重组葡激酶

摘要： 目的:评价重组葡激酶的溶栓效力,并与相同作用方式的重组链激酶进行比较.方法:30只中国实验小型猪分成5组,分别为溶剂对照组、阳性药对照组和三个重组葡激酶组,每组6只,采用麻醉动物、手术开胸、直流电刺激形成冠脉血栓;在冠脉血栓形成30 min后开始静脉给药,采用先推注、再蠕动泵恒速输注的方式给药;溶剂对照组静脉推注对照液,阳性药对照组静脉给予重组链激酶4 mg·kg-1,三个重组葡激酶组分别静脉给予4 mg·kg-1、2 mg·kg-1、1 mg·kg-1重组葡激酶,静脉推注体积为5 ml,1 min内注毕,输注速度为0.5 ml·min-1,60 min内输毕,120 min后放血处死动物.于给药前及给药后30、60、120 min取静脉血,实验结束后取血栓形成部位的冠脉血管段,分别检测优球蛋白溶解时间(ELT)、血纤维蛋白原含量(Fbg)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)和伤口出血量,检测冠脉血栓溶解率、心肌缺血程度及缺血范围.结果:与溶剂对照组相比,试验组ELT明显缩短(P<0.05或P<0.01),FDP明显升高(P<0.05或P<0.01),较少量实验动物Fbg降解超过20％,对小型猪血压及心率无明显影响.与对照组相比,试验组高、中2个剂量组,最大血栓面积分别减少34.3％、15.4％(P<0.05).与等剂量的重组链激酶相比,重组葡激酶对电刺激引起的冠脉血栓具有更强的溶栓作用(P<0.05或P<0.01),引起的出血副反应少.结论:重组葡激酶对小型猪冠脉血栓有较好的溶栓作用,相比重组链激酶,溶栓速度快、具有更高的纤维蛋白专一性,出血副反应较少.综合比较,2 mg·kg-1重组葡激酶具有较好的临床疗效和安全性保障.

摘要： 目的 构建RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化并初步鉴定其生物学活性.方法 利用重叠延伸PCR获得目的融合基因片段RGD-rSAK-α1M,插入带有His-GST标签的原核高效可溶性表达载体PEGX-6P-1中.经酶切鉴定后,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,经Ni+亲和层析柱纯化后用3C蛋白酶切除重组蛋白的His-GST标签,再利用DEAE离子交换柱和分子筛纯化蛋白.最后应用纤维蛋白平板溶圈法和血小板聚集抑制试验分别测定评价重组融合蛋白的溶栓活性和抗血小板聚集作用.结果 1)成功构建了RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白.2)实现了目的融合蛋白在大肠杆菌上清液中的高效表达,并纯化了融合蛋白.3)体外实验表明纯化后的融合蛋白纤溶活性同尿激酶标准品无明显差异.4)融合蛋白抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶明显提高.结论 经文献检索确认为首次获得了纯化的RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白,并验证了其纤溶活性和尿激酶标准品无明显差异,而抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶增强,为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础.

摘要： 目的 建立自体血栓和凝血酶致大鼠局灶性脑梗死模型.方法 采用经颈外动脉向颈内动脉注入自体血栓和凝血酶栓塞大鼠大脑中动脉的方法,建立局灶性脑梗死模型并观察重组葡激酶(rSak)对该模型的改善作用.结果 注入10μL自体血栓和50 U凝血酶时大鼠脑血流量较基础值降低,出现严重脑梗死神经症状、较大脑梗死范围和明显病理学改变,为理想模型.rSak 150 kU/kg能提高脑血流量,减少脑神经缺陷评分,缩小脑梗死范围,减轻病理学改变.结论 建立了经颈内动脉注入自体血栓和凝血酶致大鼠局灶性脑梗死模型,并用rSak验证了该模型的稳定性及可靠性.

