牙囊细胞

摘要： 目的探讨在大鼠牙囊细胞(DFC)成骨分化时Notch信号的表达情况。方法分离、培养及纯化DFC,在光镜下观察原代及第3代DFC的形态。对第3代DFC进行波形蛋白(Vimentin)、角蛋白-14(CK-14)免疫荧光染色鉴定其组织来源。将第3代DFC分为对照组(基础培养液进行培养)和成骨诱导组(成骨诱导液进行培养),28 d后进行茜素红染色,鉴定DFC的成骨分化能力。应用定量逆转录聚合酶链反应检测两组DFC的Notch信号表达情况。结果成功分离、培养及纯化DFC。DFC的胞体呈长梭形,呈典型成纤维细胞表型,Vimentin阳性表达,CK-14阴性表达,表明DFC来源于间充质且无上皮污染。培养28 d后成骨诱导组DFC较对照组茜素红染色更加明显,表明DFC在成骨诱导液诱导下可向成骨方向分化。成骨诱导组DFC经28 d培养后Notch信号表达量呈下降趋势,且明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论DFC具有间充质干细胞的特性,在成骨分化过程中Notch信号通过负反馈回路调节DFC的成骨分化。

摘要： 目的:模拟牙周膜/牙骨质发育微环境,构建一种新型的赫特维希上皮根鞘(HERS)细胞-牙囊细胞(DFC)直接混合共培养细胞膜片,为上皮参与牙周膜/牙骨质再生的调控提供一种新策略。方法:将处于同一牙胚、同一牙根发育期的HERS细胞与DFC,直接混合共培养后制备成细胞膜片,观察其形态学的特点,免疫组化染色检测共培养细胞膜片与DFC膜片之间成牙周膜/牙骨质能力的差异。结果:成功构建出牙源性上皮-间充质共培养细胞膜片,共培养细胞膜片层数较多,能分泌较多的细胞外基质。免疫组化染色结果显示,共培养细胞膜片骨钙蛋白(OCN)、Ⅰ型胶原蛋白(COLI)表达阳性,而DFC膜片的OCN、COLI表达则为阴性,共培养细胞膜片碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)表达较DFC膜片更强。结论:共培养细胞膜片成牙周膜/牙骨质能力更强,HERS细胞在牙周膜/牙骨质发育过程中的调控作用不可忽视。

摘要： 目的 探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理牙囊细胞(dental folic cells,DFCs)外泌体(exo?somes,Exos)在不同浓度条件下对牙周炎患者的牙周膜细胞(periodontal ligament cells of periodontitis,p?PDLCs)成骨分化能力的影响,为牙周病的防治提供基础.方法 组织块酶消化法培养DFCs及p?PDLCs,提取经250 ng/mL LPS刺激DFCs 24 h后的Exos,Exos的表征通过透射电镜扫描、粒径分析以及蛋白印记法进行鉴定;通过逆转录?聚合酶链反应(reverse transcription?polymerase chain reaction,RT?PCR)、茜素红染色等方法检测10μg/mL以及100μg/mL浓度的Exos对p?PDLCs成骨向分化能力的影响.结果 LPS预处理的DFCs外泌体(L?Exos)为直径30～100 nm之间的囊泡样结构,高表达CD63和相互作用蛋白X(ALG?2 interacting protein?X,Alix).100μg/mL L?Exos上调p?PDLCs骨膜蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达(P<0.05);而10μg/mL L?Exos仅上调p?PDLCs的转化生长因子?β1(transforming growth factor?β1,TGF?β1)基因的表达(P<0.01).在成骨诱导7 d后,L?Exos组的矿化结节明显多于对照组(P<0.01),并且100μg/mL L?Exos组的矿化效果更佳(P<0.01).结论 100μg/mL L?Exos较10μg/mL L?Exos更有利于增强p?PDLCs成骨向分化能力.

摘要： 目的探究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理牙囊细胞(dental folic cells,DFCs)外泌体(exo⁃somes,Exos)在不同浓度条件下对牙周炎患者的牙周膜细胞(periodontal ligament cells of periodontitis,p⁃PDLCs)成骨分化能力的影响,为牙周病的防治提供基础。方法组织块酶消化法培养DFCs及p⁃PDLCs,提取经250 ng/mL LPS刺激DFCs 24 h后的Exos,Exos的表征通过透射电镜扫描、粒径分析以及蛋白印记法进行鉴定;通过逆转录⁃聚合酶链反应(reverse transcription⁃polymerase chain reaction,RT⁃PCR)、茜素红染色等方法检测10μg/mL以及100μg/mL浓度的Exos对p⁃PDLCs成骨向分化能力的影响。结果LPS预处理的DFCs外泌体(L⁃Exos)为直径30~100 nm之间的囊泡样结构,高表达CD63和相互作用蛋白X(ALG⁃2 interacting protein⁃X,Alix)。100μg/mL L⁃Exos上调p⁃PDLCs骨膜蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原基因的表达(P<0.05);而10μg/mL L⁃Exos仅上调p⁃PDLCs的转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)基因的表达(P<0.01)。在成骨诱导7 d后,L⁃Exos组的矿化结节明显多于对照组(P<0.01),并且100μg/mL L⁃Exos组的矿化效果更佳(P<0.01)。结论100μg/mL L⁃Exos较10μg/mL L⁃Exos更有利于增强p⁃PDLCs成骨向分化能力。

