黏液高分泌

摘要： 目的:探讨槲皮素对LPS诱导的大鼠气道黏液高分泌的作用及其分子机制。方法:将36只SD大鼠随机分为:对照组、LPS组、槲皮素低、中、高剂量组、AG1478组;气道内滴注LPS建立大鼠气道黏液高分泌模型。HE染色观察肺组织的病理变化;AB-PAS染色观察杯状细胞增生和黏液分泌情况;ELISA检测肺组织中MUC5AC浓度;采用免疫组织化学法(IHC)检测MUC5AC、EGFR、PKC、NF-κB表达;RT-qPCR检测肺组织MUC5AC及EGFR mRNA表达;Western blot检测p-EGFR、EGFR、p-PI3K、PI3K、p-PKC、PKC、p-AKT、AKT、NF-κB表达。结果:与LPS组相比,槲皮素低、中、高剂量组病理变化逐渐减轻,肺组织炎症积分和AB-PAS阳性着色面积逐渐降低(P<0.05);槲皮素能减少肺组织MUC5AC、EGFR、PKC、NF-κB表达,降低MUC5AC含量,并下调MUC5AC及EGFR的mRNA水平(P<0.05);槲皮素能减少p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-PKC/PKC、p-AKT/AKT、NF-κB蛋白表达(P<0.05)。结论:气管内滴注LPS能成功诱导大鼠气道黏液高分泌模型,槲皮素对LPS诱导大鼠气道黏液高分泌具有拮抗作用,其作用机制可能与抑制EGFR信号通路,调控p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-PKC/PKC、p-AKT/AKT、NF-κB表达,下调MUC5AC表达有关。

摘要： 目的本实验旨在利用转录组测序技术探索参与香烟烟雾提取物(CSE)诱导16HBE细胞MUC5AC上调的信号通路及其分子机制,为寻找新的慢性阻塞性肺疾病(COPD)黏液高分泌药物作用靶点提供理论依据。方法利用转录组测序技术检测CSE引起16HBE细胞差异表达的基因(DEGs),通过生物信息学分析挖掘出可能参与CSE诱导16HBE细胞MUC5AC上调的信号通路及相关基因。利用RT⁃qPCR技术验证所筛选的信号通路中相关基因转录水平;利用信号通路激动剂及siRNA干扰技术分别验证该信号通路及相关基因是否参与CSE诱导的16HBE细胞MUC5AC上调过程。结果转录组测序共检测到2567个DEGs,生物信息学分析结果显示16HBE细胞中MAPK信号通路、WNT信号通路、PI3K⁃Akt等信号通路在受到CSE刺激后表达异常。RT⁃qPCR结果显示CSE刺激16HBE后WNT4、WNT5B、WNT6、WNT10A基因的转录水平较对照组分别下调了0.885、0.893、0.705、0.618倍(P<0.05),WNT9A较对照组上调3.727倍(P<0.05),与转录组测序结果一致。激活经典WNT信号通路后,16HBE细胞MUC5AC转录水平较对照组上调3.197倍(P=0.0313)。而在小分子干扰实验中,WNT5B siRNA组+CSE组MUC5AC mRNA较阴性对照+CSE组上调2.092倍(P=0.0162)。结论非经典WNT信号通路中的WNT5B在CSE刺激16HBE细胞后下调,并参与CSE诱导的MUC5AC的表达上调。

摘要： 目的:观察小青龙汤对哮喘大鼠黏液高分泌及气道炎症的影响。方法:60只SPF级SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、氨溴索组及小青龙汤高剂量组(14 g·kg^(-1))、小青龙汤中剂量组(7 g·kg^(-1))、小青龙汤低剂量组(3.5 g·kg^(-1)),每组10只。除对照组外,其余组大鼠建立支气管哮喘模型。造模成功后,各组大鼠进行药物干预,对照组和模型组给予等体积生理盐水进行灌胃,每天1次,连续14天。大鼠肺功能仪检测大鼠第0.3秒用力呼气容积(forced expiratory volume,FEV0.3)、用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、呼气峰流量(peak expiratory flow,PEF)及气道阻力值(air way resistance,R);瑞氏-姬姆萨染色计数肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的数目;ELISA法检测BALF中白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)、IL-6、IL-10、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,IgE)、黏蛋白(mucin,Muc)5ac及Muc5b的水平;实时荧光定量PCR检测肺组织中Muc5ac mRNA及Muc5b mRNA的水平。结果:与对照组比较,模型组哮喘大鼠FEV0.3、FVC和PEF降低,气道阻力值升高;BALF中巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞数目及IL-13、IL-6、IgE的水平升高,IL-10的水平降低;Muc5ac、Muc5b蛋白及mRNA水平升高;与模型组比较,小青龙汤各剂量组哮喘大鼠FEV0.3、FVC和PEF升高,气道阻力值降低;BALF中巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞数目及IL-13、IL-6、IgE的水平降低,IL-10的水平升高;Muc5ac、Muc5b蛋白及mRNA水平降低,且呈剂量依赖性,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:小青龙汤可有效抑制哮喘大鼠的黏液高分泌状态,减轻气道炎症,缓解哮喘症状,其作用机制可能与抑制黏蛋白Muc5ac、Muc5b的分泌有关。