摘要： 目的：探讨与评估溶栓药物对急性心肌梗死疗效与临床安全性.方法：将入选患者分为三组，每组给予不同的药物进行治疗，对各组患者的血管开通率和并发症发生率进行统计分析.结果：r-SAK 组患者溶栓后，其在溶栓30min 时与 UK 和 rt-PA 组差异不显著，无统计学意义(P＞0．05)；在溶栓60min、90min 和120min 时，再通率显著高于 UK 和 rt-PA 组，差异有统计学意义(P＜0．05).rt-PA 组、r-SAK 组患者的并发症发生率显著低于 UK 组，且差异具有统计学意义(P＜0．05)；r-SAK 组患者的并发症发生率低于 rt-PA 组，但差异不显著无统计学意义(P＞0．05).结论：急性心肌梗死应用 r-SAK 溶栓治疗比 rt-PA 和 UK 的 IRA 血管开通率具有更好的效果.r-SAK 溶栓治疗急性心肌梗死比 UK 具有更低的并发症发生率.

摘要： 研究探讨融合蛋白SRH对高脂喂养诱导的自发性高血压症大鼠（ Spontaneously hypertensive rat ， SHR）动脉粥样硬化发展的影响。结果表明，在正常（ WKY）大鼠和高脂喂养的SHR大鼠的体外和体内均未见出血现象，重组SRH能够降低高脂喂养的SHR大鼠的血液凝血指标，减少血液中总胆固醇量，降低血压，减弱主动脉弓病变程度。%The effect of SRH on development of atherosclerosis in SHR rats fed on high fat diet was investigated , in order to obtain reliable evidence for the possibility of further clinical application .SRH was taken intravenously by healthy rats and high fat diet SHR rats in the same dosage ( 0 .5 mg/kg ) for 20 days ( once two days ) .None of them showed visceral bleeding and gingival bleeding .There were no significant changes in WKY fibrinolytic and coagulative phases .It was supported that SRH was a highly selective fibrirolytic agent without significant influence on rat hemostatic and coagulatic systems .While , SRH can decrease the high thromboxane states of high diet fat SHR rats and the blood fat levels of high diet fat SHR rats , and it can release the blood pressure and weaken vessel wall lesion .The SRH is a relatively safe and well tolerated agent for healthy and atherosclerosis rats , and it contrib-utes to inhibit the progression of SHR's atherosclerosis .

摘要： 目的 观察重组葡激酶(r-sak)和尿激酶(UK)溶栓治疗急性心肌梗死(AMI)对血小板的活化作用,评价其治疗AMI的临床疗效.方法 将68例患者随机分为两组,r-sak组35例,以r-sak 10 mg静脉滴注溶栓；尿激酶组33例,以尿激酶150万U 30 min静脉滴注溶栓.测定两组溶栓治疗前、溶栓后2、24、48 h血浆中血小板α-颗粒膜蛋白(GMP-140)、凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)含量等相关指标.结果 A、B两组治疗后2h血浆中GMP-140均升高,尿激酶组血浆中GMP-]40升高显著.r-sak组治疗后2h血浆中TAT浓度升高不显著,尿激酶组治疗后2h血浆中TAT浓度升高显著.结论 r-sak溶栓的疗效明显优于尿激酶,r-sak有更强的血栓选择性,对促凝活性微弱,出血并发症发生率少,促血小板活化低,减轻血栓前状态对心肌的损伤作用,可以改善心肌微灌注.

