哈维氏弧菌

摘要： 为探讨哈维氏弧菌Vibrio harveyi感染对红鳍东方鲀Takifugu rubripes白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)基因DNA甲基化的影响,试验选用体质量为(100.5±10.8)g的红鳍东方鲀,设对照组和感染组(哈维氏弧菌浓度为10^(7) cfu/mL),鱼体在菌液中浸泡12 h后转移到无致病性病原的干净海水中继续饲养7 d,然后进行样品采集,检测红鳍东方鲀脾脏的病理变化、IL-6基因的相对表达量及其启动子区域DNA甲基化变化。结果表明:发病组红鳍东方鲀脾脏有大量坏死灶,未发病组无明显坏死灶;发病组脾脏IL-6 mRNA相对表达量显著高于对照组和未发病组(P0.05);未发病组IL-6基因启动子区域DNA甲基化水平明显高于发病组(P<0.05)。研究表明,哈维氏弧菌感染后,红鳍东方鲀表现出不同的抗病能力,且抗病能力不同的红鳍东方鲀在IL-6基因启动子区域DNA甲基化水平存在明显差异。

摘要： 本研究以海水养殖鱼类半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,克隆了白细胞介素12(IL-12)的p35a亚基和p40c亚基的基因编码区序列,编码区长度分别为651 bp和984 bp。系统进化树分析显示,半滑舌鳎的p35a和p40c分别与其他鱼类对应的基因聚为一支。氨基酸同源性分析显示,p35a与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)相似性最高,p40c与三棘刺鱼(Gasterosteus aculeatus)相似性最高,分别为52.04%和48.67%。组织表达分析显示,p35a在鳃、脑、心和卵巢中表达量较高,p40c在肝、脾、鳃和心中表达量较高。通过哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染实验,分析了半滑舌鳎p35a、p40c及其相关基因(ifn-γ和il-10)在哈维氏弧菌感染过程中的表达模式,p35a在脾中,48 h表达显著上升(P<0.05),之后表达逐渐下降;在肝和肠中,72 h表达显著上升。p40c在脾、肝中,6 h表达显著上升;在肾中,48 h产生上调;在肠中,6 h开始上调,并在48 h上升至最高点。ifn-γ在肝和肠中,均在p35a表达上调之前显著升高,在脾中晚于p35a上调表达;il-10在肝、脾、肾、肠中表达趋势中均与p40c的表达趋势相反。将半滑舌鳎淋巴细胞过表达p35a和p40c基因后,检测了受不同浓度脂多糖(LPS)刺激后干扰素(ifn-γ)、肿瘤坏死因子(tnf-α和tnf-β)等免疫相关细胞因子的表达变化。结果显示,p35a、p40c能够显著提高tnf-α在LPS刺激下的表达水平。上述结果表明,IL-12的p35a亚基和p40c亚基能够响应哈维氏弧菌对半滑舌鳎的刺激,过表达p35a、p40c能够通过诱导tnf-α基因的表达来参与机体的免疫应答。研究结果可为IL-12作为半滑舌鳎抗哈维氏弧菌疫苗佐剂的开发提供理论基础。

摘要： 颗粒酶(granzyme,Gzm)B是免疫炎症反应必不可少的介质,可激活半胱天冬酶3,进而诱导靶细胞的凋亡。本研究通过PCR扩增和RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)颗粒酶B基因(CsGzmBl)的全长cDNA序列,并对其序列特征和表达水平进行了分析。结果显示,CsGzmBl cDNA全长为923 bp,开放阅读框长度为780 bp,编码259个氨基酸(前19个氨基酸残基为信号肽序列),5′非编码区为49 bp,3′非编码区为94 bp。CsGzmBl的基因组结构比较保守,由5个外显子和4个内含子组成。CsGzmBl蛋白包含2个N端糖基化位点、1个催化三联体“His63Asp112Ser207”、1个“PHSRPYMA”结构域及6个保守的半胱氨酸。荧光定量PCR结果显示,CsGzmBl在半滑舌鳎健康成鱼不同组织中均有表达,其中,在脾脏中表达量最高,头肾、中肾、肝脏和鳃中表达量次之,在肌肉中表达量最低。与对照组0 h相比,CsGzmBl在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染后的不同时间点的脾脏、肠、肝脏、皮肤、鳃和肾脏中的表达水平均有不同程度的上调。研究表明,CsGzmBl基因在半滑舌鳎抵御哈维氏弧菌感染过程中发挥重要作用。

