WSSV

摘要： 套式PCR法检测白斑综合征病毒(WSSV)因操作简便、灵敏度高等优点而被县级实验室广泛应用。但基层实验室由于缺少专职实验操作员、管理较为松散等原因,经常出现假阳性和非特异性条带问题。

摘要： 随着稻田养殖克氏原螯虾(小龙虾)规模日益扩大,小龙虾病害逐年增多,白斑综合征病毒(WSSV)引起的暴发性疾病已经成为制约稻田小龙虾养殖产业发展的主要因素之一。笔者通过在江西省鄱阳湖区实地调查稻田虾白斑综合征的发病情况,结合定点取样及水质因子的测定,初步找出了WSSV致病的相关环境因子,以期为养殖户防控小龙虾WSSV暴发提供技术指导。

摘要： 对虾养殖是水产中重要的产业。对虾养殖从上一世纪80年代开始,经历了诸多病害如WSSV、EPH、EMS和WFS的洗礼,仍坚持创新和发展。在诸多业界专家学者和广大养殖者的专研和努力下,如今养殖模式多样,养殖密度和产量逐年攀高。随之养殖密度的增加,养殖户为了缓解养殖池的内源污染压力,严格控制投喂量,导致池塘弱势群体的数量增多,瘦身和生长缓慢的弱虾普遍存在。

摘要： 为了解印度、厄瓜多尔进口冷冻虾病原携带情况,掌握进口冻虾的疫情动态,为监控部门提供科学依据,对2019-2020年中301批进口冻虾进行WSSV、IHHNV、YHV、TSV和IMNV病原体检测,其中印度254批、厄瓜多尔47批.进口冻虾中WSSV的阳性率为23.92％,IHHNV的阳性率5.65％,WSSV和IHHNV共感染阳性率1.66％,而YHV、TSV、IMNV均没有检出.其中来自印度的冻虾中,WSSV阳性率达26.77％,IHHNV阳性率1.97％,WSSV和IHHNV共感染率是1.66％;来自厄瓜多尔的冻虾中,WSSV的阳性率8.5％,IHHNV的阳性率达25.53％,WSSV和IHHNV的共感染率8.5％.根据冻虾的形态分析结果显示,冻虾仁中WSSV的阳性率达25.6％,IHHNV的阳性率1.45％;带头带壳的冻虾中,WSSV的阳性率达20.21％,IHHNV的阳性率达14.99％,WSSV/IHHNV的阳性率是5.32％.结果 提示,印度的冻虾主要以感染WSSV为主,厄瓜多尔主要以感染IHHNV为主,带头带壳的冻虾WSSV和IHHNV的阳性率都很高,因此亟须加强对进口冻虾产品的管控力度,防止给我国对虾养殖业造成潜在的传播风险.

摘要： 小龙虾病害很少,引起死亡的主要原因是农药中毒和白斑病(五月瘟)。小龙虾"五月瘟"是五月前后往往发生养殖成虾大规模暴发性死亡,苗种投放成活率低等现象而取的俗名,是由白斑病毒引起的病害,为白斑综合征病毒病(WSSV)。该病毒与对虾的白斑病毒无明显差异,认为是同一病毒种;有报道小龙虾曾作为凡纳滨对虾养殖中WSSV发病的指示生物;检测表明,80%-90%的虾都带有WSSV病毒。

摘要： 为了解印度、厄瓜多尔进口冷冻虾病原携带情况,掌握进口冻虾的疫情动态,为监控部门提供科学依据,对2019—2020年中301批进口冻虾进行WSSV、IHHNV、YHV、TSV和IMNV病原体检测,其中印度254批、厄瓜多尔47批。进口冻虾中WSSV的阳性率为23.92%,IHHNV的阳性率5.65%,WSSV和IHHNV共感染阳性率1.66%,而YHV、TSV、IMNV均没有检出。其中来自印度的冻虾中,WSSV阳性率达26.77%,IHHNV阳性率1.97%,WSSV和IHHNV共感染率是1.66%;来自厄瓜多尔的冻虾中,WSSV的阳性率8.5%,IHHNV的阳性率达25.53%,WSSV和IHHNV的共感染率8.5%。根据冻虾的形态分析结果显示,冻虾仁中WSSV的阳性率达25.6%,IHHNV的阳性率1.45%;带头带壳的冻虾中,WSSV的阳性率达20.21%,IHHNV的阳性率达14.99%,WSSV/IHHNV的阳性率是5.32%。结果提示,印度的冻虾主要以感染WSSV为主,厄瓜多尔主要以感染IHHNV为主,带头带壳的冻虾WSSV和IHHNV的阳性率都很高,因此亟须加强对进口冻虾产品的管控力度,防止给我国对虾养殖业造成潜在的传播风险。

