RAW264.7细胞

摘要： 背景:柚皮苷作为一种中药单体,具有抗炎、促进成骨和抗癌等作用;RAW264.7巨噬细胞在骨破坏过程中发挥重要作用。有研究发现降低炎症水平可以促进MC-3T3-E1细胞的成骨分化,所以通过抑制炎症相关通路,可能对成骨细胞分化具有促进作用。目的:观察柚皮苷通过调控RAW264.7细胞功能是否会影响MC-3T3-E1细胞的成骨分化。方法:采用CCK-8法检测不同浓度柚皮苷对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的毒性。将RAW264.7细胞分成7组:即对照组(DMEM培养基)、炎症模型组(1 mg/L脂多糖)和柚皮苷组(1 mg/L脂多糖+50,100,150,200,250μmol/L柚皮苷),通过RT-PCR检测炎症因子m RNA水平变化,筛选出抗炎浓度较好的3组(150,200,250μmol/L柚皮苷组)数据用于后续实验。将RAW264.7细胞分成4组:炎症模型组、150,200,250μmol/L柚皮苷组分别取各组的上清液制备炎症上清液。最后将上述制取的炎症上清液与成骨诱导培养基1∶1比例混合共同培养MC-3T3-E1细胞并分为5组:对照组、炎症模型组、150,200,250μmol/L柚皮苷组,培养7,14 d进行成骨相关基因的检测,并进行碱性磷酸酶染色、碱性磷酸酶活性实验。结果与结论:①1 mg/L的脂多糖对巨噬细胞无毒性作用,200μmol/L柚皮苷对脂多糖诱导的巨噬细胞有细胞毒性作用(P<0.05);②筛选药物抗炎浓度过程中,与对照组相比柚皮苷浓度为150,200,250μmol/L时抗炎效果较好(P<0.05),此3组浓度用于后续实验;③碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比柚皮苷浓度200μmol/L时染色效果最好,且14 d比7 d染色效果更佳;④与对照组相比,200μmol/L柚皮苷组的成骨基因mRNA表达水平最接近对照组,成骨效果最差的为炎症模型(P<0.05);⑤碱性磷酸酶活性实验中,7 d时与对照组相比,柚皮苷浓度为200μmol/L时碱性磷酸酶活性最强(P<0.05);与炎症模型组相比,柚皮苷浓度为200μmol/L时最佳(P<0.05);14 d时,与对照组相比,200μmol/L组无显著差异;与炎症模型组相比,200μmol/L组活性最强;⑥以上结果证明,柚皮苷通过调节RAW264.7巨噬细胞功能可改善炎症状态下MC-3T3-E1细胞的成骨分化。

摘要： 背景:唑来膦酸可抑制骨吸收,但其是否能抑制炎症性骨疾病及其相关机制尚不完全清楚。目的:分析唑来膦酸对脂多糖诱导破骨细胞增殖、分化的影响。方法:利用脂多糖将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色鉴定诱导结果。将RAW264.7细胞分5组培养:空白对照组不进行任何干预,对照组加入脂多糖处理,其余3组在加入脂多糖的基础上分别加入0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸处理,培养6 h后,采用ELISA法检测上清液中肿瘤坏死因子α水平,Western Blot检测NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β、cleaved-caspase-1及肿瘤坏死因子α的蛋白表达。培养第5天,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞形成情况,F-actin染色观察破骨细胞肌动蛋白环。结果与结论:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色显示,脂多糖可诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;②对照组肿瘤坏死因子α水平高于空白对照组(P<0.05),0.1,5μmol/L唑来膦酸组肿瘤坏死因子α水平低于对照组(P<0.05);抗酒石酸酸性磷酸酶染色与F-actin染色显示,1,5μmol/L唑来膦酸可抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞;③与对照组比较,0.1,1,5μmol/L的唑来膦酸均可抑制NLRP3、caspase-1、白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α的蛋白表达(P<0.05),1,5μmol/L的唑来膦酸均可抑制cleaved-caspase-1的蛋白表达(P<0.05);④结果表明,唑来膦酸可抑制脂多糖诱导的破骨细胞分化,该作用可能是通过调控NLRP3信号通路实现的。