摘要： 自浙江发病泥蚶中分离到1株优势菌J14,采用人工感染试验、形态及生化特征分析、16S rRNA基因序列测定和药敏试验等方法,对该菌株进行鉴定并分析其相关特性。结果表明,菌株J14感染泥蚶的96h半致死密度为7.74×10^(6)个/mL,对泥蚶具有较强的致病性。菌株J14为革兰氏阴性细菌,经硫代硫酸盐柠檬酸盐胆盐蔗糖琼脂培养基分离为黄色不发光菌落,结合生理生化特征和16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌株为哈维氏弧菌。毒力基因的携带情况显示,哈维氏弧菌J14可检测到群体效应调节基因luxR,毒力调控基因toxR,溶血素基因vhhA、vhhB,毒力相关基因toxS,几丁质酶基因chiA,丝氨酸蛋白酶基因7种毒力基因。药敏结果显示,哈维氏弧菌J14对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、杆菌肽4种药物不敏感,对红霉素、多黏菌素B中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素、复方新诺明等26种常用抗生素药物敏感。研究结果可为泥蚶弧菌病的防治提供参考资料。

摘要： 【目的】明确马氏珠母贝TLRP基因(PmTLRP)的组织表达特征及哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)刺激、植核及脂多糖(LPS)刺激后的时序表达特点,为进一步研究TLRs在马氏珠母贝中的免疫机制打下基础。【方法】采用RACE克隆PmTLRP基因c DNA序列,通过ProtParam、ProtScale、SignalP 4.0、TMHMM v.2.0、SMART、SoftBerry Psite和SOPMA等在线软件进行生物信息学分析,并以实时荧光定量PCR检测PmTLRP基因在马氏珠母贝各组织中及经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后的表达情况。【结果】PmTLRP基因cDNA序列全长2214 bp,包含33 bp的5’非编码区(5’-UTR)、135 bp的3’非编码区(3’-UTR)及2043 bp的开放阅读框(ORF),共编码681个氨基酸残基;其编码蛋白含有信号肽、富含亮氨酸重复序列(LRRs)、跨膜结构域和TIR结构域,符合TLRs家族所具有的特征;PmTLRP氨基酸序列与其他物种的TLRs氨基酸序列存在一定相似性,其中与美洲牡蛎TLP氨基酸序列的相似度较高。PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达,以在肝胰腺中的相对表达量最高,显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.05)。在哈维氏弧菌刺激下,PmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量于注射刺激后12 h开始上调,至注射刺激后16 h达最大值,约是注射刺激前(0 h)的19.0倍。经植核刺激后,PmTLRP基因相对表达量在植核后5~20 d呈逐渐上升趋势,于植核后30 d达最大值,约是植核前(0 h)的6.4倍。在LPS刺激下,PmTLRP基因在血淋巴中的相对表达量先上升后下降,至注射刺激后3 h达最大值,约是对照组的5.0倍;PmTLRP基因在肝胰腺中的相对表达量呈升高→降低→升高→降低→升高的波动变化趋势,至注射刺激后24 h相对表达量上调到最大值,约是对照组的6.0倍。【结论】PmTLRP基因在马氏珠母贝外套膜、血淋巴、肝胰腺、鳃、性腺和闭壳肌中均有表达,但表达水平存在差异,经哈维氏弧菌、植核及LPS刺激后呈明显上调表达趋势,说明TLRP在马氏珠母贝的免疫防御反应中扮演重要角色。

