内毒素耐受

摘要： 内毒素耐受是指机体或细胞提前经低剂量脂多糖连续刺激后,对大剂量脂多糖的再刺激呈低反应甚至是无反应的一种现象。内毒素耐受是一个复杂的病理生理过程,涉及多个细胞信号通路、生物分子和受体改变。到目前为止,确切的机制尚不十分清楚。最近的研究表明内毒素耐受现象与一些疾病有关,如脓毒症、糖尿病、囊性纤维化和癌症等。本文就内毒素耐受的体内和体外模型、Toll样受体家族及其下游信号转导途径、表观遗传学及其对内毒素耐受机制的调控及临床应用研究进展做一综述。

摘要： 目的研究熊果酸(ursolic acid,UA)和坡膜酸(pomolic acid,PA)上调乌头酸脱羧酶1(aconitate decarboxylase 1,IRG1)表达从而促进巨噬细胞内毒素耐受的活性机制。方法用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7细胞两次构建巨噬细胞内毒素耐受模型;将细胞分为空白对照组、LPS组以及LPS+IRG1过表达组,检测IRG1高表达状态下巨噬细胞在两次LPS刺激下IL-6、TNF-α的分泌情况;将细胞分为LPS组和不同浓度的UA和PA干预组,检测两次LPS刺激下各组巨噬细胞IL-6、TNF-α的分泌和IRG1表达情况。结果过表达IRG1后,与空白对照组相比,LPS组的巨噬细胞在第二次LPS刺激下,IL-6和TNF-α的分泌均受到抑制(P<0.01);与LPS组相比,实验所设的LPS+UA和LPS+PA各浓度组均能有效减少巨噬细胞在受到LPS第二次刺激时IL-6和TNF-α的分泌,并能上调细胞中IRG1蛋白的表达水平(P<0.01)。结论UA和PA的干预能够促进巨噬细胞内毒素耐受,且与二者上调细胞中IRG1蛋白表达有关。

摘要： 目的寻找内毒素耐受(ET)的潜在关键基因,为脓毒症的治疗提供理论和实验依据。方法①实验1(基因芯片与生物信息分析):从基因表达数据库(GEO)中下载ET相关基因数据集GSE47783,该数据集由脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞建立脓毒症模型(LPS组)和ET模型(ET组)后进行实验获得;利用IDEP 0.92软件筛选数据集中两组差异表达基因(DEG),同时进行基因本体(GO)分析,并定位DEG主要富集的功能和信号通路。利用基因与蛋白质相互作用检索数据库(STRING),针对DEG构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选出核心基因甲型肝炎病毒细胞膜蛋白受体2(HAVCR2)进行后续验证研究。②实验2(小鼠巨噬细胞株RAW264.7模型制备):体外培养RAW264.7细胞,通过LPS刺激制备ET模型(ET组,用10μg/L的LPS培养24 h后,再用100μg/L的LPS培养4 h)和脓毒症模型(LPS组,用100μg/L的LPS培养4 h);磷酸盐缓冲液(PBS)组给予等体积溶媒PBS培养4 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞HAVCR2的mRNA及蛋白表达。③实验3(HAVCR2慢病毒载体转染RAW264.7细胞):为进一步明确HAVCR2是否参与ET形成,用慢病毒短发夹RNA(shRNA)技术敲低RAW264.7细胞中的HAVCR2后,再制备ET模型(HAVCR2--ET组),并设非敲低HAVCR2的对照组(ET组)。采用RT-qPCR法检测细胞中巨噬细胞极化关键基因〔精氨酸酶1(ARG1)、CD206、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、一氧化氮合酶2(NOS2)〕的mRNA表达。结果①实验1:共获得1013个DEG;与LPS组比较,ET组有521个上调基因,492个下调基因;这些DEG的功能主要为增加生物合成、抑制炎症反应,主要富集于Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK/STAT)、NOD样受体、Toll样受体(TLR)、TNF、缺氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路。选择ET组第一个表达上调的膜蛋白HAVCR2作为验证研究的目标。②实验2:体外实验结果显示,经大剂量LPS处理后,RAW264.7细胞中HAVCR2 mRNA表达较PBS组明显下调;而ET组HAVCR2 mRNA表达明显高于LPS组(2^(-ΔΔCT):1.10±0.10比0.60±0.10,P<0.05);Western blotting检测结果与RT-qPCR结果一致。③实验3:与ET组相比,HAVCR2--ET组细胞ARG1和CD206的mRMA表达明显降低〔ARG1 mRNA(2^(-ΔΔCT)):0.50±0.10比1.00±0.10,CD206 mRNA(2^(-ΔΔCT)):0.73±0.10比1.00±0.10〕,下游因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达明显升高〔TNF-αmRNA(2^(-ΔΔCT)):2.20±0.10比1.00±0.10,IL-1βmRNA(2^(-ΔΔCT)):9.00±0.10比1.00±0.10〕,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组NOS2 mRNA表达差异无统计学意义。结论HAVCR2参与脓毒症下游炎性因子的调节,参与ET的形成,有望成为脓毒症新的治疗靶点。

