Cyt-C

摘要： 脑卒中的发病类型主要包括缺血性脑卒中和出血性脑卒中,其中缺血性脑卒中的发病率高于出血性脑卒中,占脑卒中总数的70%~80%[1]。缺血性脑卒中的发病机制较为复杂,主要与能量代谢障碍、活性氧增多、钙超载、炎性反应、细胞凋亡、自噬、高能磷酸化合物生成障碍、兴奋性氨基酸毒性作用等多种内外因素相关[2]。各因素之间互相作用,最终导致了神经功能破坏、脑梗死灶的形成。研究发现,线粒体功能异常是缺血性脑卒中病理进程中的关键一环。线粒体功能异常,可引起促凋亡相关因子表达增强,激活线粒体凋亡通路,引起缺血性脑卒中神经功能障碍[3]。本文就p53/细胞色素(Cyt)C/凋亡蛋白酶激活因子(Apaf)-1介导的线粒体凋亡通路对缺血性脑卒中的作用进行综述。

摘要： 背景:二乙酰吗啡药物可导致神经元损伤,但是目前二乙酰吗啡是否诱导神经元细胞凋亡,C-jun、Cytc和Caspase-9因子是否参与此过程尚未见报道。目的:探讨C-jun、Cytc、Caspase-9是否参与二乙酰吗啡诱导神经元细胞凋亡过程。方法:将SD乳鼠小脑颗粒神经元细胞体外培养7 d,采用不同质量浓度二乙酰吗啡(0,10,40,80,100,120 mg/L)干预神经元细胞24 h,在倒置荧光显微镜下观察神经元细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。采用100 mg/L二乙酰吗啡和20μmol/L JNK抑制剂SP600125作用于细胞24 h,通过免疫荧光和蛋白印迹方法检测C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白的表达。结果与结论:①在不同质量浓度二乙酰吗啡干预下,随着给药质量浓度的增加,神经元细胞胞体萎缩、亮度降低,部分呈灰黑色,细胞碎裂,神经元网状结构不同程度的消失,细胞改变数量逐渐增加;②随着给药质量浓度的增加,形态改变的细胞数量明显增多(P <0.01),细胞凋亡率也显著增高(P <0.01);③与对照组相比,100 mg/L二乙酰吗啡作用神经元细胞时,二乙酰吗啡组C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白呈高表达,差异有显著性意义(P <0.05);与二乙酰吗啡组相比,二乙酰吗啡+SP600125组C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白表达明显下调,差异有显著性意义(P <0.05);④结果表明,二乙酰吗啡可诱导小脑颗粒神经元细胞凋亡,C-jun、Cytc和Caspase-9参与了二乙酰吗啡致神经元细胞凋亡的过程。

摘要： 背景:二乙酰吗啡药物可导致神经元损伤,但是目前二乙酰吗啡是否诱导神经元细胞凋亡,C-jun、Cytc和Caspase-9因子是否参与此过程尚未见报道.目的:探讨C-jun、Cytc、Caspase-9是否参与二乙酰吗啡诱导神经元细胞凋亡过程.方法:将SD乳鼠小脑颗粒神经元细胞体外培养7 d,采用不同质量浓度二乙酰吗啡(0,10,40,80,100,120 mg/L)干预神经元细胞24 h,在倒置荧光显微镜下观察神经元细胞形态改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用100 mg/L二乙酰吗啡和20μmol/L JNK抑制剂SP600125作用于细胞24 h,通过免疫荧光和蛋白印迹方法检测C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白的表达.结果 与结论:①在不同质量浓度二乙酰吗啡干预下,随着给药质量浓度的增加,神经元细胞胞体萎缩、亮度降低,部分呈灰黑色,细胞碎裂,神经元网状结构不同程度的消失,细胞改变数量逐渐增加;②随着给药质量浓度的增加,形态改变的细胞数量明显增多(P<0.01),细胞凋亡率也显著增高(P<0.01);③与对照组相比,100 mg/L二乙酰吗啡作用神经元细胞时,二乙酰吗啡组C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白呈高表达,差异有显著性意义(P<0.05);与二乙酰吗啡组相比,二乙酰吗啡+SP600125组C-jun、Cytc和Caspase-9蛋白表达明显下调,差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,二乙酰吗啡可诱导小脑颗粒神经元细胞凋亡,C-jun、Cytc和Caspase-9参与了二乙酰吗啡致神经元细胞凋亡的过程.