摘要： 目的探讨黄芩素对PM2.5致大鼠气道炎性反应及黏液高分泌状态的影响。方法SPF级SD大鼠80只随机分为对照组、模型组、地塞米松组(0.09 mg/kg)、黄芩素低剂量组(100 mg/kg)、黄芩素高剂量组(200 mg/kg),每组16只;模型组,地塞米松组,黄芩素低、高剂量组使用超声雾化器、PM2.5颗粒物悬液建立气道炎性反应模型;建模成功后,地塞米松组,黄芩素低,高剂量组给予相应药物灌胃,连续4 w;对照组及模型组给予相应体积的生理盐水。试验结束后,全自动血球分析仪测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数,阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察主支气管杯状细胞阳性百分数、细支气管杯状细胞阳性百分数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-2、IL-6、气道上皮细胞黏蛋白(MUC)5AC、MUC5B水平;同时获取大鼠气管组织,苏木素-伊红(HE)染色观察气管组织病理变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western印迹测定气管组织中信号转导子和转录激活子(STAT)6、核因子(NF)-κB mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,模型组BALF中白细胞总数、主支气管杯状细胞阳性百分数、细支气管杯状细胞阳性百分数、IL-2、IL-6、MUC5AC、MUC5B水平,气管组织STAT6、NF-κB mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论黄芩素对PM2.5致大鼠气道炎性反应及黏液高分泌状态具有明显抑制作用;其机制与黄芩素能抑制气管组织STAT6、NF-κB mRNA和蛋白的表达,进而抑制STAT6/NF-κB信号通路的激活有关。

摘要： 目的通过多次气道内雾化给药的方式建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致大鼠慢性支气管炎急性发作(acute exacerbations of chronic bronchitis,AECB)模型,探讨LPS诱导慢性支气管炎急性发作的可行性。方法将36只SD大鼠按体质量随机分为空白组、模型组、复方甘草组。采用多次气道内雾化吸入LPS的方法建立大鼠AECB动物模型。采用肺功能仪评估乙酰胆碱(Ach)和组胺激发大鼠的气道高反应,肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)采用细胞计数板进行白细胞总计数,瑞氏染色法进行白细胞分类计数(分为两类:中性粒细胞、巨噬细胞),HE、PAS、Masson染色观察肺组织的病理形态学变化,ELISA法检测BALF中白介素6(interleukin 6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量。结果与空白组相比,模型组大鼠注射不同剂量氯化乙酰胆碱和组胺(1∶1)混合液后气道阻力显著升高(P<0.01);BALF中白细胞总数、单核巨噬细胞和中性粒细胞数量明显增加(P<0.01);支气管黏膜上皮存在部分脱落坏死,管腔变窄且腔内出现较多炎性分泌物,伴肺泡塌陷,肺泡间隔增厚和肺出血,大量炎性细胞浸润,气道黏膜杯状细胞增生,出现大量胶原纤维沉积;BALF中促炎因子IL-6、TNF-α水平升高(P<0.01)。复方甘草组较模型组可明显减轻AECB大鼠肺组织的炎症损伤和肺出血程度,减轻气道上皮杯状细胞增生以及气道壁周围胶原纤维沉积,改善肺功能等。结论多次气道内雾化吸入LPS可成功建立大鼠AECB模型。

