血蓝蛋白

摘要： 甲壳类水产品味道鲜美,营养丰富,广受消费者喜爱,但可诱发机体产生严重过敏反应,甚至危及生命,已成为全球范围内日益严重的食品安全问题。概述了目前已鉴定的甲壳类水产品过敏原的结构和免疫性质,及其致敏性消减技术原理和研究进展;已报道的甲壳类水产品过敏原有原肌球蛋白、精氨酸激酶、肌质钙结合蛋白、肌球蛋白轻链、磷酸丙糖异构酶和血蓝蛋白等,其中原肌球蛋白为甲壳类水产品的主要过敏原,可与72%~98%的甲壳类食品过敏患者血清产生特异性IgE反应。利用物理加工消减甲壳类水产品过敏原致敏性,主要通过传统热处理、微波、超高压、低温等离子体和辐照等物理作用力诱导蛋白质变性,进而破坏蛋白质的致敏性表位;酸处理和糖基化等化学修饰消减技术可以通过改变过敏原结构、形成新化学键等方式掩盖或直接破坏致敏性表位;酶处理和发酵处理等生物修饰消减技术则直接降解过敏原致敏性表位。未来仍需要通过过敏表位的靶向消减、多种消减技术协同、动物与人体试验开展,探究过敏原结构和表位修饰的影响机制,推进过敏原消减技术的实际应用,为低敏甚至脱敏甲壳类食品的研发提供参考。

摘要： 采用饱和硫酸铵盐析法、透析除盐和丙烯葡聚糖凝胶柱层析分离纯化鲎血蓝蛋白,通过紫外可见吸收光谱和SDS-PAGE图谱对其进行定性分析,再通过单因素实验和响应面实验研究了温度、pH值、邻苯二酚与鲎血蓝蛋白浓度比、时间等因素对鲎血蓝蛋白酚氧化酶活性的影响。结果表明,纯化后的鲎血蓝蛋白在280 nm、340 nm处有特征吸收峰,有2个蛋白亚基,分子量约为66 kDa,为典型的节肢动物血蓝蛋白;在温度为36.7°C、pH值为6.8、邻苯二酚与鲎血蓝蛋白浓度比为1.7∶1、时间为2.1 min的最佳条件下,鲎血蓝蛋白酚氧化酶活性最高,为83.3 U·min^(-1)·mL^(-1)。

摘要： 从软体动物中的腹足纲、双壳纲以及节肢动物中的甲壳纲分别选取了3种中国沿海常见的品种——东风螺、弯竹蛏、斑节对虾,提取并分析它们的壳基质蛋白。利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术对蛋白质组学进行分析发现特定的蛋白质具有明显的种属差异:①N66蛋白(一种碳酸酐酶)通常存在于弯竹蛏中,但不存在于东风螺和斑节对虾中,揭示N66蛋白质具有特异性,在未来的物种鉴定中可能具有重要的参考意义;②角质层蛋白AM1199和CP14.6存在于斑节对虾的表皮结构中,在东风螺和弯竹蛏中未检测到;③血蓝蛋白同时在3种动物外壳的基质蛋白中被鉴定出来,揭示了其在不同物种的外壳形成与发育过程中的重要作用。该研究为壳基质蛋白在软体动物或节肢动物外壳中的鉴定提供了基础,也为探索不同物种的生物矿化过程提供了重要参考。

摘要： 血蓝蛋白又称为血蓝素,是某些软体动物和节肢动物的血淋巴中存在的一种游离的蓝色呼吸色素。研究发现,血蓝蛋白具有多种生理生化功能和开发价值。对血蓝蛋白的分布、结构特点、生理生化功能进行归纳总结,以便为血蓝蛋白的深入开发与利用提供借鉴和支持。