摘要： 基于斑节对虾(非洲群体)(Penaeus monodon)肠道菌的生理生化特性,为解决斑节对虾急性肝胰腺坏死综合征(AHPND)提供新思路,文章分离纯化健康斑节对虾肠道中的优势菌株;以致病性哈维氏弧菌为指示菌,用牛津杯法从纯化菌株中筛选拮抗菌;通过生理生化特征、Biolog系统鉴定及16S rDNA技术综合方法对菌株进行鉴定;通过药敏实验,评价拮抗菌株的安全性;绘制高敏拮抗菌株的生长曲线,得出其生长特性;通过测定其产酶活性,形成对其益生机制的初步推断。从斑节对虾肠道中共分离得到14株的优势土著菌,分别标记为P.m-1、P.m-2……P.m-14,经过拮抗实验得到了3株拮抗菌(P.m-1、P.m-9和P.m-13)。经鉴定P.m-1、P.m-9和P.m-13分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、屎肠球菌(Enterococcus faecium)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)。药敏实验结果表明,3株拮抗菌均不属于耐药菌,P.m-1对药物高度敏感。生长特征实验表明:P.m-1在2h进入对数期,10h达到生长高峰,菌体密度可达1.14×10^(9)cfu/mL,表现出了强劲的生命力。经过蛋白酶活性测定,P.m-1具有较强的产酶能力。优势菌P.m-1具有成为益生菌的潜力,后续将作为功能性饲料添加剂或水质调节剂进行应用,为AHPND进行生物防治提供新思路。

摘要： 随着养殖规模的扩大,东方鲀养殖病害时有发生,给养殖业造成较大经济损失,制约了东方鲀养殖业健康可持续发展。因此,病害防治是东方鲀养殖的关键技术,本文对近年东方鲀养殖过程中的常见病害及防治措施进行了概述,以期为东方鲀的健康养殖提供参考。一、细菌性疾病1.细菌性皮肤溃烂(1)病原:哈维氏弧菌等。(2)主要症状:病鱼体色发白、游动缓慢、摄食困难,口角、表皮等部位溃烂(图1),溃烂周边皮肤发红,鳍条缺损,肾脏、肝脏、脾脏充血。

摘要： 本试验分析体质量(190.34±2.13)g的红鳍东方鲀白介素基因IL-1b、IL-8和IL-10的序列特征,检测其在红鳍东方鲀脑、鳃、心脏、肌肉、肝脏和脾脏中的表达,以及每尾红鳍东方鲀注射密度1×107 cfu/mL的哈维氏弧菌菌液0.1 mL后0、12、24、48 h在肝脏和脾脏中的表达.试验结果表明,IL-1b、IL-8和IL-10基因的序列全长分别为771、822 bp和844 bp.3个基因在健康成鱼脑、鳃、心脏、肌肉、肝脏、脾脏中均有表达,其中肝脏和脾脏表达显著(P<0.05).感染哈维氏弧菌后12 h,IL-1b基因在肝脏中显著上调,12 h和48 h在脾脏中显著升高(P<0.05).感染哈维氏弧菌后12 h和24 h IL-8基因在肝脏和脾脏中均显著上调(P<0.05);而感染后24 h和48 h IL-10基因在肝脏中显著升高,在脾脏中12 h和48 h显著升高(P<0.05).笔者首次探讨红鳍东方鲀IL-1b、IL-8和IL-10基因的序列特性及表达特征,为研究3个基因的原核表达提供了试验信息,将为进一步深入探究重组蛋白活性及其在红鳍东方鲀健康养殖中的应用奠定基础.