摘要： 目的探讨金水六君煎对BEAS-2B细胞慢性阻塞性肺疾病(COPD)黏液高分泌的影响。方法制备金水六君煎、生理盐水、阿奇霉素大鼠含药血清,采用10%CSE和20 ng/mL LPS构建COPD气道黏液高分泌的BEAS-2B细胞模型,分为正常组、模型组、金水六君煎组、阿奇霉素组,采用CCK8法检测细胞活性,Western blotting法检测网络药理学预测的MUC5AC、EFGR、VEGF蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞活性降低(P<0.05),与模型组比较,金水六君煎含药血清组细胞活性升高(P<0.05),其中15%含药血清组升高较10%、20%含药血清组活性升高更明显(P<0.05)。与正常组比较,模型组细胞黏蛋白MUC5AC蛋白表达明显增多(P<0.05),提示COPD气道黏液高分泌造模成功。与模型组比较,金水六君煎组MUC5AC蛋白表达明显降低(P<0.05),与正常组比较,模型组EGFR、VEGF蛋白表达明显增多(P<0.05)。与模型组比较,金水六君煎组、阿奇霉素组EGFR、VEGF蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论香烟烟雾及脂多糖可诱导BEAS-2B细胞COPD黏液蛋白高表达,成功建立黏液高分泌模型。金水六君煎可明显抑制MUC5AC、EGFR、VEGF蛋白表达,且金水六君煎对MUC5AC蛋白的调控与EGFR、VEGF蛋白调控呈正相关。

摘要： 目的 评价补肺益肾组分方Ⅲ(ECC-BYFⅢ)阻抑慢性阻塞性肺疾病(COPD)黏液高分泌的配伍特点.方法 将ECC-BYFⅢ组分按原方药物功效分成补气(人参皂苷Rh1+黄芪甲苷)、补肾(淫羊藿苷)、化痰(川陈皮素)、活血(丹皮酚)4组,按数学排列组合的方法将其分为不同组分配伍组(14组).①按随机数字表法将大鼠分为对照组、模型组、ECC-BYFⅢ及不同组分配伍组,共17组.采用香烟烟雾暴露联合反复细菌感染的方法复制COPD稳定期大鼠模型.于制模第9周开始给予相应的药物灌胃,16周结束后取材.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)水平,以及肺组织和BALF中黏蛋白(MUC)5AC水平.②将人肺上皮细胞BEAS-2B分为空白组、模型组、ECC-BYFⅢ及不同组分配伍组.于相应药物预处理后4h建立缺氧诱导的BEAS-2B细胞黏液高分泌模型.采用定量聚合酶链反应(PCR)检测MUC5AC、MUC5B、MUC1的mRNA表达.采用Region(R)值综合评价法评价大鼠及BEAS-2B细胞黏液分泌指标.结果 ①与对照组比较,模型组大鼠血清及BALF中MMP-9显著升高,TIMP-1水平显著降低;肺组织及BALF中MUC5AC显著升高.R值综合评价结果显示,除补气组和补肾组外,ECC-BYFⅢ及其组分配伍均能显著纠正COPD大鼠黏液高分泌,以ECC-BYFⅢ、补肾祛邪、扶正化痰、祛邪组分配伍效果较优(R值分别为2.15±0.42、2.11 ±0.23、2.16±0.23、2.16±0.55),与模型组(R值:3.00±0.00)比较差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).②与空白组比较,模型组细胞MUC5AC、MUC5B、MUC1的mRNA表达均升高;但不同组分配伍对BEAS-2B细胞黏液分泌没有明显的作用特点.③综合体内外实验,R值综合评价结果显示,ECC-BYFⅢ及其活血、祛邪、补肾活血、扶正化痰、补气祛邪组分配伍可显著纠正COPD黏液高分泌状态(R值分别为2.30±0.43、2.33±0.44、2.12±0.68、2.27±0.64、2.24±0.27、2.29±0.47),与模型组(R值:3.00±0.00)比较差异均有统计学意义(均P＜0.01);其作用强度为:祛邪＞扶正化痰＞补肾活血＞补气祛邪＞ECC-BYFⅢ＞活血.结论 ECC-BYFⅢ组分配伍对COPD黏液分泌相关指标效应不同,含化痰(川陈皮素)或活血(丹皮酚)的组分配伍抑制黏液分泌效果较好.