摘要： 背景:白细胞介素1是一种重要的促炎细胞因子,已被证实在调节骨炎症和骨重建中发挥重要作用.有研究表明,白细胞介素1α可诱导MC3T3-E1细胞凋亡,同时抑制成骨细胞分化.目的:探讨白细胞介素1α在小鼠破骨细胞活化和骨流失中的作用及机制.方法:①细胞实验:分别以白细胞介素1α单独或与核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)联合作用于RAW264.7细胞1 d和4 d.CCK8检测细胞活力,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测多核破骨细胞,实时荧光定量PCR、免疫荧光染色及Western blot检测破骨形成相关的特异基因及核转录因子κB和Wnt/β-catenin信号通路相关基因的mRNA和蛋白表达情况;分别以白细胞介素1α单独或与RANKL和巨噬细胞集落刺激因子联合作用于骨髓源性巨噬细胞7 d,抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测多核破骨细胞,Western blot检测破骨形成相关的特异基因的蛋白水平的表达情况.②动物实验:将小鼠随机分为2组:对照组腹腔注射PBS,实验组腹腔注射白细胞介素1α溶液,每周2次,5周后取材,采用μCT、苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色和免疫荧光分析小鼠股骨骨组织变化及相关基因的表达情况.结果 与结论:①细胞实验结果显示,白细胞介素1α单独干预可显著促进RAW264.7细胞增殖,而白细胞介素1α与RANKL联合作用可刺激RAW264.7细胞向破骨细胞分化(P<0.05);在RANKL或RANKL+巨噬细胞集落刺激因子存在的情况下,白细胞介素1α明显上调RAW264.7细胞和骨髓源性巨噬细胞中破骨细胞相关标志物的表达(P<0.05),并增加抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞的数量(P<0.05);白细胞介素1α显著激活RAW264.7细胞的核转录因子κB和Wnt/β-catenin信号通路(P<0.05);阻断核转录因子κB或Wnt3信号通路不仅逆转了白细胞介素1α引起的RAW264.7细胞的核转录因子κB和Wnt3信号通路的激活,而且减弱了白细胞介素1α诱导的破骨细胞特异性基因的上调(P<0.05).②动物实验结果显示,与体外细胞实验结果一致,白细胞介素1α可诱导C57BL/6J小鼠骨流失并上调破骨特异基因TRAF6,RANK,p65和Wnt3的表达(P<0.05).③上述数据证实,白细胞介素1α通过激活核转录因子κB和Wnt信号通路诱导破骨细胞活化和骨丢失.

摘要： 背景:研究发现miR-25的下调与活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)过度激活相关,而NFATc1是破骨细胞分化成熟中的核心转录因子,提示miR-25的表达水平能调控破骨细胞分化.目的:探讨过表达miR-25对Ti颗粒诱导的破骨细胞分化的影响,并探索其中的信号通路.方法:体外培养RAW264.7细胞系,CCK-8测定Ti颗粒对细胞增殖的影响;转染miR-25模拟物(mimics)至RAW264.7细胞,并与Ti颗粒培养诱导破骨细胞的分化;免疫荧光检测NFATc1的激活状态,TRAP染色及计数验证各组破骨细胞分化情况,实时荧光定量PCR检测Ca2+/NFATc1通路分子NFATc1、CaMKⅡ、CaMKⅣmRNA表达.结果与结论:①低浓度的Ti颗粒(0.1 g/L)对细胞增殖无明显影响;②与阴性对照组相比,miR-25过表达组破骨细胞(TRAP阳性细胞)生成明显减少(P<0.05);③细胞内转染miR-25模拟物后,免疫荧光检测见NFATc1的激活减少,荧光强度降低;④miR-25过表达后信号通路分子NFATc1、CaMKⅡ、CaMKⅣmRNA的表达显著下降(P<0.05).⑤结果表明,miR-25过表达能抑制Ti颗粒诱导的破骨细胞分化,这一过程可能是通过Ca2+/NFATc1通路实现的.

