Beclin1

摘要： 背景:灸法作为中医学疗法之一在防治脑卒中方面显示出明显的临床疗效.目的:探讨灸法预处理对脑缺血再灌注模型大鼠自噬及NLRP3炎症小体表达的影响.方法:采用随机数字表法将36只SD大鼠分为假手术组、模型组、灸法预处理组,每组12只.灸法预处理组在造模前给予百会、大椎、足三里麦粒灸3壮/穴,1次/d,共治疗7 d.灸法预处理组末次艾灸30 min后,模型组和灸法预处理组大鼠采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞模型,脑缺血处理2 h后拔除中动脉线栓进行再灌注;假手术组仅给予颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉剥离,而并不插入线栓.再灌注12 h后,对3组大鼠进行进行神经功能缺损评分,采用TTC染色法计算大鼠脑梗死体积,Western-blot法检测大脑皮质缺血区中自噬相关蛋白Beclin1、p62及NLRP3炎症小体的蛋白表达.结果 与结论:①模型组大鼠神经功能缺损评分高于假手术组(P<0.01),灸法预处理组大鼠神经功能缺损评分低于模型组(P<0.01);②TTC染色显示,假手术组大鼠脑组织未见明显梗死灶,模型组、灸法预处理组大鼠右侧脑组织可见明显缺血灶,其中灸法预处理组大鼠右侧脑梗死体积小于模型组(P<0.01);③Western-blot检测显示,与假手术组比较,模型组、灸法预处理组Beclin1、NLRP3蛋白表达升高(P<0.01),p62蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,灸法预处理组Beclin1蛋白表达升高(P<0.05),p62及NLRP3蛋白表达降低(P<0.01);④结果表明,灸法预处理可显著改善缺血再灌注后大鼠的神经功能,其机制可能与激活自噬抑制炎症因子表达有关.

摘要： 目的探讨硝苯地平对肝癌细胞Huh-7自噬小体形成及其可能机制。方法以不同浓度的硝苯地平体外干预Huh-7细胞,通过细胞增殖实验和克隆形成实验,检测硝苯地平对Huh-7细胞增殖的影响;Western blot实验检测Huh-7细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ的表达变化。运用激光共聚焦显微成像技术,观测硝苯地平对Huh-7细胞自噬小体形成的作用。结果硝苯地平可明显抑制Huh-7细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖关系,2 d时硝苯地平的IC_(50)为22.7 mg·L^(-1);浓度为25 mg·L^(-1)的硝苯地平作用使Huh-7细胞的克隆形成率较对照组明显降低,克隆形成的抑制率结果为(95.46±0.45)%;Western blot结果提示,硝苯地平明显上调Beclin1、LC3B-Ⅱ蛋白表达水平;激光共聚焦显微镜影像结果显示,硝苯地平可以促进GFP-LC3B的聚集,提示硝苯地平明显诱导Huh-7细胞自噬小体形成。结论硝苯地平明显抑制肝癌细胞Huh-7增殖,并促进Huh-7细胞自噬小体形成,其机制可能与上调Beclin1蛋白的表达有关。

摘要： 为了探究抗病毒蛋白Viperin对细胞自噬过程的影响以及该生物功能与物种间正向选择的相关性,利用分子生物学方法在人肾脏上皮细胞HEK293及肺癌细胞A549中过表达灵长类动物的Viperin,通过免疫荧光、Western blotting等方法检测Viperin对自噬相关蛋白表达的影响.结果表明:人类Viperin在HEK293细胞中的过表达诱导了胞内LC3由Ⅰ型向Ⅱ型的转化,且mCherry-GFP-LC3介导的胞内自噬体的形成量增加.自噬过程中的核心蛋白Beclin 1表达量明显增加,而敲低Beclin 1能减弱Viperin对自噬的诱导作用.同人类的Viperin相比,多种非人类灵长类动物的Viperin诱导LC3脂化的效果更强,Beclin 1的增加量更多,这表明抗病毒蛋白Viperin的生物学功能可能与灵长类动物进化中的正向选择过程相关.

