成釉细胞

摘要： 在牙釉质发育过程中,成釉细胞过早衰老和凋亡是遗传性牙釉质发育不全的重要原因。沉默信息调节因子2相关酶1(silent matingtype information regulator 2 homolog 1,Sirt1)是一种依赖烟酰胺腺苷二核苷酸(nico⁃tinamide adenine dinucleotide,NAD+)的脱乙酰酶,已被广泛报道参与调节细胞衰老。本文就Sirt1调控上皮细胞衰老研究进展作一综述,从Sirt1的结构特点入手,阐述Sirt1与衰老的关系。研究表明,当上皮细胞受到外界刺激时,Sirt1通过多种途径影响上皮细胞的衰老:Sirt1参与调节线粒体功能和代谢稳态,线粒体功能障碍会影响细胞衰老表型;端粒长度与衰老呈负相关,Sirt1调节端粒延伸所需的端粒逆转录酶的表达,从而正向调节端粒的稳态;DNA受损后会经历损伤修复,未修复的DNA损伤会引起细胞衰老,Sirt1/p53通路可通过减轻DNA损伤抑制上皮细胞衰老;衰老细胞是慢性炎症的来源,慢性炎症也可以多种方式促成衰老,Sirt1通过缓解炎症症状抑制上皮细胞衰老。未来可重点关注Sirt1对成釉细胞衰老的影响,探究其对成釉细胞的具体作用机制,以期在釉质发育不全病因及治疗中找到突破。

摘要： 细胞极化是前体细胞分化为成牙本质细胞的重要步骤,是细胞发挥生理功能的结构基础,诱导间充质干细胞极化定向分化为成牙本质细胞是实现牙髓-牙本质复合体再生的关键。细胞周期蛋白42(CDC42)是细胞极性化的开关分子,其参与成牙本质细胞和成釉细胞极化的作用机制尚不明确,且相关研究较少。本文回顾了成牙本质细胞的极化以及CDC42在其细胞极化方面的相关研究,为成牙本质细胞分化及牙髓-牙本质再生研究提供基础。

摘要： 目的:研究小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中整合素β1和层黏连蛋白受体1(LAMR1)的表达模式,探讨二者在小鼠磨牙牙胚组织发育过程中可能的作用机制及其意义。方法:取胚胎期第13.5天(E13.5)、E14.5、E16.5、E18.5和出生后5 d(PN5)的小鼠,分别作为E13.5、E14.5、E16.5、E18.5和PN5组,每组5只,分离小鼠头部,固定、脱钙、脱水、包埋和切片,HE染色观察各阶段小鼠牙胚组织形态表现,免疫组织化学染色观察小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中整合素β1和LAMR1蛋白的表达分布情况和表达水平。结果:HE染色,E13.5组小鼠牙胚组织发育处于蕾状期,上皮细胞突入到外胚间充质中,形成上皮芽,状如花蕾;E14.5组小鼠牙胚组织发育处于帽状期,上皮芽体积增大,称为帽状期成釉器,成釉器周围外胚间充质细胞密度增加,形成牙乳头;E16.5组小鼠牙胚组织发育处于钟状早期,成釉器进一步长大,形似吊钟,初步具有牙尖形态;E18.5组小鼠牙胚组织发育处于钟状晚期,成釉器进一步发育,内釉上皮细胞向前成釉细胞分化,形态由立方状变为高柱状;PN5组小鼠牙冠发育完成,形成颈环、上皮根鞘和上皮隔等结构,成釉细胞和成牙本质细胞分化成熟,呈高柱状整齐排列,已有釉质和牙本质形成。免疫组织化学染色,整合素β1和LAMR1蛋白在小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织中的上皮和牙乳头均有表达,且在各部位的表达强度随细胞分化的进程整体呈逐渐增强的趋势。PN5组小鼠牙胚组织成釉细胞中整合素β1蛋白表达水平高于E14.5、E16.5和E18.5组小鼠牙胚组织内釉上皮细胞/前成釉细胞(P<0.05);PN5组小鼠牙胚组织成牙本质细胞中整合素β1蛋白表达水平高于E14.5、E16.5和E18.5组小鼠牙胚组织前成牙本质细胞(P<0.05);E16.5和E18.5组小鼠牙胚组织内釉上皮细胞/前成釉细胞中LAMR1蛋白表达水平高于E14.5组小鼠牙胚组织内釉上皮细胞(P<0.05),且低于PN5组小鼠牙胚组织的成釉细胞(P<0.05);E18.5组小鼠牙胚组织前成牙本质细胞中LAMR1蛋白表达水平高于E16.5组小鼠牙胚组织前成牙本质细胞(P<0.05),且低于PN5组小鼠牙胚组织成牙本质细胞(P<0.05)。PN5组小鼠牙胚组织牙尖处较为成熟的成牙本质细胞中整合素β1和LAMR1蛋白表达水平高于牙尖之间和牙颈部尚未完全成熟的成牙本质细胞(P<0.05)。结论:整合素β1和LAMR1表达于小鼠磨牙发育不同阶段牙胚组织的基底膜、(前)成釉细胞和(前)成牙本质细胞中,二者可能参与细胞外基质信号的转导,并在成釉细胞和成牙本质细胞的分化和极性形成过程中起促进作用。