摘要： [目的]探究慢性氨氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生理生化和血蓝蛋白基因表达的影响,明确氨氮胁迫的毒性作用,为养殖户在对虾中后期健康养殖管理上提供技术参考,同时丰富凡纳滨对虾的毒理研究资料.[方法]挑选540尾平均初始湿体重9.92±0.24 g/尾的健康凡纳滨对虾,随机分成6个组,每组设3个重复,暴露于不同氨氮浓度[0(对照)、4、6、8、12和16 mg/L]的曝气自来水中,分别于胁迫16、17、18、19和20 d时取样测定凡纳滨对虾的血淋巴氨氮、尿素氮及血蓝蛋白含量,胁迫结束后统计凡纳滨对虾的体长增长率、体重增长率和存活率,同时取鳃组织和肝胰腺制作石蜡切片.[结果]慢性氨氮胁迫16～20 d,各胁迫处理组凡纳滨对虾的存活率、体重增长率和体长增长率均随氨氮浓度的增加而依次降低,且显著低于对照组凡纳滨对虾(P<0.05,下同).随着氨氮胁迫时间的延长,各胁迫处理组凡纳滨对虾血淋巴氨氮和尿素氮含量均明显高于对照组凡纳滨对虾,且二者的变化趋势基本一致;各胁迫处理组凡纳滨对虾血蓝蛋白含量均显著低于对照组凡纳滨对虾,且血蓝蛋白含量的变化趋势总体上与水体氨氮浓度呈负相关,血蓝蛋白基因的表达水平与血蓝蛋白含量变化趋势基本相符,总体上表现为氨氮胁迫时间越长,凡纳滨对虾血蓝蛋白基因的相对表达量越低.经慢性氨氮胁迫后凡纳滨对虾鳃组织和肝胰腺严重受损,鳃丝肿胀,核固缩,血淋巴细胞增多,局部空泡化、结构不完整,鳃呼吸上皮细胞大面积脱落;胰腺管肿大,空泡化严重,肝小管排列紊乱,管腔扩大,边界模糊,肝小管间隙和管腔中可观察到破碎的细胞组织.[结论]慢性氨氮胁迫对凡纳滨对虾的生长及生存有明显影响,造成血淋巴氨氮和尿素氮含量增加,并下调血蓝蛋白基因表达及阻碍血蓝蛋白合成,凡纳滨对虾的鳃组织和肝胰腺严重受损.即慢性氨氮胁迫引起的呼吸功能障碍及肝胰腺代谢功能紊乱,是导致凡纳滨对虾应激死亡的主要原因.

摘要： 【目的】探究慢性氨氮胁迫对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)生理生化和血蓝蛋白基因表达的影响,明确氨氮胁迫的毒性作用,为养殖户在对虾中后期健康养殖管理上提供技术参考,同时丰富凡纳滨对虾的毒理研究资料。【方法】挑选540尾平均初始湿体重9.92±0.24 g/尾的健康凡纳滨对虾,随机分成6个组,每组设3个重复,暴露于不同氨氮浓度[0(对照)、4、6、8、12和16 mg/L]的曝气自来水中,分别于胁迫16、17、18、19和20 d时取样测定凡纳滨对虾的血淋巴氨氮、尿素氮及血蓝蛋白含量,胁迫结束后统计凡纳滨对虾的体长增长率、体重增长率和存活率,同时取鳃组织和肝胰腺制作石蜡切片。【结果】慢性氨氮胁迫16~20 d,各胁迫处理组凡纳滨对虾的存活率、体重增长率和体长增长率均随氨氮浓度的增加而依次降低,且显著低于对照组凡纳滨对虾(P<0.05,下同)。随着氨氮胁迫时间的延长,各胁迫处理组凡纳滨对虾血淋巴氨氮和尿素氮含量均明显高于对照组凡纳滨对虾,且二者的变化趋势基本一致;各胁迫处理组凡纳滨对虾血蓝蛋白含量均显著低于对照组凡纳滨对虾,且血蓝蛋白含量的变化趋势总体上与水体氨氮浓度呈负相关,血蓝蛋白基因的表达水平与血蓝蛋白含量变化趋势基本相符,总体上表现为氨氮胁迫时间越长,凡纳滨对虾血蓝蛋白基因的相对表达量越低。经慢性氨氮胁迫后凡纳滨对虾鳃组织和肝胰腺严重受损,鳃丝肿胀,核固缩,血淋巴细胞增多,局部空泡化、结构不完整,鳃呼吸上皮细胞大面积脱落;胰腺管肿大,空泡化严重,肝小管排列紊乱,管腔扩大,边界模糊,肝小管间隙和管腔中可观察到破碎的细胞组织。【结论】慢性氨氮胁迫对凡纳滨对虾的生长及生存有明显影响,造成血淋巴氨氮和尿素氮含量增加,并下调血蓝蛋白基因表达及阻碍血蓝蛋白合成,凡纳滨对虾的鳃组织和肝胰腺严重受损。即慢性氨氮胁迫引起的呼吸功能障碍及肝胰腺代谢功能紊乱,是导致凡纳滨对虾应激死亡的主要原因。

