.

摘要： 限制性核酸内切酶,又称限制酶,是一类可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列,并对每条主链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的酶,简称限制酶。根据限制酶的结构,辅助因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型:Type Ⅰ、Type Ⅱ及Type ID。Ⅰ型限制酶既能催化宿主DMA的甲基化,又催化非甲基化的DNA的水解;Ⅱ型限制酶只催化非甲基化的DNA的水解;瓜型限制酶同时具有修饰及认知切割的作用。由于Ⅱ型限制酶所识别的位置多为短的回文序列,所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列,所以是基因工程上实用性较高的限制酶种类,如,EcoRⅠ、HindⅢ。

摘要： 基因工程是现代生物科技专题的重要内容,其内容可概括为"两酶一体四步骤",四步骤中的核心内容是基因表达载体的构建。在构建表达载体过程涉及的限制酶种类以及筛选方法和工具酶切割位点的确定成为考试的热点内容。在学习中,学生容易和其他几种与DNA的复制、基因表达的有关酶混在一起,是学生学习的难点内容。

摘要： 在课堂教学中创设情境和任务,引导学生利用纸片模型模拟筛选含目的基因受体细胞的过程,通过层层递进的问题培养学生的科学思维能力,总结归纳限制酶的选择依据。

摘要： "基因工程"不仅在现代生物专题中占有重要地位,在高考命题中也是一大热点,并且近年来也有考点加深的趋势.因此,下面对基因工程中几组重要的基本概念进行具体分析.

摘要： 《普通高中生物学课程标准(2017年版)》通过凸显生物学核心概念的教学以培养学生的生物学核心素养,在教学中教师要围绕核心概念的教学培养学生的科学思维、科学探究方法,在此基础上形成生命观念和社会责任,因此,核心素养也是高考考查的核心目标。

摘要： 该文对限制酶与修饰酶精制各阶段（包括除核酸、透析和浓缩、柱层析、活性测定、核糖核酸酶检测、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测）常出现的问题及可采取的对策作一概括介绍。

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 探讨了基因工程中限制性内切酶在国内外研究进展情况。从限制性内切酶在基因工程中的实用价值出发，当前世界上对它的研究着重于：应用基因工程技术创造高产优质的新菌株；藉甲基化酶的配合，利用现有内切酶人为创建新的识别特异性；进一步筛选新酶，特别是寻找具有更高特异性的内切酶。对内切酶的作用亦作了充分论述，认为内切酶在医学上的作用不仅在于用基因工程生产激素、疫苗等医用药物中，它作为手术刀的价值；而且籍助于内切酶图谱分析，DNA序列测定，基因探针的分子杂交等方法，从基因水平上研究遗传疾病的病因、发病机理、临床诊断和治疗。（胡杰摘）

摘要： 本发明公开一种基于限制性内切酶HpaⅡ和核酸外切酶Ⅲ的DNA甲基化及甲基化转移酶活性的检测方法。制备了无标记的DNA探针，该探针序列包含了限制性内切酶的切割位点和甲基化的CpG位点,通过该无标记的DNA探针与目标DNA杂交，用甲基化转移酶进行甲基化处理，再用限制性内切酶HpaⅡ的特异性切割以及作用于双链DNA的3ˊ→5ˊ外切酶活性的核酸外切酶Ⅲ作用，然后利用荧光信号分子噻唑橙对单双链DNA不同信号实现检测甲基化及甲基转移酶活性的目的。本发明无需制备复杂材料和标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。

摘要： 根据本发明，提供一种编码重组II型限制性内切酶MmeI的DNA(脱氧核糖核酸)片段。这种酶具备两种相关的酶学功能；一个是识别DNA序列5’-TCC(Pu)AC-3’的内切酶活性，并在如箭头标记的地方剪切DNA：5’-TCCRAC(N20)↓-3’和3’-AGGYTG(N18)↑-5’，另一个酶活性是识别同样的DNA序列5’-TCC(Pu)AC-3’，但是通过增加甲基的方式来修饰该序列以防止MmeI内切酶活性的剪切。

