转录表达

摘要： 为筛选出较强的启动子用于提高外源基因在罗氏沼虾活体细胞中的转化表达效率,本研究构建包含eGFP基因和IE1、hr5-IE1及Sv40启动子的3个表达载体,分别按照10μg·g-1标准注射于体重5～7 g的活体罗氏沼虾肌肉内,采集注射活体肌肉的RNA样品检测各个启动子转录eGFP基因的效率.结果表明,在罗氏沼虾体内hr5-IE1启动子对eGFP基因的表达活性最强,其对eGFP外源基因的转录水平是IE1的3倍以上,IE1对于eGFP的转录水平也显著高于SV40的转录启动效率,其中SV40在罗氏沼虾体内的转录启动水平未检测到eGFP基因的转录表达,表明包含节肢动物门跨物种转录调控元件(增强子hr5)的IE1启动子能够在罗氏沼虾体内正常启动下游基因的转录表达及翻译,是罗氏沼虾开展分子功能研究较优的外源基因表达启动调控元件.

摘要： 为全面了解鳗草基因组中WRKY基因家族信息,本文采用生物信息学手段,鉴定出44个ZmWRKYs基因,基因数目低于大多数陆生高等植物。系统发育分析表明,ZmWRKYs分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组3个类群,Ⅱ组可进一步划分为5个亚组(Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc、Ⅱd和Ⅱe)。顺式作用元件分析表明,ZmWRKYs基因很可能受到激素、生物和非生物因素的调节。此外,转录组数据表明ZmWRKYs基因在不同器官中均有表达,且存在器官差异性表达,ZmWRKYs在根和营养枝中的表达量较高,在雌花和雄花中的表达量较低。因此,鳗草WRKY基因家族成员可能参与调节鳗草生长发育和激素诱导,并参与应答生物胁迫和非生物胁迫。

摘要： 为了探究盐胁迫和套袋处理对环渤海产区葡萄果实果皮总花色苷的含量及花色苷合成相关基因表达的影响,本试验以天津地区耐寒耐旱的多年生露地栽培‘摩尔多瓦’葡萄为试验材料进行3‰盐溶液和套袋处理,检测葡萄果实的可溶性固形物、总花色苷及总酚含量等一系列的生理指标,采用实时荧光定量PCR技术检测果皮中花色苷合成相关基因的转录表达水平。结果表明:成熟时,与对照相比,套袋和盐处理的果实可溶性固形物含量分别提高8%和4%,可滴定酸含量分别是对照的0.79倍和1.14倍,总酚含量分别是对照的0.80倍和1.06倍,花色苷含量分别降低了22%和45%,花色苷合成相关基因LDOX和UFGT的转录水平下调,影响无色花青素向有色花色素的转变,以及有色花色素与各种单糖结合形成花色苷。综上,套袋处理有利于葡萄果实可溶性固形物含量的增加,但影响了果皮花色苷的合成和积累。盐处理影响葡萄果实可溶性固形物含量的增加及果皮花色苷的合成和积累。

摘要： 目的:克隆斑马鱼PKR(ZPKR)及其剪接异构体(ZPKRV)并对其进行鉴定和转录表达分析.方法:采用基因克隆法克隆ZPKR及ZPKRV;利用生物信息学方法分析其结构差异,设计定量分析引物;使用病毒双链RNA类似物(Poly I:C)刺激,提取斑马鱼组织总RNA并反转录合成cDNA,通过qPCR检测ZPKR及ZPKRV转录表达的差异,推测ZPKR及ZPKRV的功能.结果:首次在斑马鱼组织中克隆到ZPKRV;生物信息分析显示,ZPKRV仅仅在ZPKR的双链RNA结合结构域和激酶区之间的链接区缺失了28个氨基酸残基,并且缺失的序列包括链接区的碱性区;Poly I:C刺激后的转录表达显示,在刺激后的12 h,ZPKR表达上调到第一个峰值,24 h又下调,48 h再上调;而ZPKRV仅在刺激后24 h表达上调到最高,然后下调.结论:ZPKRV碱性区的缺失,可能会导致其单链RNA结合功能的丧失,进而促进蛋白的翻译表达;ZPKR和ZPKRV同时表达,可能通过显性的负效应,降低PKR在抗病毒免疫反应中对蛋白翻译的抑制作用,促进抗病毒免疫细胞因子的翻译表达.