摘要： 目的 探讨安宫牛黄丸治疗中风病疗效及对患者凝血功能、Cytc、Caspase-3表达的影响.方法 随机抽取50例缺血性中风患者的临床数据,应用双色球抽签分为研究组(安宫牛黄丸治疗)和对照组(疏血通注射液治疗)各25例.治疗结束后对患者治疗前后神经功能缺损评分、Cytc、Caspase 3水平和凝血功能指标对比,观察临床疗效.结果 治疗后,两组患者Cytc、Caspase-3水平明显降低,且研究组优于对照组(P＜0.05);神经功能缺损评分及凝血功能各项指标均低于对照组(P＜0.05).研究组的临床疗效显著高于对照组(P＜0.05).结论 缺血性中风应用安宫牛黄丸治疗临床疗效显著,能够使患者神经功能恢复,同时改善凝血功能,减少出血情况,可抑制患者Cytc、Caspase 3水平.

摘要： 目的 研究低剂量林丹暴露对SD大鼠睾丸生精细胞Bcl-2、CytC等蛋白表达的影响.方法 选取健康的清洁级SD大鼠40只,随机分为5组,每组8只.参照大鼠林丹LD50(126 mg·kg-1),低、中、高剂量组按照每1 kg大鼠体质量分别给予3、6和13 mg的林丹,溶媒对照组给予10 mL玉米油,阳性对照组给予100μg雌二醇.以灌胃的方式连续染毒8周,测定大鼠睾丸附睾质量、系数及睾丸生精细胞Bcl-2、CytC的阳性表达情况.结果 各实验组大鼠体质量增长量与溶媒对照组、阳性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);各实验组睾丸、附睾系数及睾丸质量与溶媒对照组、阳性对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05);各实验组附睾质量均高于阳性对照组(P均<0.05);高剂量组Bcl-2阳性表达低于溶媒对照组(P<0.05),低、中剂量组Bcl-2阳性表达高于阳性对照组(P<0.05);高剂量组CytC阳性表达高于溶媒对照组(P<0.05),低、中剂量组CytC阳性表达低于阳性对照组(P<0.05).结论 林丹可能通过下调睾丸组织中Bcl-2蛋白表达、上调CytC蛋白表达来调控生精细胞凋亡.

摘要： 目的:观察橄榄苦苷(Oleuropein)对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用,并探讨其分子机制.方法:实验分为空白对照组、模型组和实验组.利用H2O2作用PC12细胞建立氧化应激损伤模型,实验组给予50、100、200、400μmol/L的橄榄苦苷分别作用24、48、72 h,采用MTT法检测PC12细胞的活力,TUNEL法检测细胞凋亡率,ELISA法检测超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)活性,免疫印迹法(western blot)检测胞浆细胞色素c(Cytochrome c,Cyt-c)、Caspase-3蛋白的表达.结果:橄榄苦苷能够抑制H2 O2诱导的PC12细胞的活力下降(P<0.01),降低H2 O2诱导的PC12细胞的凋亡率(P<0.05,P<0.01),抑制H2 O2诱导的PC12细胞内SOD及GSH-PX活力的降低(P<0.01,P<0.05),橄榄苦苷抑制H2 O2诱导的细胞凋亡蛋白Cyt-c、Caspase-3表达的上调(P<0.01,P<0.05).结论:橄榄苦苷对H2O2诱导的PC12细胞氧化应激损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡有关.

摘要： 背景:研究发现,在脑梗死急性期无论男女均存在不同程度的性激素失衡,在男性则主要表现为睾酮下降、雌二醇升高,随着病情的恢复逐渐趋于正常.目的:探讨雄激素对脑缺血再灌注损伤后脑组织Bcl-2、Bax与Cyt-C表达的影响.方法:120只健康成年雄性SD大鼠由西南医科大学动物实验中心提供,实验方案经西南医科大学动物实验伦理委员会批准(批准号为20170821026).将120只大鼠随机分为假手术组、对照组及低、高剂量雄激素处理组(低剂量组、高剂量组).应用改良Longa法制作大脑中动脉阻断模型大鼠,假手术组不进行插线操作.据脑缺血2 h后再灌注时间点的不同每组再随机分为5个亚组(6,12,24,48,72 h),每亚组5只.24 h时每组另有5只大鼠用于测量脑梗死体积.应用TUNEL法测原位凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax与Cyt-C的表达情况.结果与结论:①假手术组未见梗死灶,原位凋亡细胞及Bcl-2、Bax与Cyt-C的表达较少,且无动态变化;与对照组相比,低剂量组脑梗死体积百分率、凋亡细胞及Bax与Cyt-C的表达减少,Bcl-2表达增多(均P<0.05),高剂量组则相反(均P<0.05);②除假手术组外,其他3组Bcl-2与Bax于脑缺血再灌注损伤后6 h表达逐渐增强,并于24 h达到高峰,随后逐渐下降;③结果说明,脑缺血再灌注损伤后,低剂量雄激素可能通过减少Bax与Cyt-C的表达、增强Bcl-2的表达,进而减少细胞凋亡,发挥神经保护作用,高剂量则作用相反.