摘要： 氟斑牙是在牙齿发育阶段机体摄入过量的氟所引起的牙釉质发育不全,为慢性氟中毒病初期最典型的症状,其流行趋势具有一定的地域性,常发生于6岁前有高氟区定居史的患者.内质网是机体蛋白质加工、合成、运输的重要场所,也是细胞内重要的钙储存库之一.当细胞处于病毒感染、营养剥夺、钙超载、氧化应激等环境时,会造成内质网功能障碍,折叠蛋白能力下降,最终使未折叠蛋白在内质网内积聚产生内质网应激.研究发现,氟斑牙的形成可能与成釉细胞发生内质网应激有关.本文就氟化物诱导成釉细胞蛋白酶分泌减少、钙超载和氧化应激这3个因素导致内质网应激进行综述.

摘要： 目的 探索低水平的钙对成釉细胞生物学特性的影响.方法 用标准DMEM培养基培养大鼠原代成釉细胞,培养5d后,RT-PCR及免疫组化对其进行鉴定,然后分别加入含Ca2+0、0.6、1.2mmoL/L及100mL/L胎牛血清的不同钙浓度DMEM培养基.48h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT观察细胞增殖活力,Annexin V-PI观察细胞凋亡情况,Real time-PCR检测细胞釉原蛋白及激肽释放酶-4(KLK4)的mRNA表达水平.结果 标准DMEM培养基培养5d后,细胞呈铺路样排列,RT-PCR显示细胞釉原蛋白、KLK4均有表达;免疫组化显示多数细胞釉原蛋白染色阳性.不同浓度钙干预48h后,1.2mmoL/L Ca2+组部分细胞较0mmoL/L和0.6mmoL/L Ca2+组胞核密度高、透光性差、高柱状细胞数目多.随着培养基中Ca2+浓度降低,MTT显示成釉细胞增殖活性增加(P<0.01);Annexin V-PI检测显示凋亡细胞百分率降低,1.2mmoL/L Ca2+组与0mmoL/L Ca2+组间差异具有统计学意义(P<0.05);Real time-PCR显示细胞釉原蛋白及KLK4 mRNA表达水平均降低,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 钙缺乏可能抑制成釉细胞分化,进而影响釉质矿化成熟.

摘要： 目的 研究不同程度氟牙症大鼠模型切牙成釉细胞的自噬及凋亡水平,探讨自噬在氟牙症大鼠成釉细胞凋亡中的作用.方法 48只4周龄Wistar大鼠随机分为6组,通过饮水加75 mg/L和150 mg/L氟离子和腹腔注射10 mg/kg 3?甲基腺嘌呤(3?methyladenine,3?MA)的方法建立氟牙症大鼠模型及自噬抑制大鼠模型.观察成釉细胞形态改变和自噬相关蛋白Bec?lin1、自噬底物蛋白p62、微管相关蛋白轻链3(microtubule?associated protein light chain 3,LC3)及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase?3)蛋白表达水平,采用SPSS 22.0软件包对免疫组化定量结果进行统计学分析.结果 随着饮水氟离子含量增加,切牙氟牙症表现明显,成釉细胞形态结构紊乱.免疫组化结果显示饮用150 mg/L含氟水的大鼠成釉细胞中Beclin1、LC3和Cleaved Caspase?3蛋白表达量增加,p62表达量下降,比饮用75 mg/L含氟水组大鼠改变更加明显.同时,在相同饮水条件下,3?MA抑制自噬后成釉细胞中Beclin1和LC3表达量下降,p62表达量升高,Cleaved Caspase?3蛋白水平明显增加.结论 氟牙症大鼠成釉细胞中存在自噬,高浓度氟刺激对其诱导作用加强,并且自噬在一定程度上可以保护氟牙症大鼠成釉细胞免受凋亡.