摘要： 为深入解析核桃GRAS基因家族在低温胁迫中的生物学功能,本研究根据生物信息学模型搜索核桃基因组中GRAS基因,采用ExPASy、MEME、GSDS、MEGA6.0、String和Plantcare等软件分析该家族成员理化性质、基因结构、保守基序、进化关系、启动子区域结合位点及蛋白功能互作等,分析GRAS基因家族在低温胁迫下表达模式.聚类分析发现,据拟南芥分类将核桃GRAS基因家族分为9个亚族,分别为HAM、DELLA、SCR、SCL、LISCL、LS、SHR、PAT1和NEW CLASS;每个成员蛋白磷酸化和糖基化的位点和数目各异,均存在丰富的激素信号和胁迫应答调控元件;蛋白互作预测发现JrGRAS和其他响应非生物胁迫蛋白可以发生互作.在低温胁迫48 h后经转录表达分析,JrGRAS8、JrGRAS14、JrGRAS15、JrGRAS20、JrGRAS33、JrGRAS39、JrGRAS41、JrGRAS48、JrGRAS49、JrGRAS51、JrGRAS59、JrGRAS63为差异表达基因,推测可能响应低温胁迫.本研究结果将为深入研究核桃GRAS基因功能奠定基础.

摘要： 为分析ICE(Inducer of CBF Expression)基因在核桃响应低温胁迫中的结构与功能,对低温胁迫下的核桃枝条进行转录组测序并利用RT-PCR技术分析并克隆得到核桃(Juglans regia L.)中ICE同源基因,并进一步对其进行生物信息分析及转录表达分析.结果 表明,JrICE1(Genbank:109001301) CDS序列全长为1659 bp,最大开放阅读框1659 bp,编码552个氨基酸;JrICE1为不稳定亲水性蛋白,理论等电点5.73.同源比对发现ICE蛋白和其他植物一样具有bHLH基因家族的典型功能区域,包括富S区、NLS区、bHLH结构域,类泛素化(SUMO)结合位点各1个,且在bHLH结构域高度保守,核桃JrICE1与毛果杨(Populus trichocarpa)、甜杨(Populus suaveolens)关系最近.利用转录组分析ICE1在"辽宁8号"(耐低温)和"清香"(不耐低温)低温胁迫48 h后中的表达模式表明,JrICE1在"辽宁8号"和"清香"叶片中表达均显著上升0.53倍和4.5倍.

摘要： 为分析ICE(Inducer of CBF Expression)基因在核桃响应低温胁迫中的结构与功能,对低温胁迫下的核桃枝条进行转录组测序并利用RTPCR技术分析并克隆得到核桃(Juglans regia L.)中ICE同源基因,并进一步对其进行生物信息分析及转录表达分析。结果表明,JrICE1(Genbank:109001301)CDS序列全长为1659 bp,最大开放阅读框1659 bp,编码552个氨基酸;JrICE1为不稳定亲水性蛋白,理论等电点5.73。同源比对发现ICE蛋白和其他植物一样具有bHLH基因家族的典型功能区域,包括富S区、NLS区、bHLH结构域,类泛素化(SUMO)结合位点各1个,且在bHLH结构域高度保守,核桃JrICE1与毛果杨(Populus trichocarpa)、甜杨(Populus suaveolens)关系最近。利用转录组分析ICE1在“辽宁8号”(耐低温)和“清香”(不耐低温)低温胁迫48 h后中的表达模式表明,JrICE1在“辽宁8号”和“清香”叶片中表达均显著上升0.53倍和4.5倍。