摘要： 目的 寻找内毒素耐受(ET)的潜在关键基因,为脓毒症的治疗提供理论和实验依据.方法 ① 实验1(基因芯片与生物信息分析):从基因表达数据库(GEO)中下载ET相关基因数据集GSE47783,该数据集由脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞建立脓毒症模型(LPS组)和ET模型(ET组)后进行实验获得;利用IDEP 0.92软件筛选数据集中两组差异表达基因(DEG),同时进行基因本体(GO)分析,并定位DEG主要富集的功能和信号通路.利用基因与蛋白质相互作用检索数据库(STRING),针对DEG构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,筛选出核心基因甲型肝炎病毒细胞膜蛋白受体2(HAVCR2)进行后续验证研究.② 实验2(小鼠巨噬细胞株RAW264.7模型制备):体外培养RAW264.7细胞,通过LPS刺激制备ET模型(ET组,用10μg/L的LPS培养24 h后,再用100μg/L的LPS培养4 h)和脓毒症模型(LPS组,用100μg/L的LPS培养4 h);磷酸盐缓冲液(PBS)组给予等体积溶媒PBS培养4 h.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测细胞HAVCR2的mRNA及蛋白表达.③ 实验3(HAVCR2慢病毒载体转染RAW264.7细胞):为进一步明确HAVCR2是否参与ET形成,用慢病毒短发夹RNA(shRNA)技术敲低RAW264.7细胞中的HAVCR2后,再制备ET模型(HAVCR2--ET组),并设非敲低HAVCR2的对照组(ET组).采用RT-qPCR法检测细胞中巨噬细胞极化关键基因〔精氨酸酶1(ARG1)、CD206、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、 一氧化氮合酶2(NOS2)〕 的mRNA表达.结果 ① 实验1:共获得1013个DEG;与LPS组比较,ET组有521个上调基因,492个下调基因;这些DEG的功能主要为增加生物合成、抑制炎症反应,主要富集于Janus激酶/信号转导与转录激活因子(JAK/STAT)、NOD样受体、Toll样受体(TLR)、TNF、缺氧诱导因子-1(HIF-1)等信号通路.选择ET组第一个表达上调的膜蛋白HAVCR2作为验证研究的目标.② 实验2:体外实验结果显示,经大剂量LPS处理后,RAW264.7细胞中HAVCR2 mRNA表达较PBS组明显下调;而ET组HAVCR2 mRNA表达明显高于LPS组(2-ΔΔCT:1.10±0.10比0.60±0.10,P<0.05);Western blotting检测结果与RT-qPCR结果一致.③ 实验3:与ET组相比,HAVCR2--ET组细胞ARG1和CD206的mRMA表达明显降低〔ARG1 mRNA(2-ΔΔCT):0.50±0.10比1.00±0.10,CD206 mRNA(2-ΔΔCT):0.73±0.10比1.00±0.10〕,下游因子TNF-α和IL-1β的mRNA表达明显升高〔TNF-αmRNA(2-ΔΔCT):2.20±0.10比1.00±0.10,IL-1βmRNA(2-ΔΔCT):9.00±0.10比1.00±0.10〕,差异均有统计学意义(均P<0.05);两组NOS2 mRNA表达差异无统计学意义.结论 HAVCR2参与脓毒症下游炎性因子的调节,参与ET的形成,有望成为脓毒症新的治疗靶点.