摘要： 目的通过九香虫水提液对染锰雄性SD大鼠进行干预,探究其对大鼠睾丸损伤的抗凋亡作用及其修复机制。方法将50只8周龄的雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组和九香虫低、中、高剂量干预组。模型组和干预组大鼠按照30 mg/(kg d)腹腔注射氯化锰溶液,连续2周建立生殖损伤模型,空白组腹腔注射生理盐水;造模同时,九香虫低、中、高剂量干预组大鼠分别按照50、100、200 mg/kg灌胃九香虫水提液,连续4周进行干预,空白组和模型组灌胃蒸馏水。利用Western blot和免疫组化技术检测大鼠睾丸凋亡相关基因Bcl-2、Bax、CytC和Cleaved Caspase-3(C-Cas3)的表达情况。结果与空白组相比,模型组大鼠睾丸的BCL-2表达明显减少(P<0.01),而BAX、CYTC、C-CAS3表达明显增多(P<0.01);与模型组相比,部分九香虫干预组大鼠睾丸的BCL-2表达明显增高(P<0.01),而BAX、CYTC和C-CAS3表达明显降低(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论九香虫水提液增加Bcl-2表达的同时可抑制Bax和CytC的表达,进而阻止线粒体凋亡信号的传递,且使其下游信号C-Cas3低表达,最终抑制睾丸生精细胞凋亡。

摘要： 目的：探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。rn 方法：采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。rn 结果：伤后1小时至24小时Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.958,p<0.05);伤后1小时至24小时Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关(r=0.996,p<0.01),但Cytc表达峰值(24h)早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值(48h);伤后1小时至72小时Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.925,p<0.01)。rn 结论：Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。

摘要： 目的：探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。rn 方法：采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。rn 结果：伤后1小时至24小时Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.958,p<0.05);伤后1小时至24小时Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关(r=0.996,p<0.01),但Cytc表达峰值(24h)早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值(48h);伤后1小时至72小时Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.925,p<0.01)。rn 结论：Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。

摘要： 目的：探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。rn 方法：采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。rn 结果：伤后1小时至24小时Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.958,p<0.05);伤后1小时至24小时Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关(r=0.996,p<0.01),但Cytc表达峰值(24h)早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值(48h);伤后1小时至72小时Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.925,p<0.01)。rn 结论：Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。

摘要： 目的：探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。rn 方法：采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。rn 结果：伤后1小时至24小时Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.958,p<0.05);伤后1小时至24小时Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关(r=0.996,p<0.01),但Cytc表达峰值(24h)早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值(48h);伤后1小时至72小时Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.925,p<0.01)。rn 结论：Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。

摘要： 目的：探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。rn 方法：采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。rn 结果：伤后1小时至24小时Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.958,p<0.05);伤后1小时至24小时Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关(r=0.996,p<0.01),但Cytc表达峰值(24h)早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值(48h);伤后1小时至72小时Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.925,p<0.01)。rn 结论：Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。

摘要： 目的：探讨脑创伤后Bcl-2家族在线粒体途径细胞凋亡中的作用。rn 方法：采用改进的Marmarou’s法建立大鼠中度闭合性弥漫性颅脑损伤模型。应用免疫组化,TUNEL法对大鼠伤后皮质细胞色素c、Bax、Bcl-2表达及凋亡细胞数进行动态观察。rn 结果：伤后1小时至24小时Cytc表达与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.958,p<0.05);伤后1小时至24小时Bax和Bcl-2二者的比例与Cytc免疫反应相关(r=0.996,p<0.01),但Cytc表达峰值(24h)早于Bax和Bcl-2二者的比例高峰值(48h);伤后1小时至72小时Bax和Bcl-2二者的比例与TUNEL阳性细胞数密切相关(r=0.925,p<0.01)。rn 结论：Bax和Bcl-2二者的比例对Ctyc释放的调节起重要作用,Bax和Bcl-2二者的比例在Ctyc释放后的凋亡基因的调节中可能仍发挥重要的作用。

