核心启动子

摘要： 为探明脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)Dnmt2(DNA methyltransf-erase2,Dnmt2)启动子对Dnmt2转录的调控作用,本研究利用染色体步移技术克隆得到脊尾白虾Dnmt2启动子,使用在线软件预测该基因启动子区域的转录调控元件及转录因子结合位点,通过构建一系列缺失表达载体,利用双荧光素酶报告基因检测技术鉴定了该基因核心启动子区,并对其启动子活性进行检测。结果表明,克隆的脊尾白虾Dnmt2启动子长度为1315 bp,转录起始位点“A”位于ATG上游236 bp,启动子区域含有多种转录因子结合位点,包括STAT3、SOX、NF-κB、E2F、GATA-1等,但缺乏CpG岛。双荧光素酶报告基因检测显示,Dnmt2核心启动子区位于-196~+81bp,对启动子区域进行活性检测发现,在该基因启动子-640~-452bp区域内可能存在促进基因表达的转录调控元件,而在-1160~-640bp区域可能存在抑制该基因表达的转录调控元件。本研究结果为进一步研究Dnmt2启动子的表达调控机制提供理论依据。

摘要： 甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C,MBL-C)是C型(Ca^(2+)依赖型)凝集素超家族的成员,其作为一种急性期蛋白,具有抗细菌感染的功能,参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1009 bp)的重要转录因子,探寻该基因的转录调控机制,本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1009 bp,采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1009 bp的启动子5′端侧翼缺失序列,克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中,结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点,利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体,转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明,海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304~-45 bp范围内,在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明,RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P<0.01)。结果提示,RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。

摘要： [目的]本文旨在扩增猪CYP 11A1基因编码区,鉴定并分析其核心启动子区,探究猪CYP 11A1基因的转录调控机制。[方法]通过基因克隆测序技术获得猪CYP 11A1基因编码区全序列并对其序列特征进行分析;利用荧光素酶活性鉴定猪CYP 11A1基因核心启动子区,再通过生物信息学分析猪CYP 11A1基因核心启动子区潜在的甲基化位点与转录因子结合位点;利用Western blot、RT-qPCR以及染色质免疫沉淀(ChIP)等分子生物学手段解析转录因子NR2C1对猪CYP 11A1基因的转录调控功能。[结果]猪CYP 11A1基因的编码区序列全长为1563 bp,在哺乳动物的进化过程中高度保守;猪CYP 11A1基因的核心启动子区为-398~-108 bp(转录起始位点为+1),序列特征分析发现猪CYP 11A1基因核心启动子区包含多个潜在的转录因子的结合元件,包括NR2C1、SOX10、NFIX和ELF5等;另外,转录因子NR2C1可促进猪CYP 11A1基因核心启动子区活性,同时显著上调体外培养的猪卵巢颗粒细胞中CYP 11A1基因的表达。[结论]哺乳动物CYP 11A1基因在进化过程中高度保守,转录因子NR2C1能够促进猪卵巢颗粒细胞中CYP 11A1基因的转录。

摘要： 目的 探讨不同核心启动子对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞重组蛋白表达的影响.方法 以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因,分别构建以巨细胞病毒(CMV)启动子、Natural CMV启动子、超级核心启动子(SCP)2和SCP3驱动的表达载体并转染CHO细胞,根据转染表达载体的不同将细胞分为对照组、Natural CMV组、SCP2组和SCP3组.应用荧光倒置显微镜观察报告基因EGFP的瞬时转染效率,流式细胞术检测各组第1代和第30代细胞中EGFP表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组第30代细胞中EGFP mRNA相对表达量.结果 对照组、Natural CMV组、SCP2组细胞的瞬时转染效率比较差异无统计学意义(P>0.05);SCP3组细胞的瞬时转染效率显著高于对照组(P0.05),对照组、Natural CMV组、SCP2组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平两两比较差异无统计学意义(P>0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP表达水平显著高于对照组、Natural CMV组和SCP2(P0.05),SCP2组、SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于对照组、Natural CMV组(P<0.05),SCP3组第30代多克隆细胞中EGFP mRNA相对表达量显著高于SCP2组(P<0.05).结论 SCP3能够显著提高CHO细胞中重组蛋白的表达及稳定性.

