mTOR信号通路

摘要： 目的 探究丙泊酚对子宫内膜癌细胞系RL95-2增殖和凋亡的影响,以及对mTOR/S6K1信号通路的作用.方法 将RL95-2细胞分为对照组和丙泊酚组(加入不同浓度的丙泊酚).CCK-8法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞测量术检测细胞凋亡;比色法测定细胞caspase-3和caspase-9活性;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)磷酸化水平.结果 与对照组相比,丙泊酚各组RL95-2细胞增值率和细胞克隆形成能力均显著降低(P<0.05),细胞凋亡率以及细胞caspase-3和caspase-9活性均显著升高(P<0.05),细胞p-Akt、p-mTOR和p-S6K1蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05).结论 丙泊酚可能通过调控mTOR/S6K1通路,抑制子宫内膜癌细胞系的增殖、促进癌细胞凋亡.

摘要： 为了探究雷帕霉素对糖尿病肾病大鼠足细胞生物学行为及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响,采用链脲霉素腹腔注射构建糖尿病肾病大鼠模型,将正常大鼠体内取出的足细胞设为对照组,模型大鼠体内取出的足细胞设为糖尿病肾病模型组(DN组),取2 mg·kg^(−1)雷帕霉素干预DN组足细胞,并将其设为雷帕霉素组(RAPA组)。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethylthiahiazo-z-y1)-2,5-diphenytetrazoliumromide,MTT]法检测足细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测上皮-间充质转化标志物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形纤维蛋白(vimentin)]、mTOR和核糖体S6激酶1(S6K1)蛋白表达水平。结果显示,与对照组相比,DN组细胞增殖水平显著被抑制,细胞迁移、侵袭水平显著升高,细胞凋亡率显著增加,上皮-间充转标志物E-cadherin表达显著下调,N-cadherin和Vimentin表达显著上调,mTOR/S6K1信号通路被显著活化(P<0.05)。与DN组相比,RAPA组细胞增殖水平显著升高,细胞迁移、侵袭水平显著降低,细胞凋亡率显著降低,E-cadherin表达显著上调,N-cadherin和Vimentin表达显著下调,mTOR和S6K1的蛋白表达显著被抑制(P<0.05)。结果表明,雷帕霉素通过抑制mTOR信号通路,促进足细胞体外增殖,抑制细胞迁移、侵袭、凋亡和上皮-间充质转化,发挥对糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用。

摘要： 目的:探讨七氟醚对人神经母细胞瘤细胞(SHSY-5Y细胞)自噬的影响及mTOR信号通路在其中的作用。方法:将培养的SHSY-5Y细胞随机分为4组,空白对照组(C组)、空白对照+雷帕霉素50 nmol/L组(C+R组)、4.8%七氟醚12 h组(S组)和4.8%七氟醚12 h+雷帕霉素50 nmol/L组(S+R组)。各组分别于处理结束时采用Western blot法测定各组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Atg5以及p-mTOR、t-mTOR、β-actin的表达水平;利用mRFP-EGFP-LC3质粒转染,共聚焦显微镜观察各组细胞内自噬小体以及自噬溶酶体的数量,从而判断七氟醚对SHSY-5Y细胞自噬流的影响及其具体机制。结果:与C组比较,C+R组、S组和S+R组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Atg5表达水平均增高(P<0.05);与C+R组和S组比较,S+R组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Atg5表达水平也增高(P<0.01)。与C组比较,C+R组、S组和S+R组p-mTOR/t-mTOR比值均降低(P<0.001);与C+R组和S组比较,S+R组p-mTOR/t-mTOR比值也降低(P<0.001)。与C组比较,C+R组、S组和S+R组自噬小体、自噬溶酶体数量均增加(P<0.001);与C+R组和S组比较,S+R组自噬小体、自噬溶酶体数量也增加(P<0.001)。结论:吸入麻醉药七氟醚通过mTOR信号通路诱导SHSY-5Y细胞自噬的发生。