摘要： 黄芪多糖是一种具有高效免疫调控效应的中草药提取物,动物摄入后可诱导肠道黏膜免疫系统TLR4通路内毒素耐受免疫反应,进而影响肠道黏膜免疫功能状态,优化动物肠道黏膜组织形态和健康状态.本文对黄芪多糖的免疫调控机理及其对肠道黏膜免疫系统的影响进行总结,以期为后续研究提供参考.

摘要： 内毒素耐受是机体对抗过度炎症反应时产生的一种保护性机制,指机体接受小剂量内毒素刺激后产生的一系列复杂的适应性调节反应,是机体或细胞对后续刺激反应性降低的一种现象.在内毒素诱导的葡萄膜炎中不仅可防止内毒素再次刺激后出现过度的炎症反应,还能减轻葡萄膜炎的症状.因此,如能阐明内毒素耐受减轻葡萄膜炎症状的机制及关键性调控因子,将有可能为以内毒素耐受为基础的葡萄膜炎的治疗找到新的靶点.

摘要： 内毒素耐受是机体对抗过度炎症反应时产生的一种保护性机制,指机体接受小剂量内毒素刺激后产生的一系列复杂的适应性调节反应,是机体或细胞对后续刺激反应性降低的一种现象。在内毒素诱导的葡萄膜炎中不仅可防止内毒素再次刺激后出现过度的炎症反应,还能减轻葡萄膜炎的症状。因此,如能阐明内毒素耐受减轻葡萄膜炎症状的机制及关键性调控因子,将有可能为以内毒素耐受为基础的葡萄膜炎的治疗找到新的靶点。