摘要： 目的研究蓝萼甲素(GLA)对人肝癌HCCLM3细胞自噬与凋亡的调节作用机制。方法HCCLM3细胞按不同实验目的主要设对照组、GLA 2.5μg/mL组、GLA 5μg/mL组、GLA 10μg/mL组。对照组仅加入完全培养基,各给药组分别加入含GLA相应终质量浓度的完全培养基。采用流式细胞术检测细胞周期分布与凋亡情况;采用透射电镜观察细胞线粒体形态和自噬情况(仅设对照组、GLA 5μg/mL组);采用JC-1染色和荧光倒置显微镜观察并检测细胞线粒体膜电位;采用Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Beclin1、活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白的表达;采用免疫共沉淀法检测细胞中Bcl-2与Beclin1的结合与解离(仅设GLA 5μg/mL组、GLA 10μg/mL组)。结果与对照组相比,GLA 5、10μg/mL能够诱发细胞周期显著阻滞于G2~M期、诱导线粒体膜电位显著下降、增加促凋亡作用,还能显著促进Bax、cleaved caspase-3、Beclin1蛋白表达,显著抑制Bcl-2蛋白表达(P<0.01);GLA 5μg/mL还可引发线粒体形态显著改变,自噬小体增多。免疫共沉淀法结果显示,与GLA 5μg/mL比较,GLA 10μg/mL能够增强Bcl-2与Beclin1的结合。结论GLA可能通过Bcl-2/Beclin1靶点调节HCCLM3细胞自噬与凋亡,且作用效果与剂量密切相关。

摘要： 目的观察青光安颗粒剂对抗青光眼术后滤过道组织自噬相关蛋白Beclin1/微管相关蛋白轻链B(light chain 3B,LC3B)表达的影响。方法将30只成功建立慢性高眼压模型的新西兰白兔随机平均分为5组,除空白组(A组)外,其余各组均行常规小梁切除术,阳性对照组(B组)术中放置丝裂霉素C棉片,单纯手术组(C组)仅行常规小梁切除术,青光安组(D组)术后灌胃青光安颗粒剂混悬液,阴性对照组(E组)术后灌胃蒸馏水。干预14 d后,Western blot法检测滤过道组织Beclin1、LC3B-I、LC3B-II的表达量,RT-qPCR法检测Beclin1及LC3B mRNA的相对表达量。结果各手术组Beclin1蛋白平均表达量均显著高于A组(P0.05);各手术组LC3B mRNA相对表达量均显著高于A组(P0.05)。结论青光安颗粒剂能通过促进滤过道组织Beclin1蛋白及mRNA的表达,诱导瘢痕组织的自噬,维持滤过道的通畅。

摘要： 骨关节炎(OA)是一种常见的退行性疾病,目前发病原因尚不清楚,治疗主要以改善症状为主,尚无有效治疗药物。目前认为,自噬在抑制软骨细胞凋亡启动过程中发挥关键调控作用,故推测自噬可能是防治OA的重要靶点。关于中药复方、中药提取物、西药等方面的OA细胞自噬机制的相关药物分析研究相继开展,且基于自噬的OA防治相关药物研究取得了一定的研究成果,发现通过药物激活自噬可有效延缓OA进展,但具体作用机制尚不清楚,药物的使用时机、方式以及如何有效提高自噬调控效率仍需进一步研究。因此,深入研究自噬调控OA可能是未来防治OA的重要研究方向。