摘要： 背景:研究发现miR-25的下调与活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)过度激活相关,而NFATc1是破骨细胞分化成熟中的核心转录因子,提示miR-25的表达水平能调控破骨细胞分化。目的:探讨过表达miR-25对Ti颗粒诱导的破骨细胞分化的影响,并探索其中的信号通路。方法:体外培养RAW264.7细胞系,CCK-8测定Ti颗粒对细胞增殖的影响;转染miR-25模拟物(mimics)至RAW264.7细胞,并与Ti颗粒培养诱导破骨细胞的分化;免疫荧光检测NFATc1的激活状态,TRAP染色及计数验证各组破骨细胞分化情况,实时荧光定量PCR检测Ca^(2+)/NFATc1通路分子NFATc1、CaMKⅡ、CaMKⅣmRNA表达。结果与结论:①低浓度的Ti颗粒(0.1 g/L)对细胞增殖无明显影响;②与阴性对照组相比,miR-25过表达组破骨细胞(TRAP阳性细胞)生成明显减少(P<0.05);③细胞内转染miR-25模拟物后,免疫荧光检测见NFATc1的激活减少,荧光强度降低;④miR-25过表达后信号通路分子NFATc1、CaMKⅡ、CaMKⅣmRNA的表达显著下降(P<0.05)。⑤结果表明,miR-25过表达能抑制Ti颗粒诱导的破骨细胞分化,这一过程可能是通过Ca^(2+)/NFATc1通路实现的。

摘要： 探讨红毛五加多糖(Acanthopanax giraldii Hams polysaccharide)单一组分AHP-Ⅲ(Acanthopanax giraldii Hams polysaccharideⅢ)对小鼠巨噬细胞RAW 264.7的激活作用及机制。不同浓度AHP-Ⅲ作用RAW 264.7细胞,中性红试验检测细胞吞噬能力;ELISA和Griess法检测其IL-6、TNF-α和NO的释放量;RT-qPCR检测iNOS、TNF-α和IL-6 mRNA相对表达水平;Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化水平。在实验浓度范围内,AHP-Ⅲ可显著增强RAW 264.7细胞的吞噬能力(P<0.05);促进RAW 264.7分泌NO、TNF-α和IL-6(P<0.05或P<0.001);并显著增加RAW 264.7细胞中IL-6、TNF-α和iNOS mRNA的表达量,呈剂量依赖性;Western blot结果表明,AHP-Ⅲ作用RAW 264.7细胞后,NF-κB中的p65、IKKβ、IκBα磷酸化水平明显升高。结果显示红毛五加多糖AHP-Ⅲ对小鼠巨噬细胞RAW 264.7具有显著激活作用。