摘要： 目的:研究miRNA101在人牙囊细胞(DFCs)成骨分化过程中的作用及探讨其调节成骨分化的相关机制.方法:体外培养DFCs,转染miRNA101诱导miRNA101表达,提取总RNA和miRNA,RT-PCR检测miRNA-101表达情况及成骨细胞分化相关基因ALP、OCN、Runx2、SATB2的水平,采用LabAssayTM ALP检测试剂盒检测碱性磷酸酶ALP活性.结果:miRNA-101能够调控DFCs的成骨分化.体外转染miRNA101模拟物后,碱性磷酸酶活性增加,并且成骨分化相关基因及成骨转录因子SATB2表达上调.结论:体外诱导DFCs成骨分化后miRNA101的表达升高.体外转染增加miRNA101的表达能够促进人类牙囊细胞的成骨分化.

摘要： 目的 通过建立特发性甲状旁腺功能减退症(idiopathic hypoparathyroidism,IHP)动物模型,探究生长发育期甲状旁腺功能减退对牙萌出及牙釉质发育的影响,以及IHP影响牙萌出的作用机制.方法 选择出生后第7天(postnatal 7,P7;P14、P25、P38含义以此类推)的SD大鼠共48只,采用随机数字表法分为IHP组和假手术组,每组24只,用纳米碳负显影技术对IHP组大鼠行双侧甲状旁腺切除术(parathyroidectomy,PTX),对假手术组大鼠应用同样技术但不行PTX,术后检测大鼠血清钙、磷、甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)浓度,建立IHP模型.P14、P25及P38时分别处死大鼠并收集下颌骨样本,每组每个时点6只,通过显微CT分析下颌第三磨牙根方牙槽骨的骨微结构参数、下颌第三磨牙萌出高度及牙釉质体积.制备组织学石蜡切片,通过免疫组织化学染色检测大鼠第三磨牙周围牙槽骨中成骨标志物Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、成骨细胞特异性转录因子(osterix,OSX)的分布及表达,抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测破骨细胞数量.分离下颌第三磨牙,显微硬度仪检测牙釉质硬度,扫描电镜观察牙釉质显微结构.另收集P14大鼠下颌骨,每组6只,体外分离培养牙囊细胞进行细胞集落形成实验.诱导牙囊细胞成骨向分化后用碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测矿化程度.提取下颌骨组织及牙囊细胞mRNA,实时荧光定量PCR检测与成骨、破骨细胞分化和功能有关的基因及甲状旁腺激素受体-1(parathyroid hormone receptor 1,PTH1R)基因的表达.结果 通过双侧PTX成功建立大鼠IHP模型,术后IHP组大鼠血清钙及PTH浓度显著降低、血清磷浓度显著升高(P＜0.01).IHP组下颌第三磨牙牙釉质体积[(4.58±0.24)mm3]较假手术组[(5.22±0.46)mm3]显著减小(P＜0.05),牙釉质表面釉柱结构排列紊乱,显微硬度[(167.76±21.86)MPa]较假手术组[(223.92±10.94)MPa]显著降低(P＜0.01).IHP组下颌第三磨牙萌出高度显著低于假手术组(P＜0.05),根方牙槽骨骨体积分数、骨小梁数量均较假手术组显著减小(P＜0.05),根方牙槽骨中RUNX2、OSX蛋白表达均较假手术组显著降低(P＜0.05),冠方牙槽骨破骨细胞数量[(3.86±1.07)个]显著低于假手术组[(6.43±1.27)个](P＜0.01).IHP组牙囊细胞增殖活性较假手术组显著降低(P＜0.01).诱导成骨分化后,IHP组牙囊细胞矿化能力较假手术组减弱.与假手术组相比,IHP组下颌骨组织中RUNX2、OSX等成骨相关基因表达水平均显著降低(P＜0.05),核因子κB活化因子配体/骨保护素比值亦显著降低(P＜0.01),PTH1R的基因表达显著降低(P＜0.05).同时,IHP组牙囊细胞中RUNX2、OSX等成骨相关基因表达、核因子κB活化因子配体/骨保护素比值及PTH1R的基因表达也较假手术组显著降低(P＜0.01).结论 IHP可能通过抑制PTH/PTH1R信号通路,进而抑制牙囊细胞的增殖及成骨向分化、影响破骨细胞分化及功能,从而使牙萌出过程中牙胚周围牙槽骨的骨改建受阻,最终导致牙齿迟萌.