摘要： Objective To observe the curative effects of urokinase (UK) and recombinant staphylokinase (r-Sak) in the treatment of acute myocardial infarction (AMI). Methods 200 cases with AMI in our hospital from January 2010 to January 2012 were chosen and randomly divided into UK group and r-Sak group, each of 100 cases, r-Sak group was given 0.9% saline 100 mL + r-Sak 10 mg, UK group was given UK 1.5 million U + 0.9% sodium chloride injection 100 mL. The clinical symptoms of patients in two groups were observated and recorded, and the therapeutic effect were judged. Results Chest pain relief, the recanalization, the total effective rate rate in r-Sak group were higher than those in the UK group, the differences were statistically significant (P < 0.05); infarction mortality, angina pectoris incidence, heart failure rate, arrhythmia, average hospitalization days, incidence of complications in r-Sak group were lower than those in the UK group, the differences were statistically significant (P < 0.05). Conclusion The treatment effect of r-Sak to AMI is better than UK, with high recanalization rate, low composite clinical event rates, and its effect is sure, which is worthy to be popularized.%目的 观察重组葡激酶(r-Sak)与尿激酶(UK)治疗急性心肌梗死(AMI)的疗效.方法 选择我院2010年1月～2012年1月接受治疗的200例AMI患者,将其随机分为UK组和r-Sak组,各100例.r-Sak组给予0.9%生理盐水100 mL + r-Sak 10 mg,UK组给予UK 150万U + 0.9%氯化钠注射液100 mL.观察并记录两组患者临床症状缓解情况,判断两组治疗效果.结果 r-Sak组胸痛症状缓解率、再通率、总有效率均高于UK组,差异均有统计学意义(均P ＜ 0.05);r-Sak组死亡率、梗死后心绞痛发生率、心力衰竭发生率、心律失常发生率、平均住院天数、并发症发生率均低于UK组,差异均有统计学意义(均P ＜ 0.05).结论 r-Sak治疗AMI的效果优于UK,再开通率高,复合临床事件发生率低,效果肯定,值得推广.

摘要： 目的 建立光化学法诱导大鼠冠状动脉血栓致心肌梗死模型.方法 大鼠分为激光和化学单独刺激组、联合刺激组和重组葡激酶处理组,通过注射光敏剂四氯四碘荧光素二钠(虎红)后激光照射冠状动脉形成血栓致心肌梗死动物模型,比较各组血管栓塞程度以及心电图Ⅱ导联ST段高度变化选择出最佳模型.并用该模型评价重组葡激酶溶栓作用效果.结果 相对于单独刺激组,联合刺激组心脏激光照射处均出现明显损伤病灶.HE染色心肌细胞肿胀,排列紊乱,动静脉内均见血栓.心电图出现不同程度心律失常,ST段抬高.其中注射40 mg·kg-1虎红后照射15 min心律失常出现时间较早,心电图ST段抬高幅度高、维持时间长,而且死亡率低,为本研究中最佳光化学法冠状动脉血栓模型.重组葡激酶处理组能够部分溶解动静脉血管内血栓,减小血栓面积(P<0.01),抑制ST段抬高(P<0.05～0.01).结论 该文建立了最佳光化学法诱导大鼠冠状动脉血栓模型,适于溶栓药物研发评价.%Aim To establish a rat coronary thrombosis model induced by photochemistry. Methods Rats were divided as single stimulation group, conjunct stimulation group and recombi-nant staphylokinase group. Laser irradiation was performed after the injection of photosensitizer rose bengal to achieve coronary thrombosis for myocardial infarction, whereafter the best model was chosen by comparing the intravascular embolism and ST segment elevation. The effect of recombinant staphylokinase was also evaluated. Results Compared with the single stimulation group, there was significant injury at the heart of the conjunct stimulation group. The swelled and disordered myocardial fiber and thrombus inside the arterial and venous were seen in HEstaining. Meanwhile ST segment elevated to some extent in ECG. The model of 15 min irradiation after the injection of 40 mg ? Kg"1 rose bengal was the best model because of the earlier arrhythmia, higher ST segment elevation, longer time endurance and lower death rate. Recombinant staphylokinase could reduced thrombus area ( P < 0. 01 ) and inhibited ST segment elevation ( P <0. 05 ~0. 01 ). Conclusion A best model of rat coronary thrombosis is established by photochemistry, which is applicable to antithrombotic drugs research.

摘要： 目的 探讨对老年急性心肌梗死患者实施重组葡激酶静脉溶栓治疗的临床价值.方法选取老年急性心肌梗死患者53例,随即分为两组.其中,对照组26例,给予重组组织型纤溶酶原激活物静脉溶栓治疗;观察组27例,给予重组葡激酶静脉溶栓治疗.对两组患者的治疗效果及并发症情况进行比较.结果观察组患者血管再通情况明显优于对照组,并发出血情况明显低于对照组,两组比较差异具有统计学意义(P ＜ 0.05).结论重组葡激酶用于治疗老年急性心肌梗死安全可靠,效果明显,值得临床推广.