摘要： 本研究利用RACE方法克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)凋亡蛋白酶激活因子-1(Apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1)基因,该基因cDNA全长为2032 bp,其中,ORF为1050 bp,编码349个氨基酸,预测分子量为39.13 kDa,理论等电点为7.67.同源性和系统发育分析显示,Apaf-1与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei) Apaf-1的同源性最高,为51.27％,并与凡纳滨对虾聚为一支.组织表达分析显示,Apaf-1基因的相对表达水平在肝胰脏最高,其次是肌肉、心脏、鳃和眼柄,血细胞和表皮最低.不同盐度胁迫后,Apaf-1在Ⅱ期幼蟹体内表达水平在3h达到最大值,此后,呈先下降再上升趋势;Apaf-1在80日龄盐度20胁迫后三疣梭子蟹的鳃中呈上升趋势,在肝胰腺中为先上升后下降趋势,表明盐度改变能影响该基因在鳃和肝胰腺组织中的表达.不同病原感染实验结果显示,在血细胞中,注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后Apaf-1的表达于48 h到达峰值,为对照组的2.76倍(P＜0.05),注射白斑综合征病毒(WSSV)后,仅在12h表达水平上调,为对照组的1.25倍(P＜0.05);在肝胰腺中,注射副溶血弧菌后在72 h到达峰值,为对照组的5.44倍(P＜0.05),注射WSSV后在12 h到达峰值,为对照组的5.89倍(P＜0.05),整体呈上调表达趋势.本研究为进一步理解三疣梭子蟹Apaf-1基因的生理功能提供了参考.

摘要： 白斑综合征病毒(WSSV)自暴发以来给全球范围内的对虾养殖产业带来了巨大的损失.为了解我国凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖区WSSV的流行变异情况,选取2017年中国部分地区的42个WSSV阳性样本,对ORF14/15、ORF23/24、ORF75、ORF94和ORF125共5个可变区进行PCR特异性扩增,分析其序列的缺失变异和重复单元(Ru)中单核苷酸多态性的变化.研究结果显示,在ORF14/15的扩增中共出现4种缺失片段;ORF23/24只出现11 945 bp的缺失片段;ORF75扩增中,总RUs数目为3、4、9,其中45 bp的RUs在12、27、80位点发生多核苷酸多态性;ORF94的RUs数目为6,其各重复单元在48位发生单核苷酸多态性;ORF125的RUs数目为4、6、7不等,其各重复单元分别在20、27、50、53、61位发生碱基突变.研究结果表明,2017年样本中,WSSV在中国大部分地区均出现一定程度的缺失变异,其中部分可变区表现出缺失情况的稳定性,某些可变区的重复单元数目及SNP表现出地区的差异性以及不稳定性.

摘要： 为探明高温应激对克氏原螯虾(Procambarus clarkia)抗病力的影响,分别采用30°C 和35°C 水温进行高温应激试验,应激前和应激后3、6、12、24和48 h分别采集血淋巴样本,测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)、 多酚氧化酶(PPO)、 溶菌酶(LYZ)、 酸性磷酸酶(ACP)以及碱性磷酸酶(ALP)等免疫相关酶类指标.并在上述高温应激下开展WSSV人工感染实验,同时设置25°C 为阳性和阴性对照组,于感染后3、6、12、24、48、72 h取鳃组织定量测定WSSV在组织中的载量,同时记录克氏原螯虾感染的发病和死亡情况,统计累积死亡率.结果显示,克氏原螯虾血淋巴中的T-SOD与LYZ含量在高温应激后都出现了显著性降低,而PPO、ACP和ALP的变化差异不大.在35°C 饲养条件下,WSSV在克氏原螯虾体内的增殖受到抑制,实验虾发病慢,累积死亡率相对较低,但在30°C 饲养条件下,WSSV在克氏原螯虾体内的增殖较常温(25°C)下更活跃,发病和死亡更快.结果表明,高温应激能导致克氏原螯虾机体非特异性免疫力降低,30°C 时能加快克氏原螯虾感染WSSV的发病进程,而35°C 时因病毒复制被抑制而导致疾病的发展受阻.

