TGF-β1/Smad信号通路

摘要： 背景:目前已将NIPBL基因突变作为诊断Cornelia de Lange综合征的首选指标,但由于该病的遗传异质性,显著增加了临床诊疗难度,尤其患儿骨骼发育畸形的发生率高,其发病机制尚不明确,目前无有效治疗方案,患儿平均寿命较一般人群显著缩短。目的:探究敲低NIPBL基因对小鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化能力的影响及其可能的分子调控机制。方法:将慢病毒转染NIPBL sh RNA的小鼠骨髓间充质干细胞作为sh-NIPBL组,慢病毒空载体转染的骨髓间充质干细胞作为sh-NC组,无慢病毒干扰的骨髓间充质干细胞作为空白对照组,对上述3组细胞进行成软骨诱导培养,诱导21 d后测量软骨微球最大横截面的周长,行阿利辛蓝染色鉴定其诱导分化结果,免疫荧光法检测软骨细胞Ⅱ型胶原的表达水平,应用实时荧光定量PCR法检测软骨细胞Sox-9、TGF-β1、Smad2、Smad4 m RNA表达水平。结果与结论:(1)成软骨诱导第21天,sh-NIPBL组的软骨微球最大横截面的周长明显小于对照组(P <0.05),阿利辛蓝染色后在倒置显微镜下观察sh-NC组较sh-NIPBL组可见更多的蓝色软骨内酸性黏多糖;(2)诱导成软骨分化后,sh-NIPBL组骨髓间充质干细胞中Ⅱ型胶原、Sox-9的表达低于sh-NC组和空白对照组(P <0.05);(3)成软骨诱导过程中,sh-NIPBL组TGF-β1、Smad2、Smad4基因的表达水平低于sh-NC组和空白对照组(P <0.05);(4)结果表明,慢病毒敲低NIPBL基因表达降低了骨髓间充质干细胞的成软骨分化能力,且该过程可能由TGF-β1/Smad信号通路参与介导。

摘要： 肾纤维化的发生发展受到生长因子、细胞因子、趋化因子等多种因素的调控。TGF-β1是目前已知的最重要的致纤维化因子。TGF-β1/Smad和TGF-β1/ERK信号通路是传导TGF-β1的主要信号通路,在肾纤维化中发挥着重要作用。因此,本文结合最新研究成果就TGF-β1/Smad和TGF-β1/ERK信号通路在肾纤维化中的作用及其二者之间的相互关系进行综述。

摘要： 目的探讨大王马先蒿对肝纤维化的保护作用。方法将昆明小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱(0.1 mg·kg^(-1))组及大王马先蒿小(200 mg·kg^(-1))、中(400 mg·kg^(-1))、大(800 mg·kg^(-1))剂量组,每组10只;通过腹腔注射四氯化碳(CCl_(4),1 mL·kg^(-1))建立肝纤维化模型,并于第5周开始灌胃给药,每天1次,持续至第12周结束;末次给药后1 h,麻醉眼球取血检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及IV型胶原(Ⅳ-C)水平,处死小鼠并取出脏器,计算小鼠脏器系数,Western blotting检测肝组织TGF-β_(1),Smad3,α-SMA及Collagen Ⅰ表达,苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察小鼠肝组织病理形态。结果模型对照组小鼠皮毛竖立,活动减少,反应迟缓,大王马先蒿组小鼠一般状态好于模型对照组,反应较敏捷,皮色白有光泽。与模型对照组比较,大王马先蒿各剂量均能显著改善CCl_(4)所致小鼠肝组织的肝纤维化程度,显著降低血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ及Ⅳ-C水平(P<0.01),显著下调TGF-β_(1),Smad3,α-SMA及Collagen Ⅰ蛋白表达(P<0.01)。结论大王马先蒿对CCl_(4)诱导的肝纤维化小鼠具有较好的保护作用,该作用可能与抑制TGF-β_(1)/Smad信号通路及下调α-SMA和Collagen Ⅰ蛋白的表达有关。