摘要： [目的]前期研究证实linc-NORFA作为母猪繁殖性状候选基因参与调控卵泡闭锁与卵泡颗粒细胞凋亡过程,进一步鉴定二花脸猪linc-NORFA核心启动子并分析其转录调控机制,为解析linc-NORFA介导猪卵泡闭锁的分子机制奠定理论基础并提供新的研究思路.[方法]采集二花脸猪耳组织样品并提取基因组DNA,利用PCR扩增和测序技术获得二花脸猪linc-NORFA 5′调控区序列;通过构建缺失表达荧光报告载体并利用荧光素酶活性试验鉴定二花脸猪linc-NORFA核心启动子;利用生物信息学分析二花脸猪linc-NORFA核心启动子区序列特征与潜在的转录因子结合位点;构建猪FOXO1真核生物表达载体并进一步采用Western blot、qRT-PCR以及荧光素酶活性试验分析转录因子FOXO1过表达对二花脸猪linc-NORFA转录的影响;利用染色质免疫沉淀(ChIP)技术鉴定转录因子FOXO1与二花脸猪linc-NORFA核心启动子区的结合能力.[结果]通过克隆测序与序列拼接共获得二花脸猪linc-NORFA 5′调控区序列1734 bp,其中包含两个潜在的CpG岛;利用荧光素酶活性试验证实linc-NORFA核心启动子位于-988—-684 bp(转录起始位点作为+1),生物信息学分析表明二花脸猪linc-NORFA核心启动子上包含多个转录因子的结合元件,例如ESR2、FOXO1、E2F1、BRCA1以及NFIC等;另外,ChIP试验还证实在猪卵巢颗粒细胞中FOXO1作为转录因子直接靶向结合在linc-NORFA的核心启动子区;进一步通过试验证实FOXO1过表达可显著下调linc-NORFA核心启动子区活性(P<0.01),同时显著抑制体外培养的猪卵巢颗粒细胞中linc-NORFA的表达(P<0.01).[结论]鉴定了二花脸猪linc-NORFA核心启动子区,同时证实FOXO1作为转录因子能够与linc-NORFA核心启动子区特异性结合,进而抑制后者的转录活性与表达.研究结果对探究linc-NORFA在猪卵泡闭锁过程中显著下调的分子机制具有重要意义.

摘要： 目的 分析HBV为C基因型的HBsAg阳性母亲核心启动子(BCP)区突变与宫内传播的关系.方法 2011年6月至2013年7月太原市第三人民医院妇产科HBsAg阳性母亲及新生儿399对.收集一般人口学资料,采用荧光定量PCR和电化学发光法分别检测母婴血清HBVDNA及HBV血清学标志物.选择HBV DNA载量≥106IU/ml的113例母亲为研究对象,其新生儿发生宫内传播的22例为宫内传播组,随机选取其中22例未发生宫内传播者作为对照组,母亲HBV DNA经提取、扩增、克隆、测序和序列编辑及剪接后与从NCBI下载的标准序列比对进行基因分型,最终选择C基因型的39例母亲进行突变分析.结果 HBV为C基因型(88.63％)的母亲共39例,其中宫内传播组19例,对照组20例.母亲A1762T/G 1764A双突变率在两组差异显著(7.53％ vs.27.72％,P＜0.001).非条件logistic回归分析显示A1762T/G1764A双突变可能是宫内传播的保护因素(aOR=0.065,95％CI:0.006～ 0.746,P=0.028).母亲A1762T/G1764A双突变可能与新生儿HBeAg水平有关(P=0.0S0).结论 HBV C基因型的HBsAg阳性母亲HBV DNABCP区A1762T/G1764A双突变可能降低HBV宫内传播的风险.

摘要： 为了丰富广温性潮间带底栖生物的温度调控机制研究,本研究采用荧光定量PCR法、亚硫酸氢盐处理基因组DNA结合甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)法及染色质免疫共沉淀法,对40°C热胁迫24 h后,近江牡蛎(Crassostrea rivularis)热休克蛋白90(Heat shock protein 90,Hsp90)的mRNA表达及其核心启动子甲基化的调控模式进行研究.结果显示:近江牡蛎成贝在40°C热胁迫24 h后,其消化腺、腮和心脏组织中Hsp90 mRNA表达显著升高(P0.05),灰度分析显示消化腺和心脏组织中的Hsp90核心启动子与RNA聚合酶Ⅱ(RNA polymeraseⅡ)结合增强,腮组织中的Hsp90核心启动子与RNA polymeraseⅡ出现弱结合.表明Hsp 90是近江牡蛎抵御高温胁迫的主要表达基因.

