白斑综合症病毒

摘要： 为了揭示凡纳滨对虾自噬相关基因LvATG3在对虾先天免疫过程中的作用,利用PCR技术克隆出LvATG3,利用荧光定量PCR方法检测LvATG3在凡纳滨对虾不同组织中的表达,用白斑综合症病毒(WSSV)侵染凡纳滨对虾,检测WSSV侵染后不同时间LvATG3的基因表达情况.LvATG3 ORF区全长948 bp,编码315个氨基酸,蛋白相对分子质量为35.527×103,对应等电点为4.58.LvATG3基因在凡纳滨对虾的眼柄、鳃、心脏、神经、血细胞等11种组织中均有表达,在中肠、后肠、鳃和血细胞中表达量较高.血细胞中,LvATG3的表达在WSSV病毒感染的不同时间呈现先下降再上升的趋势.凡纳滨对虾LvATG3参与的细胞自噬可能在WSSV病毒感染增殖过程中发挥了重要作用.

摘要： 水是病毒传播的最重要途径之一,但是从水中检测病毒是一项挑战。由于水中的病毒滴度低,而且水的样品成分复杂,检测前通常需要进行水样品处理,浓缩水中的病毒以达到可检测的数量。本试验分析切向流超滤技术的关键参数(包括切向流的不同孔径、不同面积的超滤柱)以提高从水环境样品中浓缩对虾白斑综合症病毒的效率,并用荧光PCR和数字PCR来定量检测病毒浓缩效果。结果显示,浓缩白斑综合症病毒的过滤最佳过滤柱为0.2μm微过滤膜、UFP-100-C-4MA超滤柱(孔径100 kDa,面积为420 cm^(2))。在进行水样品倍比稀释后所构建的切向流超滤方法对白斑综合症病毒的平均浓缩回收率为73.92%,浓缩效果较好;且病毒回收重复性较高。因此,本试验所优化的切向流超滤方法可以有效地浓缩环境水中的虾病毒,提高水生病毒病原体的检测与流行病学调查的效率。

摘要： 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus, WSSV)是危害我国虾蟹类水产养殖业健康发展的重要病毒性病原体之一,与其他病毒相比,庞大的基因组和较低的基因组同源性是其显著特征。本文对WSSV病毒在基因组、病毒与宿主互作的机制、检测方法及防治手段方面的最新研究进展进行了综述和展望,为加深人们对于WSSV病毒的理解,把握未来发展方向提供帮助。

摘要： C型凝集素(CTL)是一类重要的先天性免疫因子,在对虾机体的免疫防御中具有重要的作用.该研究利用相对定量PCR实验检测基因表达量、绝对定量PCR实验检测病毒拷贝数、组织切片分析实验检测感染病毒细胞数.实验数据显示:WSSV感染能显著上调LvCTL1的表达;WSSV感染的LvCTL1敲降的凡纳滨对虾中,膜囊蛋白VP28表达量、病毒拷贝数和胃上皮细胞中的感染细胞数都显著高于注射dsEGFP对照组.研究结果表明:WSSV感染后,机体通过上调LvCTL1表达来抑制WSSV复制.

摘要： WSV403是白斑综合症病毒(WSSV)的一个极早期基因,它编码一种E3泛素连接酶.在293T细胞中,利用串联亲和纯化和蛋白质谱技术筛选WSV403的相互作用蛋白,获得了15个可能与WSV403结合的蛋白.在此基础上对5个候选基因进行了克隆,并分别将它们与WSV403基因共表达.通过免疫共沉淀和免疫荧光分析证实了WSSV极早期蛋白WSV403能够与核转运蛋白(KP-NA6)、丝/苏氨酸蛋白磷酸酶2A 65 kDa调节亚基A(PPP2RIA)和striatin(STRN)发生相互作用.该研究结果为进一步揭示WSV403的作用机制奠定了基础.