摘要： 目的探究维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者血清Beclin1和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达水平与血管钙化(vascular calcification,VC)的相关性。方法选取2017年4月~2020年9月三河市燕郊人民医院收治的MHD患者145例作为研究对象,根据是否发生VC,将患者分为MHD未并发VC组(n=75)和MHD并发VC组(n=70)。根据VC评估结果将MHD并发VC患者分为轻度VC组(n=36)、中度VC组(n=24)、重度VC组(n=10);另选取同期在该院进行体检的健康人80例作为对照组。收集受试者一般资料,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测受试者血清Beclin1和LC3-Ⅱ的水平,Pearson法分析MHD患者血清Beclin1和LC3-Ⅱ水平与VC相关指标的相关性,二元logistic回归分析MHD患者发生VC的影响因素。结果与对照组相比,MHD未并发VC组和MHD并发VC组血清肌酐(serum creatinine,SCr)(72.48±18.26μmol/L vs 685.30±192.42μmol/L,733.98±206.35μmol/L)、血磷(1.28±0.42mmol/L vs 2.08±0.71mmol/L。2.86±0.87mmol/L)、血钙(1.54±0.45mmol/L vs 2.46±0.62mmol/L,2.98±0.77mmol/L)、全段甲状旁腺激素(intact parathyroid hormone,iPTH)(58.10±17.36pg/ml vs 634.58±172.44pg/ml,769.48±195.02pg/ml)水平升高,差异有统计学意义(F=100.197~500.960,均P<0.05);血清血红蛋白(hemoglobin,Hb)(134.82±35.16g/L vs 112.78±32.85g/L,103.66±27.91g/L),Beclin1(8.09±2.16μg/L vs 5.65±1.43μg/L,2.56±0.73μg/L)和LC3-Ⅱ(45.16±5.15μg/L vs 36.31±3.42μg/L,27.47±2.76μg/L)水平降低,差异有统计学意义(F=18.748~372.522,均P<0.05);与MHD未并发VC组相比,MHD并发VC组血磷、血钙及iPTH水平升高(t=7.136~9.723,均P<0.05),血清Beclin1和LC3-Ⅱ水平降低(t=16.605,18.982,均P<0.05)。轻度VC组、中度VC组和重度VC组血清Beclin1(4.35±0.71μg/L,3.49±0.57μg/L和1.91±0.26μg/L)和LC3-Ⅱ(31.12±3.32μg/L,25.65±2.62μg/L vs 20.47±1.76μg/L)水平依次降低,差异均有统计学意义(F=366.298,296.025,均P<0.05)。MHD患者血清Beclin1水平与血磷、血钙及iPTH均呈负相关(r=-0.674,-0.682,-0.597,均P<0.05);血清LC3-Ⅱ水平与血磷、血钙及i PTH也呈负相关(r=-0.648,-0.703,-0.674,均P<0.05)。二元logistic回归分析发现,Beclin1和LC3-Ⅱ水平偏低是MHD患者发生VC的危险因素(P<0.05)。结论MHD并发VC患者血清Beclin1和LC3-Ⅱ水平降低,与VC严重程度有关,是MHD患者发生VC的危险因素,可作为预测MHD患者发生VC的潜在生物学标志物。

摘要： 结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是最常见的消化道肿瘤之一,其发病率及致死率逐年上升,且发病机制尚未完全阐明。自噬是人体内细胞维持新陈代谢及获取能量的重要途径,与肿瘤的发生、发展及预后有着密切的关联。研究证实,自噬相关蛋白Beclin1、p62通过从不同层面调控自噬,影响CRC的发生和发展,同时对CRC的临床预后具有一定的意义,且越来越成为研究的热点。

摘要： 目的研究外周血自噬相关蛋白Beclin-1、自噬相关基因5(Atg5)表达与老年脓毒症患者预后的相关性。方法选择2015年3月至2019年10月河北北方学院附属第一医院收治的136例老年脓毒症患者作为脓毒症组,选取同期一般资料匹配的55例受试者作为对照组,检测外周血Beclin-1、Atg5的表达水平。根据脓毒症组28 d预后情况分为存活和死亡患者,比较存活和死亡患者临床资料的差异并采用COX回归模型分析预后的影响因素,采用Kaplan-Meier曲线和受试者工作特征(ROC)曲线分析Beclin-1、Atg5对预后的评估价值。结果脓毒症组外周血Beclin-1、Atg5的表达水平低于对照组,且死亡患者外周血Beclin-1、Atg5的表达水平低于存活患者(P<0.05)。经COX回归分析,中性粒细胞/淋巴细胞比值、单核细胞/淋巴细胞比值、Beclin-1、Atg5、急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)是脓毒症组患者预后的影响因素(P<0.05);经Kaplan-Meier曲线和ROC曲线分析,Beclin-1、Atg5对脓毒症组患者的预后具有评估价值;在logistic模型中生成Beclin-1联合Atg5评估预后的新指标,该指标预测预后的曲线下面积为0.672,优于单一指标。结论老年脓毒症患者外周血Beclin-1、Atg5水平降低且与预后恶化有关,Beclin-1联合Atg5用于预后评估的价值优于单一指标。