摘要： 目的:观察大鼠脑出血后血肿周围神经元线粒体内细胞色素C(Cyt-C)释放规律,及中药复方平肝熄风汤的干预作用.方法:用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型.免疫组织化学法检测神经元线粒体内Cyt-C的释放情况,结果:大鼠脑出血后血肿周围神经元于6 h即有Cyt-C释放,出现胞浆染色的阳性细胞;1 d后胞浆染色最浓,细胞形态变得不规则,阳性细胞表达最多;3 d后染色变淡,阳性细胞数减少;5 d后胞浆染色继续变谈,阳性细胞继续减少.治疗组与模型组比较在1 d,3 d,5 d时阳性细胞减少明显(P＜0.01),染色亦较模型组谈.结论:脑出血后血肿周围神经元Cyt-c于6 h即开始从线粒体释放,1 d达高峰后下降;平肝熄风汤能阻制Cyt-C的释放,从而组断细胞凋亡.

摘要： 目的:观察大鼠脑出血后血肿周围神经元线粒体内细胞色素C(Cyt-C)释放规律,及中药复方平肝熄风汤的干预作用.方法:用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型.免疫组织化学法检测神经元线粒体内Cyt-C的释放情况,结果:大鼠脑出血后血肿周围神经元于6 h即有Cyt-C释放,出现胞浆染色的阳性细胞;1 d后胞浆染色最浓,细胞形态变得不规则,阳性细胞表达最多;3 d后染色变淡,阳性细胞数减少;5 d后胞浆染色继续变谈,阳性细胞继续减少.治疗组与模型组比较在1 d,3 d,5 d时阳性细胞减少明显(P＜0.01),染色亦较模型组谈.结论:脑出血后血肿周围神经元Cyt-c于6 h即开始从线粒体释放,1 d达高峰后下降;平肝熄风汤能阻制Cyt-C的释放,从而组断细胞凋亡.

摘要： 目的:观察大鼠脑出血后血肿周围神经元线粒体内细胞色素C(Cyt-C)释放规律,及中药复方平肝熄风汤的干预作用.方法:用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型.免疫组织化学法检测神经元线粒体内Cyt-C的释放情况,结果:大鼠脑出血后血肿周围神经元于6 h即有Cyt-C释放,出现胞浆染色的阳性细胞;1 d后胞浆染色最浓,细胞形态变得不规则,阳性细胞表达最多;3 d后染色变淡,阳性细胞数减少;5 d后胞浆染色继续变谈,阳性细胞继续减少.治疗组与模型组比较在1 d,3 d,5 d时阳性细胞减少明显(P＜0.01),染色亦较模型组谈.结论:脑出血后血肿周围神经元Cyt-c于6 h即开始从线粒体释放,1 d达高峰后下降;平肝熄风汤能阻制Cyt-C的释放,从而组断细胞凋亡.

摘要： 目的:观察大鼠脑出血后血肿周围神经元线粒体内细胞色素C(Cyt-C)释放规律,及中药复方平肝熄风汤的干预作用.方法:用Ⅶ胶原酶脑内立体定位注射诱导大鼠脑出血模型.免疫组织化学法检测神经元线粒体内Cyt-C的释放情况,结果:大鼠脑出血后血肿周围神经元于6 h即有Cyt-C释放,出现胞浆染色的阳性细胞;1 d后胞浆染色最浓,细胞形态变得不规则,阳性细胞表达最多;3 d后染色变淡,阳性细胞数减少;5 d后胞浆染色继续变谈,阳性细胞继续减少.治疗组与模型组比较在1 d,3 d,5 d时阳性细胞减少明显(P＜0.01),染色亦较模型组谈.结论:脑出血后血肿周围神经元Cyt-c于6 h即开始从线粒体释放,1 d达高峰后下降;平肝熄风汤能阻制Cyt-C的释放,从而组断细胞凋亡.

摘要： 本发明公开了番茄溃疡病菌中cytC基因的LAMP检测引物组、试剂盒及检测方法。引物组由5条特异性引物组成，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO：1~5所示。检测试剂盒包括检测引物溶液、具有链置换活性的DNA聚合酶、10×反应缓冲液、dNTPs溶液、显色剂。检测方法是采用特异性引物及具有链置换活性的DNA聚合酶，在63~65°C对样品DNA模板进行扩增，通过观察显色剂颜色变化，判断样品是否含有番茄溃疡病菌。本发明不需要特殊仪器，具有快速高效、操作简便、特异性强、灵敏度高等特点，适合现场检测。