摘要： @@ 急性心肌梗死(AMI)是危害人类健康的严重疾病,通常由粥样硬化斑块破裂引起血栓性冠状动脉阻塞所致.早期、持续、有效的再灌注治疗能明显缩小心肌梗死面积,挽救左心室功能,降低病死率,改善AMI患者临床预后.目前,直接经皮冠状动脉介入治疗(PCI)已成为AMI的首选治疗方式.但静脉溶栓治疗仍占据很重要的临床地位.静脉溶栓治疗能及时开通梗死相关动脉,血运重建可降低其病死率.

摘要： 随着国民经济的发展，人民生活水平的提高，和营养条件的改善，心脑血管疾病趋于低龄化。因社会进入了老龄化，老年人心脑血管疾病的频发。心脑血管疾病严重威胁着人们的健康。目前临床上使用于治疗血检的药物主要有尿激酶(UK)，链激酶(SK)和组织型血纤溶酶原激活剂(t-PA)等类型。临床中发现现有溶栓药物存在一定的不足之处。如尿激酶、链激酶为非纤维蛋白特异性的溶栓药物。治疗过程中，它不仅对血纤维蛋白凝块(血栓)有降解作用，它对血液中的其他正常组分如凝血酶原，凝血因子，纤溶酶原，纤维蛋白原等等也起作用。使血液中凝血机制易遭破坏，容易出现周身出血现象而导致死亡。t-PA是有纤维蛋白特异性的溶栓药，但在体内半衰期短，使用的剂量较大，因此价格昂贵。我们最近开发成功的注射用重组葡激酶，临床试验表明，它具有纤维蛋白的特异性，因它的活性受血液中α2-纤溶酶抑制物所制约。血液中没有出现纤维蛋白凝块即血栓时，它转化纤溶酶原为纤溶酶的活性很低。只有出现纤维蛋白凝块时，在纤维蛋白凝块周围近百倍地提高转化能力。本文试探了肌肉注射的给药途径。

摘要： 目的:比较动脉内注射不同剂量重组葡激酶(recombinantStaphylokinase,r-Sak)溶栓治疗犬急性脑梗死的疗效和并发症。rn 方法:成年比格犬24条,用介入技术建立犬脑栓塞动物模型,随机分为对照组(生理盐水 10ml)、小剂量组(r-Sak5,000u/kg)、中剂量组(r-Sak 10,000u/kg)和大剂量组(r-Sak20,000u/kg)。栓塞后5h行脑血管造影观察所栓塞血管的通畅情况,插管至左颈内动脉分别在30min内注入药物行溶栓治疗,在溶栓后0.5、1及2h复查DSA,观察栓塞血管的再通情况,并分别在溶栓前0.5h、溶栓后0.5h、1h及2h抽取犬静脉血检测PT、APTT和D-dimer。24h后处死动物行病理检查。rn 结果:溶栓后2h内造影显示对照组、r-Sak小剂量、-中剂量和大剂量组的有效率分别为10.0%(1/10)、40.0%(4/10)、90.9%(10/11)和100%(9/9),各组问比较有显著性差异(P＜0.05);完全通畅的比率分别为0、10%(1/10)、36.4%(4/11)、66.7%(6/9),也有统计学差异(P＜0.05)。溶栓后PT、APTT在r-Sak各剂量组皆显著延长(P＜0.001);各组的D-dimer在溶栓前后没有明显变化(各组P＞0.05)。溶栓后r-Sak大剂量组有1例死亡,病理检查在其顶叶脑实质见出血灶,其余动物均存活。rn 结论:1.在犬脑梗死的超急性期,r-Sak动脉内溶栓治疗有效、可行,r-Sak对含少量血小板的白色血栓有显著溶栓作用,剂量大或等于10,000u/kg时血管再通率高,剂量再增加出血风险加大;2.r-Sak在有效剂量范围内不激活犬的系统纤溶,但对犬的凝血系统影响较大。