摘要： 目的 对COPD患者采取清金化痰汤治疗,并分析其应用效果.方法 选取2018年1月—2020年1月,在我院治疗的58例急性加重期COPD患者,辨证分型为痰热壅肺证,将其分为两组.对照组29例,采取常规抗感染治疗;观察组29例,在此基础上,联合清金化痰汤治疗.结果 与对照组对比,观察组患者治疗后的MUC5AC、TNF-α、IL-1β水平更低,TCMSS评分更低,FVC、FEV1、FEV1/FVC水平更高,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,观察组患者的总有效率为96.55％,对照组为79.31％,差异有统计学意义(P<0.05).结论 对急性加重期COPD患者采取清金化痰汤治疗可获得更为理想的治疗效果,能够减轻患者气道炎症反应,改善黏液高分泌状态及肺功能,与常规西医治疗相比更具优势,具有推广价值.

摘要： 气道黏液高分泌是指各种致病因素引起气道黏膜产生过量黏液的病理生理过程,气道黏液高分泌会导致气道阻塞,进而出现气体交换功能障碍、通气与灌注比例失调等病理生理异常,使患者肺功能和生活质量显著下降,是影响慢性气道炎症性疾病发病与进展的重要危险因素.明确气道黏液高分泌的病理生理及临床特征,将有助于建立针对气道黏液高分泌的呼吸康复治疗方法.由中国医学装备协会呼吸病学装备专业委员会、中国残疾人康复协会肺康复专业委员会中青年肺康复专业学组的有关专家组成的共识撰写专家组,通过文献检索和专家组的反复讨论,制订本共识,为临床实践提供参考.

摘要： 目的:研究丁苯酞对哮喘小鼠气道黏液高分泌及白介素-13(IL-13)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法:小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组和丁苯酞高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)组(n=12).实验第1日、8日、15日通过注射卵清白蛋白(OVA)致敏,第22日吸入OVA连续激发5周复制哮喘模型,同时在激发前给予丁苯酞20 mg/kg进行干预,观测哮喘行为学、气道杯状细胞及黏蛋白5ac(Muc5ac)的分泌,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)粘度,采用ELISA法测定BALF中Muc5 ac、IL-13及TNF-α的水平.结果:与空白对照组比较,模型对照组小鼠打喷嚏、抓鼻及哮喘的程度显著加重(P<0.01),小鼠气道上皮杯状细胞增生及Muc5ac的分泌显著增加(P<0.01),BALF的粘度及其中的Muc5ac、IL-13和TNF-α的含量显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg丁苯酞干预后哮喘行为学评分明显下降(P<0.01);小鼠气道上皮杯状细胞增生、Muc5ac的分泌、BALF的粘度及其中的Muc5ac、IL-13和TNF-α的含量均明显降低(P<0.05,0.01).结论:丁苯酞具有抑制哮喘气道黏液高分泌而平喘的作用,缓解IL-13、TNF-α异常高表达是其抑制气道黏液高分泌的作用机制之一.

摘要： 上世纪五六十年代，反复呼吸道感染和黏液高分泌被认为是导致COPD的病因。后来，随着香烟烟雾暴露的致病作用得到证实，细菌感染又被看作是COPD的一种伴随现象。新的证据表明，感染是COPD急性加重的主要原因，而且可能在COPD发病机制中发挥重要作用。本文介绍了感染与COPD急性加重的关系，分析了COPD的慢性感染机制，提出环境因素、病毒和细菌在COPD急性加重发病中的相互作用值得深入研究。

摘要： 本发明涉及新型蛋白质分泌因子、包含编码蛋白质分泌因子的核酸序列的载体和载体被引入的转化细胞。本发明还涉及使用包含载体的转化细胞制备靶蛋白的方法。

摘要： 本发明公开了一种具有高分泌能力的β‑淀粉酶及其应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的β‑淀粉酶具有高分泌能力，将携带本发明β‑淀粉酶的大肠杆菌摇瓶发酵48h，可使发酵上清液中的β‑淀粉酶酶活高达434.65U/mL，将携带本发明β‑淀粉酶的大肠杆菌在3L发酵罐中诱导培养30h，可使发酵上清液中的β‑淀粉酶酶活高达13063.8U/mL，因此，本发明的β‑淀粉酶适用于大规模工业化生产。