摘要： [目的]明确棉花黄萎病菌(大丽轮枝菌Verticillium dahliae)中一个新基因(VdHP1)的功能,为解析棉花黄萎病菌的致病机制以及棉花黄萎病的防治提供依据.[方法]以大丽轮枝菌野生型菌株V592的基因组DNA和cDNA为模板,对VdHP1全长进行克隆并测序;利用逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别对棉花根系诱导不同时间VdHP1的表达量及V592菌株不同组织中VdHP1的表达量进行测定;构建针对VdHP1的敲除载体、互补载体和过表达载体,通过农杆菌介导的遗传转化筛选VdHP1基因敲除突变体、互补菌株和过表达菌株;以野生型菌株V592为对照,对VdHP1基因敲除突变体及互补菌株的菌落及菌丝形态进行观察,并对微菌核量、产孢量及致病力进行测定;通过RT-qPCR测定其他致病力相关的基因在VdHP1基因敲除突变体及过表达体菌株中的表达情况.[结果]VdHP1全长为862 bp,预测编码蛋白含268个氨基酸,与GenBank中已注释的基因没有任何的序列相似性.野生型菌株V592受棉花根系诱导6—12 h时VdHP1表达水平显著上调,表明VdHP1在大丽轮枝菌侵染早期发挥作用.VdHP1在分生孢子中的表达量显著高于在菌丝和微菌核中的表达量,表明VdHP1在大丽轮枝菌不同组织中的表达具有差异性.与野生型菌株V592相比,VdHP1基因敲除突变体产孢量和产孢梗显著减少,菌丝分支呈螺旋状,对棉花的致病力明显下降.与侵染钉形成相关基因(VdCrz1、VdNoxB、VdPls1)、分泌蛋白释放相关基因(VdSep5)及分生孢子产生相关基因(Vdpf、VdSge1、VGB、VdPLP、VdCYC8、VdNLP1、VdNLP2)在VdHP1基因敲除体中的相对表达量显著下调,在过表达菌株中上调;而与黑色素合成相关基因(VdCmr1、VdSho1、VdLAC、VdPKS1)在VdHP1基因敲除突变体中则显著上调,在过表达菌株中下调.[结论]VdHP1与大丽轮枝菌分生孢子和产孢梗的产生有关,参与大丽轮枝菌致病;VdHP1对与侵染钉形成、分泌蛋白释放及分生孢子产生相关基因的表达具有正调控作用,对黑色素合成相关基因的表达具有负调控作用.

摘要： 目的 探讨鼻咽癌中MSH6基因甲基化和转录表达及其临床病理意义.方法 选取60例鼻咽癌组织作为研究组,30例正常鼻咽上皮组织作为对照组,通过半定量反转录PCR和甲基化特异性PCR方法检测两组中MSH6基因甲基化及转录表达水平,并分析MSH6基因甲基化对鼻咽癌组织转录表达的影响及其与临床病理资料的关系.结果 研究组中MSH6基因甲基化明显高于对照组,MSH6基因相对转录表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(χ2=11.25,t=-4.07,P均0.05).研究组中不同性别、年龄、T分期、N分期、TNM分期及病理类型的MSH6基因相对转录表达水平比较,差异均无统计学意义(t分别=1.23、-0.01、0.56、-0.59、-1.37、-0.74,P均>0.05).甲基化鼻咽癌组中MSH6基因相对转录表达水平明显低于非甲基化鼻咽癌组(t=-26.80,P<0.05).结论 鼻咽癌组织中MSH6基因甲基化可能参与调控其转录表达,MSH6基因甲基化具有肿瘤特异性,MSH6基因甲基化有望作为鼻咽癌早期辅助诊断的分子生物标志物.

摘要： 中国大鲵虹彩病毒(CGSW)是近年来在患病大鲵体内分离出来的一种新型病毒.这种病毒潜伏期短,发病突然,会造成大鲵大规模的发病并导致死亡,将对野生和驯养大鲵的生存和生长造成严重影响.CGSIV基因组信息分析和重要基因转录表达研究是阐明CGSIV分子感染和生物学机制的重要基础.CGSIV的病毒全基因组测序及ORFs的分析预测己完成，但基因组中绝大部分ORFs的表达情况还没有经过研究。与核酸代谢的蛋白如DNA复制,RNA转录,核酸修饰,核苷酸代谢等相关酶是病毒复制、病毒与宿主细胞相互作用的重要蛋白。CGSIV病毒的ORFs的分析预测中发现了大量与此相关的编码ORF,但是否表达有待于证明.CGSIV病毒在细胞中的转录分为3个期:即早期(IE)、早期(E)和晚期(L)。病毒蛋白在不同时期的表达与其功能的作用密切相关，研究时相表达有助于对病毒基因产物在病毒感染中的作用。论文主要选择CGSIV中与核酸代谢相关基因的ORFs进行信息学的分析和转录表达研究。