摘要： 将两株溶藻弧菌PC070573和LV060810分别添加在基础饲料中,以0.1%和1%灭活菌及0.1%活菌添加配制成三种免疫饲料,凡纳滨对虾免疫3周后,进行WSSV攻毒实验。免疫期间定期取样,测定凡纳滨对虾血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性,分析溶藻弧菌对凡纳滨对虾非特异性免疫的影响;统计对虾感染病毒后的累积死亡率,验证溶藻弧菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力的影响。结果显示:PC070573的三个免疫组中1%灭活菌组的各项免疫指标较高,LV060810的三个免疫组中0.1%活菌组的各项免疫指标较高;PC070573各实验组的最高免疫保护率可达65.5%,LV060810各实验组的最高免疫保护率仅为15.5%。研究提示,溶藻弧菌PC070573能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平、增强抵抗疾病的能力,将其作为对虾益生菌制剂有良好的应用前景。

摘要： 将两株溶藻弧菌PC070573和LV060810分别添加在基础饲料中,以0.1%和1%灭活菌及0.1%活菌添加配制成三种免疫饲料,凡纳滨对虾免疫3周后,进行WSSV攻毒实验。免疫期间定期取样,测定凡纳滨对虾血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性,分析溶藻弧菌对凡纳滨对虾非特异性免疫的影响;统计对虾感染病毒后的累积死亡率,验证溶藻弧菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力的影响。结果显示:PC070573的三个免疫组中1%灭活菌组的各项免疫指标较高,LV060810的三个免疫组中0.1%活菌组的各项免疫指标较高;PC070573各实验组的最高免疫保护率可达65.5%,LV060810各实验组的最高免疫保护率仅为15.5%。研究提示,溶藻弧菌PC070573能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平、增强抵抗疾病的能力,将其作为对虾益生菌制剂有良好的应用前景。

摘要： 将两株溶藻弧菌PC070573和LV060810分别添加在基础饲料中,以0.1%和1%灭活菌及0.1%活菌添加配制成三种免疫饲料,凡纳滨对虾免疫3周后,进行WSSV攻毒实验。免疫期间定期取样,测定凡纳滨对虾血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性,分析溶藻弧菌对凡纳滨对虾非特异性免疫的影响;统计对虾感染病毒后的累积死亡率,验证溶藻弧菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力的影响。结果显示:PC070573的三个免疫组中1%灭活菌组的各项免疫指标较高,LV060810的三个免疫组中0.1%活菌组的各项免疫指标较高;PC070573各实验组的最高免疫保护率可达65.5%,LV060810各实验组的最高免疫保护率仅为15.5%。研究提示,溶藻弧菌PC070573能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平、增强抵抗疾病的能力,将其作为对虾益生菌制剂有良好的应用前景。

摘要： 将两株溶藻弧菌PC070573和LV060810分别添加在基础饲料中,以0.1%和1%灭活菌及0.1%活菌添加配制成三种免疫饲料,凡纳滨对虾免疫3周后,进行WSSV攻毒实验。免疫期间定期取样,测定凡纳滨对虾血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性,分析溶藻弧菌对凡纳滨对虾非特异性免疫的影响;统计对虾感染病毒后的累积死亡率,验证溶藻弧菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力的影响。结果显示:PC070573的三个免疫组中1%灭活菌组的各项免疫指标较高,LV060810的三个免疫组中0.1%活菌组的各项免疫指标较高;PC070573各实验组的最高免疫保护率可达65.5%,LV060810各实验组的最高免疫保护率仅为15.5%。研究提示,溶藻弧菌PC070573能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平、增强抵抗疾病的能力,将其作为对虾益生菌制剂有良好的应用前景。

