乌头原碱下调NFATc1、NF-κB转录和破骨相关基因表达抑制RANKL诱导的破骨细胞生成

摘要

目的：附子、乌头用于治疗类风湿性关节炎已有2000多年的历史,临床使用需久煎,而乌头原碱为其长时间煎煮后的低毒化学成分,但其对类风湿性关节炎中起关键作用的破骨细胞的影响仍未阐明.因此,本研究将探讨中药单体乌头原碱抑制破骨细胞HYPERLINK分化和骨吸收功能的作用和机制.rn 方法：用RANKL诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7在体外生成破骨细胞,采用TRAP染色观察乌头原碱对破骨细胞分化形成的影响,骨片吸收实验评价药物对破骨细胞骨吸收功能的作用,利用Realtime-PCR技术观察乌头原碱对破骨细胞特异性基因c-Src、cathepsin K、β3-Integrin和核转录因子NFATc1,Fra-1和Fra-2 mRNA表达的影响.此外,采用NF-κB-luc和NFATcl-luc稳转的Raw264.7细胞,通过检测荧光素酶报告基因,观察乌头原碱对RANKL激活的核转录因子NF-κB和NFATc1转录表达的影响.rn 结果：乌头原碱呈剂量依赖性地抑制破骨细胞前体细胞(RAW264.7)生成破骨细胞及骨吸收活性，同时无显著细胞毒性。乌头原碱能降低RANKL诱导的破骨前体细胞核转录因子NFATc1和NF-κB转录表达;此外，乌头原碱明显抑制破骨相关基因如c-Src、cathepsin K、β3-Integrin和核转录因子NFATc1、Fra-1和Fra-2的基因表达。rn 结论：乌头原碱能够抑制破骨细胞分化和破骨功能，作用机制可能与其下调破骨细胞生成的关键核转录因子NFATc1和NF-κB转录和多种破骨相关基因尤其是cathepsin K、Fra-1表达有关。