摘要： 2019年8月,大连市金州区大李家街道海域海水网箱养殖许氏平鲉(Sebastes schlegeli暴发严重的皮肤溃疡性疾病.以其为研究对象,从体表病灶、肝脏和肾脏上进行细菌分离,得到1株优势菌株BN-1910.为了验证网箱养殖许氏平鲉死亡是否由该菌株引起,采取腹腔注射的方式进行该菌株回感,以确定该菌株的致病力.在对菌株进行生理生化检验和形态学观察后,可以初步判断菌株为哈维氏弧菌(Vibrio harveyi).基于16S rRNA基因序列构建的分子系统发生树表明,哈维氏弧菌(MT864681.1)和该菌株在系统发育树中聚为一支,99％置信水平.研究结果显示,菌株BN-1910为哈维氏弧菌(V.harveyi),对许氏平鲉10d的LD50为7.98×103CFU/mL;对14种药物的敏感试验证实,菌株BN-1910对氟哌酸、链霉素和左氧氟沙星敏感.

摘要： Bfr(Bacterioferritin)是细菌主要的储铁蛋白和重要的免疫相关蛋白.为探索哈维氏弧菌Vibrio harveyi Bfr蛋白的免疫特性,本研究利用大肠杆菌Escherichia coli表达系统表达哈维氏弧菌Bfr重组蛋白(rBfr),并进行纯化,进一步通过动物模型评估rBfr的免疫特性.结果显示,成功表达了哈维氏弧菌Bfr蛋白,Bfr蛋白分子量大小约为25 ku;表达的重组蛋白主要以可溶性形式存在;免疫小鼠结果显示,rBfr蛋白能激发小鼠产生高水平的特异性抗体,rBfr具有较好的免疫原性;利用斑马鱼Danio rerio建立哈维氏弧菌感染模型,表明哈维氏弧菌对斑马鱼无致病性.本研究证实了哈维氏弧菌Bfr具有免疫原性,为进一步研制哈维氏弧菌亚单位疫苗和核酸疫苗提供了参考和借鉴.

摘要： 本研究旨在研究理化因子对哈维氏弧菌V.harveyi QHD-1生物被膜形成的影响.本试验以哈维氏弧菌分离菌株V.harveyi QHD-1为试验菌株,采用常规细菌培养方法检测盐离子浓度、温度、pH值、NH4+、Mg2+对其生长的影响,并采用采用改良微孔板法测定V.harveyi QHD-1生物被膜的形成特性,并进一步检测初始菌液浓度、温度、pH值、盐离子浓度对其体外形成生物被膜的影响.结果显示,不同盐离子浓度、温度、pH值、NH4+、Mg2+可影响菌株V.harveyiQHD-1的生长,尤其在盐离子浓度为3％、温度为30°C、pH为8时,分离菌株V.harveyi QHD-1生长情况最好,且NH4+、Mg2+能够促进分离菌株V.harveyi QHD-1生长;菌株V.harveyi QHD-1能够在聚苯乙烯板上形成生物被膜,且其形成受初始菌液浓度、温度、pH值等理化因子的影响,尤其当温度为30°C、pH值为8、盐离子浓度为5％、初始菌液浓度为1.0×109cfu/mL时,是分离菌株V.harveyi QHD-1形成生物被膜的最佳条件.本研究结果为生物被膜形成机制与致病机理的研究提供一定的参考.

摘要： 生物被膜是细菌间相互协调形成的高度分化的结构群体，其外包裹着自身产生的多聚基质，它是细菌抵抗外界不利因素的重要手段之一。哈维氏弧菌广泛分布于近岸温暖的海水、海洋沉积物、海洋动物的体表、海洋发光鱼类和头足类动物等各种海洋场所，它是一种革兰氏阴性、发光的(并非所有菌株)海洋细菌，菌体呈弧状，极生单鞭毛，是海水鱼虾养殖中常见的致病菌，此菌引起的大范围发病曾给养殖业造成巨大的经济损失。本研究以从患病青石斑鱼分离到的病原菌哈维氏弧菌TS-628菌株为研究对象，建立该菌生物被膜的体外模型，探讨理化及生物因子对哈维氏弧菌生物被膜形成的影响，了解该菌生物被膜形成的规律，为进一步探索该菌的致病机理及防治措施奠定理论基础。