摘要： 为了解SOD1和GPX1在燃煤污染型地方性砷中毒(以下简称燃煤型砷中毒)患者外周血中的转录表达情况，探讨其在燃煤型砷中毒发生发展中的作用。本研究针对性选择SOD1和GPX1基因，拟从转录表达水平初步探讨其在砷致肝损伤中的作用机制。结果发现，肝病组SOD1 mRNA和GPX1 mRNA表达升高。有研究表明，SOD1和GPX1可能通过转录调控影响其蛋白质合成，从而影响酶活力;结合课题组前期研究结果，砷中毒患者体内SOD和GPx酶活力出现明显下降，推测燃煤型肝病组患者体内SOD1 mRNA和GPX1 mRNA表达异常可能是其酶活力异常改变的原因之一。另外，酶活力除了受酶的转录调控影响外，尚受诸多因素的影响，如mRNA加工、翻译和翻译后修饰、酶的基因多态性和酶的别构调节等。本研究仅从转录表达水平初步探讨了SOD1和GPX1与然煤型砷中毒的关系，其深层次的作用机制尚需做大量工作。

摘要： TLR信号通路是最重要的先天免疫信号通路之一.TLR2和TLR4等TLR样受体识别细菌和病毒等病原后,诱发机体免疫反应的信号往下游传递均需接头分子MyD88参与,MyD88活化转录因子NF-κB和AP-1并促进炎症因子(TNF、IL6、IL1β等)的转录表达,因此MyD88在先天免疫反应中具有至关重要的作用.然而，MyD88的蛋白水平必须受到严格的调控，避免先天免疫通路过于活跃引起自身免疫疾病。ChHIB是一种E3泛素连接酶中，该蛋白促使靶蛋白发生泛素化修饰，从而调控蛋白的功能或者将蛋白转运至蛋白酶体并其降解。本研究发现ChHIB和鸡MyD88相互作用并促进进MyD88蛋白降解，下调NF-κB信号通路活性和免疫因子的表达并负调控机体的先天免疫反应。

摘要： 本发明涉及合成的非天然存在的寡核苷酸化合物，该化合物含有其序列定义了一个保守催化区的核苷酸和其序列能够与RNA病毒包装序列内预定的靶序列杂交的核苷酸。优选的，病毒包装序列是反转录病毒包装序列，或是HIV-1Psi包装序列。RNA病毒可以是HIV-1，猫白血病病毒，猫免疫缺损病毒或表I中所列病毒之一。保守催化区可以得自锤头核酶，发夹核酶，肝炎δ核酶，RNAase P核酶，I组内含子，II组内含子。本发明还涉及以RNA病毒为靶的多核酶，含有或不含有反义链的核酶组合物和含有反义链和polyTAR，RRE或TAR引诱物的核酶组合物。本发明还描述了载体。此外，还描述了体内和间接体内的治疗方法和使用方法。

摘要： 本发明公开了一种用于真核细胞系的提高蛋白表达水平的MAR转录调控元件及其表达系统，首次利用CHO细胞克隆出具有转录调节功能的DNA调控元件(MAR)，通过一系列载体构建及稳定细胞株筛选，证明了此DNA调控元件可提高蛋白质的表达产量。还首次将此MAR调控元件与睡美人转座子载体结合，从而构建了一种适用于高效稳定表达医用蛋白质药物的表达系统，与传统的质粒表达系统相比，该系统具有如下优点：高蛋白质产量；稳定持久地蛋白表达；大大缩短筛选克隆的时间；快速便捷的基因克隆。本发明中的表达系统，可显著提高医用蛋白质药物的产量和质量，一经投入工业化使用，将极大地降低生产成本，产生巨大的社会和经济效益。