摘要： [目的]克隆获得凡纳滨对虾自噬相关基因LvATG6 cDNA全长,揭示其组织表达特征及其在白斑综合症病毒(WSSV)感染后的表达变化.[方法]利用PCR方法克隆LvATG6,半定量PCR方法检测LvATG6在对虾10种组织中的表达情况及WSSV侵染后LvATG6在对虾鳃和肝胰脏2种组织中的基因表达变化.[结果]克隆获得LvATG6 cDNA全长1275 bp,编码424个氨基酸,预测蛋白分子量大小为51.5 kD; LvATG6基因在凡纳滨对虾10种组织中均有表达,无组织表达特异性;LvATG6在病毒感染不同时间的对虾鳃和肝胰脏组织中均出现明显的表达变化.[结论]凡纳滨对虾 LvATG 6及参与的细胞自噬可能在WSSV病毒感染增殖过程中发挥了重要作用,该研究为深入揭示凡纳滨对虾细胞自噬与WSSV病毒作用关系奠定了基础.%[Objective]To clone a full length of autophagy related gene 6(LvATG6)and reveal its tissue expression characteristics in Litopenaeus vannamei.To detect the changes of LvATG6 tissue expression after WSSV infection.[Method]LvATG6 of L.vannamei was cloned by PCR.The ex-pression level of LvATG6 in 10 tissues of L.vannamei and gene expression changes of LvATG6 in gills and hepatopancreas after WSSV infection were detected by semiquantitative PCR.[Result]The full length of LvATG6 cDNA was obtaind,including 1 275 bp which encoded 424 amino acids.The molecular weight of predicted protein was 51.5 kD.LvATG6 expressed in 10 tissues of L.vannamei,without tissue expression specificity. LvATG6 showed significant expression changes in the gills and hepatopancreas of the shrimp after WSSV infection.[Conclusion]LvATG6 and au-tophagy of this gene involved in may play an important role in the proliferation of WSSV infection.This study provides a basis for revealing the re-lationship between autophagy and WSSV virus in L.vannamei.

摘要： 用实时荧光定量PCR技术检测了高密度精养池塘中日本囊对虾体内及浮游动物白斑综合症病毒携带量的动态变化,检测结果显示,两口池塘的日本囊对虾苗种均携带白斑综合症病毒,达2.43×105~9.42×105 IU/mg;浮游动物也携带微量白斑综合症病毒,达6.78×102~8.02×102 IU/mg.在整个养殖过程中,日本囊对虾多个组织均携带白斑综合症病毒,平均病毒量为鳃>肌肉>肝胰腺>胃;各组织病毒携带量的变化趋势不一致,肌肉、肝胰腺、胃等呈现明显的先降后升趋势,最低降至1.78×103 IU/mg,鳃白斑综合症病毒携带量的下降幅度较小,最低为7.29×104 IU/mg.浮游动物的病毒量在白斑综合症爆发前波动不明显,发病时急剧升高.综合认为,苗种携带是白斑综合症病毒的主要来源;当养殖进入中后期,底质变差、水温降至病毒适宜复制的温度时,易爆发白斑综合症.

摘要： 研究了不同浓度哈维氏弧菌与白斑综合症病毒单独、合并浸泡感染,以及不同温度和盐度条件下单独、合并浸泡感染对墨吉明对虾仔虾死亡情况和WSSV携带量的影响.结果表明:高浓度哈维氏弧菌浸泡感染仔虾,48 h死亡率可达100％,高浓度WSSV浸泡感染仔虾,96 h死亡率可达97％;盐度突变可以降低弧菌与病毒浸泡感染对仔虾的致病性;高温条件下(32°C)弧菌对仔虾的致病性较强,低温条件下(26°C)病毒对仔虾的致病性较强;盐度26、水温26°C条件下,合并感染组死亡率较WSSV单独感染组低;哈维氏弧菌感染可以抑制WSSV在对虾体内的复制.