摘要： 胞外蛋白酶（ECPase）是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子，经鉴定其为半胱胺酸蛋白酶，分子量约55KD，能够分解脱脂奶中的酪蛋白，命名为1108-ECPase。本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活（YZ为能够分泌目的蛋白酶的重组菌），并利用这个方法确定了细菌分泌ECPase达最高峰的培养时间为36h，粗提ECPase最适的饱和硫酸铵浓度为70%。 GYC1108-1和YZ培养上清经硫酸铵盐析，SephadexG-25凝胶过柱后，得到较为纯化的1108-ECPase和YZ-ECPase。选择白油、蜂胶和弗氏三种不同佐剂与适量抗原混匀，分别免疫3只ICR小鼠，并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。三次免疫后制备小鼠血清，间接ELISA测定抗体效价，除空白对照外，其它8组小鼠的免疫血清效价达1:1.6×104～1:2.56×105，免疫组的效价从高到低依次为弗氏＞白油＞蜂胶＞不加佐剂，不同佐剂的免疫效果依次为：弗氏＞白油＞蜂胶。免疫印迹实验结果表明：小鼠血清在55KD处有明显的反应条带。以上结果表明，ECP具有很好的免疫原性，这为下一步研究基因工程疫苗奠定了基础。

摘要： 哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)广泛存在于海洋环境中，能引起世界范围内的海水鱼类及其他养殖动物发病，给水产养殖业造成巨大的经济损失。哈维氏弧菌的胞外分泌物如蛋白酶、溶血素、几丁质酶、脂酶和磷脂酶等毒力因子在致病过程中起到重要作用。磷脂酶广泛存在于各种生物体中，能水解甘油磷脂。病原菌产生的磷脂酶不仅可以通过水解宿主细胞膜上的磷脂引起宿主组织被破坏，磷脂酶水解产生的脂类还可以作为第二信使来调节信号传导途径对宿主产生影响。

摘要： 弧菌是水产养殖鱼类主要的致病菌之一，但是关于弧菌疫苗的研究和开发还鲜有报道。近年来，DNA疫苗以其突出优势受到世界范围的广泛关注，鱼用DNA疫苗的研究也已取得很大进展。本文以哈维氏弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因为抗原基因，构建真核表达重组质粒pcFlaA，以该重组质粒免疫青石斑鱼，从mRNA及蛋白质水平检测该重组质粒在青石斑中的表达，并采用MTT、 ELISA及攻毒感染实验研究pcFlaA的免疫效果，探索防治弧菌病的鱼用DNA疫苗的可行性，以期为鱼用弧菌DNA疫苗的进一步开发、养殖病害的防治提供理论基础和实践经验。

摘要： 胞外产物(ECP)是致病菌在生长繁殖过程中释放出的代谢产物，是侵染机体的主要成分之一。本文以养殖青石斑鱼(Epinephelus awoara)溃疡病分离的细菌性病原哈维氏弧菌TS-628株为对象，尝试采用复性电泳技术，研究环境pH值、温度及培养时间对该菌胞外产物蛋白酶活性的影响，为揭开弧菌的致病机制提供理论基础，以探寻防治弧菌病的有效措施。

摘要： 以哈维氏弧菌福尔马林灭活菌苗浸浴免疫大黄鱼幼鱼,可以明显降低弧菌病发病率,提高当年成活率.本研究旨在探索哈维氏弧菌菌苗的有效保护抗原,为深入进行疫苗研制提供基础.