摘要： 目的:探究自噬蛋白在良性胸腔积液和肺癌引起的恶性胸腔积液中的表达有无差异。方法:采用实时荧光定量PCR技术和Western-blot技术检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和mTOR在良性胸腔积液标本和恶性胸腔积液标本中的表达及意义。结果:自噬相关蛋白Beclin-1和LC3在恶性积液组中的表达量均低于良性积液组,差异具有统计学意义(P<0.05);mTOR在恶性积液组中表达量高于良性积液组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:联合检测Beclin-1、LC3和mTOR三种蛋白有助于临床化验室对胸腔积液进行性质鉴别,也有利于肺癌的早期筛查,可为临床诊断和治疗提供新思路。

摘要： 本发明公开了一种靶向Beclin1的订书肽、药物组合物，其中，所述订书肽包含的氨基酸序列与Beclin1氨基酸残基191‑205至少有66.7％相同，所述订书肽中的E195氨基酸残基和N202氨基酸残基被一个全碳氢链连接起来以稳定其α‑螺旋结构。本发明将全碳氢链放置在订书肽中离Beclin 1卷曲螺旋域‑订书肽结合界面更近的位置，可使其与Beclin1的结合亲和力提高10‑30倍。与其他自噬诱导剂如雷帕霉素和Tat‑Beclin 1肽相比，本发明优化的订书肽在HER2阳性癌细胞中不仅能诱导自噬，还能显著增强细胞表面致癌受体EGFR和HER2的内体‑溶酶体降解。

摘要： 本发明公开了放射超敏蛋白Beclin1作为机体核辐射保护的靶点。本发明通过研究发现，Beclin1双等位基因敲除小鼠与致死剂量放射所致小鼠在死亡时间及体态特征及小鼠脏器系数、血量、血常规的变化上都呈现一致的表现，且致死剂量放射后1天小鼠骨髓细胞中Beclin1蛋白表达即消失，这和Beclin1敲除小鼠表型一致。因此证明可将Beclin1蛋白作为机体内放射超敏蛋白进行后续的研发，Beclin1蛋白有望作为机体内放射性损伤救治的靶标，筛选能提高机体内Beclin1蛋白表达或增强其稳定或筛选能抑制放射导致Beclin1降解的制剂可作为放射损伤救治的手段，为放射性救治提供全新理论依据和高效救治方案。

摘要： 本发明提供一种针对自噬相关基因Beclin1编码区174‐194位点的siRNA序列，其核苷酸序列是：5’‐GGAGGAAGAGACTAACTCAGG‐3’。本发明根据siRNA设计原则，选择的siRNA的cDNA序列GC含量为52.4％，对应Beclin1基因编码区的第174‐194位核苷酸。构建针对Beclin1的siRNA真核表达载体，转化大肠杆菌后提取质粒，转染AD293细胞，能有效抑制Beclin1基因的mRNA和蛋白表达水平，可作为人源细胞自噬水平调控的一个有效靶点。应用于人类细胞自噬水平的调控。