摘要： 目的 探讨内毒素耐受树突状细胞(endotoxin tolerant dendritic cell , ETDC)免疫功能的改变,观察其对脓毒症模型小鼠的作用.方法 以脂多糖刺激小鼠来源骨髓树突状细胞制备ETDC,流式细胞仪检测ETDC表面标志物主要组织相容性复合体( major histocompatibility complex , MHC)Ⅱ、CD86和CD11c表达水平,细胞计数试剂盒检测T淋巴细胞增殖率, ELISA检测细胞上清液中细胞因子水平.将36只BALB/c小鼠分为4组,空白对照组不做任何处理,假手术组行单纯切开缝合术,脓毒症组和ETDC回输治疗组行盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型前,分别尾静脉回输0.9%氯化钠溶液和ETDC与0.9%氯化钠混悬液.检测各组小鼠血丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase , ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspatate, AST)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factro, TNF)-α、白细胞介素(interleukin, IL)-6、IL-10水平和脾脏辅助性T-淋巴细胞( help T cells, Th)17/调节性T淋巴细胞(regulatory T cells, Treg)比例,观察小鼠肝脏、肾脏和回肠病理学表现.组间比较采用t检验或χ2检验.结果 ETDC表面MHCⅡ、CD86和CD11c表达分别为70.4%、43.1%、73.1%,较成熟树突状细胞(mature dendritic cell, mDC)的96.1%、89.5%和84.6%显著下降(χ2 值分别为56.47、83.78和23.29,均P＜0.01). ETDC细胞上清液中IL-10、TNF-α和IL-6分别为(978.04 ±56.70)、(980.34 ±111.96)和(12 743.03 ±865.81) ng/L, mDC分别为(741.35 ±99.23)、(1 703.11 ±117.00)和(19 052.28 ±1 145.84) ng/L,差异均有统计学意义(t值分别为5.073、10.93和10.76,均P＜0.01). ETDC和T淋巴细胞1∶5、1∶10共培养的增殖率分别为(676.95 ±85.99)%和( 514.00 ±106.39 )%, mDC 为(956.25 ±127.12)%和( 772.07 ± 214.08)%.ETDC回输治疗组小鼠肝脏、肾脏和回肠病理学改变明显轻于脓毒症组. ETDC回输治疗组小鼠血清ALT 和 AST 为(299.71 ±36.91)和(690.39 ±154.92) U/L, TNF-α、IL-6 和IL-10 分别为(0.067 ±0.005)、(0.428 ±0.051)和(0.058 ±0.005) ng/L,脓毒症组ALT和AST为(620.67 ±69.27)和(1 430.17 ±134.05)U/L, TNF-α、IL-6和IL-10分别为(0.085 ±0.007)、(0.774 ±0.088)和(0.036 ± 0.005)ng/L,差异均有统计学意义( t值分别为11.60、10.96、5.991、8.657 和8.042,均P＜0.01).ETDC回输治疗组小鼠Treg/Th17比例为23.4%,脓毒症组为60.8%( χ2 ＝28.69, P＜0.01).结论ETDC回输对脓毒症模型小鼠具有保护作用,可能是通过调节T淋巴细胞分化发挥了负向免疫调控作用.%Objective To study the changes of immune function of endotoxin tolerant dendritic cell (ETDC) and to observe its effect on sepsis in mouse model.Methods ETDC were prepared by pretreated bone marrow dendritic cells derived from BALB/c mice with lipopolysaccharide stimulation.The cells were collected and the expressions of surface markers including major histocompatibility complex ( MHC)Ⅱ, CD86 and CD11c were detected by flow cytometry.The proliferation rate of T lymphocytes was evaluated by cell counting kit-8 and the concentrations of cytokines in the supernatant were detected by enzyme linked immuno sorbent assay.Afterwards, 36 mice were randomly assigned into 4 groups.The blank control group did not receive any treatment, the sham-operated group underwent simple incision suture, the sepsis group and ETDC reinfusion group underwent cecal ligation and puncture to establish sepsis.Before sepsis model establishment, 0.9% sodium chloride solution or suspension of ETDC and 0.9%sodium chloride were reinfused by tail vein.The serum levels of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate transaminase (AST), tumor necrosis factor (TNF)-α, interleukin(IL)-6 and IL-10, and the proportion of help T cell ( Th) 17/regulatory T cell ( Treg) in spleen of each group were detected.The pathological manifestations of liver, kidney and ileum in each group were observed.T test and χ2 test were used for comparisons between groups.Results The results of flow cytometry showed that MHCⅡ, CD86 and CD11c of ETDC were 70.4%, 43.1%, and 73.1%, respectively, which were significantly lower than those of mature dendritic cell (mDC) (96.1%, 89.5%, and 84.6%, respectively) (χ2 ＝56.47, 83.78, and 23.29, respectively, all P＜0.01).The concentrations of IL-10, TNF-αand IL-6 in the supernatant of ETDC were (978.04 ±56.70), (980.34 ±111.96) and (12 743.03 ±865.81) ng/L, respectively, and those of mDC were (741.35 ±99.23), (1 703.11 ±117.00) and (19 052.28 ±1 145.84) ng/L, respectively.The differences were all statistically significant (t＝5.073, 10.93, and 10.76, respectively, all P＜0.01).The proliferation rates of T lymphocytes co-cultured with ETDC in 1∶5 and 1∶10 ratio group were (676.95 ±85.99)%and (514.00 ±106.39)%, respectively, which were lower than those of the mDC group (956.25 ±127.12)%and (772.07 ±214.08)%, respectively.The pathological injuries of liver, kidney and ileum in ETDC treatment group were significantly lighter than those in sepsis group.Serum ALT and AST levels in the ETDC reinfusion group were (299.71 ±36.91) and (690.39 ±154.92) U/L, respectively, and TNF-α, IL-6 and IL-10 were (0.067 ±0.005), (0.428 ±0.051) and (0.058 ±0.005) ng/L, respectively.Serum ALT and AST levels in the sepsis group were (620.67 ±69.27) and (1 430.17 ±134.05) U/L, respectively, and TNF-α, IL-6 and IL-10 were (0.085 ±0.007), (0.774 ±0.088) and (0.036 ±0.005) ng/L, respectively.The differences were all statistically significant (t＝11.60, 10.96, 5.991, 8.657, and 8.04, respectively, all P ＜0.01).The proportion of Treg/Th17 in the ETDC reinfusion group was 23.4%, and that in the sepsis group was 60.8%(χ2 ＝28.69, P＜0.01).Conclusion The reinfusion of ETDC has a protective effect on sepsis in mouse model, which may play a negative immune regulatory role by regulating the differentiation of T cells.