摘要： 目的 对人β位点裂解酶-1(BACE1)基因核心启动子进行克隆,构建携带BACEI基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞株并分析其转录活性.方法 提取人胚肾HEK293细胞基因组DNA,以其为模板,PCR扩增BACE1核心启动子(-691～+67)并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.21中,构建BACE1基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.21-BACE1,将其转染HEK293细胞(无启动子的pGL4.21载体作阴性对照),利用嘌呤霉素筛选稳定表达株后检测其转录活性.结果 成功扩增到758 bp的BACE1核心启动子,pGL4.21-BACE1载体经双酶切鉴定正确;HEK293细胞被该载体转染后经嘌呤霉素筛选得到6株稳定表达BACE1启动子的细胞株,其转录活性分别是对照组(HEK293/pGL4.21)的(134.7±22.3)、(634.0±13.9)、(437.6±6.1)、(805.5±5.5)、(492.8±59.1)、(1 021.1±46.6)倍(P=0.001).结论 成功构建了人BACE1基因启动子荧光素酶报告载体.

摘要： 目的 鉴定人不育-α-基序结构域和组氨酸/天冬氨酸残基双联体结构域包涵蛋白1 (SAMHD1)基因的核心启动子区域,研究SAMHD1的转录调控机制.方法 从HepG2细胞中提取基因组DNA,PCR扩增SAMHD1基因翻译起始位点上游937、667、553、399 bp片段.将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体,双酶切鉴定后将DNA条带切胶回收,再连入pGL3-Basic载体中,双酶切及DNA测序鉴定.将包含有4个片段的荧光素酶表达载体与pRL-TK共转染HepG2细胞,荧光素酶报告基因活性检测并分析4个片段的启动子活性.5'RACE鉴定SAMHD1在HepG2细胞中的转录起始位点.结果 电泳结果显示已经从HepG细胞中提取出基因组DNA.PCR扩增后电泳结果显示已经扩增出937、667、553、399 bp片段.双酶切后电泳结果显示成功将扩增出的4个片段连入pMD19-T载体.双酶切及DNA测序鉴定已成功构建荧光素酶表达载体pGL3-937、pGL3-667、pGL3-553和pGL3-399.荧光素酶报告基因活性检测显示SAMHD1核心启动子区域位于0～-399区域(ATG前一个碱基为-1).5'RACE结果显示SAMHD1在HepG2细胞中转录起始位点位于-101.结论 SAMHD1的核心启动子位于翻译起始位点上游-101～-399区域,为深入研究肝细胞中SAMHD1转录调控机制奠定了基础.%Objective To identify the core promoter region of human antiviral SAMHD1 gene.Methods Genomic DNA was extracted from HepG2 cells,then 937,667,553 and 399 bp fragments before the translation start site of SAMHD1 gene were amplified by PCR from genomic DNA.Four fragments were inserted into the pMD19-T vector.After enzyme digestion and electrophoresis,DNA bands were separated and ligated into pGL3-Basic vector.The pGL3 plasmids containing four fragments were further identified by double enzyme digestion and DNA sequencing.The luciferase expression vector containing four fragments was co-transfected with pRL-TK into HepG2 cells and the promoter activities of four fragments were analyzed by luciferase assay.The transcription initiation site of SAMHD1 in HepG2 cells was identified by 5'RACE.Results Electrophoretic results showed that genomic DNA had been successfully extracted from HepG cells.The results of electrophoresis after PCR amplification showed that 937,667,553 and 399 bp fragments had been amplified.The results of electrophoresis showed that four fragments were successfully inserted into pMD19-T vector.Double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that luciferase expression vectors pGL3-937,pGL3-667,pGL3-553 and pGL3-399 were successfully constructed.Luciferase activity analysis showed that the SAMHD1 core promoter region was located in the 0 ～-399 region(the first base before ATG was set as-1).5'RACE results showed that the transcription initiation site of SAMHD1 in HepG2 cells was located at-101.Conclusion The core promoter of SAMHD1 is located at-101 ～-399 region,which lays a foundation for further study of SAMHD1 transcriptional regulation in hepatocytes.