摘要： 目的:探讨丹酚酸B(Sal B)对小鼠动脉粥样硬化病变和氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞胞葬作用的影响,阐明Sal B抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:将32只雄性低密度脂蛋白受体基因敲除(LDLR-/-)小鼠随机分为对照组、模型组、Sal B组和阿托伐他汀组,每组8只。对照组小鼠给予普通饲料喂养,其他各组小鼠给予高脂饲料喂养12周。对照组和模型组小鼠每日给予生理盐水腹腔注射,Sal B组小鼠给予Sal B溶液腹腔注射,阿托伐他汀组小鼠给予阿托伐他汀溶液灌胃。检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)水平,油红O染色法观察小鼠主动脉粥样硬化斑块面积百分率。RAW264.7细胞分为对照组、ox-LDL组(采用40 mg·L^(-1) ox-LDL诱导24 h),低、中和高剂量Sal B组(给予含1.25、2.50和5.00 mg·L^(-1) Sal B的培养基)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blotting法检测各组小鼠主动脉组织及RAW264.7细胞中AXL、MERTK、TYRO3和乳脂球表皮生长因子8(MFGE8)mRNA及蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-c水平升高(P<0.05),小鼠主动脉粥样硬化斑块面积百分率升高(P<0.05),小鼠主动脉组织中AXL、MERTK、TYRO3和MFGE8 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,Sal B和阿托伐他汀组小鼠血清TC、TG和LDL-c水平降低(P<0.01),小鼠主动脉粥样硬化斑块面积百分率降低(P<0.01),小鼠主动脉组织中AXL、MERTK、TYRO3和MFGE8 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,ox-LDL诱导组RAW264.7细胞中AXL、MERTK、TYRO3和MFGE8 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与ox-LDL诱导组比较,Sal B组RAW264.7细胞中AXL、MERTK、TYRO3、MFGE8 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。结论:Sal B通过上调胞葬相关分子表达,促进LDLR-/-小鼠及RAW264.7细胞的胞葬作用,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用。

摘要： 目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)调控丝裂原活化蛋白激酶/核因子κB(MAPK/NF-κB)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的RAW 264.7细胞炎症反应的影响。方法取对数生长期的RAW264.7细胞,随机分为对照组、LPS(1μg/mL)组、LPS+EGCG-L(12.5μmol/L)组、LPS+EGCG-M(25μmol/L)组、LPS+EGCG-H(50μmol/L)组、LPS+DEX(阳性对照,0.5μg/mL)组、LPS+EGCG-H+Anisomycin(300 ng/mL MAPK/NF-κB通路激活剂Anisomycin)组,细胞在添加对应的药物处理1 h后,再加入100μL 1μg/mL LPS,培养24h后,进行后续相关实验。利用倒置显微镜观察各组细胞的形态特征;MTT法检测各组细胞的存活率;Griess法检测各组细胞上清中一氧化氮(NO)含量;ELISA法检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-10(IL-10)的表达;Western blotting检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)蛋白及MAPK/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果各组细胞的存活率均大于92%;与对照组比较,LPS组RAW264.7细胞形态呈梭形,细胞中iNOS、COX-2、p-p38、p-IκBα、p-NF-κB蛋白及上清中NO含量、TNF-α、IL-6、IL-1β表达显著升高,IL-10表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,LPS+EGCG-L组、LPS+EGCG-M组、LPS+EGCG-H组、LPS+DEX组对应指标变化与上述相反,且EGCG浓度越高,趋势越明显(P<0.05);Anisomycin可逆转高剂量EGCG对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用。结论EGCG可抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,该机制与抑制MAPK/NF-κB信号通路有关。

摘要： 目的研究丹栀龙胆逍遥汤中抗炎成分獐牙菜苦苷、京尼平苷酸、没食子酸复配物对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞炎症以及2,4-二硝基氯苯(DNCB)诱导小鼠特应性皮炎的保护作用。方法采用MTT法检测细胞活力,Griess法检测NO水平,ELISA法检测IL-6、TNF-α、PGE_(2)、iNOS、COX-2水平,Western blot法和免疫荧光染色检测NF-κB p65核易位,采用HE染色、甲苯胺蓝染色以及IgE试剂盒检测小鼠特应性皮炎皮损情况。结果 0~200μg/mL质量浓度的复配物对细胞活力无明显影响(P>0.05)。在细胞炎症模型中,复配物处理可以降低NO、IL-6、TNF-α、PGE_(2)、iNOS和COX-2水平(P<0.05,P<0.01);复配物可抑制LPS诱导的NF-κB p65核易位。在小鼠特应性皮炎模型中,外用复配物可以降低小鼠皮肤的表皮增厚、肥大细胞增多以及血清总IgE水平(P<0.05,P<0.01)。结论獐牙菜苦苷、京尼平苷酸、没食子酸复配物在体外细胞炎症和体内小鼠特应性皮炎中都具有很好的抗炎效果。