摘要： 目的:考察甘草提取物对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞(CFs)纤维化干预作用。方法:10 ng/mL TGF-β1诱导CFs建立心肌纤维化细胞模型。用甘草提取物处理纤维化细胞,MTT法检测不同浓度甘草提取物对细胞增殖的影响;CCK-8检测TGF-β1诱导后,甘草提取物对CFs细胞增殖的影响;免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;Western blot检测TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平;RT-PCR检测Smad2、Smad3、Smad4 mRNA表达水平。结果:各浓度甘草提取物处理细胞后细胞活性与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。甘草提取物各浓度组细胞增殖率显著低于TGF-β1组(P<0.05);100μg/mL甘草提取物对α-SMA、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达水平显著低于TGF-β1组(P<0.05)。结论:甘草提取物对TGF-β1诱导的心肌纤维细胞纤维化的发生发展具有一定改善作用,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。

摘要： 目的探讨蒙古扁桃苦杏仁苷对肾纤维化大鼠的作用及其机制。方法SD雄性大鼠60只,按体质量随机分为6组:假手术组、模型对照组、贝那普利组和苦杏仁苷小、中、大剂量组,每组10只。除假手术组外其余各组大鼠均采用左侧输尿管梗阻方法造模。连续灌胃给药21 d后处死,记录大鼠24 h尿量、计算大鼠肾脏脏器系数;测定大鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、白蛋白(ALB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量及组织中SOD、MDA、羟脯胺酸(HYP)含量;荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测组织内转化生成因子β_(1)(TGF-β_(1))、Smad3、Smad7 mRNA的表达;采用苏木精-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察左侧肾脏组织病理变化。结果与假手术组比较,模型对照组大鼠尿量显著减少(P<0.01),血清和组织SOD活力显著降低(P<0.01),肾脏脏器系数、BUN、Scr、ALB水平及血清和组织MDA含量、组织HYP含量显著升高(P<0.01);TGF-β_(1)、Smad3 mRNA表达量显著升高,Smad7 mRNA表达量显著降低(P<0.01)。与模型对照组比较,苦杏仁苷给药组肾间质及肾小管损伤情况显著改善,纤维化程度显著降低(P<0.01),24 h尿量显著增加(P<0.01),脏器系数显著降低(P<0.01),其中以小剂量组效果最显著;苦杏仁苷小剂量组BUN、Scr、ALB水平、血清和组织MDA含量及HYP含量(P<0.01)均显著降低,血清SOD活力显著升高(P<0.01),TGF-β_(1)、Smad3 mRNA的表达显著下调(P<0.01),Smad7 mRNA的表达(P<0.01)显著上调;苦杏仁苷中剂量组Scr水平、ALB水平、血清和组织MDA含量及HYP含量均显著降低(P<0.01),组织SOD活力显著升高(P<0.01);苦杏仁苷大剂量组血清和组织MDA含量均显著降低(P<0.01)。结论苦杏仁苷对肾纤维化大鼠肾脏具有良好的保护作用,能提高机体抗氧化能力,以小剂量作用效果最好,其作用机制可能是干预TGF-β_(1)/Smad信号通路。

摘要： 目的:研究解毒凉血方含药血清对TNFα联合ActD诱导肝衰竭肝细胞凋亡的抑制作用及机制。方法:采用人正常肝细胞Chang liver及肿瘤细胞HepG2筛选解毒凉血方含药血清的有效比例。干预组采用有效比例的解毒凉血方含药血清预刺激24 h,然后采用TNFα联合ActD刺激Chang liver模拟急性肝衰竭肝细胞凋亡,流式细胞术检测各组细胞的凋亡率,免疫荧光实验检测凋亡肝细胞TBFβ1的表达及分布,免疫印迹法检测TGFβ1/Smad信号通路中TGFβ1、p-TβRⅡ、Smad7及p-Smad2/3的表达水平。结果:15%(体积比)解毒凉血方含药血清对TNFα联合ActD诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用,15%解毒凉血方含药血清组细胞凋亡率显著低于模型组及空白血清组(P<0.01);与模型组及空白血清组比较,15%解毒凉血方含药血清预处理组胞质中TGFβ1、p-TβRⅡ以及Smad2/3磷酸化(p-Smad2/3)均低水平表达,而Smad7表达水平较高(均P<0.05)。结论:解毒凉血健脾方含药血清对TNFα联合ActD刺激诱导的急性肝衰竭肝细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能与调节TGFβ1/Smad信号通路有关。