摘要： 本试验旨在通过体外法研究竹叶黄酮(BLF)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路中关键基因表达的影响。采用单因素试验设计,对照组不添加BLF,试验组分别添加不同浓度(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、60.0、100.0μg/mL)BLF,处理BMECs 3、6、12、24和48 h后,应用细胞增殖试剂盒(CCK-8)法检测BMECs的活性,应用乳酸脱氢酶(LDH)法检测BLF对BMECs的毒性,每次试验平行复孔6个,重复试验3次。分别应用流式细胞仪和试剂盒法检测BLF对BMECs抗氧化指标的影响,并应用实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因以及mTOR信号通路中相关基因表达量的变化。结果表明:1)BLF对BMECs活性适宜作用浓度为1.0、5.0、10.0μg/mL,最佳作用时间为12 h,且此浓度的BLF对BMECs无毒性作用。2)流式细胞仪检测结果表明,与对照组相比,5.0、10.0μg/mL的BLF极显著降低了BMECs的早期凋亡率和晩期凋亡/坏死率(P<0.01),BLF极显著降低了BMECs的总凋亡率(P<0.01)。3)与对照组相比,5.0μg/mL的BLF极显著降低了细胞内活性氧(ROS)的生成和线粒体膜电位(MMP)水平(P<0.01)。4)与对照组相比,添加BLF可极显著升高BMECs的总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(P<0.01)活性极显著降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.01)。5)实时荧光定量PCR的结果表明,与对照组相比,添加5.0μg/mL的BLF显著降低B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的基因相对表达量(P<0.05);BLF可极显著提高B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)的基因相对表达量(P<0.01),极显著降低Bax/Bcl-2的比值(P<0.01);添加5.0和10.0μg/mL的BLF显著降低环氧合酶-2(COX-2)基因相对表达量(P<0.05),极显著降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)基因相对表达量(P<0.01),极显著提高真核翻译起始因子4E结合蛋白1(EIF-4EBP1)基因相对表达量(P<0.01);此外,与对照组相比,BLF可极显著提高BMECs中mTOR信号通路关键调控基因mTOR、核糖体p70s6(S6K1)和细胞周期素D1(Cyclin D 1)基因相对表达量(P<0.01),极显著提高β-酪蛋白(β-casein)基因相对表达量(P<0.01)。综上所述,BLF可促进BMECs的活性,减少ROS的积累和MMP水平;BLF可显著提高BMECs的抗氧化能力,降低凋亡相关基因的表达,通过mTOR信号通路转导,从而影响乳蛋白的合成。

摘要： 低氧性肺动脉高压(HPH)是一种由低氧引起的以肺血管重建与血管阻力增加为特征的疾病,主要表现为低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)异常增殖和肺外膜成纤维细胞活化。随着高原地区经济建设和旅游业开发,HPH的高发病率成为当前高原医学亟待解决的难题之一。PASMCs过度增殖受到多种自噬相关信号通路调节,自噬相关雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路可双向影响低氧条件下PASMCs增殖,ERK1/2、PI3K、NF-κB等自噬相关信号通路可在低氧条件下促进PASMCs增殖,AMPK、死亡相关蛋白激酶(DAPK)等自噬相关信号通路可在低氧条件下抑制PASMCs增殖,对上述信号通路进行深入研究可为HPH的治疗提供新方向。

摘要： 目的通过检测天然产物漏芦乙酸乙酯提取物[rhaponticum uniflorum(L.)DC.ethyl acetate,RUEA]对口腔癌裸鼠移植瘤自噬相关蛋白表达的影响,探讨自噬在RUEA抑制口腔癌生长中的作用机制。方法利用口腔鳞状细胞癌细胞株SCC15细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型。实验分为4组:空白对照组、溶剂对照组、高剂量RUEA组和低剂量RUEA组。HE染色对各组口腔癌组织进行组织学观察;免疫组化染色法检测RUEA对各组移植瘤组织自噬及其通路相关蛋白p62、LC3B、mTOR、ULK1表达的影响;以自噬及其通路相关蛋白为模型,采用AutoDock计算模拟其与RUEA的主要化合物分子对接模型,预测其潜在的结合蛋白及结合位点。结果RUEA处理导致口腔癌移植瘤组织出现明显坏死。与溶剂组相比,自噬相关蛋白mTOR、p62在低剂量组、高剂量组口腔癌组织中表达显著降低(P<0.05);而ULK1、LC3B在低剂量组、高剂量组口腔癌组织中表达显著升高(P<0.05),差异具有统计学意义。Autodock预测RUEA主要化合物与p62、LC3B、mTOR、ULK1存在不同程度的结合。结论漏芦可能通过mTOR信号通路诱导自噬抑制口腔癌生长。