摘要： 本发明属于化学领域，具体公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用，通过抑制肝癌干细胞中干性转录因子的表达，降低肝癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力和成球能力，从而抑制肝癌干细胞的自我更新；因此可以将干扰SIRT1表达试剂用于制备靶向治疗肝癌的药物。

摘要： 本发明提出一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达方法的反转录反应体系，所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。

摘要： 本发明提出一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达中的反转录产物PCR体系。所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。本发明还提供了反转录产物进行实时定量PCR检测的PCR体系。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。

摘要： 本发明涉及合成的非天然存在的寡核苷酸化合物，该化合物含有其序列定义了一个保守催化区的核苷酸和其序列能够与RNA病毒包装序列内预定的靶序列杂交的核苷酸。优选的，病毒包装序列是反转录病毒包装序列，或是HIV-1 Psi包装序列。RNA病毒可以是HIV-1，猫白血病病毒，猫免疫缺损病毒或表I中所列病毒之一。保守催化区可以得自锤头核酶，发夹核酶，肝炎δ核酶，RNAase P核酶，I组内含子，II组内含子。本发明还涉及以RNA病毒为靶的多核酶，含有或不含有反义链的核酶组合物和含有反义链和polyTAR，RRE或TAR引诱物的核酶组合物。本发明还描述了载体。此外，还描述了体内和间接体内的治疗方法和使用方法。

摘要： 本发明公开了一种用于真核细胞系的提高蛋白表达水平的MAR转录调控元件及其表达系统，首次利用CHO细胞克隆出具有转录调节功能的DNA调控元件(MAR)，通过一系列载体构建及稳定细胞株筛选，证明了此DNA调控元件可提高蛋白质的表达产量。还首次将此MAR调控元件与睡美人转座子载体结合，从而构建了一种适用于高效稳定表达医用蛋白质药物的表达系统，与传统的质粒表达系统相比，该系统具有如下优点：高蛋白质产量；稳定持久地蛋白表达；大大缩短筛选克隆的时间；快速便捷的基因克隆。本发明中的表达系统，可显著提高医用蛋白质药物的产量和质量，一经投入工业化使用，将极大地降低生产成本，产生巨大的社会和经济效益。

摘要： 本发明属于化学领域，具体公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用，通过抑制肝癌干细胞中干性转录因子的表达，降低肝癌干细胞的增殖能力、克隆形成能力和成球能力，从而抑制肝癌干细胞的自我更新；因此可以将干扰SIRT1表达试剂用于制备靶向治疗肝癌的药物。

摘要： 本发明公开了一种特异性抑制人端粒酶反转录酶基因表达的siRNA及该siRNA的表达质粒和它们在制备与人端粒酶活化有关的肿瘤的药物中的应用。本发明利用生物计算机信息技术从GenBank中获得一组人端粒酶反转录酶基因序列，并以RNA干扰技术为基础，设计出一组可能诱发RNA干扰的siRNA，通过化学法合成或质粒载体表达一定量的siRNA，从而特异性抑制人端粒酶反转录酶基因的表达。该siRNA及其表达质粒可制备高效快速、特异性强、副作用少的抗肿瘤药。

摘要： 本发明公开了一种罗氏沼虾外源基因的表达质粒及其高效转录表达方法，本发明表达质粒包括顺序排列的hr5增强子、转录启动子IE1、外源目标基因和终止子；hr5增强子核苷酸序列如SEQIDNo：1所示，转录启动子IE1核苷酸序列如SEQIDNo：2所示。本发明以10ug质粒每g虾体重的量，从沼虾腹部头胸甲和躯干交界线插入微量注射器并注射上述表达质粒，每只虾注射量控制在5μL～20μL的范围内；注射外源表达质粒4～12h后，采集罗氏沼虾躯干肌肉组织，并验证外源目标基因的表达量。本发明对鉴定罗氏沼虾外源基因肌肉内的转录表达水平更高，高出目前常用启动子IE1转录水平约3倍；并且对于外源基因活体表达的方法快捷高效。