摘要： 器官纤维化常常是反复损伤和炎症反应引起成纤维细胞持续活化、增殖,致使细胞外基质的进行性积累,组织器官功能进行性丧失,是影响人类健康的重要问题。越来越多的证据表明,上皮间质转化(EMT)可能是导致组织器官纤维化中肌成纤维细胞产生的主要途径之一。回顾上皮间质转化在组织器官纤维化形成的作用,总结近十年来中医药单体和复方通过干预EMT中的相关因子或信号转导途径等机制来抑制器官纤维化进程。

摘要： 目的 观察健脾补肾利湿方对高尿酸肾病大鼠肾组织TGF-β1/Smads信号通路的调节作用。方法 建立高尿酸肾病损伤大鼠模型,随机分为模型组、别嘌醇组和中药组(健脾补肾利湿方),每组12只,另取12只SD大鼠设为空白对照组,用药8周后,采用ELISA法检测24 h尿蛋白定量(24 hUPQ)、血清尿酸(SUA)、血清肌酐(Scr),血清尿素氮(BUN)的含量;Western blot法检测大鼠肾脏组织的转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维粘连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col4)、Smad同源物2(Smad2)、Smad同源物3(Smad3)与Smad同源物7(Smad7)和磷酸化Smad2/3/7蛋白表达;RT-PCR法检测各组大鼠肾组织TGF-β1、Col4、FN、Smad2/3、Smad7 mRNA表达。结果 与模型组比较,中药组和别嘌醇组大鼠24 hUPQ、SUA、Scr和BUN表达均显著下降(P<0.01),且中药组优于别嘌醇组(P<0.01);中药组大鼠肾组织TGF-β1、FN、Col4蛋白及TGF-β1、FN、Col4mRNA表达均显著下降(P<0.01);中药组大鼠肾组织Smad2/3、p-Smad2/3蛋白及Smad2/3 mRNA表达均显著下降(P<0.05);中药组大鼠肾组织Smad7蛋白及Smad7 mRNA表达显著上升(P<0.05)。结论 健脾补肾利湿方可能通过调节TGF-β1/Smad信号通路中正调控蛋白(Smad2/3)和负调控蛋白(Smad7)的再平衡,抑制TGF-β1信号通路,从而起到延缓肾纤维化的作用。

摘要： 目的探讨双氢青蒿素对心肌成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法取1-3天的SD乳鼠心肌成纤维细胞分为对照组、双氢青蒿素组、TGF-β1组。采用MTT比色法对各组细胞增殖情况进行计算,使用PCR法检测TGF-β1mRNA的相对表达量,应用荧光法检测TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达。结果双氢青蒿素组各时间点的细胞增殖活力均低于TGF-β1组。与TGF-β1组比较,双氢青蒿素组的TGF-β1mRNA表达及蛋白水平均低。双氢青蒿素组的Smad2、Smad3蛋白表达低于TGF-β1组。结论双氢青蒿素对SD乳鼠的心肌成纤维细胞具有抑制作用,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。