摘要： 目的 搜寻内毒素耐受相关的核心基因,探讨其在脓毒症中产生及发展的内在机制. 方法 从GEO数据库下载raw264.7细胞相关基因表达谱数据GSE8621,筛选出其中的脓毒症模型与内毒素耐受模型的样本芯片数据,将其分为脓毒症组和内毒素耐受组,运用在线数据分析软件GCBI对该芯片数据进行处理,筛选出两组间的差异基因并对差异基因进行基因本体论(GO)功能富集分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、基因共表达分析,通过STRING在线平台进行蛋白质的相互作用分析. 结果 两组数据进行对比后,共有2 584个差异基因被找到(P＜0.05);与脓毒症组相比,内毒素耐受组中有1 618条下调基因、966条上调基因.结果表明差异表达基因主要参与了转录的调节、细胞的凋亡以及蛋白质的磷酸化等生物进程,而功能通路分析显示这些差异基因主要集中于代谢相关通路、MAPK信号通路、PI3 K-Akt信号通路、肿瘤相关信号通路、Jak-STAT信号通路、NF-κB信号通路、TLRs信号通路等,并且基因Pik3r2、Nfkb1、Plcg2、Gnai3、Rac3、Src、Rnd1、E dn1、Socs3、Il10被筛选为核心基因. 结论 通过基因芯片对脓毒症组及内毒素耐受组的转录组学进行测序、分析,发现两组之间的差异基因,通过网络模块的建立,将基因Pik3r2、Nfkb1、Plcg2、Gnai3、Rac3、Src、Rnd1、Edn1、Socs3、Il10筛选为与内毒素相关的核心基因,这其中包括已经被证实的与脓毒症密切相关的基因及部分未被证实的基因,这为脓毒症的预防和治疗提供了新的方向.

摘要： 当机体遭受外来病原微生物入侵时,固有免疫系统发挥抵抗作用.病原微生物组成成分及机体自身产生的炎性因子结合抗原提呈细胞表面的Toll样受体(Toll receptors,TLRs),进而激活细胞内的一系列连锁反应,最终产生大量炎性因子.在脓毒症中,上述大量炎症因子释放状态又称为炎性因子风暴(cytokines storm),它会对机体产生炎性损伤,诱发脓毒性休克、多器官衰竭,是脓毒症早期死亡的主要原因.然而，机体面对这种过度的炎症状态自身也会做出相应的反馈调整来避免过度的伤害。而内毒素耐受(Endotoxin Tolerance,ET)机制就是其一。本文介绍了ET与脓毒症免疫抑制和ET的分子机制，并研究了ET的药物干预。深入了解ET发生的分子机制以及ET与机体状态的量化关系，可能会对脓毒症等炎症性疾病的研究提供新的希望。

摘要： 目的:观察革兰阴性菌感染所致脓毒症患者外周血单个核细胞Toll样受体4(TLR4)的表达与内毒素耐受之间的关系.rn 方法:以重症监护病房治疗的32例革兰阴性菌感染所致脓毒症患者为研究对象,另选20人为健康对照组,两组入选人员均晨起空腹采血,分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪技术检测单个核细胞表面TLR4的表达,另一部分外周血分离单个核细胞,并加入1μg/ml脂多糖(LPS)培养24小时,同样进行流式细胞仪检测单个核细胞表面TLR4的表达.并应用放射免疫法测定血清及外周血单个核细胞培养液中TNF-α、IL-6的浓度.rn 结果:(1)脓毒症组外周血单个核细胞表面TLR4表达、血清细胞因子TNF-a, IL-6浓度均明显高于健康对照组.(2)脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后培养上清液中TNF-a,IL-6的浓度显著低于健康对照组，脓毒症组患者外周血单个核细胞经LPS刺激后TLR4表达较刺激前轻度下调，但刺激前后组间无统计学差异.rn 结论：脓毒症患者外周血单个核细胞体外给予大剂量LPS刺激后可以产生内毒素耐受，但这种现象不能单纯用TLR4的表达下调解释，其可能存在更复杂的机制。内毒素耐受状况下，单个核细胞表现为促炎因子表达的明显下调。