摘要： 应用聚合酶链反应PCR方法，从患病石斑鱼分离到的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一个约800bp的外膜蛋白基因，将其克隆到pGEM-T Easy载体，序列分析表明：该基因含有一个801bp的开放读码框ORF，编码266个氨基酸，推算分子量为28.112 kDa。用PCR方法对此基因进行改造后，定向克隆至原核表达载体pBV220，构建重组哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因表达载体pBVOmpK，并在大肠杆菌中获得高效表达，表达目的蛋白占细菌总蛋白的24.8％。蛋白经纯化后，免疫新西兰大白兔制备抗血清，经Westem－blotting分析表明，重组蛋白与从哈维氏弧菌中提取的外膜蛋白具有相同的免疫原性。

摘要： 对从海水中分离的3株噬菌蛭弧菌Blb-1、Blb-2、Blb-3在不同条件下的裂解特性进行了初步研究,并进行了Blb-2裂解水体哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的应用试验,结果表明该3株菌在0～30％盐度范围内均能良好生长,具有很好的广盐性;该3株菌对灭活后的宿主菌具有更强的裂解作用,形成噬斑的时间普遍提前,且噬菌斑较大;3株蛭弧菌的裂菌谱试验以及不同蛭弧菌菌龄的裂解效果试验表明,该3株菌对气单胞菌属(Aeromonas)和弧菌属(Vibrio)均有很好的裂解能力,而对水产益生菌芽孢杆菌、乳酸菌等裂解能力很弱;应用试验表明,噬菌蛭弧菌对水体中的哈维氏弧菌具有较强的的清除能力,为开发噬菌蛭弧菌微生态制剂在水产养殖领域的实际应用提供理论依据.

摘要： 一组能同时识别哈维氏弧菌和溶藻弧菌的寡核苷酸序列及其制备方法，涉及哈维氏弧菌和溶藻弧菌的识别检测。寡核苷酸序列包括SEQ ID No.1～4。合成用于筛选的ssDNA寡核苷酸文库(5′-TCA GTC GCT TCG CCG TCT CCT TC----N35----GCA CAA GAG GGA GAC CCC AGA GGG-3′)；将寡核苷酸文库分别与哈维氏弧菌、溶藻弧菌混合后进行SELEX筛选；SELEX筛选完成后对适配子富集文库进行克隆测序；选择测序结果中出现的高拷贝ssDNA，进行亲和特异性的验证，获得相应适配子。

摘要： 本发明涉及哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗的制备方法和应用，其特征是将哈维氏弧菌oppA基因和副溶血弧菌tdh2基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-oppA融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括：使基因tdh2和oppA克隆到线性载体pMD19-T Simple中；再通过双酶切技术，将该融合基因插入到真核表达载体pEGFP-N1中构建得到pEGFP-N1-tdh2-oppA融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；最后用常规的方法制成哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗悬液，以100μl/尾的剂量对鱼类进行免疫。本发明操作性强重复率高，安全无毒副作用，可对鱼类双重免疫保护，免疫效果较灭活疫苗、重组蛋白疫苗及普通DNA疫苗高。

摘要： 本发明提供了一种利用烈性哈维氏弧菌噬菌体快速鉴定哈维氏弧菌的方法及试剂盒，属于哈维氏弧菌菌种鉴定技术领域，所述方法包括以下步骤：1)将浓度为10

摘要： 本发明公开一种耗时短、效率高，灵敏度高，可直接应用于临床的同时检测水产动物中哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法。可同时检测哈维氏弧菌和鳗弧菌的双重PCR方法，制备被检测物的DNA模板并置于反应管中；将鳗弧菌引物和哈维氏弧菌引物放入a步骤的反应管中进行双重PCR反应，所述鳗弧菌引物的浓度为1-20pmol/μl，所述哈维氏弧菌引物的浓度为1-20pmol/μl；所述鳗弧菌引物引物序列为：Rpo-F:5’-AGACCAAGAGATCATGGATT-3’、Rpo-R:5’-AGTTGTTCGTATCTGGGATG-3’、所述哈维氏弧菌引物序列为：Tox-F:5’-GAAGCAGCACTCACCGAT-3’、Tox-R:5’-GGTGAAGACTCATCAGCA-3’。