摘要： 目的探讨双氢青蒿素(Dihydroartemisinin,DHA)诱导人肝癌Hep-G2细胞凋亡的作用机制.方法将实验分为实验组(DHA)、无水乙醇组(C_(2)H_(6)O)及空白对照组(Mock),利用分光光度法检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的生长周期,Western Blot检测mTOR信号通路关键因子的表达.结果DHA在15μM处对Hep-G2有较好的抑制效果,DHA组的相对吸光率在第2天开始就与Mock组与C_(2)H_(6)O组差异性显著,并随着增殖天数的增加,差异性逐步加大;DHA组的细胞凋亡率高于Mock组与C_(2)H_(6)O组,差异有统计学意义(P<0?001),DHA对细胞凋亡的影响发生在G1期;DHA组的p21、Bax的mRNA及蛋白相对表达量高于Mock组与C_(2)H_(6)O组(P<0?001),Bcl-2的mRNA及蛋白相对表达量低于Mock组与C_(2)H_(6)O组(P<0?001).结论DHA对HepG2细胞的作用是通过影响mTOR信号通路来实现的.

摘要： 目的:探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制。方法:利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2^(flox/flox)小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响。在子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中分别进行高表达和敲低Kindlin-2的实验,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的激活变化,并且提取特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(实验组,基因型为Cdh16-Cre;Kindlin-2^(flox/flox))和未特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(对照组,基因型为Kindlin-2^(flox/flox))子宫蛋白,每组包含6~8只小鼠,重复3次独立实验,检测mTOR信号通路和Hippo信号通路关键分子的蛋白水平。结果:成功构建了子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,通过鼠尾聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、Western blot、免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)等方法鉴定和验证Kindlin-2在小鼠子宫中的敲除效率。子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的雌鼠与对照组相比体质量减轻、生殖能力严重受损、出生仔鼠数量减少,但出生仔鼠中雌鼠和雄鼠的比例未发生改变,通过苏木精-伊红染色实验观察表明实验组子宫内膜发育不完整、子宫壁厚度变薄。机制方面,子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中敲除Kindlin-2能够下调mTOR、磷酸化mTOR、腺嘌呤核糖核苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK和磷酸化的核糖体蛋白(ribosomal protein S6,S6)的蛋白水平,在雌鼠子宫中发现特异性敲除Kindlin-2能够上调Mps结合1(Mps one binding 1,MOB1)、磷酸化的Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的蛋白水平。结论:Kindlin-2通过抑制mTOR信号通路、激活Hippo信号通路抑制子宫内膜的发育,进而抑制雌鼠的生育能力。

摘要： 目的探讨他克莫司结合蛋白38(Fkbp38)在卵泡发育中的作用及其缺失导致早发性卵巢功能不全(POI)的机制。方法采用Cre-loxp系统构建卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠,并应用PCR鉴定小鼠基因型,然后在蛋白水平上验证Fkbp38在卵母细胞中的敲除效果。通过HE染色在显微镜下计数敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量分析卵母细胞缺失Fkbp38基因对小鼠卵泡发育的影响。通过繁殖实验及ELISA实验检测小鼠繁殖能力及血清性激素水平,明确卵母细胞敲除Fkbp38基因对卵巢功能的影响。TUNEL法检测敲除小鼠与同窝对照小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况。检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路下游靶蛋白磷酸化核糖体S6(PS6)活性验证Fkbp38基因对mTOR信号通路的影响。IF检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl2-Associated X(BAX)表达明确Fkbp38基因敲除对卵母细胞发育的影响。结果卵母细胞特异性敲除Fkbp38转基因小鼠模型构建成功。敲除小鼠较对照小鼠表现出生育力下降,性激素水平紊乱,卵巢内原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡数均显著减少(P<0.05),引起POI样改变。卵母细胞特异性敲除Fkbp38基因后,mTOR信号通路激活,颗粒细胞凋亡增加,卵母细胞内BAX蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达减弱,BAX/Bcl-2蛋白比值显著升高(P<0.05)。结论Fkbp38在卵泡发育中发挥重要作用,其缺失致POI发生的机制可能是通过激活mTOR信号通路诱导细胞凋亡而引起的。

摘要： 自噬及凋亡广泛存在于细胞中,是细胞内生物大分子的降解再循环过程,在细胞生长代谢中发挥着重要作用.两者相互作用,共同推动和影响细胞的程序性死亡,维持机体自身稳态及外界环境刺激下的应激反应.mTOR信号通路是一条经典的调控自噬凋亡信号通路,在细胞代谢中发挥重要作用.结合mTOR信号通路探讨自噬及凋亡在细胞代谢及生物体生长发育过程中的作用及相关研究进展,对其在细胞增殖、老化及肿瘤发生等进行综述,对肿瘤等疾病的诊疗提供借鉴.