摘要： 目的 探讨Notch信号通路对大鼠牙囊细胞(rDFCs)增殖和成骨分化的调控作用.方法 体外培养rDFCs,经细胞形态、免疫组化鉴定rDFCs后,使用10 ng/L大鼠重组Jagged1蛋白、10μmol/L DAPT溶液、对照组培养液作用于细胞,CCK-8检测增殖能力;利用碱性磷酸酶、茜素红染色分析rDFCs成骨分化能力;Western Blot检测关键蛋白Notch受体胞内段(NICD)、碱性磷酸酶(ALP)、骨形成蛋白2(BMP2).结果 rDFCs呈成纤维细胞形态;rDFCs中波形丝蛋白明显表达,角蛋白未表达;诱导组ALP染色、茜素红染色均强于对照组;Jagged1第4天后能明显促进rDFCs细胞增殖,DAPT第4天后能显著抑制rDFCs细胞增殖(P<0.05).Jagged1组ALP、BMP2的表达趋势下降,DAPT组ALP、BMP2的表达趋势升高(P<0.05).结论 激活Notch信号通路可促进rDFCs的增殖,抑制Notch信号通路可促进rDFCs的成骨分化.

摘要： 牙齿发育依赖于外胚层来源的上皮组织与神经嵴来源的间充质组织不断相互作用和相互诱导.在釉质发育的前分泌阶段,牙源性上皮与牙囊细胞,即前成牙本质细胞被基底膜分隔,牙囊细胞分化为成牙本质细胞进而发育为牙本质,而上皮细胞分化为成釉细胞,分泌釉基质进一步发育为釉质.基于以上研究,笔者猜想,牙囊细胞可能作用于相邻的上皮细胞,进而影响釉质发育.釉质发育受上皮与间充质相互作用的调控，牙囊细胞能够促进成釉细胞的分化。

摘要： 在发育过程中或在受到生理和病理刺激的反应过程中,牙槽骨都经历了不断改建的过程.但是,关于牙槽骨发育的具体机制和过程尚不清楚.本研究旨在提高对牙槽骨形成过程的认识和骨形成蛋白(Bmps)在这个过程中的作用.本实验观察胚胎期(E)第13.5天到出生后(PN)第15.5天小鼠牙槽骨的发育过程.实验结果发现牙槽骨开始发育的时间是E14.5.将用Bmp2、Bmp4、Noggin、BSA分别预处理后的PN7.5小鼠磨牙胚移植于成年小鼠的背部皮下进行培养后发现用Bmp2、Bmp4预处理的牙胚周围形成更多的牙槽骨,而用Noggin处理的牙胚周围没有骨质形成.用real-time RT-PCR检测小鼠磨牙牙胚周围牙囊细胞中基因的表达水平后发现Bmp2、Bmp4组的牙囊细胞中Runx2、BSP和Ocn的表达水平明显高于用BSA处理的对照组,而Noggin组的明显降低.研究结果表明牙囊细胞参与牙槽骨的形成,Bmp2/4能够促进牙槽骨的发育.

摘要： 本发明提供了一种牙囊干细胞的鉴定方法、引物组及试剂盒，本发明根据牙囊干细胞的蛋白组学结果，针对HEXB基因，设计特异性引物，将所述特异性引物用于牙囊干细胞与其他相似来源干细胞的区分鉴定，由于引物的特异性高，不受样本的异质性的干扰，结果稳定、可靠，所述鉴定方法包括提取细胞总RNA，反转录获取cDNA模板以及实时荧光定量PCR。该方法不需要进行基于荧光抗体的表面标志物鉴定，节省了大量的时间和仪器试剂成本，并且本发明所述鉴定方法灵敏度好，对于牙囊干细胞与其他干细胞的区分和牙科组织工程具有很高的参考价值，适于推广应用。

摘要： 本发明公开了牙囊干细胞外泌体、制法及应用、其组合物及制法，属于生物医药技术领域。本发明的牙囊干细胞外泌体经脂多糖刺激处理。其制备方法包括：收集P2‑P10代中的任意一代牙囊干细胞，加入脂多糖共同培养后，采用外泌体提取试剂提取，获得所述外泌体。本发明公开了该外泌体在制备治疗牙周炎药物、或/和促进牙周膜干细胞的成骨分化药物、或/和促进牙周组织再生药物中的应用。本发明所述的一种可注射的药物组合物，包括透明质酸、以及上述牙囊干细胞外泌体。本发明的牙囊干细胞外泌体，不仅具有治疗牙周炎的作用，还能促进牙周膜干细胞的成骨分化、促进牙周组织再生。