摘要： 为了解决真核生物启动子调控元件注释难题,以短柄草为研究对象,进行全基因组范围内的核心启动子模体预测.基于系统进化足迹技术,集成多种模体发现算法寻找启动子模体,并结合模体聚类算法筛选出真实模体.结果发现,在前10个最优的核心启动子模体中,有6个与已知的拟南芥模体一致,表明该方法的有效性.

摘要： @@目的：研究慢性HBV感染者抗病毒治疗前HBV基本核心启动子(BCP)突变和前C区(PreC)突变与HBeAg、HBVDNA水平和慢性肝病进展的关系。方法：收集283例慢性HBV感染者抗病毒治疗前的血清标本，其中慢性乙型肝炎(CHB) 185例，肝硬化(LC) 98例。采用PCR后直接测序法检测HBV BCP和PreC区突变，同时确定基因型。结论：前C区A1896突变与HBeAg的消失有关；年龄(≥45岁)、BCP T1762/ A1764双突变和HBV DNA高载量(≥105copies/ml)与肝硬化进展有关。

摘要： 目的：探讨乙型肝炎病毒基本核心启动子(BCP)及前C基因变异与慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平的关系。方法：应用基因芯片技术检测乙型肝炎病毒BCP及前C基因nt1762、nt1764、nt1896位碱基变化；应用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+调节性T细胞表达水平。结果：10例急性乙型肝炎、68例慢性活动性乙型肝炎、36例肝硬化、18例肝癌患者血清中HBVDNA nt1762、nt1764、nt1896位碱基突变率分别为0、41.2%、69.4%、100%；急性乙型肝炎、慢性活动性乙型肝炎、肝硬化患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平明显高于正常对照，P<0.01，肝癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平与正常对照比较P<0.05；HBeAg阳性感染者CD4+CD25+调节性T细胞水平明显高于HBeAg阴性感染者，前C/C变异株感染者CD4+CD25+调节性T细胞水平明显低于非变异株感染者，P<0.01。结论：前C/C基因变异与乙型肝炎病毒感染后肝病的慢性化及临床病情加重有关，与CD4+CD25+调节性T细胞表达相关。基因变异及免疫调节在乙型肝炎的发病机制中可能起着重要作用。

摘要： 本发明提供一种负链RNA病毒载体的制备方法，其特征在于使用含有巨细胞病毒增强子和鸡β-肌动蛋白启动子的启动子来诱导负链RNA病毒载体的基因组RNA的转录及与该基因组RNA形成核蛋白的负链RNA病毒蛋白质的表达。本发明的方法可以高效地制备具有高度安全性的负链RNA病毒载体。特别地，本发明的方法可用于制备缺失了包膜构成蛋白质基因的负链RNA病毒载体。

摘要： 本发明公开了一种具有启动苜蓿质体蓝素表达的光诱导特异性及叶片组织特异性启动子序列及一对快速克隆该启动子的引物。文献报道质体蓝素是一种与植物光合作用有关的质体蛋白，已被验证是一种光诱导表达蛋白；而该苜蓿质体蓝素启动子具有TATAbox、CAATbox等启动子必需元件、与光应答有关的特异元件G-box？(ctttatca)及与组织特异性表达有关的GT-1基序(aatccaca)等9个特异元件；并已通过试验验证此启动子具有一定光诱导特异性及叶片组织特异性，可驱动报告基因GUS在转基因苜蓿叶片中特异表达。而该引物是参照蒺藜苜蓿基因组相关序列而设计的特异性引物适用于采用PCR方法快速克隆苜蓿质体蓝素启动子。

摘要： 本发明公开了高通量筛选构巢曲霉启动子与启动子库的构建方法。本发明公开的高通量筛选构巢曲霉启动子的构建方法包括：A1)将n个表达盒分别导入丝状真菌中，获得n个重组丝状真菌；n大于等于2；n个表达盒中，每个表达盒均含有一个丝状真菌的待测启动子以及与之相连的报告基因；A2)将每个重组丝状真菌利用VinoTaste Pro处理，获得由n个重组丝状真菌的原生质体组成的启动子库，检测各个原生质体中报告基因的表达情况，报告基因得到表达的重组丝状真菌中所含待测启动子即为具有启动子活性的启动子，即实现丝状真菌启动子的筛选。本发明的方法对于研发具有工业价值或潜在的真菌天然药物具有实际意义。