摘要： 目的：应用NONMEM法对—类新药重组葡激酶(Recombinant Staphylokinase，r-SAK)进行群体药物动力学研究。方法：建立双抗体酶联免疫吸附法(ELISA)测定r-SAK的血浆药物浓度，应用非线性混合效应模型(NONMEM)法进行模型优化，通过统计分析确定r-SAK的药动学模型和统计学模型，估算群体药物动力学参数和个体间、个体内变异，并进行统计分析。结论：应用NONMEM法估算出的群体药物动力学参数结果可全面给出药物的药代动力学参数和变异，为新药安全性和有效性研究提供了丰富的依据。群体药物动力学方法是进行新药研究的一种重要有用的方法。有十分广阔的应用前景。

摘要： 本文报道用生物法测急性心肌梗死患者血浆中重组葡激酶的血浆浓度该方法能实际反映生物制品的综合效应,为临床开展生物制剂的血药浓度监测及药物学,生物利用度等研究提供了样例.

摘要： 本发明公开了一种C-末端引入半胱氨酸的葡激酶突变体。与野生型葡激酶相比，该突变体在C-末端多了3个氨基酸，即甘氨酸-甘氨酸-半胱氨酸(-Gly-Gly-Cys)。本发明还公开了该葡激酶突变体二聚体的制备方法。葡激酶的二聚体化是通过同型双功能连接剂1，4-二马来酰亚胺丁烷的2个马来酰亚胺基团与葡激酶的C-末端的半胱氨酸形成稳定的共价键。本发明还公开了该葡激酶突变体二聚体实现N-末端聚乙二醇定点修饰的制备方法。在特定条件下，甲氧基聚乙二醇丙醛与葡激酶二聚体分子中的1个N-末端通过共价键连接。葡激酶二聚体的聚乙二醇修饰产物在生物活性方面要比葡激酶单体的修饰产物要高。

摘要： 本发明公开了一种C-末端引入半胱氨酸的葡激酶突变体。与野生型葡激酶相比，该突变体在C-末端多了3个氨基酸，即甘氨酸-甘氨酸-半胱氨酸(-Gly-Gly-Cys)。本发明还公开了该葡激酶突变体二聚体的制备方法。葡激酶的二聚体化是通过同型双功能连接剂1，4-二马来酰亚胺丁烷的2个马来酰亚胺基团与葡激酶的C-末端的半胱氨酸形成稳定的共价键。本发明还公开了该葡激酶突变体二聚体实现N-末端聚乙二醇定点修饰的制备方法。在特定条件下，甲氧基聚乙二醇丙醛与葡激酶二聚体分子中的1个N-末端通过共价键连接。葡激酶二聚体的聚乙二醇修饰产物在生物活性方面要比葡激酶单体的修饰产物要高。

摘要： 本发明提供了一种制备重组葡激酶‑水蛭素融合蛋白的方法，该方法采用Sepharose Q‑XL阴离子交换层析‑Uni Phenyl‑30L疏水层析‑中空纤维柱脱盐‑UniQ‑30L阴离子交换层析‑中空纤维柱超滤置换。本发明提供的方法能够制备纯度高达99％以上的重组葡激酶‑水蛭素融合蛋白。

摘要： 本发明提供了一种RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD‑重组葡激酶‑人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR法获得目的基因融合片段；将目的基因融合片段插入表达载体中，构建重组表达质粒；构建的重组表达质粒转化大肠杆菌，在大肠杆菌中进行高效表达；融合蛋白的分离纯化。与现有的同类产品比较，本发明的融合蛋白不仅具有高效的溶栓抗凝活性，而且兼备低的免疫原性。与此同时，本发明的融合蛋白还克服了现有的一些RGD‑重组葡激酶活性下降和不溶性表达的缺点。