摘要： 为研究不同类型Toll样受体基因在凡纳滨对虾免疫调控机制中的作用,实验首先通过荧光定量PCR方法检测了凡纳滨对虾3种Toll样受体基因在不同组织中的表达情况.结果表明凡纳滨对虾3种Toll样受体基因mRNA在各组织中均有表达.其中,Toll1基因在肌肉,血淋巴,心脏和鳃均有较高表达,心脏表达量最高;Toll2基因在血淋巴,心脏和鳃均有较高表达,其中在鳃表达量最高;Toll3基因在鳃和心脏有较高表达,其中在鳃表达量最高.实验还对人工感染溶藻弧菌及白斑综合症病毒后凡纳滨对虾3种Toll样受体基因在不同免疫组织的表达变化差异进行研究.感染白斑综合症病毒后凡纳滨对虾血淋巴及鳃中3种Toll样受体基因表达量均显著提高,并在各自达到表达峰值后逐渐下降直至恢复到感染前水平.感染溶藻弧菌后凡纳滨对虾血淋巴中3种Toll样受体基因表达量均显著提高;鳃中Toll1及Toll3表达量分别于感染后3h和12h有显著提高,而Toll2表达量无显著提高.由此推测3种Toll样受体基因均可能参与白斑综合症病毒感染所引起的免疫调控;而在溶藻弧菌感染所引起的免疫调控中,除了Toll1,Toll3参与鳃的免疫调控外,Toll2基因还参与血淋巴中的先天性免疫调控.长期感染白斑综合症病毒或溶藻弧菌后,凡纳滨对虾3种Toll样受体基因在血淋巴与鳃中的表达量均显著升高,这可能与虾体在长期感染过程中,需要不断保持较高免疫水平有关.

摘要： 本文研究了不同温度对感染白斑综合症病毒的凡纳滨对虾的影响.感染了WSSV的凡纳滨对虾分别置于17°C、21°C、25°C、28°C、32°C和36°C的海水中,观察记录对虾的生存状况并计算其平均存活时间.结果显示,在32°C海水中凡纳滨对虾的存活率为38.5％,其他温度下对虾全部死亡.在17～28°C范围内,实验对虾的平均存活时间随着温度的增高而缩短,在32°C时对虾的平均存活时间比相邻的28°C和36°C的平均存活时间延长且有显著性差异(P＜0.01).

摘要： 对虾白斑综合症病毒(White Spot Syndromic Virus,wssV),是1种严重危害对虾养殖业的主要病原,至今仍无有效的防治方法.为了解对虾的先天性免疫机制,研究比较了细胞免疫中的凋亡和吞噬以及体液免疫中的酚氧化酶原系统在对虾WSSV侵染中起的作用,用cytochalasin B,z-VAD-FMK和allylthiourea这3种特异的抑制剂分别对凋亡、吞噬和酚氧化酶活力进行活体抑制,通过对感染对虾死亡率及其体内WSSV拷贝数的跟踪检测,发现凋亡和吞噬的抗病毒活性要高于酚氧化酶系统,说明对无脊椎动物的病毒防御来说,细胞免疫比体液免疫所起的作用更大.为对虾病毒有效的防治方法的建立提供了理论依据。

摘要： microRNA是真核生物中一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，广泛参与机体的生长发育、器官形成、细胞增殖与凋亡等各个过程。越来越多的证据表明microRNA在机体的先天免疫及适应性免疫方面也发挥着重要的作用。对虾作为一种重要的经济动物，对其microRNA相关的分子特征还知之甚少。为了了解microRNA在对虾免疫中的功能特点，本研究对日本囊对虾microRNA相关分子特征进行了初步的研究。我们以白斑综合症病毒(WSSV)感染的对虾血细胞为材料，从中分离并克隆小RNA．运用较为灵敏的PCR鉴定方法，从中我们鉴定得到35个microRNA。序列分析表明血细胞中部分microRNA表现出了表达丰度的差异性及进化上的保守性，其与已知物种中的microRNA具有极高的同源性，尤其是进化关系上十分接近的果蝇、家蚕等节肢动物来源的microRNA。进一步，我们运用半定量PCR方法检测所鉴定microRNA在WSSV病毒感染过程中表达水平的变化情况，结果表明部分microRNA的表达水平在病毒感染过程中发生了变化。日本囊对虾microRNA的初步研究表明microRNA与WSSV的病毒感染存在着紧密的联系。对其进行深入的研究将有助于我们认识microRNA在对虾免疫中的分子机制，为对虾的抗病毒免疫研究提供新线索，从而拓展对虾的免疫调节机制，丰富无脊椎动物的免疫学研究。