摘要： 本发明公开了牙囊干细胞外泌体、制法及应用、其组合物及制法，属于生物医药技术领域。本发明的牙囊干细胞外泌体经脂多糖刺激处理。其制备方法包括：收集P2‑P10代中的任意一代牙囊干细胞，加入脂多糖共同培养后，采用外泌体提取试剂提取，获得所述外泌体。本发明公开了该外泌体在制备治疗牙周炎药物、或/和促进牙周膜干细胞的成骨分化药物、或/和促进牙周组织再生药物中的应用。本发明所述的一种可注射的药物组合物，包括透明质酸、以及上述牙囊干细胞外泌体。本发明的牙囊干细胞外泌体，不仅具有治疗牙周炎的作用，还能促进牙周膜干细胞的成骨分化、促进牙周组织再生。

摘要： 本发明涉及生物技术领域，具体地，公布了一种鉴定牙囊干细胞的引物、试剂、试剂盒、鉴定方法及应用，本发明提供的用于鉴定牙囊干细胞的引物为检测CD13的特异性引物。通过本发明提供的用于检测CD13的引物、试剂、试剂盒及方法能够简便、有效地鉴定牙囊干细胞，对于牙囊干细胞的分离鉴定和牙科组织工程具有较高参考价值，适于推广应用。

摘要： 本发明提供了一种牙囊干细胞的鉴定方法、引物组及试剂盒，本发明根据牙囊干细胞的蛋白组学结果，针对HEXB基因，设计特异性引物，将所述特异性引物用于牙囊干细胞与其他相似来源干细胞的区分鉴定，由于引物的特异性高，不受样本的异质性的干扰，结果稳定、可靠，所述鉴定方法包括提取细胞总RNA，反转录获取cDNA模板以及实时荧光定量PCR。该方法不需要进行基于荧光抗体的表面标志物鉴定，节省了大量的时间和仪器试剂成本，并且本发明所述鉴定方法灵敏度好，对于牙囊干细胞与其他干细胞的区分和牙科组织工程具有很高的参考价值，适于推广应用。

摘要： 本发明公开了一种治疗含牙囊肿的中药，是由中草药四楞筋骨草、香芋、瓜馥木、紫金标、楤木根、半枫荷根、马尿烧、山马蝗、柳枝、还亮草、荭草、阿里红、蜂窝草、蛋不老、胡麻叶、黄梢蛇、金刚散、蜘蛛、漆大姑组成。本发明以纯天然的中草药为原料，标本兼治，疗效确切、无毒副作用，不易复发。

摘要： 本发明的目的在于，提供能够使T细胞或NK细胞高效地增殖并且维持该细胞的状态(例如未分化性)的T细胞或NK细胞的制造方法、T细胞或NK细胞的培养用培养基、T细胞或NK细胞的培养方法、维持未分化T细胞的未分化状态的方法和T细胞或NK细胞的增殖促进剂。本发明涉及T细胞或NK细胞的制造方法等，其包括如下步骤：在含有式(X‑1)或式(X‑2)所示的双苄基异喹啉生物碱或者其中的1个醚键断裂后的化合物或其药学上可接受的盐的培养基中培养T细胞或NK细胞。

摘要： 提供能保存细胞的组合物。本发明的组合物包含微小气泡。

摘要： 本发明涉及一种红细胞除去装置(100)，具备：血液容器(10)，其容纳血液；以及红细胞除去器(11)，其从血液容器(10)接受血液，并从血液至少部分地除去红细胞。

摘要： 本实用新型公开一种颌骨发育期含牙囊肿开窗减压助萌矫治器，涉及口腔医疗器械领域；一种颌骨发育期含牙囊肿开窗减压助萌矫治器，包括辅助基托部、引流部和固定部，所述辅助基托部包括固位基托、固位颊侧翼、引流孔和延伸弯头，所述引流部包括引流管和环形凸起，所述固定部包括单臂卡环和邻间钩；一种颌骨发育期含牙囊肿开窗减压助萌矫治器，在固位基托的固位颊侧翼引流孔下侧设有引流管，从囊腔上方自牙槽嵴顶伸向囊腔内，通过引流管减小囊腔内压，使囊腔内外压力保持平衡，达到缩小囊肿、引导骨质重建、导萌内含恒牙的效果，在固位基托两侧分别设有单臂卡环和邻间钩，固定在口腔内前、后邻牙上起到固位作用。