摘要： 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及毛花苷C作为Beclin1的激活剂在制备抗肝癌药物中的应用。所述毛花苷C通过上调Beclin1蛋白的表达，促进LC3Ⅰ向LC3Ⅱ的转化，促进细胞自噬小体的形成，从而抑制肝癌Huh‑7细胞的增殖。本发明试验中发现毛花苷C对肝癌Huh‑7细胞具有抑制作用，并呈现出良好的时间和浓度依赖性，为靶向Beclin1治疗肝癌提供了新的候选药物，具有重要的临床意义。

摘要： 本发明公开了Beclin1作为哺乳动物炎症抑制剂的应用。本发明通过成功构建Beclin1双等位基因全身诱导缺失的小鼠模型，探究Beclin1与炎症间的关系，发现Beclin1全身缺失后，各脏器的炎症因子水平显著增加，表明Beclin1在机体中作为一个镇压炎症的蛋白所存在，当机体失去Beclin1后，炎症因子表达增加，处于炎症状态。因此有望利用Beclin1制备哺乳动物炎症抑制剂，这种抑制剂可以通过靶向Beclin1起到抑制炎症的效果，恢复机体的健康，意义重大。

摘要： 本发明公开了Beclin1作为哺乳动物肠道稳态保护剂的应用。本发明通过构建肠道上皮特异性Beclin1缺失小鼠，发现Beclin1肠道上皮特异性缺失后，小鼠肠道组织结构有明显异常，肠道上皮受损；并且通过对小鼠肠道菌群分析发现，纯合缺失小鼠肠道菌群变化明显，其中与胃肠道疾病有关的有害菌增加，从而表明Beclin1对于小鼠肠道上皮以及肠道菌群稳态的维持息息相关。因此，本发明揭示了Beclin1可用于制备哺乳动物肠道组织和肠道菌群稳态保护剂，以维持哺乳动物肠道组织和肠道菌群稳态，日后可望通过靶向Beclin1来维持肠道组织和肠道菌群的稳态，保护机体的健康，意义重大。

摘要： 本发明公开了Beclin1作为骨保护素抑制破骨细胞分化药物靶点中的应用，属于细胞生物学技术领域。本发明在骨保护素（OPG）抑制破骨细胞分化的基础上，从自噬标志蛋白Beclin1在此过程中的调控机制进行探讨，结合自噬过程中AMP活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/核糖体蛋白S6激酶‑1（S6K1）信号通路，对破骨细胞分化相关调控分子逐一进行证明。本发明证明Beclin1可作为骨保护素抑制破骨细胞分化的潜在靶点，并为骨保护素调控破骨细胞的分化提供一定的理论基础。

摘要： 本发明公开了一种自噬蛋白beclin‑1及其编码基因和应用。自噬蛋白beclin‑1，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次从香港牡蛎中鉴定获得Beclin‑1基因，干扰Beclin‑1的表达可以抑制自噬体的形成，抑制NF‑κB信号通路，而且可以快速响应溶藻弧菌、溶血葡萄球菌的感染。本发明中的Beclin‑1在香港牡蛎免疫防御中发挥重要的作用，为牡蛎及其它海水养殖贝类的病害防治、抗病育种提供应用指导。

摘要： 本发明公开了一种靶向Beclin1的订书肽、药物组合物，其中，所述订书肽包含的氨基酸序列与Beclin1氨基酸残基191‑205至少有66.7％相同，所述订书肽中的E195氨基酸残基和N202氨基酸残基被一个全碳氢链连接起来以稳定其α‑螺旋结构。本发明将全碳氢链放置在订书肽中离Beclin 1卷曲螺旋域‑订书肽结合界面更近的位置，可使其与Beclin1的结合亲和力提高10‑30倍。与其他自噬诱导剂如雷帕霉素和Tat‑Beclin 1肽相比，本发明优化的订书肽在HER2阳性癌细胞中不仅能诱导自噬，还能显著增强细胞表面致癌受体EGFR和HER2的内体‑溶酶体降解。

摘要： 本发明公开了Beclin1在维持胚胎造血中的应用，尤其是用于保护胚胎造血干祖细胞的稳态。本发明率先关注Beclin1对于造血干祖细胞的作用，利用Beclin1