摘要： 目的:研究健脾消癌方干预肠癌细胞外泌体对巨噬细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:将50只大鼠随机分为正常组和健脾消癌方含药血清组,每组25只,健脾消癌方含药血清组以健脾消癌方水煎液灌胃,正常组大鼠每日以等量蒸馏水灌胃,1次/d,连续7 d后获取含药血清和不含药血清。将对数生长期的HCT116细胞分为JPXAF组、WY组,JPXAF组予20%健脾消癌方含药血清干预,WY组以20%不含药血清干预,采用超速离心法提取外泌体,JPXAF组、WY组提取的外泌体分别命名为JPXAF-Exo、WY-Exo。将THP-1巨噬细胞分为对照组和外泌体组,对照组进行常规培养,外泌体组予HCT116细胞外泌体干预。采用反转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞MMP2 mRNA、MMP9mRNA、TNF-αmRNA、PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量。将THP-1巨噬细胞随机分为Control组、WY-Exo组、JPXAF-Exo组。Control组常规培养,WY-Exo组、JPXAF-Exo组分别予WY-Exo、JPXAF-Exo干预。采用RT-PCR法检测巨噬细胞中MMP2 mRNA、MMP9 mRNA、TNF-αmRNA、PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA的表达,采用蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞TGF-βRⅡ、Smad2/3蛋白的表达水平及Smad2/3蛋白的磷酸化水平。结果:外泌体组巨噬细胞中PD-L1 mRNA、TGF-β1 mRNA相对表达量均高于对照组(P0.05);JPXAF-Exo组巨噬细胞MMP9 mRNA相对表达量低于Control组、WY-Exo组(P<0.05);WY-Exo组、JPXAF-Exo组巨噬细胞PD-L1 mRNA的表达明显高于Control组(P<0.01);WY-Exo组巨噬细胞TGF-β1 mRNA相对表达量明显高于Control组(P<0.01);JPXA-Exo组巨噬细胞TGF-β1 mRNA相对表达量显著低于Control组、WY-Exo组(P<0.05或P<0.01)。JPXA-Exo组巨噬细胞TGF-βRⅡ、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达均低于WY-Exo组(P<0.01)。结论:健脾消癌方含药血清可通过外泌体抑制TGF-β1/Smad信号通路改善外泌体介导的肿瘤转移前微环境从而抑制结直肠癌的转移。

摘要： 本发明公开了miR‑339‑5p在抑制前列腺癌骨转移及TGF‑β信号通路中的应用。本发明研究发现miR‑339‑5p在前列腺癌骨转移中低表达，进一步研究发现，miR‑339‑5p通过靶向TGF‑β信号通路中SMAD2、SMAD3和TGFBRI，抑制TGF‑β信号通路活性，从而抑制骨转移前例腺癌细胞的迁移和侵袭，因此，miR‑339‑5p有望应用于制备前列腺癌骨转移诊断试剂、抑制骨转移药物、TGF‑β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂及TGFBRI抑制剂。

摘要： 本发明公开了一种TGF‑β信号通路在如皋黄鸡雄性生殖细胞分化过程中功能验证方法：首先基于RNA‑seq数据源进行关键信号通路富集并筛选；利用TGFβ受体抑制剂:LY2109761，BMP4受体抑制剂:LDN193189在体内和体外两个水平对TGF‑β信号通路进行抑制以验证该通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的具体功能；设计LY2109761+BMP4，LDN193189+BMP4以及Double+BMP4实验组进行实验，实验过程中每个1d，取样一次。检测Smad2，Smad5的表达变化以及生殖标记基因的表达变化，利用间接免疫荧光和FACS检测各分组中细胞诱导后interginα6

摘要： 本发明涉及肝囊型包虫病治疗药物技术领域，是一种TGF‑βSmad信号通路抑制剂作为制备治疗肝囊型包虫病药物的应用。本发明首次公开了TGF‑β/Smad信号通路抑制剂LDN193189在治疗肝囊型包虫病方面的应用，体内方面的药效学实验数据均表明LDN193189等TGF‑β/Smad信号通路抑制剂是一类高效的抗包虫病药物分子，能够破坏细粒棘球蚴囊泡组织结构，导致细粒棘球蚴感染能力下降，降低囊型包虫病小鼠模型肝脏炎性病灶的面积；鉴于临床包虫病患者长期服用阿苯达唑会导致耐药性，因此该药物能作为阿苯达唑的替代品进行治疗包虫病。

摘要： 本发明提供了一种调控TGF‑β 1‑Smads通路的方法及其应用，具体地本发明提供了一种RXRα受体激动剂的用途，用于制备药物或试剂，所述药物或试剂用于抑制急性心肌梗死大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原合成，并改善心功能等。