摘要： 目的 研究硒对小鼠氟斑牙发生的拮抗作用,并检测其对自噬相关基因Beclin1表达的影响.方法 将36只2月龄费城癌症研究所(institute of cancer research,ICR)雄鼠,随机分为3组,每组12只,建立饮水型氟斑牙模型,用亚硒酸钠(Na2SeO3)进行干预,具体分组为:对照组(ddH2O)、氟化钠组(200 mg/L NaF)、硒组(2 mg/L Na2SeO3+200 mg/L NaF),喂养8周后,观察氟斑牙发生情况,记录其长度并计算小鼠下颌切牙增长率;分离下颌骨后,进行micro-CT扫描,测量小鼠切牙唇侧硬组织厚度;H-E染色观察成釉细胞的变化,免疫组化方法检测Beclin1的表达.结果 氟化钠组氟斑牙检出率为100％,表现为小鼠切牙白垩色改变;硒组未发现明显氟斑牙症状,形态与色泽介于正常与极轻度之间;micro-CT结果显示,氟化钠组切牙唇侧硬组织厚度比对照组薄,硒组介于两者之间(P＜0.01);H-E结果显示,氟化钠组成釉细胞排列紊乱,极性消失;而对照组与硒拮抗组成釉细胞呈栅栏状,排列整齐规则;免疫组化结果显示,3组中成釉细胞从分泌期到成熟期Beclin1的阳性表达均呈逐渐增强的表达趋势,且Beclin1在氟化钠组表达明显强于正常组,硒组介于两者之间.结论 2 mg/L硒离子浓度对氟斑牙的发生有一定拮抗作用;其作用机制可能是通过抑制成釉细胞自噬的发生,进而减轻过量氟对小鼠切牙毒性影响.

摘要： 牙齿发育依赖于外胚层来源的上皮组织与神经嵴来源的间充质组织不断相互作用和相互诱导.在釉质发育的前分泌阶段,牙源性上皮与牙囊细胞,即前成牙本质细胞被基底膜分隔,牙囊细胞分化为成牙本质细胞进而发育为牙本质,而上皮细胞分化为成釉细胞,分泌釉基质进一步发育为釉质.基于以上研究,笔者猜想,牙囊细胞可能作用于相邻的上皮细胞,进而影响釉质发育.釉质发育受上皮与间充质相互作用的调控，牙囊细胞能够促进成釉细胞的分化。

摘要： 本研究旨在观察不同剂量氟化物对成釉细胞发育的四个时期——分泌前期、分泌期、过渡期和成熟期的形态学影响，并分析氟作用下不同时期成釉细胞中内质网应激相关因子的表达特点，为揭示氟斑牙的发生机制提供实验基础。实验结果表明染氟可以破坏大鼠成釉细胞的形态和分化;一定浓度的氟暴露激发了染氟大鼠切牙中成釉细胞的内质网应激，并随着氟浓度的增加而加剧;氟对不同发育时期的成釉细胞有不同的影响。

摘要： 牙发育有赖于上皮及其下间充质之间的序列性交互性的诱导信号.因此,目前牙组织再生工程的各种尝试都有着共同特点,即重建和模仿牙发育过程中细胞和信号分子的变化.观察体外培养的人牙源性间充质细胞(胚胎牙乳头细胞)对非牙源性口腔上皮的成釉向分化的诱导潜能以及生长因子在这个过程中的作用,以实现成釉细胞的再生.非牙源性口腔上皮分别与人胚胎牙源性间充质细胞或成人牙髓细胞进行二维共培养或在MatrigelTM中三维共培养.二维共培养1周后,收集细胞,提RNA,qPCR检测细胞角蛋白14和釉原蛋白mRNA的表达水平.同时包埋三维共培养的MatrigelTM细胞复合体,冰冻切片后免疫荧光检测细胞角蛋白14和釉原蛋白的表达.此外,qPCR检测人胚胎牙乳头细胞和成人牙髓细胞FGF3,WNT5a的表达水平,同时利用高通量qPCR构建了人胚胎牙乳头细胞核成人牙髓细胞的生长因子表达谱.体外培养的胚胎牙乳头细胞能够诱导非牙源性口腔上皮细胞向能够表达釉原蛋白的细胞分化，可能是钟状后期牙源性间充质表达FGF3和WNT5a对上皮细胞产生诱导作用。

摘要： 本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

摘要： 提供能保存细胞的组合物。本发明的组合物包含微小气泡。

摘要： 本发明涉及一种红细胞除去装置(100)，具备：血液容器(10)，其容纳血液；以及红细胞除去器(11)，其从血液容器(10)接受血液，并从血液至少部分地除去红细胞。