摘要： 目的：探讨内毒素耐受和拟胆碱药物卡巴胆碱对巨噬细胞TNFα分泌的调节作用。rn 方法：①分离小鼠腹腔巨噬细胞，将其与LPS作用不同时间; ②小鼠腹腔巨噬细胞分为三组:空白对照组((RPMI1640常规培养),LPS耐受+刺激组(LPS预刺激20h,再用 LPS刺激4h)和LPS刺激组(RPMI1640常规培养20h后，再加LPS刺激4h);③分离大鼠腹腔巨噬细胞,分为三组：空白对照组、LPS刺激组及卡巴胆碱预处理后LPS刺激组。收集各组强胞培养上清淮及细胞裂解液,用ELISA方法检测TNFα浓度。rn 结果：LPS预刺激巨噬细胞20h后再次用LPS刺激时,其TNFα分泌量不增加,与对照组接近，同时细胞内TNFα含量也不增加。未经LPS预刺激的巨噬细胞在受到LPS刺激后TNFα分泌量大幅增加,同时细胞内TNFα含量也伴随增加,即细胞分泌和贮存的TNFα量变化一致。卡巴胆碱预处理巨噬细胞受内毒素刺激后TNFα分泌量低于单纯内毒素刺激组细胞,但细胞内的TNFα含量高于对照组,与单纯内毒素刺激组接近。rn 结论：巨噬细胞建立内毒素耐受机制或受到拟胆碱药物作用后,再次受到LPS刺激后均表现为TNFα分泌的减少,但细胞内TNFα量变化规律不一致。提示内毒豢耐受和胆碱能抗炎所致巨噬细胞炎症反应特性改变的机制不同。

摘要： 目的：建立内毒素耐受(endotoxin tolerance，ET)大鼠模型，探讨ET状态对大鼠肝脏Janus激酶/信号转导和转录激活子(Janus kinase/signaltransducer and activator of transcription，JAK/STAT)信号转导及对急性肝功能衰竭发生的影响。rn 方法：雄性SD大鼠，分为正常对照组、急性肝功能衰竭模型组(ALF组)和内毒素耐受组(ET组)。ET组及ALF组先分别以0.1mg/kg脂多糖(LPS)和0.9％Nacl溶液腹腔注射，每日1次，连续5次，于第6天同时腹腔注射D-氨基半乳糖(D-GalN)800 mg/kg和LPS8 μg/只，分别在注射D-GalN/LPS前(0 h)和注射后2、6、12、24和48h 6个时间点留取大鼠血及肝脏标本。RT-PCR法检测大鼠肝组织中STAT3和SOCS3 mRNA表达；ELISA法测定血清TNF-α、IL-6水平。数据分析采用t检验。rn 结果：ET组大鼠肝组织病理改变明显轻于ALF组，其血清TNF-α、IL-6水平虽仍高于正常对照组，但却明显低于ALF组(TNF-α：6 h组t值为2.670，P<0.05，12、24和48 h组t值分别为3.604、6.426、3.274，P值均<0.01；IL-6：6h组t值为2.333，P<0.05，12、24和48 h组t值分别为4.266、8.063、4.177，P值均<0.01)，ALF组大鼠肝组织STAT3和SOCS3 mRNA表达均明显上调，ET组STAT3 mRNA的表达较模型组明显下降，但SOCS3mRNA出现过表达现象。rn 结论：ET组大鼠出现STAT3的抑制及SOCS3的一过性高表达，使TNF-α、IL-6释放减少，减轻肝损伤，提示JAK/STAT途径可能在内毒素耐受的形成机制中发挥重要作用。rn 急性肝衰竭是肝细胞大面积坏死引起肝功能严重障碍所导致的综合征，大量炎性反应介质持续释放和堆积又反过来通过各种途径加重肝损害，形成恶性循环。其发病凶险，预后很差。肝功能衰竭时由于肝功能严重受损，肠道内毒素产生增加，同时也伴有库普弗细胞解毒功能受损，来自肠道的内毒素未经解毒而进入体循环，形成肠源性内毒素血症，内毒素能激活单核/巨噬细胞系统引起TNF-α等大量促炎介质释放。机体或单核-巨噬细胞经LPS预处理后，对LPS的再次刺激呈低反应或无反应的现象，称为内毒素耐受(endotoxin tolerance，ET)。研究表明，细胞因子对细胞行为的调节主要与胞内信号转导通路的活化密切相关，其中Janus激酶，信号转导和转录激活子(Janus kinase/signal transducer andactivator of transcription，JAK/STAT)途径因其简单的构成模式和独特的激活方式而备受关注，而一族被称为细胞因子信号转导抑制因子(suppressor of cytokinesignaling，SOCSs)的蛋白质作为JAK的内源抑制因子参与了JAK/STAT途径的“负反馈”调节过程，在维持机体免疫自稳中可能发挥重要作用。rn 我们建立了肝功能衰竭和内毒素耐受大鼠模型，探讨ET对大鼠肝组织JAK/STAT信号转导通路及ET对急性肝功能竭发生的影响。