摘要： 将两株溶藻弧菌PC070573和LV060810分别添加在基础饲料中,以0.1%和1%灭活菌及0.1%活菌添加配制成三种免疫饲料,凡纳滨对虾免疫3周后,进行WSSV攻毒实验。免疫期间定期取样,测定凡纳滨对虾血清的溶菌酶、酚氧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶活性,分析溶藻弧菌对凡纳滨对虾非特异性免疫的影响;统计对虾感染病毒后的累积死亡率,验证溶藻弧菌对凡纳滨对虾抗病毒感染能力的影响。结果显示:PC070573的三个免疫组中1%灭活菌组的各项免疫指标较高,LV060810的三个免疫组中0.1%活菌组的各项免疫指标较高;PC070573各实验组的最高免疫保护率可达65.5%,LV060810各实验组的最高免疫保护率仅为15.5%。研究提示,溶藻弧菌PC070573能提高凡纳滨对虾非特异性免疫水平、增强抵抗疾病的能力,将其作为对虾益生菌制剂有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种高效抵抗WSSV的siRNA分子wsv147，序列为：正义链：5'‑GUCAAGCAAAUGUACAAACAAAUUU‑3’反义链：5'‑AUUUGUUUGUACAUUUGCUUGACUU‑3’。本发明的wsv147‑siRNA可以显著抑制病毒基因wsv147在日本囊对虾及克氏原螯虾体内的表达，能抑制WSSV在日本囊对虾及克氏原螯虾体内的增殖；降低WSSV感染所导致的日本囊对虾及克氏原螯虾的死亡；还能够显著提高病毒感染后虾血淋巴细胞的活力，能够增强日本囊对虾和克氏原螯虾对病毒的抵抗能力。本发明的siRNA分子wsv147特异性强，作用周期短，副作用小，可高效快速的抑制WSSV的增殖；适用范围广，不仅适用于海水养殖的日本囊对虾，同样也适用于淡水养殖的克氏原螯虾；为白斑综合症病毒的防治提供了一种新的药物。

摘要： 抑制WSSV增殖的半胱天冬氨酸酶基因Cq‑caspase及其蛋白抗病毒活性应用。提供红螯螯虾caspase的基因序列、氨基酸序列、重组蛋白的制备方法和红螯螯虾caspase重组蛋白在制备抗WSSV类新药和动物抗病饲料添加剂中应用。依据Cq‑caspase基因序列特征成功构建重组表达载体，在大肠杆菌原核表达系统中诱导表达并纯化获得Cq‑caspase重组蛋白。基于得到的rCq‑caspase，探究其抗WSSV活性。结果表明，rCq‑caspase能够抑制WSSV在红螯螯虾Hpt细胞中的增殖。因此重组基因工程产品rCq‑caspase在制备抗WSSV类新药开发应用中显示出非常诱人的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种用于日本对虾抗WSSV感染的AMO‑miRNA，所述AMO‑miRNA的核苷酸序列为5’‑CATCAAAGCTGGCTGTGATA‑3’。本发明能够显著抑制WSSV在日本对虾体内的增殖，有效解决了养殖对虾感染WSSV致死的现象。

摘要： 本发明提供一种阻断多肽，该多肽能够阻断中国对虾PcRab7蛋白与WSSV囊膜蛋白VP28的相互作用，具有抗WSSV的作用。本发明所提供的阻断多肽，其氨基酸序列为TAPLAITAIIAVFI。本发明所提供的多肽可以阻断PcRab7结合VP28，进而影响病毒包膜和宿主细胞膜的融合，使病毒无法进入宿主细胞，实现抗WSSV的作用。本发明采用对虾感染实验验证了其可以有效延长对虾感染WSSV后的存活时间，可以作为有效的抗WSSV候选药物，为今后WSSV的防治提供可能的多肽药物。