摘要： 该研究通过脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型,对粉葛粗多糖(FGC)、葛根粗多糖(GGC)以及粉葛均一多糖(FGJ)的抗炎作用进行比较。用CCK8试剂盒检测FGC、GGC以及FGJ对细胞活力的影响;相关试剂盒检测细胞产生NO、TNF-α、IL-6的分泌情况;蛋白印迹法检测NF-κB、Nrf2/HO-1通路相关蛋白表达,QPCR检测TNF-α、IL-6的mRNA表达,通过流式检测活性氧的产生。结果显示,在浓度为10、20、40μg/mL时,FGC、GGC以及FGJ对细胞均没有毒性(p>0.05)。各浓度的FGC、FGJ不能抑制LPS诱导产生的的NO、TNF-α、IL-6(p>0.05),GGC在浓度为40μg/mL时,对NO、TNF-α、IL-6的抑制率达到38.46%、52.90%、55.87%,可以抑制细胞内ROS释放,在10、20、40μg/mL时抑制率达到37.28%、41.05%、54.09%,在浓度为40μg/mL时,对iNOS、COX-2、p-p65、p-IκBα的抑制率达到29.27%、95.04%、27.18%、28.45%,对Nrf2、HO-1蛋白的表达有促进作用,在浓度40μg/mL时显著地抑制IL-6与TNF-α的mRNA表达,抑制率达到57.70%、81.68%。结果证明,GGC与FGC、FGJ相比抗炎活性更加明显,并且其抗炎作用是通过NF-κB与Nrf2/HO-1两条通路来实现的。

摘要： 本研究以RAW264.7细胞为研究对象,使用H2O2构建细胞氧化损伤模型.采用MTT法获得H2O2的IC50为467.46μM,姜黄素的安全浓度为0～20μM.同时,还测定了抗氧化和凋亡相关指标.试验结果表明,姜黄素能够在一定程度上提高CAT、SOD和GSH-PX酶活力,降低细胞内ROS水平,并且各试验组均能显著降低MDA水平.细胞凋亡测定结果表明,姜黄素能够在一定程度上缓解氧化损伤带来的伤害,阻止细胞凋亡的进行,特别是阻止早期凋亡向晚期凋亡的转化,从而提高细胞存活率.综上,姜黄素能够通过上调抗氧化相关酶的活性,来增强其清除ROS能力,消除伴随着氧化应激而产生的细胞凋亡.

摘要： 本研究以RAW264.7细胞为研究对象,使用H2O2构建细胞氧化损伤模型.采用MTT法获得H2O2的IC50为467.46μM,姜黄素的安全浓度为0～20μM.同时,还测定了抗氧化和凋亡相关指标.试验结果表明,姜黄素能够在一定程度上提高CAT、SOD和GSH-PX酶活力,降低细胞内ROS水平,并且各试验组均能显著降低MDA水平.细胞凋亡测定结果表明,姜黄素能够在一定程度上缓解氧化损伤带来的伤害,阻止细胞凋亡的进行,特别是阻止早期凋亡向晚期凋亡的转化,从而提高细胞存活率.综上,姜黄素能够通过上调抗氧化相关酶的活性,来增强其清除ROS能力,消除伴随着氧化应激而产生的细胞凋亡.

摘要： 本研究以RAW264.7细胞为研究对象,使用H2O2构建细胞氧化损伤模型.采用MTT法获得H2O2的IC50为467.46μM,姜黄素的安全浓度为0～20μM.同时,还测定了抗氧化和凋亡相关指标.试验结果表明,姜黄素能够在一定程度上提高CAT、SOD和GSH-PX酶活力,降低细胞内ROS水平,并且各试验组均能显著降低MDA水平.细胞凋亡测定结果表明,姜黄素能够在一定程度上缓解氧化损伤带来的伤害,阻止细胞凋亡的进行,特别是阻止早期凋亡向晚期凋亡的转化,从而提高细胞存活率.综上,姜黄素能够通过上调抗氧化相关酶的活性,来增强其清除ROS能力,消除伴随着氧化应激而产生的细胞凋亡.