摘要： 本发明是一种利用甲基化酶的保护高效重组表达限制性内切酶的方法，其特征在于：所述的甲基化酶是M.Sss I；所述限制性内切酶D选自：AatII、AciI、AclI、AfeI、AgeI、AscI、AsiSI、AvaI、BceAI、BmgBI、BsaAI、BsaHI、BsiEI、BsiWI、BsmBI、BspDI、BspEI、BsrFI、BssHII、BstBI、BstUI、BtgZI、ClaI、EagI、FauI、FseI、FspI、HaeII、HgaI、HhaI、HinP1I、HpaII、Hpy99I、HpyCH4IV、KasI、MluI、NaeI、NarI、NgoMIV、NotI、NruI、Nt.BsmAI、Nt.CviPII、PaeR7I、PluTI、PmlI、PvuI、RsrII、SacII、SalI、SfoI、SgrAI、SmaI、SnaBI、TliI、TspMI、XhoI、XmaI、ZraI。本发明方法重组工程菌的构建过程中直接使用广谱保护型甲基化酶M.Sss I，无需针对单个限制性内切酶进行繁琐的甲基化酶基因筛选，应用范围广泛，大大简化了重组表达过程。

摘要： 本发明公开一种基于限制性内切酶HpaⅡ和核酸外切酶Ⅲ的DNA甲基化及甲基化转移酶活性的检测方法。制备了无标记的DNA探针，该探针序列包含了限制性内切酶的切割位点和甲基化的CpG位点,通过该无标记的DNA探针与目标DNA杂交，用甲基化转移酶进行甲基化处理，再用限制性内切酶HpaⅡ的特异性切割以及作用于双链DNA的3'→5'外切酶活性的核酸外切酶Ⅲ作用，然后利用荧光信号分子噻唑橙对单双链DNA不同信号实现检测甲基化及甲基转移酶活性的目的。本发明无需制备复杂材料和标记DNA探针，可避免材料制备及标记DNA探针而导致检测成本高、操作烦琐，重现性差的缺陷。本发明具有成本低、快速、简便、灵敏度高的优点。

摘要： 根据本发明，提供一种编码重组Ⅱ型限制性内切酶MmeI的DNA(脱氧核糖核酸)片段。这种酶具备两种相关的酶学功能；一个是识别DNA序列5’-TCC(Pu)AC-3’的内切酶活性，并在如箭头标记的地方剪切DNA：5’-TCCRAC(N20)↓-3’和3’-AGGYTG(N18)↑-5’，另一个酶活性是识别同样的DNA序列5’-TCC(Pu)AC-3’，但是通过增加甲基的方式来修饰该序列以防止MmeI内切酶活性的剪切。

摘要： 新的限制性内切核酸酶和制备该限制性内切核酸酶的方法可以从柠檬酸杆菌属的菌种2144(NEB#1398)或重组的大肠杆菌菌株(NEB#1554)得到，其在双链DNA分子中的核苷酸序列5’－CAANNNNNGTGG－3’(SEQ ID NO：14)处进行切割。新的限制性内切核酸酶是组件式蛋白质，其中的特异性部分是独立于限制性修饰组件的独立组件。

摘要： 根据本发明，提供一种编码重组II型限制性内切酶MmeI的DNA(脱氧核糖核酸)片段。这种酶具备两种相关的酶学功能；一个是识别DNA序列5’－TCC(Pu)AC－3’的内切酶活性，并在如箭头标记的地方剪切DNA：5’－TCCRAC(N20)↓－3’和3’－AGGYTG(N18)↑－5’，另一个酶活性是识别同样的DNA序列5’－TCC(Pu)AC－3’，但是通过增加甲基的方式来修饰该序列以防止MmeI内切酶活性的剪切。

摘要： 本发明是一种利用甲基化酶的保护高效重组表达限制性内切酶的方法，其特征在于：所述的甲基化酶是M.CviPI；所述的限制性内切酶C选自：AatI，AscI，BanII，BglI，BmtI，BspQI，BsrDI，BssHII，BtsI，EagI，HindIII，KasI，MluI，NheI，NotI，NruI，NsiI，PstI，PvuII，SacI，SapI，SbfI，SfiI，SphI。本发明方法重组工程菌的构建过程中直接使用广谱保护型甲基化酶M.CviPI，无需针对单个限制性内切酶进行繁琐的甲基化酶基因筛选，应用范围广泛，大大简化了重组表达过程。

摘要： 蛋白酶是一种水解蛋白质并消除其活性的酶。本发明中利用蛋白酶包括蛋白酶K、内切蛋白酶LysC和/或胰蛋白酶的水解活性来控制限制酶的活性和/或消除或减少非必要DNA或RNA片段的产生(称为星号活性)。

摘要： 蛋白酶是水解蛋白质酶、消除其活性的酶。本发明利用包括蛋白酶K、内切蛋白酶LysC和/或胰蛋白酶的蛋白酶的水解活性来控制限制酶的活性和/或消除或减少不需要的DNA或RNA片段的产生(称为星号活性)。