摘要： 本发明涉及一种高效抵抗WSSV的siRNA分子wsv147，序列为：正义链：5'‑GUCAAGCAAAUGUACAAACAAAUUU‑3’反义链：5'‑AUUUGUUUGUACAUUUGCUUGACUU‑3’。本发明的wsv147‑siRNA可以显著抑制病毒基因wsv147在日本囊对虾及克氏原螯虾体内的表达，能抑制WSSV在日本囊对虾及克氏原螯虾体内的增殖；降低WSSV感染所导致的日本囊对虾及克氏原螯虾的死亡；还能够显著提高病毒感染后虾血淋巴细胞的活力，能够增强日本囊对虾和克氏原螯虾对病毒的抵抗能力。本发明的siRNA分子wsv147特异性强，作用周期短，副作用小，可高效快速的抑制WSSV的增殖；适用范围广，不仅适用于海水养殖的日本囊对虾，同样也适用于淡水养殖的克氏原螯虾；为白斑综合症病毒的防治提供了一种新的药物。

摘要： 本发明公开了一组检测IHHNV、EHP和WSSV的引物组、试剂盒及其应用，涉及分子生物学技术领域。本发明用于检测IHHNV、EHP和WSSV的引物组包括：IHHNV‑F和IHHNV‑R、EHP‑F和EHP‑R、WSSV‑F和WSSV‑R。该引物组特异性强、灵敏度高，可用于检测IHHNV、EHP和WSSV。基于该组引物的方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强、检测通量高、检测速度快和成本低的特点，且通过荧光数据直接分析得到结果，结果判读方式简单直接。

摘要： 本发明公开同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV多重荧光PCR检测试剂盒，包括冻干固态PCR Mix，液态复溶Buffer、冻干固态阴性对照和冻干固态阳性对照，所述冻干固态PCR Mix含有WSSV VP644基因、IHHNV NS2基因、EHP 18s基因和SHIV MCP基因对应的特异性引物探针序列组；所述引物和探针的序列如SEQ ID NO:1‑12所示。本发明还提供使用上述试剂盒检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV的方法。本发明提供的试剂盒采用全预混冻干多重荧光PCR法，能够同时检测对虾WSSV、IHHNV、EHP、SHIV这四种病原体，大大节约的检测时间，具有灵敏度高、操作技术要求低和防污染等优点。

摘要： 本发明公开的是一种能够防治白斑病毒病WSSV药物的制备方法，针对白斑病毒的关键蛋白基因设计RNA序列，合成序列；将RNA诱导表达，纯化后作为药物使用；试验后进行基因表达检测，本发明经过验证，能降低白斑病的病害效果，市场前景好，解决了虾养殖产业一直受到白斑病毒病危害的问题。

摘要： 本发明公开了一种中国对虾核心育种群WSSV的净化方法，包括以下步骤：收集越冬池中中国对虾亲虾粪便进行WSSV检测，淘汰检测结果为阳性的越冬池中的亲虾；对选留的亲虾进行单个检测，淘汰检测结果为阳性的个体；选留亲虾产卵孵化后对育苗池的仔虾进行抽样混合检测，淘汰阳性仔虾；将检测结果为阴性的仔虾个体放于室外养殖池的围格中进行养殖；收获时对每个围格养殖个体进行抽样混合检测，选留检测结果为阴性的围格内交尾雌虾进行越冬，作为第二年苗种繁育的亲虾。采用上述净化方案对中国对虾核心育种群进行连续多代的净化，可显著降低WSSV传播的风险，提高中国对虾的养殖成功率和产品质量安全。

摘要： 本发明提出WSSV实时荧光定量PCR检测引物探针组合、试剂盒及方法，其引物探针组合包括WSSV上游引物、WSSV下游引物和WSSV探针；所述WSSV上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述WSSV下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述WSSV探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述WSSV探针的5'端有荧光标记FAM、3'端连接荧光淬灭基团TAM。采用该引物探针组合能够实现高灵敏度、高特异性的WSSV检测，为对虾白斑综合症病毒的早期检测和精准防控提供重要的技术支撑，对保障我国对虾养殖业健康发展具有重要意义。