摘要： 本研究以RAW264.7细胞为研究对象,使用H2O2构建细胞氧化损伤模型.采用MTT法获得H2O2的IC50为467.46μM,姜黄素的安全浓度为0～20μM.同时,还测定了抗氧化和凋亡相关指标.试验结果表明,姜黄素能够在一定程度上提高CAT、SOD和GSH-PX酶活力,降低细胞内ROS水平,并且各试验组均能显著降低MDA水平.细胞凋亡测定结果表明,姜黄素能够在一定程度上缓解氧化损伤带来的伤害,阻止细胞凋亡的进行,特别是阻止早期凋亡向晚期凋亡的转化,从而提高细胞存活率.综上,姜黄素能够通过上调抗氧化相关酶的活性,来增强其清除ROS能力,消除伴随着氧化应激而产生的细胞凋亡.

摘要： 本研究以RAW264.7细胞为研究对象,使用H2O2构建细胞氧化损伤模型.采用MTT法获得H2O2的IC50为467.46μM,姜黄素的安全浓度为0～20μM.同时,还测定了抗氧化和凋亡相关指标.试验结果表明,姜黄素能够在一定程度上提高CAT、SOD和GSH-PX酶活力,降低细胞内ROS水平,并且各试验组均能显著降低MDA水平.细胞凋亡测定结果表明,姜黄素能够在一定程度上缓解氧化损伤带来的伤害,阻止细胞凋亡的进行,特别是阻止早期凋亡向晚期凋亡的转化,从而提高细胞存活率.综上,姜黄素能够通过上调抗氧化相关酶的活性,来增强其清除ROS能力,消除伴随着氧化应激而产生的细胞凋亡.

摘要： 目的：观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响.rn 方法：采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型.以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量.rn 结果：雷公藤次碱在11.5～115μmol·L-1的浓度范围内,对RAW264.7细胞无毒性作用(p>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO(p<0.01);雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制(p<0.05,p<0.01).rn 结论：雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关.

摘要： 目的：观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响.rn 方法：采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型.以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量.rn 结果：雷公藤次碱在11.5～115μmol·L-1的浓度范围内,对RAW264.7细胞无毒性作用(p>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO(p<0.01);雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制(p<0.05,p<0.01).rn 结论：雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关.

摘要： 目的：观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响.rn 方法：采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型.以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量.rn 结果：雷公藤次碱在11.5～115μmol·L-1的浓度范围内,对RAW264.7细胞无毒性作用(p>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO(p<0.01);雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制(p<0.05,p<0.01).rn 结论：雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关.

摘要： 目的：观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响.rn 方法：采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型.以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量.rn 结果：雷公藤次碱在11.5～115μmol·L-1的浓度范围内,对RAW264.7细胞无毒性作用(p>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO(p<0.01);雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制(p<0.05,p<0.01).rn 结论：雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关.

摘要： 目的：观察雷公藤次碱(wilforine)对脂多糖诱导的小鼠单核/巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症模型中炎症因子的影响.rn 方法：采用LPS刺激生长良好的RAW264.7细胞,建立细胞炎症模型.以CCK-8法检测不同浓度雷公藤次碱对RAW264.7细胞的毒性作用;以酶联免疫吸附试验检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量;以硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量.rn 结果：雷公藤次碱在11.5～115μmol·L-1的浓度范围内,对RAW264.7细胞无毒性作用(p>0.05);脂多糖可以明显诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和NO(p<0.01);雷公藤次碱可使TNF-α、IL-6和NO的释放受到抑制(p<0.05,p<0.01).rn 结论：雷公藤次碱可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎作用与减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和NO的产生有关.