摘要： 本发明公开了一种同时检测对虾白斑综合症和托拉综合症病毒的核酸点杂交方法，其步骤是：首先是探针的制备；其次是样品处理；第三是预杂交和杂交；第四洗涤；第五是封闭；第六是抗体抗原反应；第七是洗涤；第八是两步显色反应；最后终止反应。本发明能同时检测两种病毒，灵敏度高，成本低，适合于对虾白斑综合症和托拉综合症病毒的诊断以及亲虾、幼苗和成虾的健康状态检测。

摘要： 本发明属于生物技术中的病毒检测领域，具体涉及一种虾白斑综合症病毒病诊断用核酸样品制备方法以及利用核酸样品经LAMP扩增后检测虾白斑综合症病毒的方法：取处死的新鲜的虾的组织，稍剪碎后加到缓冲液III中，快煮、离心后取上清作为核酸扩增的模板；通过LAMP扩增后，向稀释千倍至万倍后的环介导等温扩增(LAMP)产物中添加SYBR GreenI，在紫外光激发下，通过肉眼直接观察是否有被激发出的绿色荧光结果判断检测结果。本发明具有高灵敏性、高特异性、操作简便、耗时短、所需样品少、成本低等特点。

摘要： 本发明涉及一种miR‑276模拟物在制备广谱抗白斑综合症病毒药物中的应用，所述miR‑276模拟物为人工合成的日本对虾miR‑276，序列为：5'‑TAGGAACTTCATACCGTGCTCT‑3’。所述miR‑276在日本对虾受到WSSV感染后含量显著上升；能显著抑制WSSV的在日本对虾体内的复制，提高对虾的抗病毒能力，显著提升对虾的存活率；也能抑制WSSV在克氏原螯虾及拟穴青蟹体内的复制。miR‑276模拟物可作为一种高效预防WSSV的感染及传播新的药物，应用范围广泛，不仅适用于海水养殖的日本对虾和拟穴青蟹，同时适用于淡水养殖的克氏原螯虾，对食品安全也没有影响，有利于水产养殖业的长期可持续发展。

摘要： 本发明涉及反义核酸AMO‑miR‑9875在制备广谱抗白斑综合症病毒制剂中的应用，所述的小RNA反义核酸AMO‑miR‑9875的序列为：5’‑CUCCUCCCUUCCUCUUCC‑3’。本发明的小RNA反义核酸AMO‑miR‑9875能显著抑制WSSV在拟穴青蟹、日本囊对虾及克氏原螯虾体内的增殖，大幅降低WSSV对海水和淡水养殖虾蟹类感染并致死现象。本发明为水产养殖中抗白斑综合症病毒提供了一种潜在的药物，可高效快速的抑制WSSV的复制，适用范围广泛，不仅适用于海水养殖的日本囊对虾及拟穴青蟹，同样也适用于淡水养殖的克氏原螯虾。本发明的小RNA反义核酸AMO‑miR‑9875分子质量小易降解，不会破坏海洋养殖的生态平衡，且不会对人体造成伤害，是一种既环保又有效的病毒防御物质。

摘要： 本发明涉及尿刊酸在制备抗白斑综合症病毒制剂中的应用，所述尿刊酸在日本囊对虾及克氏原螯虾受到白斑综合症病毒感染后含量均显著增加；分别对日本囊对虾及克氏原螯虾进行攻毒实验及死亡率统计分析，发现注射尿刊酸能显著抑制白斑综合症病毒在日本囊对虾及克氏原螯虾体内的复制，大幅降低由白斑综合症病毒感染所导致的日本囊对虾及克氏原螯虾的死亡。本发明为白斑综合症病毒的防治提供了一种新的药物，能有效预防白斑综合症病毒的感染及传播，对于已爆发白斑综合症的虾同样适用。而且本发明应用面广，能够同时满足海水虾类及淡水虾类；本发明尿刊酸来自虾体本身，不会破坏海洋及淡水养殖过程中的生态平衡，且在人体内的积累也不会有危害。