摘要： 为进一步探讨中药的分子生物学作用机制，本实验针对TRAb产生后的作用环节，即信号在甲状腺细胞内的传导，研究中药甲亢宁能否通过这种途径发挥治疗作用。本研究采用目前学界较为广泛认可的Ad-TSHRa-289腺病毒免疫诱导GD动物模型，其甲状腺激素水平、TRAb含量及组织学特征和甲状腺毒症表现等均与GD的特征良好吻合，且在实验全程时间内稳定保持了模型特征。从给药5周后的甲状腺功能水平来看，药物干预使中西药组T4、T3、TRAb水平明显下降，提示中西药均有降低甲状腺激素和调节免疫的作用，且两组间药效差异无统计学意义。由于血清TSH的变化往往迟于甲状腺激素，恢复正常所需的时间更长，故在5周给药后各组间TSH水平未表现出明显差异。这也反映了给药后使机体的甲状腺功能有所恢复，但下丘脑一垂体一甲状腺轴的恢复还需要更长的时间。GD存在甲状腺细胞的增殖过度、凋亡减少，本研究发现：与正常组比较，模型组的甲状腺中磷酸化的Akt和mTOR表达水平均明显升高，说明GD的发病存在Akt通路的过度激活。甲亢宁干预后，Akt的表达变化有下降趋势但差异无统计学意义，可能与较小的样本量下实验操作中的误差有关，但作为其下游因子的mTOR表达水平明显下降，说明甲亢宁可能作用于Akt/mTOR通路，并对其关键因子Akt和mTOR的表达有影响，这可能是中药发挥治疗怍用的靶点之一。

摘要： 为进一步探讨中药的分子生物学作用机制，本实验针对TRAb产生后的作用环节，即信号在甲状腺细胞内的传导，研究中药甲亢宁能否通过这种途径发挥治疗作用。本研究采用目前学界较为广泛认可的Ad-TSHRa-289腺病毒免疫诱导GD动物模型，其甲状腺激素水平、TRAb含量及组织学特征和甲状腺毒症表现等均与GD的特征良好吻合，且在实验全程时间内稳定保持了模型特征。从给药5周后的甲状腺功能水平来看，药物干预使中西药组T4、T3、TRAb水平明显下降，提示中西药均有降低甲状腺激素和调节免疫的作用，且两组间药效差异无统计学意义。由于血清TSH的变化往往迟于甲状腺激素，恢复正常所需的时间更长，故在5周给药后各组间TSH水平未表现出明显差异。这也反映了给药后使机体的甲状腺功能有所恢复，但下丘脑一垂体一甲状腺轴的恢复还需要更长的时间。GD存在甲状腺细胞的增殖过度、凋亡减少，本研究发现：与正常组比较，模型组的甲状腺中磷酸化的Akt和mTOR表达水平均明显升高，说明GD的发病存在Akt通路的过度激活。甲亢宁干预后，Akt的表达变化有下降趋势但差异无统计学意义，可能与较小的样本量下实验操作中的误差有关，但作为其下游因子的mTOR表达水平明显下降，说明甲亢宁可能作用于Akt/mTOR通路，并对其关键因子Akt和mTOR的表达有影响，这可能是中药发挥治疗怍用的靶点之一。