摘要： 本发明涉及十二烷基癸烯酸BDSF在提升RAW264.7巨噬细胞吞噬能力中的应用，属于生物药品技术领域技术领域。加入BDSF的浓度为3～300μmol/L时可以提升RAW264.7巨噬细胞吞噬C.albicans的能力，BDSF提升RAW264.7巨噬细胞吞噬C.Albicans的作用时间为2h，3h，4h，5h，6h。BDSF具有低生物毒性，且对免疫细胞RAW264.7巨噬细胞吞噬能力的提升有显著效果。

摘要： 一种在Raw264.7细胞中快速构建稳定高表达细胞株的方法：将质粒转化到感受态DH5α；对转化后的DH5α扩大培养，提取质粒；将转后的大肠杆菌进行质粒提取，获得将目的基因与载体连接，转化到感受态DH5α；对转化后的DH5α扩大培养，提取质粒；将获得的质粒转染293T细胞，获得慢病毒液；利用PTG8000浓缩病毒液的方法浓缩病毒液；利用电转仪通过电转的方式将浓缩病毒转入Raw264.7细胞；稳定表达细胞的筛选；细胞扩增；获得稳定高表达目的基因的Raw264.7细胞株。本发明利用电转仪解决了Raw264.7细胞难感染，难以构建稳定高表达细胞株的问题，操作简便，可以在短时间内获得稳定高表达某基因的Raw264.7细胞株。

摘要： 本发明涉及一种转染红色荧光蛋白的RAW264.7单细胞稳定细胞系及其筛选方法。所述筛选方法包括：(1)向RAW264.7细胞中加入pDsRED2‑C1质粒和转染试剂进行转染；(2)向步骤(1)得到的细胞施加筛选压力；(3)根据荧光观察结果，选择转染阳性的步骤(2)细胞进行消化、重悬、单细胞稀释铺板，并进行单细胞稳定细胞株筛选。本发明所涉及的筛选转染红色荧光蛋白的RAW264.7单细胞稳定细胞系的方法能够得到转染效果好的RAW264.7单细胞细胞系，且其具有良好的传代稳定性。

摘要： 本发明公开了一种RAW264.7细胞成破骨细胞的诱导方法，所述方法包括以下步骤：制备RAW264.7培养基以及成破骨细胞诱导培养基；取RAW264.7细胞，通过0.25%胰酶消化RAW264.7细胞至6孔板内，每孔接种约2X104个细胞，再加入RAW264.7培养基的培养液，每孔添加2ml，通过显微镜观察细胞的生长状况，细胞融合度20%左右为最佳诱导密度；移除旧的RAW264.7培养基，更换为成破骨细胞诱导培养基，每孔添加2ml，培养箱内培养；48h后更换成破骨细胞诱导培养基，96h时第二次更换成破骨细胞诱导培养基，120h时第三次换液，144h时诱导完成。本发明通过添加制备的成破骨细胞诱导培养基，并且三次更换诱导液，144h时即诱导完成，大大提高RAW264.7细胞的诱导效率，提高诱导破骨细胞的成功率。

摘要： 本发明公开了一种稳定表达人源不同ApoE基因型的Raw264.7细胞系在研究ApoE基因型对炎症免疫的影响上的应用，及该稳转细胞系的制备方法：利用转染试剂将带有EGFP标签的人源不同ApoE基因型质粒ApoE2、ApoE3、ApoE4和对照质粒N1转染到Raw264.7细胞中；添加阳性筛选剂G418选择性培养后，流式细胞仪单细胞分选模式多次分选得到稳转细胞株，并进行ApoE基因型和表达鉴定；应用该稳转细胞研究ApoE基因型对NLRP3炎症小体活化、内源性褪黑素合成、线粒体能量代谢以及病原体清除等的影响。该细胞株为进一步研究不同ApoE基因型在炎症免疫领域的生物学特性及药物研发提供了很好的工具。