摘要： ①血蓝蛋白与酚氧化酶血蓝蛋白是存在于节肢动物和软体动物血淋巴中的含铜呼吸蛋白。血蓝蛋白不仅具有运输氧气、调节渗透压、贮存能量、调节蜕皮过程和合成黑色素等功能外,近年来研究表明,血蓝蛋白及其降解片段还具有酚氧化酶活性、凝集素活性以及抗菌抗病毒等多种免疫学功能。

摘要： 以源于血蓝蛋白化学合成肽段B1为研究对象,运用蛋白质组学、分子生物学等策略分析其对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的免疫调控活性.结果显示,与对照组比,对虾在受到肽段B1刺激后,血浆中2条分子量分别为65 kD和35 kD的蛋白条带(分别命名为p65和p35)表达水平显著上调.经质谱和Western blot鉴定,p65、p35与包括对虾 β-1,3-葡聚糖结合蛋白、葡聚糖模式识别脂蛋白、血蓝蛋白等在内的13个蛋白具有高度同源性,其中p65与兔抗血蓝蛋白抗体呈明显的阳性反应.实时荧光定量PCR检测显示,肽段B1刺激对虾24 h后,5个质谱鉴定免疫相关基因:血蓝蛋白大亚基、血蓝蛋白小亚基、谷氨酰胺转氨酶、α2巨球蛋白亚型2、葡聚糖模式识别脂蛋白在肝胰腺、鳃和血细胞等组织中mRNA的表达水平显著性(P<0.05)或极显著性(P<0.01)上调.由此推测,源于凡纳滨对虾血蓝蛋白的化学合成肽段B1对包括血蓝蛋白在内的多种免疫因子的表达具有一定的调控作用.

摘要： [目的]意大利蝗Calliptamus italicus是新疆草原的主要优势危害种,以卵在土壤中越冬.呼吸代谢可反映蝗卵的生理状态,呼吸蛋白对于呼吸系统不完善的蝗卵尤为重要.本研究旨在明确意大利蝗卵发育过程中血蓝蛋白基因的表达情况.[方法]采用实时荧光定量PCR方法检测不同发育阶段的蝗卵以及1龄蝗蝻的血蓝蛋白2个亚基基因Hc1和Hc2的表达量.[结果]根据解剖形态观察,将意大利蝗越冬卵的整个发育过程分为10个阶段,包括9个卵发育阶段(C-I-C-X)和1龄蝗蝻阶段(C-X).Hc1和Hc2在越冬蝗卵各发育阶段以及1龄蝗蝻中均有表达.其中,在蝗卵早期发育阶段(C-Ⅰ,C-Ⅱ和C-Ⅲ),Hc1表达量逐渐增加,C-Ⅲ阶段表达量显著高于C-Ⅰ和C-Ⅱ阶段;滞育阶段(C-Ⅳ,C-V和C-Ⅵ),胚胎发育停滞,Hc1表达量较C-Ⅲ,C-Ⅶ和C-Ⅷ阶段低;滞育后发育阶段(C-Ⅶ和C-Ⅷ),蝗卵解除滞育,快速发育,Hc1表达量较早期发育阶段和滞育阶段高,其中,C-Ⅷ阶段Hc1表达量最高(212.3156±10.5470),显著高于其他所有阶段;1龄蝗蝻(C-X)的Hc1表达量最低,为0.4017±0.1010.Hc2表达量在C-V阶段最高(679.7511±54.5719),显著高于其他所有阶段;除C-V阶段外,其他各阶段之间Hc2表达量差异均不显著.Hc1在蝗卵滞育后阶段高表达,而Hc2在蝗卵滞育阶段高表达.[结论]血蓝蛋白亚基基因Hc1和Hc2在整个意大利蝗卵发育过程均有表达,且具有阶段特异性.Hc1与Hc2协同作用为蝗卵发育供氧,其中,Hc1主要负责蝗卵滞育后发育期间的氧气运载,而Hc2主要维持滞育期间的氧气运载,且载氧效率较低.研究结果可为进一步探讨意大利蝗卵的抗逆机制提供科学依据.