摘要： 一种环介导等温扩增法检测对虾白斑综合症病毒的方法，涉及水生动物病原微生物检测。基因组提取；制备阳性对照；制备阴性对照；样品检测及结果判定。根据对虾白斑综合症病毒囊膜基因的保守序列，设计了LAMP引物，建立LAMP反应体系，并通过在LAMP反应中添加不同的pH指示剂，以达到通过肉眼观察颜色变化判定靶基因被有效扩增的目的。闭管式可视化快速检测对虾白斑综合症病毒的方法，因为反应产物无须通过电泳和/或添加入荧光染料等鉴定，降低了LAMP产物的污染风险。

摘要： 本发明属于生物技术中的病毒检测领域，具体涉及一种虾白斑综合症病毒病诊断用核酸样品制备方法以及利用核酸样品经LAMP扩增后检测虾白斑综合症病毒的方法：取处死的新鲜的虾的组织，稍剪碎后加到缓冲液III中，快煮、离心后取上清作为核酸扩增的模板；通过LAMP扩增后，向稀释千倍至万倍后的环介导等温扩增(LAMP)产物中添加SYBR GreenI，在紫外光激发下，通过肉眼直接观察是否有被激发出的绿色荧光结果判断检测结果。本发明具有高灵敏性、高特异性、操作简便、耗时短、所需样品少、成本低等特点。

摘要： 本发明公开了枯茗醛在制备白斑综合症病毒抑制剂方面的应用，并公开了枯茗醛在制备预防和/或治疗对虾白斑综合症药物方面的应用、用于抑制对虾白斑综合症病毒的枯茗醛制剂及其制备方法，特点是该枯茗醛制剂由以下原料及其质量百分比组成：枯茗醛4～16％、乙醇4～8％、吐温‑20 2～5％、水溶性氮酮2～6％，其余部分为花生油，其包括以下步骤:称取枯茗醛、吐温‑20、水溶性氮酮、乙醇以及花生油备用；将枯茗醛、乙醇和花生油混匀至枯茗醛完全溶解，再加入吐温‑20和水溶性氮酮，混匀即得枯茗醛制剂，优点是枯茗醛毒性低、不易产生耐药性，能有效防治白斑综合症，该枯茗醛制剂可以有效防治WSSV在幼虾体内的复制。

摘要： 本发明公开了花旗松素在制备白斑综合症病毒抑制剂方面的应用，并公开了花旗松素在制备预防和/或治疗对虾白斑综合症药物方面的应用、用于抑制对虾白斑综合症病毒的花旗松素制剂及其制备方法，特点是花旗松素制剂由以下原料及其质量百分比组成：花旗松素4～16％、乙醇4～8％、吐温‑20 2～4％、水溶性氮酮1～3％，其余为菜籽油，包括以下步骤:称取花旗松素、吐温‑20、水溶性氮酮、乙醇以及菜籽油备用；将花旗松素、乙醇和菜籽油混匀至花旗松素完全溶解，再加入吐温‑20和水溶性氮酮，混匀即得花旗松素制剂，优点是花旗松素毒性低、不易产生耐药性，能有效防治白斑综合症，该花旗松素制剂可以有效防治WSSV在幼虾体内的复制。

摘要： 本发明公开了一种对虾白斑综合症病毒LAMP检测简并引物组、试剂盒及方法，所述简并引物组包括引物OF、OR、IF、IR、LB，其中，OF：5’‑CTTCAGACCATATKTAAGAGTG‑3’；OR：5’‑GCAGATTCCAAACCAGGAA‑3’：IF：5’‑GAGCGGGCATAGAAGTGTAAAAMAT‑TCTCTTCTTGGAATGATGAACG‑3’；IR：5’‑TCCAATATGAAGCAATGGGAGCTA‑GGTTTAAGCCATGGTCTCT‑3’；LB：5’‑GTGCTAATGGCAGCTGAA‑3’；本发明通过设计该对虾白斑综合症病毒LAMP检测简并引物组完成对虾白斑综合症病毒的特异性扩增，特异性好、灵敏度高，并在此基础上设计对虾白斑综合症病毒的LAMP检测试剂盒，所述LAMP检测试剂盒可在40分钟内完成多种对虾白斑综合症病毒株的检测，检测速度快，操作简便，能够广泛应用于虾白斑综合征病毒多种病毒株的快速鉴别诊断。