背景:研究发现miR-25的下调与活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)过度激活相关,而NFATc1是破骨细胞分化成熟中的核心转录因子,提示miR-25的表达水平能调控破骨细胞分化.目的:探讨过表达miR-25对Ti颗粒诱导的破骨细胞分化的影响,并探索其中的信号通路.方法:体外培养RAW264.7细胞系,CCK-8测定Ti颗粒对细胞增殖的影响;转染miR-25模拟物(mimics)至RAW264.7细胞,并与Ti颗粒培养诱导破骨细胞的分化;免疫荧光检测NFATc1的激活状态,TRAP染色及计数验证各组破骨细胞分化情况,实时荧光定量PCR检测Ca2+/NFATc1通路分子NFATc1、CaMKⅡ、CaMKⅣmRNA表达.结果与结论:①低浓度的Ti颗粒(0.1 g/L)对细胞增殖无明显影响;②与阴性对照组相比,miR-25过表达组破骨细胞(TRAP阳性细胞)生成明显减少(P<0.05);③细胞内转染miR-25模拟物后,免疫荧光检测见NFATc1的激活减少,荧光强度降低;④miR-25过表达后信号通路分子NFATc1、CaMKⅡ、CaMKⅣmRNA的表达显著下降(P<0.05).⑤结果表明,miR-25过表达能抑制Ti颗粒诱导的破骨细胞分化,这一过程可能是通过Ca2+/NFATc1通路实现的.
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