摘要： 为进一步探讨中药的分子生物学作用机制，本实验针对TRAb产生后的作用环节，即信号在甲状腺细胞内的传导，研究中药甲亢宁能否通过这种途径发挥治疗作用。本研究采用目前学界较为广泛认可的Ad-TSHRa-289腺病毒免疫诱导GD动物模型，其甲状腺激素水平、TRAb含量及组织学特征和甲状腺毒症表现等均与GD的特征良好吻合，且在实验全程时间内稳定保持了模型特征。从给药5周后的甲状腺功能水平来看，药物干预使中西药组T4、T3、TRAb水平明显下降，提示中西药均有降低甲状腺激素和调节免疫的作用，且两组间药效差异无统计学意义。由于血清TSH的变化往往迟于甲状腺激素，恢复正常所需的时间更长，故在5周给药后各组间TSH水平未表现出明显差异。这也反映了给药后使机体的甲状腺功能有所恢复，但下丘脑一垂体一甲状腺轴的恢复还需要更长的时间。GD存在甲状腺细胞的增殖过度、凋亡减少，本研究发现：与正常组比较，模型组的甲状腺中磷酸化的Akt和mTOR表达水平均明显升高，说明GD的发病存在Akt通路的过度激活。甲亢宁干预后，Akt的表达变化有下降趋势但差异无统计学意义，可能与较小的样本量下实验操作中的误差有关，但作为其下游因子的mTOR表达水平明显下降，说明甲亢宁可能作用于Akt/mTOR通路，并对其关键因子Akt和mTOR的表达有影响，这可能是中药发挥治疗怍用的靶点之一。

摘要： 为进一步探讨中药的分子生物学作用机制，本实验针对TRAb产生后的作用环节，即信号在甲状腺细胞内的传导，研究中药甲亢宁能否通过这种途径发挥治疗作用。本研究采用目前学界较为广泛认可的Ad-TSHRa-289腺病毒免疫诱导GD动物模型，其甲状腺激素水平、TRAb含量及组织学特征和甲状腺毒症表现等均与GD的特征良好吻合，且在实验全程时间内稳定保持了模型特征。从给药5周后的甲状腺功能水平来看，药物干预使中西药组T4、T3、TRAb水平明显下降，提示中西药均有降低甲状腺激素和调节免疫的作用，且两组间药效差异无统计学意义。由于血清TSH的变化往往迟于甲状腺激素，恢复正常所需的时间更长，故在5周给药后各组间TSH水平未表现出明显差异。这也反映了给药后使机体的甲状腺功能有所恢复，但下丘脑一垂体一甲状腺轴的恢复还需要更长的时间。GD存在甲状腺细胞的增殖过度、凋亡减少，本研究发现：与正常组比较，模型组的甲状腺中磷酸化的Akt和mTOR表达水平均明显升高，说明GD的发病存在Akt通路的过度激活。甲亢宁干预后，Akt的表达变化有下降趋势但差异无统计学意义，可能与较小的样本量下实验操作中的误差有关，但作为其下游因子的mTOR表达水平明显下降，说明甲亢宁可能作用于Akt/mTOR通路，并对其关键因子Akt和mTOR的表达有影响，这可能是中药发挥治疗怍用的靶点之一。

摘要： 选择10kg左右杜长大三元杂交断奶仔公猪54头,随机分配到33双因素试验中,预饲喂期为3天.试验设计如下,饲喂天数分别为10天、25天和45天,每种天数的18头猪随机饲喂3种粗蛋白水平日粮,高蛋白日粮组(HP,20％粗蛋白,标准水平),中蛋白日粮组(MP,17％粗蛋白)和低蛋白日粮组(LP,14％粗蛋白),其中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸的含量不变.保证3种饲喂时间和3种粗蛋白水平日粮自由组合成9种处理,每种处理6个重复.断奶仔猪日粮中低水平蛋白质含量会减少机体对蛋白质的沉积，使背最长肌的重量减少。低水平蛋白日粮导致氨基酸转运体高表达来维持机体内部氨基酸的平衡，随着饲喂时间的延长，由于氨基酸转运体己经不足以平衡机体内部的氨基酸水平，导致氨基酸转运信号通路受到影响，mTOR的活性被抑制，从而减少核糖体蛋白激酶S6K1和真核起始因子4EBP1的磷酸化，从而减少蛋白质的合成。