摘要： 一组能同时识别哈维氏弧菌和溶藻弧菌的寡核苷酸序列及其制备方法，涉及哈维氏弧菌和溶藻弧菌的识别检测。寡核苷酸序列包括SEQ ID No.1～4。合成用于筛选的ssDNA寡核苷酸文库(5′-TCA GTC GCT TCG CCG TCT CCT TC----N35----GCA CAA GAG GGA GAC CCC AGA GGG-3′)；将寡核苷酸文库分别与哈维氏弧菌、溶藻弧菌混合后进行SELEX筛选；SELEX筛选完成后对适配子富集文库进行克隆测序；选择测序结果中出现的高拷贝ssDNA，进行亲和特异性的验证，获得相应适配子。

摘要： 本发明涉及哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗的制备方法和应用，其特征是将哈维氏弧菌oppA基因和副溶血弧菌tdh2基因通过6个核苷酸GAATTC相连成的tdh2-oppA融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；其制备方法包括：使基因tdh2和oppA克隆到线性载体pMD19-T Simple中；再通过双酶切技术，将该融合基因插入到真核表达载体pEGFP-N1中构建得到pEGFP-N1-tdh2-oppA融合基因蛋白真核表达工程载体疫苗；最后用常规的方法制成哈维氏弧菌和副溶血弧菌二联DNA疫苗悬液，以100μl/尾的剂量对鱼类进行免疫。本发明操作性强重复率高，安全无毒副作用，可对鱼类双重免疫保护，免疫效果较灭活疫苗、重组蛋白疫苗及普通DNA疫苗高。

摘要： 本发明提供了一株可产乳糖酶的哈维氏弧菌变种，菌株编号为BHNC004002，所述菌株于2021年10月11日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC No：M20211247。本发明还提供了一株哈维氏弧菌变种在表达乳糖酶中的应用，其表达的乳糖酶酶活温度和酶活PH值适应范围广。

摘要： 本发明涉及一种重组鞭毛蛋白在制备水产动物抗哈维氏弧菌药物中的应用；属于生物工程和免疫学技术领域，所述重组鞭毛蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述重组鞭毛蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述重组载体包括表达载体和所述重组鞭毛蛋白的基因；所述表达载体为原核表达载体pET32a；所述重组菌包括宿主细菌和所述重组载体；所述宿主细菌为Rosetta工程菌株。本发明的重组鞭毛蛋白制备的疫苗对哈维氏弧菌的免疫保护率达83.77％。

摘要： 本发明提供了一种筛选抗哈维氏弧菌病半滑舌鳎的标记组合和筛选半滑舌鳎抗病个体的方法，属于水产生物技术领域。所述标记组合包括微生物标记和宿主基因标记；所述微生物标记包括Alicyclobacillus pohliae、Phaeobacter inhibens和Propionibacterium acnes；所述宿主基因标记包括soat、meso1等基因。采用本发明提供的标记组合和筛选方法能够区分抗病和不抗病的半滑舌鳎个体，进而能够筛选抗病力强的半滑舌鳎优质良种。

摘要： 本发明属于生物技术领域，公开了一种哈维氏弧菌感染的生物标志物，具体公开了一种哈维氏弧菌感染的生物标志物，所述生物标志物包括氨基肽酶、钙转运ATP酶、组蛋白H2B和组蛋白H2A中的至少一种。本发明在感染哈维氏弧菌的病鱼的细菌感染特征中，对海洋硬骨鱼半滑舌鳎粘液中的DEPs进行了鉴定和开发，并进过qRT‑PCR验证，结果表明氨肽酶和钙转运ATP酶显著上调，组蛋白H2B和组蛋白H2A显著下调，可上述4种蛋白作为生物标志物来鉴定硬骨鱼是否感染哈维氏弧菌。