摘要： ''哎呦,医生快帮帮我,我的嘴巴好痛啊.''海鸥一脸痛苦地来到了动物医院。海象医生仔细检查了海鸥的嘴巴,说:''你的喉咙被贝壳划破了,我帮你涂点止血药,再观察一下。''过了一会儿,红色的血止住了,海鸥很感激海象医生,连连道谢。''呼叫海象医生,呼叫海象医生,请速到急诊室.''躺在急诊室里的是一个怪怪的家伙,它已经奄奄一息。

摘要： 本文以克氏原螯虾为研究对象,鉴定血蓝蛋白的理化性质及其过敏原性.酶联免疫吸附试验结果表明:6份甲壳类过敏患者血清与克氏原螯虾血淋巴发生特异性IgE反应,利用离心和柱层析方法从血淋巴中分离纯化到目的蛋白.SDS-PAGE分析显示纯化的目的蛋白由6个亚基(依次为68,72,76,82,84和88ku)组成,采用兔抗凡纳滨对虾血蓝蛋白多克隆抗体的免疫印迹试验证实目的蛋白为血蓝蛋白.免疫印迹试验结果显示,纯化的血蓝蛋白与甲壳类过敏患者血清出现了特异的杂交显色条带,表明血蓝蛋白具有IgE结合活性.与克氏原螯虾主要过敏原(原肌球蛋白)相比,血蓝蛋白的糖含量为1.99％,热稳定性好,pH稳定性及对胃蛋白酶的耐受性不如原肌球蛋白,但比原肌球蛋白更耐胰液消化.综合血清学及理化性质分析结果,提示血蓝蛋白是克氏原螯虾的1种新型过敏原.

摘要： 利用超速离心和CsCL梯度离心的方法，从杂色鲍血淋巴中分离纯化血蓝蛋白(Hcs)，SDS-PAGE检测提取的血蓝蛋白由一种亚基构成，分子量为400KDa；Native-PAGE电泳检测两个Isoforms分别为HdH1、HdH2：透射电镜下其四级结构为圆柱体，以多十聚体、二十聚体和少十聚体存在血淋巴中。杂色鲍血蓝蛋白在以邻苯二酚为底物的条件下表现出微弱的酚氧化酶活性(Km=25.66mM)，胰蛋白酶和SDS能使其酚氧化酶活性增强：以L-DOPA为底物则不表现出酚氧化酶活性。

摘要： 从血蓝蛋白的分子结构、功能特性、合成和代谢方面综述了国内外海洋节肢动物 血蓝蛋白的研究进展。

摘要： 以开本沼虾Macrobrachium nipponense为材料,分别测定了其在0、2.2、4.2、8.7、17.8、36.6 mg/L氨氮暴露组和0、2.0、3.2、5.0、7.9、13.3 mg/L业硝酸盐暴露组24 h急性胁迫下,血细胞数量变化和血蓝蛋白含量变化.结果表明,在氨氮浓度为8.7 mg/L,血细胞数量显著高于对照组;随着亚硝酸盐浓度升高,血细胞数量逐渐增加.在氨氮浓度为2.2 mg/L、亚硝酸盐浓度为2.0 mg/L时,血蓝蛋白含量显著高于对照组.