摘要： 一种葡萄球菌激酶及利用生物技术高效分泌表达重组葡萄球菌激酶的方法。它以金黄色葡萄球菌的总DNA为摸板，通过PCR扩增，获得含信号肽的葡激酶(Sak)基因。该基因序列第33、34及36位氨基酸，不同于已报道的Sak基因。将该基因与载体pGEX-4T-1进行连接，转化宿主菌，获得的重组工程菌，经TPTG诱导可分泌表达具有纤溶酶原激活作用的重组葡激酶。采用本发明方法表达重组葡激酶蛋白，基因表达水平高，表达产物主要为分泌型蛋白，并以活性状态存在于菌体外胞质及胞外，因此，纯化工艺简单，产量高，生产成本低。

摘要： 本发明公开了属于基因工程及生物溶栓药物制备技术范围的涉及一种重组葡激酶衍生体及其制备方法。其制备方法为利用基因体外重组技术将RGD序列、水蛭素的C末端序列与构建的低抗原性高活性SAK突变体基因相融合，同时引入Xa因子切割位点和柔性连接臂，将其C末端氨基酸进行修饰，另外添加一个赖氨酸。利用双酶切和PCR对构建的突变体碱性鉴定，构建了融合蛋白表达载体，使融合蛋白可以在血块周围被降解成具有不同功能的多肽。获得高效表达的重组SAK衍生体；为研制新一代溶栓药物奠定了基础，同时将大大拓展新型SAK衍生体的应用范围。

摘要： 本公开提供一种重组葡激酶突变体纯化制备工艺，其包括步骤1工程菌菌体匀浆及匀浆液处理，步骤2重组蛋白的捕获，以及步骤3离子交换层析色谱精制；其中所述步骤2重组蛋白的捕获是将工程菌菌体匀浆处理液上样至镍亲和柱，通过改变咪唑浓度洗脱目的蛋白，同时加入0.3mol/L NaCl来减少由于电荷作用引起的非特异性吸附。所述方法重复性好、得率高，能获得纯度接近100%的葡激酶，适合制药工业大规模生产。

摘要： 本发明提供了一种制备重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的方法，该方法采用Sepharose Q-XL阴离子交换层析-Uni Phenyl-30L疏水层析-中空纤维柱脱盐-UniQ-30L阴离子交换层析-中空纤维柱超滤置换。本发明提供的方法能够制备纯度高达99％以上的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白。

摘要： 本发明提供了一种RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白及其制备与应用。本发明所述RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.12所示。本发明的融合蛋白通过以下制备方法获得：采用重叠延伸PCR法获得目的基因融合片段；将目的基因融合片段插入表达载体中，构建重组表达质粒；构建的重组表达质粒转化大肠杆菌，在大肠杆菌中进行高效表达；融合蛋白的分离纯化。与现有的同类产品比较，本发明的融合蛋白不仅具有高效的溶栓抗凝活性，而且兼备低的免疫原性。与此同时，本发明的融合蛋白还克服了现有的一些RGD-重组葡激酶活性下降和不溶性表达的缺点。

摘要： 本实用新型涉及一种用于重组葡激酶生产的发酵系统搅拌装置，其包括整体呈圆柱形的发酵罐、气源以及搅拌部；发酵罐的顶端开设有加料口、底部固定设置有支架；气源固定设置在发酵罐的顶部；搅拌部包括固定设置在发酵罐底部的电机、中空结构的转轴以及叶片；电机的旋转输出端穿过发酵罐与转轴固定连接；其特征在于：叶片包括叶片前盖、叶片后盖、叶片端盖、叶片内支架以及具备两个顶杆的双向气缸；叶片前盖、叶片后盖以及叶片端盖合围成一端开口的封闭空间并相互固定连接。本实用新型的叶片可以调整角度，进而可以改善用于重组葡激酶生产的发酵系统搅拌装置的搅拌均匀性；使用条件较宽松，不需要专门的配备压缩空气站等设施；便于制作、安装并且可靠性较高。