摘要： 本发明涉及一种驱动基因在植物韧皮部表达的启动子及其应用，含有该启动子的表达载体及转基因植物材料，还涉及相关载体及转基因植物材料在植物基因功能研究中的应用。本发明从普通烟草基因组中获得了一段基因的启动子，随后构建了由该启动子驱动报告基因β‑葡萄糖苷酸酶基因表达的重组载体，将构建的重组载体转化普通烟草，经过多代抗性筛选，获得单拷贝插入的转基因纯合株系；对所获得的转基因纯合植株进行GUS组织化学染色实验，该启动子驱动GUS报告基因只在烟草的茎和叶脉的韧皮部中特异表达。该发明可应用于植物基因韧皮部定位表达、诱导目的基因在韧皮部中特异高效表达等相关基因功能研究。

摘要： 本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种蓝光调节启动子、蓝光调节启动子的融合基因、蓝光介导调节质粒及构建方法和应用。本发明提供了一种蓝光调节启动子PC120‑CYC。本发明利用基于此合成的融合基因和蓝光介导调节质粒验证了蓝光诱导调节方式在解脂耶氏酵母的基因表达与调控过程中的可行性。本发明提供的蓝光介导调节质粒非常简洁紧凑，还能够在解脂耶氏酵母单细胞水平上被蓝光诱导。蓝光介导调节质粒的应用中，无毒无害、响应快速、操作简便、可逆性好，能够有效推动解脂耶氏酵母在食品、医药、农产品加工等领域的广泛应用。

摘要： 本发明提供一种负链RNA病毒载体的制备方法，其特征在于使用含有巨细胞病毒增强子和鸡β－肌动蛋白启动子的启动子来诱导负链RNA病毒载体的基因组RNA的转录及与该基因组RNA形成核蛋白的负链RNA病毒蛋白质的表达。本发明的方法可以高效地制备具有高度安全性的负链RNA病毒载体。特别地，本发明的方法可用于制备缺失了包膜构成蛋白质基因的负链RNA病毒载体。

摘要： 本发明公开了一种具有启动苜蓿质体蓝素表达的光诱导特异性及叶片组织特异性启动子序列及一对快速克隆该启动子的引物。文献报道质体蓝素是一种与植物光合作用有关的质体蛋白，已被验证是一种光诱导表达蛋白；而该苜蓿质体蓝素启动子具有TATAbox、CAATbox等启动子必需元件、与光应答有关的特异元件G-box(ctttatca)及与组织特异性表达有关的GT-1基序(aatccaca)等9个特异元件；并已通过试验验证此启动子具有一定光诱导特异性及叶片组织特异性，可驱动报告基因GUS在转基因苜蓿叶片中特异表达。而该引物是参照蒺藜苜蓿基因组相关序列而设计的特异性引物适用于采用PCR方法快速克隆苜蓿质体蓝素启动子。

摘要： 一种响应缺铁胁迫的诱导型启动子GmbHLH47启动子及其应用，属于基因工程技术领域。为了提高植物的抗铁胁迫能力，本发明提供了一种响应缺铁胁迫的诱导型启动子GmbHLH47启动子，该启动子从大豆GmbHLH47基因启动子区域克隆得到，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。通过对该启动子区的分析发现其中含有多种可能参与多重逆境胁迫的顺式作用元件。当用缺铁培养基对转基因植株进行处理后，发现GmbHLH47启动子可以增加外源基因GUS的表达，致使转基因植株的染色加深，证明GmbHLH47启动子受缺铁胁迫诱导。作为一个受缺铁胁迫诱导的启动子，其启动子区域和上游调控序列在基因工程和提高植物抵抗缺铁方面起着重要作用。

摘要： 本申请涉及新的启动子和使用所述启动子生产所需物质的方法。

摘要： 本公开属于生物技术和基因工程技术领域，具体涉及谷氨酸棒杆菌启动子突变体文库的构建方法、具有启动子活性的多核苷酸，包含具有启动子活性的多核苷酸的启动子突变体文库、转录表达盒、重组表达载体、重组宿主细胞，以及调控目标基因转录的方法、制备蛋白的方法和生产目标化合物的方法。本公开首先提供了谷氨酸棒杆菌启动子突变体文库的构建方法，通过该方法可以获得一系列高活性的启动子突变体，通用性广，为目标基因的改造提供了具有高启动子活性的丰富的启动子元件。