摘要： 选择10kg左右杜长大三元杂交断奶仔公猪54头,随机分配到33双因素试验中,预饲喂期为3天.试验设计如下,饲喂天数分别为10天、25天和45天,每种天数的18头猪随机饲喂3种粗蛋白水平日粮,高蛋白日粮组(HP,20％粗蛋白,标准水平),中蛋白日粮组(MP,17％粗蛋白)和低蛋白日粮组(LP,14％粗蛋白),其中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸的含量不变.保证3种饲喂时间和3种粗蛋白水平日粮自由组合成9种处理,每种处理6个重复.断奶仔猪日粮中低水平蛋白质含量会减少机体对蛋白质的沉积，使背最长肌的重量减少。低水平蛋白日粮导致氨基酸转运体高表达来维持机体内部氨基酸的平衡，随着饲喂时间的延长，由于氨基酸转运体己经不足以平衡机体内部的氨基酸水平，导致氨基酸转运信号通路受到影响，mTOR的活性被抑制，从而减少核糖体蛋白激酶S6K1和真核起始因子4EBP1的磷酸化，从而减少蛋白质的合成。

摘要： 选择10kg左右杜长大三元杂交断奶仔公猪54头,随机分配到33双因素试验中,预饲喂期为3天.试验设计如下,饲喂天数分别为10天、25天和45天,每种天数的18头猪随机饲喂3种粗蛋白水平日粮,高蛋白日粮组(HP,20％粗蛋白,标准水平),中蛋白日粮组(MP,17％粗蛋白)和低蛋白日粮组(LP,14％粗蛋白),其中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸的含量不变.保证3种饲喂时间和3种粗蛋白水平日粮自由组合成9种处理,每种处理6个重复.断奶仔猪日粮中低水平蛋白质含量会减少机体对蛋白质的沉积，使背最长肌的重量减少。低水平蛋白日粮导致氨基酸转运体高表达来维持机体内部氨基酸的平衡，随着饲喂时间的延长，由于氨基酸转运体己经不足以平衡机体内部的氨基酸水平，导致氨基酸转运信号通路受到影响，mTOR的活性被抑制，从而减少核糖体蛋白激酶S6K1和真核起始因子4EBP1的磷酸化，从而减少蛋白质的合成。

摘要： 选择10kg左右杜长大三元杂交断奶仔公猪54头,随机分配到33双因素试验中,预饲喂期为3天.试验设计如下,饲喂天数分别为10天、25天和45天,每种天数的18头猪随机饲喂3种粗蛋白水平日粮,高蛋白日粮组(HP,20％粗蛋白,标准水平),中蛋白日粮组(MP,17％粗蛋白)和低蛋白日粮组(LP,14％粗蛋白),其中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸的含量不变.保证3种饲喂时间和3种粗蛋白水平日粮自由组合成9种处理,每种处理6个重复.断奶仔猪日粮中低水平蛋白质含量会减少机体对蛋白质的沉积，使背最长肌的重量减少。低水平蛋白日粮导致氨基酸转运体高表达来维持机体内部氨基酸的平衡，随着饲喂时间的延长，由于氨基酸转运体己经不足以平衡机体内部的氨基酸水平，导致氨基酸转运信号通路受到影响，mTOR的活性被抑制，从而减少核糖体蛋白激酶S6K1和真核起始因子4EBP1的磷酸化，从而减少蛋白质的合成。

摘要： 选择10kg左右杜长大三元杂交断奶仔公猪54头,随机分配到33双因素试验中,预饲喂期为3天.试验设计如下,饲喂天数分别为10天、25天和45天,每种天数的18头猪随机饲喂3种粗蛋白水平日粮,高蛋白日粮组(HP,20％粗蛋白,标准水平),中蛋白日粮组(MP,17％粗蛋白)和低蛋白日粮组(LP,14％粗蛋白),其中赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸的含量不变.保证3种饲喂时间和3种粗蛋白水平日粮自由组合成9种处理,每种处理6个重复.断奶仔猪日粮中低水平蛋白质含量会减少机体对蛋白质的沉积，使背最长肌的重量减少。低水平蛋白日粮导致氨基酸转运体高表达来维持机体内部氨基酸的平衡，随着饲喂时间的延长，由于氨基酸转运体己经不足以平衡机体内部的氨基酸水平，导致氨基酸转运信号通路受到影响，mTOR的活性被抑制，从而减少核糖体蛋白激酶S6K1和真核起始因子4EBP1的磷酸化，从而减少蛋白质的合成。