摘要： 本发明公开一种治疗气道粘液高分泌的中药组合物及其应用，所述中药组合物包括：生麻黄，桂枝，龙胆草，细辛，干姜，生黄芪，生地，炒黄芩，蒲公英，紫花地丁，柯子肉，姜半夏，生甘草。本发明还涉及上述中药组合物在制备治疗或抑制气道粘液高分泌的药物中的应用。本发明中药联合西药治疗慢性阻塞性肺疾病疗效显著，能更好地缓解患者喘息中医症状、改善MMRC评分，缩短患者住院天数。中药联合西药常规治疗AECOPD能够降低患者血CRP和PCT水平，有助于AECOPD细菌感染控制，并能够改善患者的辅助呼吸肌动用评分，减轻呼吸肌的做功。

摘要： 本发明公开了一种高分泌纳豆激酶枯草芽孢杆菌及其应用，所述菌株的分类命名为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)gs‑11061，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号是CGMCC No.13932。本发明还公开了利用上述高产纳豆激酶的枯草芽孢杆菌生产纳豆激酶的方法。本发明方法与其他发酵方法相比，在发酵方面，该菌可以在高温条件下发酵，同时明显地缩短发酵周期；在培养基成分方面，利用木糖母液粗原料降低成本，能耗低，污染小；与原始菌相比，纳豆激酶的分泌量明显提高，且发酵产物易处理，副产物少。

摘要： 本发明公开了一种具有高分泌能力的普鲁兰酶及其应用，属于酶工程和微生物工程技术领域。本发明的普鲁兰酶胞外分泌能力高，将携带本发明普鲁兰酶的大肠杆菌摇瓶发酵48h，可使发酵液中的总酶活力达212.0U·mL

摘要： 本发明涉及新型蛋白质分泌因子、包含编码蛋白质分泌因子的核酸序列的载体和载体被引入的转化细胞。本发明还涉及使用包含载体的转化细胞制备靶蛋白的方法。

摘要： 本发明提供一种促进蜗牛黏液分泌的方法及其黏液的萃取方法，包含提供活体蜗牛，并在一预设时间内以具有预设电压的金属装置接触该活体蜗牛的腹足。

摘要： 一种耐糖高分泌型基因工程受体菌的构建方法。包括：a选择受CCR抑制的目的基因，如ackA、ycgE、ptsH、budA、acsA、xylA与sucC等，确定其cre box的位点及碱基序列；b设计一组与cre box共有序列目标片段相似性为30～100％的gRNA，确保能实现多个目标cre box片段的编辑；c构建含有CRISPR/Cas9基因座和gRNA的整合型质粒，并转入芽孢杆菌，实现对基因组多个cre box位点的编辑。采用本发明提出的基因改造方法，能同时解除多个基因的CCR阻遏效应，从而增加细菌的次级代谢产物，能够得到一种高分泌型基因工程受体菌。CCR效应的解除，提高了该工程菌的葡萄糖耐受性，使其具有较强的细胞分泌能力，能够作为微生物发酵的受体细胞。

摘要： 本发明涉及一种用于经口吸入、优选用于经口吸气的粉末形式的组合物，所述组合物包含粘液溶解剂，优选N‑乙酰半胱氨酸。此外，本发明涉及所述组合物用于治疗有需要的受试者的粘液高分泌和与之相关的疾病、症状或紊乱的方法。最后，本发明涉及一种通过经口吸气的吸入途径而施用至所述需要的受试者的装置。

摘要： 本发明涉及一种体外诱导粘液高分泌模型及其构建方法。本发明采用IL‑1β对H292细胞进行体外诱导，通过MTT检测不同浓度的IL‑1β作用于H292细胞培养不同时间对细胞生长的影响；ELISA检测H292细胞黏蛋白MUC5AC、炎症因子白介素‑8(IL‑8)的含量；PCR检测MUC5AC mRNA表达水平，证明了IL‑1β对H292细胞生长不具有抑制作用，且能诱导H292细胞分泌炎症因子IL‑8，上调MUC5AC基因表达及蛋白分泌。因而，本发明选用5‑10ng/mL IL‑1β诱导H292细胞24h作为体外黏液高分泌模型为建立条件，能够简便快捷的获得有效的粘液高分泌模型。本发明提供的体外粘液高分泌模型可用于气道粘液分泌病理性机制研究及相关药物的研发，相对于动物模型周期短，操作简便。