摘要： 本发明公开了生物硅在制备促进BMP-2表达的促进剂中的应用、生物硅在制备BMP-2/Smad/Runx2信号通路激活剂中的应用，以及生物硅在制备促进成骨细胞合成骨胶原蛋白的药物中的应用；所述生物硅的浓度为10-20μM，生物硅优选为原硅酸。本发明经实验首次证实生物硅可以显著增加BMP-2的表达；而BMP-2的高表达可以通过Smad信号通路上调Runx2的表达，Runx2在成骨细胞系中的高表达，促进了成骨细胞合成骨胶原蛋白，在相应药物开发中具有极大的应用价值。

摘要： 本发明公开了一种TGF‑β信号通路单核苷酸多态性检测试剂盒及其检测方法，其中，所述试剂盒内包括三对扩增引物和多重PCR混合反应液，其中扩增引物用于扩增TGFB2 rs2799086位点、TGFB2 rs17047740位点和TGFBR2 rs304822位点中的至少两个SNP位点，每对引物分别对应一个SNP位点的上下游区域。本发明采用采用多重PCR的扩增方法，同时扩增TGF‑β信号通路的多个重要SNP位点，且可以根据实际需要灵活选择扩增的位点组合，可以起到一盒多用的作用，试剂盒中的引物特异性高，错配率低，引物长度和T

摘要： 本发明公开了miR‑339‑5p在抑制前列腺癌骨转移及TGF‑β信号通路中的应用。本发明研究发现miR‑339‑5p在前列腺癌骨转移中低表达，进一步研究发现，miR‑339‑5p通过靶向TGF‑β信号通路中SMAD2、SMAD3和TGFBRI，抑制TGF‑β信号通路活性，从而抑制骨转移前例腺癌细胞的迁移和侵袭，因此，miR‑339‑5p有望应用于制备前列腺癌骨转移诊断试剂、抑制骨转移药物、TGF‑β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂及TGFBRI抑制剂。

摘要： 本发明公开了一种新的TGF‑β信号通路在如皋黄鸡雄性生殖细胞分化过程中功能验证方法：首先基于RNA‑seq数据源进行关键信号通路富集并筛选；利用TGFβ受体抑制剂:LY2109762，BMP4受体抑制剂:LDN193189在体内和体外两个水平对TGF‑β信号通路进行抑制以验证该通路在鸡雄性生殖细胞分化过程中的具体功能；设计LY2109762+BMP4，LDN193189+BMP4以及Double+BMP4实验组进行实验，实验过程中每个1d，取样一次。检测Smad2，Smad5的表达变化以及生殖标记基因的表达变化，利用间接免疫荧光和FACS检测各分组中细胞诱导后interginα6

摘要： 本发明涉及一种药物筛选模型及其专用质粒，特别是涉及一种与TGF－β信号通路相关药物的筛选模型及其专用质粒。本发明所提供的报告质粒，是将12个CAGA－box组成的串联序列、腺病毒主要晚期启动子序列及报告蛋白编码基因序列插入哺乳动物细胞表达载体的多克隆位点得到的重组表达载体。本发明所提供的TGF－β信号通路相关药物的筛选模型，是含有所述报告质粒的人肝癌细胞系。本发明的与TGF－β信号通路相关药物的药物筛选模型可靠稳定，而且操作简便，大大提高了筛选效率，降低了筛选成本，缩短了筛选周期，减少受试化合物用量，减少放射性污染。因此，将本发明的药物筛选模型应用于相关药物开发中，将会降低开发费用，加快开发进程，有着广阔的应用前景。

摘要： 本发明公开了一种上调MLLT3基因表达的信号通路抑制剂、药物，及该信号通路抑制剂的应用。本发明将JNK信号通路抑制剂以及任选的mTOR信号通路抑制剂和芳烃受体抑制剂作用于造血干细胞，可以有效地上调MLLT3基因表达，为MLLT3基因调控提供了可靠的研究手段，为通过MLLT3调控造血干细胞功能的研究和临床应用奠定了基础，具有重要的科研和临床转化价值。