摘要： 目的:探讨Hep3B细胞中调控cyclin D1过表达的分子机制.rn 方法:提取正常肝细胞LO2和肝癌细胞Hep3B的总RNA和蛋白,RT-qPCR和Western blot法检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IkBa)的蛋白表达水平.ERK、mTOR、NF-κB抑制剂处理Hep3B细胞,检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达变化.rn 结果:与LO2相比,Hep3B中cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平分别升高115.73倍(t=36.617,P＜ 0.001)和22.60倍(t=8.457,P＜0.001),p-ERK1、ERK1、p-mTOR的蛋白表达水平分别升高10.87倍(t=5.903,P=0.004)、24.77倍(t=23.284,P=0.002)和20.60倍(t=24.492,P＜ 0.001),IκBα的蛋白表达水平没有显著差异(t=35.923,P=0.058).ERK抑制剂PD184352处理Hep3B细胞,对p-mTOR蛋白表达水平没有明显影响,但cyclin D1的mRNA表达水平显著下降(F=52.53,P＜ 0.001).其蛋白表达水平也随之在6-24h明显降低.mTOR抑制剂Rapamycin处理Hep3B细胞,明显提升了p-ERK蛋白的表达水平和显著升高了cyclinD1mRNA的表达水平(F=587.47,P=0.002),但cyclin D1的蛋白表达水平在6-24h明显降低.同时用ERK和mTOR的抑制剂处理Hep3B细胞,与ERK抑制剂的处理结果相同.NF-κB抑制剂BAY11-7082处理Hep3B细胞对cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平没有明显影响.rn 结论:ERK1和mTOR是调控Hep3B细胞cyclin D1表达主要信号分子.mTOR对ERK的抑制作用可能是维持适当cyclin D1蛋白水平的重要调控机制.

摘要： 本发明涉及关于PRCP的拮抗剂、PREP的拮抗剂、或者PRCP以及PREP的双重拮抗剂的药物组合物。本发明也涉及关于联合使用PRCP的拮抗剂和mTOR的拮抗剂、联合使用PREP的拮抗剂和mTOR的拮抗剂、或者联合使用PRCP以及PREP的双重拮抗剂和mTOR的拮抗剂的药物组合物。此外，本发明还涉及治疗或预防癌症等与PI3K/AKT/mTOR信号通路相关的疾病的方法。

摘要： mTOR信号通路激活剂及其在原始卵泡体外激活中的应用，mTOR信号通路激活剂，包括mTOR信号通路激活剂I和II，mTOR信号通路激活剂I为50-200μM磷脂酸，mTOR信号通路激活剂II为20-50μM普萘洛尔。应用原始卵泡体外激活试剂盒处理小鼠或人卵巢皮质，可以激活组织中的原始卵泡并促进卵泡的发育，并且在小鼠能够得到功能完全正常的卵子，受精后胚胎在体外能够发育到囊胚阶段，胚胎移植后得到具有生育能力健康的后代。本发明提供了一种mTOR信号通路激活剂，同时提供了一种可供体外培养操作用的试剂盒，以使该技术应用于更大的医学辅助生殖领域。

摘要： 本发明公开大黄素作为PI3K/Akt/mTOR信号转导通路活化分子p-Akt和p-mTOR的抑制剂及其应用，大黄素是从中药大黄提取的纯天然蒽醌类单体化合物，具有抗微生物、抗炎、抗氧化、免疫调节、肝保护等多种生物学活性。本发明发现，急性白血病多药耐药细胞HL-60/ADR、急性早幼粒白血病维甲酸耐药细胞MR2和相应敏感细胞NB4以及急性白血病原代细胞经大黄素作用后，PI3K/Akt/mTOR信号转导通路关键信号活化分子尤其是被p-Akt和p-mTOR被特异性抑制，体内研究证实，大黄素给药后急性白血病裸鼠移植瘤组织蛋白中PI3K/Akt/mTOR信号通路关键活化分子p-Akt、p-p65和p-mTOR均表达下调，说明大黄素可作为一种新型的PI3K/Akt/mTO信号转导活化分子特别是p-Akt和p-mTOR靶向抑制剂，应用于治疗血液系统恶性肿瘤。

摘要： 本发明公开了ERK/mTOR信号通路调节剂在制备改善或治疗神经发育障碍相关疾病药物中的应用，ERK/mTOR信号通路调节剂包括激动剂和抑制剂，其中具体的ERK/mTOR信号通路的激动剂包括PLPPR4蛋白，其激动剂主要应用在制备促进神经元树突发育和/或轴突再生的药物或者试剂盒中，ERK/mTOR信号通路抑制剂在制备神经元树突或者轴突的抑制发育细胞模型或者动物模型中的应用。