摘要： 目的 了解单核细胞在产生内毒素耐受时,核因子Κb(Nuclear Factor Κb,NF-Κb)在蛋白质水平的表达,髓系细胞触发受体1(Triggering Receptor Expressed on Myeloid cells-1,TREM-1)核酸和蛋白质水平的表达及NF-Κb与TREM-1两者的关系。 　　方法 将无血清培养基培养的THP-1细胞随机分为4组(A、B、C、D),A为空白对照,B、C、D各分1、2、3三小组o B、C、D三组分别用浓度0、10、100ng/Mllps刺激24小时后,再按1、2、3三小组依次以10、100、500ng/Ml LPS刺激6小时,A组两次均用培养基培养,提取RNA及总蛋白,检测TREM-1在Mrna水平的表达及NF-Kb p65与TREM-1在蛋白水平的表达. 　　结果 内毒素耐受组Trem-1(Mrna和蛋白),NF-Κb P6s表达较LPS刺激组降低,各组TREM-1,NF-κBp65的表达组间差异均有显著意义.TREM-1 Mrna与TREM-1蛋白的表达高度正相关。 　　结论 内毒素耐受的THP-1细胞TREM-1下调,这可能在THP-1细胞的内毒素耐受过程中起重要作用。

摘要： 本发明提供了一种内毒素稳定剂，它能在较长时间内，在稳定状态下保持样品或参考标准中的内毒素活性，以及制备每瓶之间差异很小的内毒素参考标准，该内毒素参考标准在长时间内特别是在溶液状态下能保持稳定且能重复使用。本发明还提供一种包含上述内毒素稳定剂和内毒素的内毒素组合物以及利用上述物质分析内毒素的方法。

摘要： 本发明公开了一种去除果胶中内毒素的方法，旨在提供一种操作简单、产品收率高、易于工业化生产的内毒素去除方法；其技术要点是：(1)果胶溶于水中形成溶液；(2)果胶溶液微滤分离，去除固体杂质；(3)果胶溶液中加入酸溶液调节pH值形成酸凝胶，搅拌将凝胶打碎并进行清洗；结束后减压抽滤去除水分，加入碱溶液调pH值，溶解凝胶形成浓溶液；(4)果胶溶液加入无水乙醇进行沉淀；(5)果胶沉淀进行常压干燥。

摘要： 本发明涉及一种基于富铜离子材料标记的内毒素适配体传感器及其检测内毒素的方法。所述传感器由适配体修饰电极和富铜离子标记物构成。适配体与内毒素分子发生特异性结合后，进行铜离子标记。通过对富铜离子材料中铜离子含量的电化学分析，实现内毒素含量的间接测定。本发明所述基于富铜离子材料标记的内毒素适配体传感器可以实现对内毒素的强特异性、高灵敏、低检测限的快速检测，有助于实现内毒素电化学适配体传感器的低成本、稳定、批量的制备，推动生物化学检测的精准化和高效化。

摘要： 本文报道了一种测定抗体(使用细菌细胞产生的抗体)样品中低浓度的细菌内毒素的方法，其按照以下顺序包括以下步骤：i)向样品中加入镁离子，ii)稀释样品，iii)相对于无内毒素的水溶液透析具有pH值5.7‑8.0的样品，和iv)使用细菌内毒素测试，特别是鲎变形细胞溶解物测定法，测定样品中的细菌内毒素。