摘要： 提供一种细胞的培养方法，在细胞培养器内向细胞导入因子，并在与上述细胞培养器相同的细胞培养器内培养导入了上述因子的细胞。另外，提供一种单核细胞的回收方法，其包括：对血液进行处理，制作至少部分地除去了红细胞而得到的处理血液；对处理血液进行稀释；使稀释后的处理血液中所含的单核细胞沉降；除去稀释后的处理血液的上清液；以及回收单核细胞。

摘要： 本申请提供了一种制备NKT细胞刺激性树突细胞的方法，该方法包括：将单个核细胞置于培养容器内并通过保持该培养容器静置而使得所述单个核细胞中的一些沉降于所述容器的底表面上的步骤；将除已沉降于所述培养容器的底表面上的细胞以外的悬浮细胞去除的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使已沉降于所述底表面上的细胞中的单核细胞分化为未成熟树突细胞的步骤；通过向所述培养容器内添加预定的因子而使所述未成熟树突细胞成熟；和通过向所述培养容器内添加α‑半乳糖神经酰胺而将成熟树突细胞诱导为NKT细胞刺激性树突细胞的步骤。

摘要： 含有细胞细胞外基质的制造方法包括：在具有前端开口部的移液管的内部准备含有(i)细胞外基质前体以及(ii)细胞或者细胞团的细胞外基质溶液；排出上述细胞外基质溶液，在上述移液管的前端开口部形成上述细胞外基质溶液的液滴；使上述移液管的前端开口部接近细胞培养容器的培养面，按照使上述移液管的前端开口部不与上述培养面接触的方式将上述液滴载置于上述培养面上；使上述移液管的前端开口部从上述培养面远离，将上述液滴与上述移液管的前端开口部分离；以及使上述细胞外基质溶液凝胶化，形成含有细胞细胞外基质。

摘要： 本发明公开了一种腺病毒载体介导的立体状态牙胚成釉细胞基因转染方法，包括以下步骤：将分离到的初生牙胚牙尖向上置于Transwell内置小室的微孔滤膜上，在包含牙胚培养液下培养；使用含AAV-GFP基因的传染性病毒颗粒，感染培养的牙胚；感染24小时后在牙胚的表层出现绿色荧光，结合釉原蛋白的免疫染色，在牙胚定位GFP和釉原蛋白共表达的重组牙胚成釉细胞。在Transwell系统体外培养牙胚的成釉细胞保持着立体状态，成釉细胞与周围的基质和相关细胞存在互动，而这种模式下基因转染成釉细胞成功，有利于从三维的角度研究牙胚中成釉细胞的基因功能。

摘要： 本发明提供一种环状RNA在诊断和/或治疗成釉细胞瘤中的应用，所述环状RNA的circbase ID为：has‑ circRNA‑ 100375，其序列如SEQ NO:1所示，是由如该序列所示的核苷酸序列收尾连接成的环状结构。该环状DNA可作为成釉细胞瘤诊断和/或治疗的分子标志物。本研究在分子机制层面从非编码RNA hsa‑circRNA‑100375入手，验证了其在成釉细胞瘤侵袭性生长中发挥的作用，为成釉细胞瘤的诊断和治疗提供新的发展方向。

摘要： 本发明涉及一种成釉细胞的分离培养方法，具体地说，是涉及一种采用体视显微镜下分离牙胚组织和酶消化法分选相结合分离培养高纯度成釉细胞的方法。该方法的步骤为：体视显微镜下分离小鼠牙胚后，采用单克隆法原代培养成釉细胞，用更换培养液类型、差别消化法进行纯化，在倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况，用免疫荧光法检测细胞表达釉原蛋白、成釉蛋白和细胞角蛋白14的情况。原代培养的成釉细胞生长良好，纯化后间充质细胞明显减少，上皮细胞呈片状生长，表达角蛋白，釉原蛋白以及成釉蛋白。体外培养的人成釉上皮细胞在较长时间内可保持其特性。建立人牙源性上皮细胞的体外培养方法，为牙齿组织工程研究提供可靠的种子细胞来源。

摘要： 本发明公开了一种腺病毒载体介导的立体状态牙胚成釉细胞基因转染方法，包括以下步骤：将分离到的初生牙胚牙尖向上置于Transwell内置小室的微孔滤膜上，在包含牙胚培养液下培养；使用含AAV－GFP基因的传染性病毒颗粒，感染培养的牙胚；感染24小时后在牙胚的表层出现绿色荧光，结合釉原蛋白的免疫染色，在牙胚定位GFP和釉原蛋白共表达的重组牙胚成釉细胞。在Transwell系统体外培养牙胚的成釉细胞保持着立体状态，成釉细胞与周围的基质和相关细胞存在互动，而这种模式下基因转染成釉细胞成功，有利于从三维的角度研究牙胚中成釉细胞的基因功能。