摘要： 近年来研究表明血蓝蛋白是一种多功能蛋白,尤其是血蓝蛋白及其降解片段具有酚氧化物酶、抗病毒和抗细菌等多种免疫学活性.但迄今为止,其凝集活性及其作用机理等尚不清楚.本研究以凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei为研究对象,运用亲和层析、SDS-PAGE、细菌凝集实验、细菌凝集抑制实验、生物信息学、基因克隆与表达等方法探索血蓝蛋白的凝集活性及其作用机理.结果发现,血蓝蛋白对大肠杆菌Escherichia coli、副溶血弧菌Vibrio parahaemolyticus、溶藻酸弧菌Vibrioalginolyticus、河弧菌Vibrio fluvialis、哈维氏弧菌Vibrio harveyi和嗜水气单胞菌Aeromona hydrophila等6种细菌具有凝集活性(凝集活性大小为0.27～1.08 mg/L),其凝集活性可被N-乙酰神经氨酸所全部抑制.在此基础之上,选用大肠杆菌外膜蛋白和血蓝蛋白亚克隆重组表达蛋白进一步探索血蓝蛋白凝集活性机理.结果显示,大肠杆菌外膜蛋白可明显抑制血蓝蛋白凝集反应,同时含血蓝蛋白Ig-like区的原核表达蛋白具有凝集活性,而不含Ig-like区的原核表达蛋白则无凝集活性.由此推测,血蓝蛋白确实具有凝集活性,其凝集反应机制可能是血蓝蛋白通过其Ig-like区与细菌外膜蛋白相互作用的结果,对进一步研究血蓝蛋白的非特异性免疫机理具有重要意义.

摘要： 本发明公开了一种包含钥孔血蓝蛋白片段的融合蛋白及其应用。所述融合蛋白包含钥孔血蓝蛋白片段及目的蛋白；所述的钥孔血蓝蛋白片段包含钥孔血蓝蛋白第1‑245位氨基酸残基；所述的目的蛋白为植物线粒体膜蛋白或其免疫原性片段。在将钥孔血蓝蛋白片段与目的蛋白融合表达后，钥孔血蓝蛋白片段显著增强了目的蛋白的免疫原性。由于本发明的融合蛋白展示了比单独的目的蛋白更强的免疫原性，因此，通过融合钥孔血蓝蛋白片段可用于制备针对特异性目的蛋白多克隆抗体。

摘要： 本发明公开了一种鹦鹉螺血蓝蛋白衍生抗菌肽TYW4及其应用。氨基酸序列如下所示：Arg Val Phe Ala Gly Phe Leu Arg His Gly lle Lys Arg Ser Arg。本发明通过分子改造已有鹦鹉螺血蓝蛋白天然衍生抗菌肽S4，创造出衍生抗菌肽TYW4，对得到的抗菌肽进行抗菌检测，发现其杀菌活力明显提高。衍生抗菌肽TYW4对溶藻弧菌A056及副溶血性弧菌2013V‑1174的MIC分别为60μM、100μM，而且具有较好的α螺旋结构。本发明不仅为进一步了解鹦鹉螺免疫防御机制，提高其应用价值奠定了基础，还为研制新型抗菌药物提供了一种新的途径。

摘要： 本发明公开了一种鲎血蓝蛋白脱铜的方法及应用，属于化妆品和药物技术领域。该脱铜鲎血蛋白制备方法包括以下步骤：鲎血浆加入螯合剂与蛋白沉淀剂溶液，搅拌离心得沉淀，加入无机溶剂继续离心，冷冻干燥得到脱铜鲎血蛋白。该方法有效解决了鲎血蓝蛋白中的重金属铜含量超标的问题，在鲎数量逐渐减少的情况下，不仅实现了资源的合理利用，还为后续鲎血蓝蛋白在化妆品以及药物方面的应用研究提供了基础。

摘要： 本发明涉及一种来源于凡纳滨对虾血蓝蛋白的抗WSSV肽LvHcS52，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码基因如SEQ ID NO：2所示。本发明的短肽LvHcS52不管在动物水平还是在体外细胞水平，均能显著抑制WSSV极早期基因wsv069和晚期基因wsv421的转录，同时在体内还能显著抑制WSSV的增殖；能激活对虾血细胞内的STAT信号通路，引发该信号通路下游抗菌肽的转录从而发挥抗WSSV的功能。本发明的抗WSSV肽LvHcS52可以作为抑制WSSV的制剂，可作为添加剂添加到饲料中，以期提高对虾的抗WSSV能力。