摘要： 本发明脂多糖诱导的Caco‑2/RAW264.7细胞共培养模型的建立方法及应用，包括：1）Caco‑2细胞和RAW264.7细胞的培养；2）将Caco‑2细胞接种于Transwell板上室的AP侧，孵化；3）RAW 264.7细胞接种于24孔板，孵化；4）将Transwell上室转移到24孔板；5）将脂多糖溶于PBS中，配制母液，过滤后稀释备用；6）在BL侧加入LPS‑10%DMEM培养基孵化，形成肠道炎症模型。本发明建立了肠上皮细胞系Caco‑2和巨噬细胞系RAW‑264.7细胞的体外模型，以建立肠道炎症反应，用以研究巨噬细胞介导的Caco‑2细胞对C3G纳米脂质体的吸收机制。

摘要： 本发明属于医药及功能性食品领域，本发明公开了天然活性物质在缓解苯并芘诱导的RAW264.7细胞脂质代谢紊乱中的应用。巨噬细胞的脂质代谢紊乱是引起动脉粥样硬化的诱因之一。本发明首次发现环境或食品中的污染物苯并芘能够引起巨噬细胞RAW264.7的脂质积累，表现为细胞内脂滴蓄积，总胆固醇与甘油三酯含量升高。而红景天苷、大蒜素和蒜氨酸能在不同程度上缓解苯并芘对细胞脂质代谢所造成的影响。在对细胞的安全剂量内，三种天然活性物质能够通过减少细胞内脂滴的蓄积；降低总胆固醇和甘油三酯的含量；激活在脂质代谢中起重要调控作用的蛋白cAMP来缓解苯并芘引起的脂质积聚，三种天然活性物质均能在不同程度上对苯并芘诱导的细胞脂质代谢紊乱起缓解作用。

摘要： 本发明公开了一种RAW 264.7细胞炎症模型的建立方法。该方法首次使用革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌匀浆提取液为刺激物诱导RAW 264.7细胞炎症反应。通过简单的超声和离心步骤获得细菌匀浆提取物，对革兰氏阴性菌鼠伤寒沙门氏菌和革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌匀浆提取物按不同的体积比制备刺激物，结果发现不同体积比的制剂的细胞毒性低，均能高效诱导RAW 264.7细胞发生炎症反应。本发明建立的RAW 264.7细胞炎症模型弥补了LPS诱导RAW 264.7炎症模型不稳定的缺点，此外由于包含多种病原相关分子模式，涉及多条信号通路，为抗炎药物及抗炎机制研究提供了更有效的细胞炎症模型，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明涉及一种LPS诱导RAW264.7细胞炎症模型的建立方法，通过LPS体外处理RAW264.7细胞，LPS浓度为1‑1000ng/ml，处理时间为4‑24h。本发明利用不同浓度LPS作用不同时间，通过MTS检测细胞存活率，检测细胞因子TNF‑α，IL‑6和IL‑1β的分泌，检测NO的释放等指标，为探究LPS体外诱导RAW264.7细胞炎症与免疫之间的关系和免疫相关疾病的发生机制提供了理论基础，同时也为深入研究炎症的感染机制和开发用于炎症感染的制剂提供技术基础和理论参考。

摘要： 本发明公开了一种PRRSV诱导RAW264.7细胞氧化胁迫模型的建立方法，采用PRRSV体外处理RAW264.7细胞，病毒浓度为TCID50是10‑5.5/0.1mL的PRRSV病毒原液的100‑10‑4，处理时间为4‑48h。应用本发明，利用不同浓度PRRSV作用不同时间，通过检测细胞存活率，NO释放，细胞内ROS水平，GSH和GSSG含量，XOD、MPO和iNOS活性等指标，为阐明PRRSV体外诱导RAW264.7细胞氧化应激与免疫抑制之间的关系和疾病的发生发展机制提供了有力的理论依据，也为后续深入研究PRRSV的感染机制和开发应用于PRRSV感染的制剂提供技术平台和理论参考。