摘要： 一种在基本上是水的系统中通过固相萃取材料从已知的或可疑的含有内毒素的源中去掉或去除内毒素的方法，包括以下步骤：‑提供已知或疑似含内毒素的源，‑使所述已知或疑似含内毒素的源与带正电荷的固相材料接触，所述固相材料的表面固定有三价铁，其中所述固相萃取材料已通过(2‑氨基乙基)胺(TREN)配体固定了三价铁；‑孵育所述已知或疑似含内毒素的源一段时间，所述时间足以将内毒素结合到多孔固相材料上，‑将所述固相材料与所述基本上是水的体系分开，‑任选地分离所述基本上是水的体系，该系统不含或去掉了内毒素。

摘要： 本发明提供了一种内毒素稳定剂，它能在较长时间内，在稳定状态下保持样品或参考标准中的内毒素活性，以及制备每瓶之间差异很小的内毒素参考标准，该内毒素参考标准在长时间内特别是在溶液状态下能保持稳定且能重复使用。本发明还提供一种包含上述内毒素稳定剂和内毒素的内毒素组合物以及利用上述物质分析内毒素的方法。

摘要： 本发明涉及一种去除海藻酸盐中内毒素的方法及去除内毒素的海藻酸盐，旨在提供一种操作简单、易于工业化的高效去除海藻酸盐中内毒素的方法。其技术要点是：以水溶性海藻酸盐为原料，经微孔过滤分离去除不溶性颗粒，经离子交联形成凝胶，将凝胶浸入碱性溶液清洗，然后用水洗至中性，加入离子络合剂使凝胶形成溶液并透析、过滤，经吸附介质吸附后，在无菌环境下用有机溶剂将海藻酸盐析出，干燥得去除内毒素的海藻酸盐。本发明利用碱性条件下将内毒素部分水解、活性炭吸附去除海藻酸盐中的内毒素，其制备过程中无杂质引入，所得海藻酸盐中内毒素含量低，海藻酸盐分子量变化小。

摘要： 本发明公开了一种结合内毒素的肽及其在无标记内毒素检测中的应用，所述肽至少包括如下序列片段：NLQEFLF，且所述肽的羧端和/或氮端含有半胱氨酸。本发明提供的肽可对内毒素定量检测，检测限低，检测结果准确，灵敏度高，检测线性范围广，涵盖《中国药典》中规定的内毒素含量最大值，可以直接用于注射用水和注射液中的内毒素检测，无需稀释；本发明精度高，可重复性高，检测时间短，单个样品单次检测不超过10分钟；相对鲎试剂生产方便(寡肽可固相合成)且成本低，本发明不受鲎资源的限制，质量稳定，不同批次的质量具备可比性；本发明的生物传感器电极可在一定时间多次重复使用，结果误差小，并可进一步降低成本。

摘要： 发明的目的在于提供一种不使用高价试剂地，在短时间内简便地对内毒素进行检测的装置及检测内毒素的方法。本发明的内毒素检测装置的特征在于，包括：区域部，其包含电解液；划分构件，其将所述区域部划分为2个分区，并将所述2个分区以纳米孔连通；第一电极，其被设置于第一分区；第二电极，其被设置于第二分区，并与所述第一电极电连接；电解液流产生部件，其使所述第一分区的电解液从所述纳米孔通过并向所述第二分区移动；施加部件，其向所述第一电极与所述第二电极之间施加电压；以及监视部件，其对电流进行监视。

摘要： 本发明公开了一种与内毒素结合的肽及其在内毒素检测中的应用，所述肽至少包括如下序列片段：GCKK YRRF RWKF KGKF WFWG C，且所述肽的羧端和/或氮端含有半胱氨酸。本发明提供的肽可对内毒素定量检测，检测限低，检测结果准确，灵敏度高，检测线性范围广，涵盖《中国药典》中规定的内毒素含量最大值，可以直接用于注射用水和注射液中的内毒素检测，无需稀释；本发明精度高，可重复性高，检测时间短，单个样品单次检测不超过10分钟；相对鲎试剂生产方便且成本低，本发明不受鲎资源的限制，质量稳定，不同批次的质量具备可比性；本发明的生物传感器电极可在一定时间多次重复使用，结果误差小，并可进一步降低成本。