摘要： 本发明涉及一种来源于凡纳滨对虾血蓝蛋白的抗WSSV肽LvHcL48，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码基因如SEQ ID NO：2所示。本发明的短肽LvHcL48不管在动物水平还是在体外细胞水平，均能显著抑制WSSV极早期基因wsv069和晚期基因wsv421的转录，同时在体内还能显著抑制WSSV的增殖；还能与WSSV最重要的外膜蛋白VP28相互作用，可能为其发挥功能的作用机制。本发明的抗WSSV肽LvHcL48可以作为抑制WSSV的制剂，可作为添加剂添加到饲料中，以期提高对虾的抗WSSV能力。

摘要： 本发明公开了一种包含钥孔血蓝蛋白片段的融合蛋白及其应用。所述融合蛋白包含钥孔血蓝蛋白片段及目的蛋白；所述的钥孔血蓝蛋白片段包含钥孔血蓝蛋白第1‑245位氨基酸残基；所述的目的蛋白为植物线粒体膜蛋白或其免疫原性片段。在将钥孔血蓝蛋白片段与目的蛋白融合表达后，钥孔血蓝蛋白片段显著增强了目的蛋白的免疫原性。由于本发明的融合蛋白展示了比单独的目的蛋白更强的免疫原性，因此，通过融合钥孔血蓝蛋白片段可用于制备针对特异性目的蛋白多克隆抗体。

摘要： QM蛋白被发现可能是肿瘤抑制因子，QM蛋白已在植物、动物和真菌中得到广泛研究。迄今为止，对于QM蛋白的确切功能尚未研究清楚。本实验研究发现在抗病虾中，QM基因(命名为PjQM)的转录、表达显著上调，表明该蛋白可能参与了对虾的免疫反应。GST下拉实验表明在对虾体内，QM蛋白可与血蓝蛋白和肌球蛋白发生相互作用。蛋白质互作提示，PjQM可能通过酚氧化酶激活系统等途径参与对虾免疫。采用RNAi技术，首次证实在对虾中，QM蛋白可以通过与血蓝蛋白互作，来调控参与无脊椎动物抗病毒免疫反应的酚氧化酶(PO)的活性。

摘要： 本发明公开了一种抗血蓝蛋白的特异性人源scFv抗体及其应用，属于抗血蓝蛋白的单克隆抗体的筛选合成技术领域。通过淘选检测，本发明提供了一种特异性人源scFv抗体，还提供了编码该抗体的核苷酸序列，以及相应的重组表达载体、宿主细胞，还提供了筛选获得的两种抗KLH的检测性抗体(全长IgG抗体)的序列。这种特异性人源scFv抗体或其相应的核苷酸序列、重组表达载体、宿主细胞、全长IgG抗体能够应用于血蓝蛋白的内参标记和制备检测试剂盒。

摘要： 本发明公开了一种鲎血蓝蛋白脱铜的方法及应用，属于化妆品和药物技术领域。该脱铜鲎血蛋白制备方法包括以下步骤：鲎血浆加入螯合剂与蛋白沉淀剂溶液，搅拌离心得沉淀，加入无机溶剂继续离心，冷冻干燥得到脱铜鲎血蛋白。该方法有效解决了鲎血蓝蛋白中的重金属铜含量超标的问题，在鲎数量逐渐减少的情况下，不仅实现了资源的合理利用，还为后续鲎血蓝蛋白在化妆品以及药物方面的应用研究提供了基础。

摘要： 一种用于检测中华绒螯蟹血蓝蛋白基因表达的特异性探针及应用。基于探针序列与目标基因的mRNA按比例特异性结合的原理，将荧光原位杂交技术与图像流式细胞术结合，通过细胞内有无荧光信号区分不同类群，根据信号强弱分析功能差异，还能拓展利用多色荧光共定位了解不同基因是否在同一细胞中表达。细胞分类服务于诊断和功能研究等需求。常规方法多采用抗体识别来分类细胞，但水产动物缺乏市售抗体的现状限制了这种应用。本方法无需抗体，从基因序列出发，制备荧光标记的短探针，杂交条件温和，可在完整单细胞水平开展定量分析，在细胞分类等很多方面具有很好的应用前景。