摘要： 本发明公开了一种mTOR信号通路小分子抑制剂在制备肺癌化疗药物中的应用，所述抑制剂由下列化学结构式表达：本发明新开发的mTOR信号通路抑制剂可通过下调mTORC1上游RagD表达及受体酪氨酸激酶磷酸化来抑制mTOR通路的活性；并在与顺铂联合化疗时促进肺鳞癌细胞对化疗药的敏感性。从而有望将其开发为新的抗肿瘤药物，为改善肺癌患者对化疗药物的反应提供一个潜在靶点。

摘要： 本发明公开了mTOR/S6K1及MAPK信号通路抑制在胰岛素抵抗改善中的应用，属于医学生物技术领域。具体地，本发明公开了mTOR/S6K1信号通路和/或MAPK信号通路抑制剂在制备用于改善胰岛素抵抗的药物中的应用，以及mTOR/S6K1信号通路标记试剂和/或MAPK信号通路标记试剂在制备用于评估药物改善胰岛素抵抗的效果的试剂盒中的应用。本发明为胰岛素抗性的提供新的药物靶点，对临床上改善胰岛素抵抗具有重要的医学和药学价值，同时，利用本发明，通过监测相关信号通路，可以方便快捷评估药物改善胰岛素抵抗的效果。

摘要： 本发明公开了mTOR信号通路抑制剂在制备预防或治疗非遗传性听力障碍药物中的用途，所述mTOR信号通路抑制剂选自雷帕霉素、雷帕霉素类似物和第二代mTOR信号通路抑制剂中的至少一种；所述雷帕霉素类似物选自依维莫司、西罗莫司脂化物和Deforolimus中的至少一种；所述第二代mTOR信号通路抑制剂选自PI3K/mTOR双重抑制剂、选择性mTORC1/2抑制剂和ATP竞争性mTOR激酶抑制剂中的至少一种。本申请发明人首次发现mTOR信号通路抑制剂能有效地减轻耳毒性药物等非遗传因素对内耳毛细胞和螺旋神经节细胞的损伤，显著地改善受损的听力水平，有效预防和治疗非遗传性听力障碍。

摘要： 本发明涉及关于PRCP的拮抗剂、PREP的拮抗剂、或者PRCP以及PREP的双重拮抗剂的药物组合物。本发明也涉及关于联合使用PRCP的拮抗剂和mTOR的拮抗剂、联合使用PREP的拮抗剂和mTOR的拮抗剂、或者联合使用PRCP以及PREP的双重拮抗剂和mTOR的拮抗剂的药物组合物。此外，本发明还涉及治疗或预防癌症等与PI3K/AKT/mTOR信号通路相关的疾病的方法。

摘要： mTOR信号通路激活剂及其在原始卵泡体外激活中的应用，mTOR信号通路激活剂，包括mTOR信号通路激活剂I和II，mTOR信号通路激活剂I为50-200μM磷脂酸，mTOR信号通路激活剂II为20-50μM普萘洛尔。应用原始卵泡体外激活试剂盒处理小鼠或人卵巢皮质，可以激活组织中的原始卵泡并促进卵泡的发育，并且在小鼠能够得到功能完全正常的卵子，受精后胚胎在体外能够发育到囊胚阶段，胚胎移植后得到具有生育能力健康的后代。本发明提供了一种mTOR信号通路激活剂，同时提供了一种可供体外培养操作用的试剂盒，以使该技术应用于更大的医学辅助生殖领域。

摘要： 开发了用于在受试者的组织中选择性抑制mTOR和/或增加自噬的组合物和方法，用于治疗癌症。提供了包含可光裂解的保护基团的笼锁的mTOR抑制剂前药以用于通过光化学治疗系统进行选择性化疗。提供了用可光去除的保护基团去活化(笼锁)以可控地阻断抑制剂的抑制活性的mTOR抑制剂的药物组合物。可光去除的基团在暴露于光照射后可裂解，在照射部位释放mTOR信号传导和自噬的活性抑制剂。示例性的笼锁的mTOR抑制剂前药是具有与其结合的DEACM部分的笼锁OSI‑027前药(cOSI‑027)。通过暴露于420nm的光以去除DEACM保护基团，从而在肿瘤区域激活cOSI‑027。